一、软骨胶原诱导实验性关节炎及与类风湿关节炎关系的研究概况（论文文献综述）
刘进[1]（2021）在《二妙散水提物调控CIA大鼠FLS NF-κB信号通路的机制研究》文中研究指明目的本研究通过建立胶原诱导性关节炎（Collagen induced arthritis,CIA）大鼠模型,从CIA大鼠关节滑膜中分离纯化培养成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）,研究不同浓度二妙散（Er-Miao-San,EMS）水提物对CIA大鼠FLS增殖、迁移和炎性因子表达的影响,并基于核因子-κB（NF-κB）信号通路探索其作用机制,为临床应用EMS治疗类风湿关节炎提供一定的实验基础。方法将24只雌性SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组（Normal组）、模型组（CIA组）,Normal组常规饲养,CIA组给予牛Ⅱ型胶原免疫2次建立CIA大鼠模型,每周记录大鼠体重、关节评分和足容积,初次免疫42 d后,10%水合氯醛麻醉后处死,取大鼠左踝关节,4%多聚甲醛固定,脱钙后,Masson染色技术检测大鼠关节组织病理改变;无菌条件下剥离CIA大鼠右踝关节滑膜组织,纯化培养CIA-FLS,分别加入不同浓度EMS水提物（200、400、800、1600、3200μg/m L）干预,MTT法、Transwell小室检测CIA-FLS增殖和迁移能力,实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测CIA-FLS中NF-κB信号通路相关分子IL-6、TNF-α、NF-κBp65 m RNA和蛋白表达水平。结果1.与Normal组相比,初次免疫14 d后,CIA组大鼠体重增长不显着（P>0.05）。与Normal组相比,初次免疫7 d后,CIA组大鼠关节炎评分、足容积明显升高（P<0.01）;初次免疫7d后,CIA组大鼠关节炎评分、足容积增长显着（P<0.05）,Normal组大鼠关节炎评分、足容积无明显改变（P>0.05）。Masson染色结果显示,Normal组大鼠踝关节关节囊腔光滑、组织形态完整,被覆薄层的透明软骨,见滑膜细胞生长良好。CIA组大鼠踝关节见关节腔破坏、结构不完整,伴关节软骨的部分损伤,滑膜细胞增生,间质充血水肿,炎细胞不同程度地浸润。说明本研究成功构建CIA大鼠模型。2.分离纯化培养CIA-FLS,倒置显微镜下见长梭形或纺锤形的CIA-FLS贴壁聚集生长,少数有多个类似于神经元的突起,细胞核呈卵圆型位于细胞中央,随着CIA-FLS细胞不断分裂、增殖,CIA-FLS细胞逐渐增多,相互接触交织成网状,说明本研究成功分离纯化CIA-FLS。3.EMS水提物对CIA-FLS增殖、迁移能力的影响结果显示,不同浓度EMS水提物作用CIA-FLS 48 h后,与空白对照组相比,EMS水提物呈剂量依赖性抑制CIA-FLS增殖（P<0.05）。1600μg/m L EMS水提物极显着抑制CIA-FLS的增殖和迁移（P<0.01）,表明在CIA-FLS存在异常的增殖、迁移,EMS水提物能不同程度地抑制CIA-FLS的增殖、迁移能力。4.EMS水提物对CIA-FLS中IL-6、TNF-α、NF-κBp65 m RNA和蛋白水平表达的影响结果显示,1600μg/m L EMS水提物极显着抑制CIA-FLS中IL-6、TNF-α、NF-κBp65 m RNA和蛋白水平表达（P<0.01）。EMS可能通过抑制CIA-FLS中IL-6、TNF-α、NF-κBp65 m RNA和蛋白水平表达,负向调控NF-κB,进而抑制FLS的过度增生和炎症,说明EMS水提物可能通过抑制NF-κB信号通路的活化及炎症因子的生成,进而减轻CIA-FLS的增殖和炎症水平。结论本研究成功分离纯化CIA-FLS。EMS水提物抑制CIA-FLS增殖、迁移和炎症因子表达,最佳作用浓度是1600μg/m L。EMS水提物可能通过抑制NF-κB信号通路的活化及炎症因子的生成,进而减轻CIA-FLS的增殖和炎症水平;本研究为后期临床应用二妙散治疗类风湿关节炎提供一定的实验基础。
赵彩虹[2]（2021）在《傅山风湿外治方对CIA大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响》文中研究说明目的:旨在研究傅山风湿外治方（FS-med）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响。方法:将36只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为:健康组（Normal,n=12）、CIA模型组（CIA,n=12）、傅山风湿外治方治疗CIA组（FS-med,n=12）。CIA组和FS-med组大鼠采用牛Ⅱ型胶原和弗氏完全/不完全佐剂建立CIA大鼠模型。造模成功后,Normal组和CIA组大鼠外敷空输液贴,FS-med组大鼠外敷FS-med药膏,2次/d,用药6周;每周测量并记录大鼠体重、关节直径和进行关节炎评分。6周后,3个实验组大鼠腹主动脉取血后,脱颈处死,取大鼠左右踝关节,左踝关节液氮冻存后放-80°C冰箱保存备用,右踝关节用4%多聚甲醛固定。ELISA检测血清中IFN-γ、IL-4和IL-6的表达;HE染色和Masson染色检测大鼠踝关节组织病理改变,qRT-PCR和Western Blot分别检测大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1 m RNA和蛋白水平表达,免疫组化技术检测关节组织中Notch1、Jagged1和Hes1的阳性信号表达并进行光密度值分析。结果:1.不同实验组大鼠足外观、体重、关节直径、关节炎评分检测结果显示,造模后第14 d（给药前）,与Normal组比较,CIA组和FS-med组大鼠后足踝关节至趾关节明显肿胀,大鼠体重减轻,左踝关节直径和关节炎评分均极显着增高（P<0.01）,提示造模成功。21d-56d（给药1-6周）,CIA组大鼠后足持续肿胀,关节变形,体重增长缓慢;与CIA组相比,FS-med组大鼠在此过程中踝关节及足趾肿胀程度明显缓解,体重缓慢增长,左踝关节直径和关节炎评分降低,随着时间的推移,作用愈加显着（P<0.05）。2.不同实验组大鼠关节滑膜组织病理学检测结果显示,HE染色和Masson染色可见,Normal组踝关节组织结构完整,关节软骨面较为光滑,细胞排列整齐,潮线完整,软骨细胞分布规律,无增生、变性,滑膜光滑无增生,关节腔隙良好,未见炎症水肿,无明显病理变化。与Normal组相比,CIA组踝关节关节面粗糙、缺失,表层软骨变性失染,纤维化明显,大量的滑膜组织增生,血管翳形成,关节腔隙狭窄,炎性细胞浸润,软骨和骨严重破坏。与CIA组相比,FS-med组关节软骨形态得到改善,关节面仍不平整,但纤维组织增生、滑膜细胞增生减少,伴少量淋巴细胞浸润,关节腔隙明显得到改善,且骨组织破坏得到控制。3.不同实验组大鼠血清中细胞因子水平检测结果显示,与Normal组相比,CIA组大鼠血清中IFN-γ和IL-6表达极显着升高（P<0.01）,IL-4表达极显着降低（P<0.01）;与CIA组相比,FS-med组大鼠血清中IFN-γ和IL-6表达极显着降低（P<0.01）,IL-4表达显着升高（P<0.05）。4.不同实验组大鼠关节中Notch1/Jagged1通路相关基因表达结果显示,与Normal组相比,CIA组大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1 m RNA和蛋白的表达极显着增高（P<0.01）;与CIA组相比,FS-med组大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1 m RNA和蛋白的表达极显着降低（P<0.01）。5.不同实验组大鼠关节Notch1、Jagged1和Hes1免疫组化检测结果显示,Notch1、Jagged1和Hes1在不同实验组大鼠关节中均有不同程度的阳性表达;与Normal组相比,CIA组大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1呈强阳性表达,AOD值极显着增加（P<0.01）;与CIA组相比,Notch1、Jagged1和Hes1在FS-med组的阳性表达减少,AOD值极显着降低（P<0.01）。结论:本研究证实FS-med对CIA大鼠具有良好的治疗效果,Notch1/Jagged1信号通路参与了RA的发生发展。FS-med可能通过抑制Notch1/Jagged1信号通路激活,调节Th1/Th2细胞因子平衡而达到治疗RA的目的。本实验对于了解FS-med治疗RA的作用机制具有重要意义,靶向抑制Notch1/Jagged1信号的活化可能成为治疗RA的新途径。
张晓燕[3]（2021）在《甘草制祖师麻炮制工艺及其抗类风湿性关节炎作用机制研究》文中提出目的本论文以祖师麻甲素含量为评价指标,采用响应曲面法探究祖师麻甘草制（炙法、烘法）的炮制工艺;并基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨祖师麻甘草制品改善弗式完全佐剂混合牛Ⅱ胶原（CⅡ）诱导的大鼠类风湿性关节炎与脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞炎症的作用机制。方法1.以祖师麻甲素含量为评价指标,通过响应曲面实验研究甘草汁与祖师麻比例、闷润时间、炒制温度、炒制时间对祖师麻甘草炙祖师麻炮制工艺的影响,从而优选出甘草炙祖师麻的最佳炮制工艺。2.以祖师麻甲素含量为评价指标,通过响应曲面实验研究甘草汁与祖师麻比例、闷润时间、烘干温度、烘干时间对祖师麻甘草烘制祖师麻炮制工艺的影响,从而优选出甘草烘制祖师麻的最佳炮制工艺。3.建立弗式完全佐剂并牛Ⅱ胶原（CⅡ）诱导的大鼠类风湿性关节炎模型（CIA）,通过检测大鼠体重、关节炎评分、足肿胀度、脾脏与胸腺指数、踝关节的组织病理学与X-射线（X-Ray）放射学观察,对于CIA大鼠的治疗作用进行对比研究。4.通过酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清中白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、白介素-10（IL-10）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）与血管内皮生长因子（VEGF）的含量,免疫组织化学方法测定CIA大鼠踝关节中含NLR家族PYRIN域蛋白3（NLRP3）与核转录因子-κB（NF-κB）的表达,蛋白免疫印迹法（Western-Blot）测定大鼠滑膜组织的Toll样受体4（TLR4）、NLRP3、NF-κB、IL-1β表达量,来初步探讨基于TLR4/NLRP3/NF-κB通路的祖师麻不同甘草制品治疗CIA大鼠的作用机制。5.以脂多糖（LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞（Raw 264.7细胞）炎症为模型,细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK8）测定细胞增殖率、微板法测定细胞中一氧化氮（NO）含量、酶联免疫法（ELISA）测定细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的含量、Western-Blot测定细胞的TLR4、NLRP3、NF-κB、IL-1β表达量,验证祖师麻甘草制品抗炎的作用机制。结果1.甘草炙祖师麻的最佳炮制工艺为:甘草汁与祖师麻比例为0.8,闷润时间为53min,炒制温度为150℃,炒制时间为14min。2.甘草烘制祖师麻的最佳炮制工艺为:甘草汁与祖师麻比例为0.8,闷润时间为62min,烘干温度为150℃,烘干时间为100min。3.祖师麻不同甘草制品能显着降低CIA大鼠的关节炎评分（AI）、足肿胀度、改善踝关节红肿、关节和关节软骨的病理状况（P<0.05）;且祖师麻甘草制品治疗效果与祖师麻生品相比,虽无显着性差异,但总体祖师麻甘草制品的治疗效果优于祖师麻生品。4.祖师麻不同甘草制品均可调节大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的分泌,还可显着降低CIA大鼠血清中MMPs与VEGF的水平（P<0.05）。此外,还可能通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3通路,从而发挥抗炎作用从而治疗类风湿性关节炎。5.祖师麻炮制品可以调节LPS诱导的Raw264.7细胞上清液中NO含量以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10的表达（P<0.05）,其作用机制可能与调节TLR4/NF-κB/NLRP3通路有关。结论本研究采用响应曲面法优化甘草炙祖师麻与甘草烘制祖师麻的炮制工艺参数。药效学研究表明:祖师麻不同炮制品可以缓解类风湿性关节炎大鼠的症状,且祖师麻炮制品的治疗效果优于生品。通过体内体外实验对其作用机制进一步探索发现,祖师麻缓解CIA大鼠的类风湿性关节炎症状并抑制Raw264.7细胞炎症可能与调节炎症因子与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路有关。
吴秉星[4]（2021）在《基于NF-κB信号通路探讨siRNA干扰联合BMSCs对类风湿关节炎治疗作用的实验研究》文中进行了进一步梳理类风湿关节炎（RA）是一种自身免疫性疾病,目前尚无根治方法。该病严重影响着人类健康,同时动物RA使畜禽养殖业的效益下降。有研究表明,小干扰RNA（siRNA）能有效抑制目标基因表达,能有效治疗相关疾病。骨髓间充质干细胞（BMSCs）能靶向迁移受损组织,并且其多向分化潜能可以修复受损组织,与炎性细胞接触介导调节炎症,能有效治疗自身免疫性疾病。已有研究发现NF-κB信号通路与炎症和自身免疫疾病密切相关。本研究运用RA大鼠模型,探讨NF-κB信号通路在RA发病中的作用,研究RA发病机制。利用siRNA联合BMSCs体外移植,探讨基于NF-κB信号通路联合治疗RA的可行性。1.NF-KB信号通路在RA大鼠发病过程中动态变化的研究实验以鸡Ⅱ型胶原（CIA组）乳化液作为致敏剂于大鼠尾根部到背部散点皮下注射,建立RA大鼠模型。以大鼠生长状况、行为学、病理学、影像学、足趾肿胀、脾脏指数筛选成功RA大鼠模型;通过检测NF-κB信号通路中白介素-1β（IL-1βp）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、NF-κB-P65、p-NF-κB-P65的动态变化,探讨NF-κB信号通路在RA发病过程中的作用机制。结果显示,在1 w时CIA组血清中IL-1β、TNF-α表达量极显着高于对照组（P<0.01）。造模至2w时CIA组大鼠足趾肿值极显着高于对照组（P<0.01）。造模至3w时CIA组大鼠体重极显着低于对照组（P<0.01）、游泳不动时间极显着高于对照组（P<0.01）。造模至6 w时CIA组IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量极显着高于对照组（P<0.01）;CIA组NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量亦极显着高于对照组（P<0.01）;CIA组脾脏指数极显着高于对照组（P<0.01）;DR-X线成像显示CIA组出现骨质增生、骨赘等病变;切片显示关节软骨受炎性细胞浸润,导致软骨破坏、关节滑膜炎等。提示随着炎症发展,NF-κB信号通路被过度激活,其中IL-1β、TNF-α等因子之间相互作用加剧炎症反应。2.siRNA干扰IL-1β、TNF-α表达以及BMSCs对炎症细胞调节的体外研究由第一部分实验可见,RA大鼠IL-1β、TNF-α表达量增加,导致了 RA炎症加剧,提示通过抑制IL-1β、TNF-α表达可以作为治疗RA的一种手段。本研究以LPS刺激致炎细胞RAW264.7（单核巨噬细胞）建立体外细胞炎症模型,并通过siRNA技术干扰IL-1β、TNF-α表达,并采用BMSCs与炎性细胞共培养技术,检测其对炎症的调节作用,在体外探讨siRNA干扰联合BMSCs对RA治疗的可行性。结果显示,以500ng/ml的LPS刺激建立的炎症细胞模型,其培养上清液和细胞裂解液中IL-1β、TNF-α表达量均极显着高于正常处理组（P<0.01）;筛选实验,发现50 pmol siRNA和1 μ1的转染试剂比例组合为最佳转染组合,48 h为最佳转染时间;siRNA转染后,细胞培养上清液中siRNA+LPS+RAW264.7组的IL-1β表达量极显着低于LPS+RAW264.7 组（26.75±2.15 pg/ml vs 56.15±2.49 pg/ml,P<0.01）;siRNA+LPS+RAW264.7 组的 TNF-α 表达量极显着低于 LPS+RAW264.7 组（223.37±6.43 pg/ml vs 371.42±5.48pg/ml,P<0.01）。提示siRNA能有效抑制炎性细胞分泌IL-1β、TNF-α,能够抑制炎症细胞模型的炎症反应。划痕实验结果显示,LPS+RAW264.7+BMSCs组的划痕面积极显着小于LPS+RAW264.7（P<0.01）。提示BMSCs对炎症细胞具有良好的调节作用,并调节后者的增殖能力。3.基于NF-KB信号通路探讨siRNA联合BMSCs对RA治疗作用的实验研究siRNA联合BMSCs对RA大鼠进行体内治疗,以体重变化、足趾肿胀、行为学变化,血清中IL-1β、TNF-α表达,脾脏组织IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量,踝关节、膝关节NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量的变化,探讨基于NF-κB信号通路基因干扰联合BMSCs对RA治疗的作用及其机制。实验结果显示,甲氨蝶呤组、BMSCs组、siRNA组、siRNA+BMSCs组体重增长速度均高于,模型对照组,其中siRNA+BMSCs组的体重增长速度极显着高于模型对照组（P<0.01）。上述各治疗组的足趾肿胀值、脾脏指数、游泳不动时间、以及血清中IL-1β、TNF-α表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标均极显着低于模型对照组（P<0.01）。细胞标记实验显示关节成骨、软骨、以及滑膜中均发现有外源BMSCs,说明BMSCs能归巢至受损关节组织。除甲氨蝶呤组踝关节p-NF-κB-P65蛋白表达量与模型对照组差异不明显外,各治疗组膝关节、踝关节中NF-κB-P65、p-NF-κB-P65蛋白表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标极显着低于模型对照组（P<0.01）;各治疗组脾脏组织IL-1β、TNF-α、NF-κB-P65的mRNA表达量均低于模型对照组,其中siRNA+BMSCs组上述指标极显着低于模型对照组（P<0.01）。提示联合治疗能有效缓解RA发病和抑制NF-κB信号通路激活,并且BMSCs靶向修复受损组织,为后续基因干扰联合BMSCs治疗RA提供理论基础和实验依据。
范氏绒[5]（2021）在《昆断益母方调控Treg/Th17细胞失衡和抗类风湿关节炎的机制研究》文中提出目的:类风湿关节炎是一种以影响关节和软骨的慢性炎症为特征的自身免疫性疾病,可导致不同程度的关节疼痛、僵硬、肿胀和畸形,并可引起不同程度的残疾。目前治疗类风湿关节炎的主要目的是缓解疼痛和炎症,减少关节损伤和残疾,维持或改善身体机能,保证正常的生活质量。中国是中草药大国,中医药治疗类风湿关节炎历史悠久,治疗经验和策略丰富,使中医药在临床治疗类风湿关节炎中广泛应用。在“因地制宜”“辨证论治”理念的指导下,本实验室拟出了昆断益母方这一临床使用有效的复方。实验室前期的研究已经证实昆断益母方对类风湿性关节炎有很好的疗效。作为一名越南医生,已将昆断益母方在越南进行推广,并取得一定的临床成果。但是其治疗类风湿关节的作用机制仍然大量未知。近年来,随着人们对类风湿性关节炎发病机制认识的不断深入,发现辅助性T17细胞（T helper 17,Th17）与调节性T细胞（regulatory T,Treg）之间的功能失衡是引起类风湿性关节炎发病的发病机制之一。因此,本研究利用小鼠类风湿性关节炎的动物模型-胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）和体外细胞实验探讨昆断益母方对CIA小鼠和细胞内Th17/Treg失衡、炎症因子以及micro RNAs表达水平调控的作用,为昆断益母方类治疗类风湿性关节炎的作用机制提供新的理论依据。方法:（1）24只SPF级9周龄雄性DBA/1小鼠,采用随机数字表法将小鼠随机分为4组:正常组（Normal）、模型组（Model）、甲氨蝶呤组（MTX）和昆断益母方组（KDYMF）。以正常小鼠作为正常组,以MTX为阳性对照组,确保每组样本量为6只。采用牛II型胶原（collagen II,CII）免疫小鼠,诱导发生关节炎。自初次免疫后第21天（即第二次加强免疫当天,也就是造模完成当天）开始,给予相应的处理,昆断益母方（KDYMF）（0.2 m L/10g）,每天灌胃1次,连续2周;甲氨蝶呤（MTX）组,给予2 mg/kg,每周灌胃2次,连续2周;正常对照组给予等体积生理盐水,每天灌胃1次,连续2周后。每2天观察四肢临床评分,第35天予小鼠脱颈椎处死。在第35天取小鼠血液、脾脏、关节滑膜及软骨组织。HE染色检测踝关节组织病理学改变。（2）采用RT-qPCR方法检测第35天时外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）和关节滑膜组织中Treg细胞的特异性转录因子-特异性转录因子叉头蛋白p3（forkhead box p3,Foxp3）和Th17细胞的特异性转录因子-维甲酸相关孤儿受体γt（retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt）的m RNA表达水平;血清、关节滑膜组织和关节软骨组织中的Toll样受体4（Toll-like receptors 4,TLR4）和信号传导及转录激活因子3（signal transducers and activators of transcription,STAT3）m RNA表达水平;血清和关节滑膜组织中miR-21-5p表达水平。ELISA方法测定第35天时PBMC中白介素（interleukin,IL）-1β（IL-1β）、IL-17、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-10的表达水平。（3）分离小鼠脾脏初始T细胞,置于IL-6（30 ng/m L）的极化环境进行培养,然后对细胞进行昆断益母方（KDYMF,600μg/m L）干预,实验分为4组,分别为对照组（Control）、昆断益母方组（KDYMF）、IL-6组（IL-6）、IL-6+昆断益母方组（IL-6+KDYMF）。培养48h后,RT-q PCR检测各组细胞中IL-17,IL-1β,TNF-α,IL-10的表达。随后对各组细胞给予anti-CD4抗体（2μg/m L）和anti-CD25抗体（2μg/m L）激活,流式细胞仪检测分析Th17和Treg细胞的比例。（4）小鼠原始T细胞,添加IL-6（30 ng/m L）同小鼠成纤维细胞样滑膜细胞同时极化培养,然后对细胞进行昆断益母方（KDYMF,600μg/m L）干预,实验分为4组,初始T细胞+滑膜细胞组（Control）,初始T细胞+滑膜细胞+昆断益母方组（KDYMF）、初始T细胞+IL-6+滑膜细胞组（IL-6）、初始T细胞+IL-6+滑膜细胞组+昆断益母方组（IL-6+KDYMF）,培养48h后,CCK8方法检测滑膜细胞的增殖;培养48h后,Transwell检测滑膜细胞迁移和侵袭;RT-q PCR检测各组滑膜细胞中miR-21-5p表达水平,以及Foxp3和RORγt的m RNA表达水平。结果:（1）从第25天开始,模型组（Model组）小鼠双侧的踝关节出现明显的类风湿性关节炎临床症状,在第35天时大部分小鼠表现踝关节强直样改变。甲氨蝶呤灌胃治疗（MTX组）和经过昆断益母方灌胃的治疗（KDYMF组）小鼠踝关节并没有出现明显的红肿,并且关节活动度也与正常小鼠无明显差异。（2）CIA小鼠踝关节组织HE染色病理结果显示,模型组小鼠踝关节结构破坏严重,炎症细胞浸润明显,滑膜增生,导致软骨及骨破坏。DTYMD组及MTX组踝关节相对完整,滑膜增厚不明显,少量炎症细胞浸润。（3）CIA小鼠在免疫的第35天时,与Model组相比,MTX组和KDYMF组小鼠的血液PBMC和关节滑膜组织中Foxp3的m RNA相对表达水平均表现上调,但在KDYMF组小鼠中更显着;而MTX组和KDYMF组小鼠的血液PBMC和关节滑膜组织中RORγt的m RNA相对表达水平均表现下调,在KDYMF组小鼠中更显着。（4）CIA小鼠在免疫的第35天时,与Model组相比,MTX组小鼠的血液PBMC中IL-1β、IL-17、TNF-α表达水平均表现上调,但IL-10表达水平表现出显着下调;KDYMF组小鼠的血液PBMC中IL-1β、IL-17、TNF-α表达水平均低于MTX组,更接近Normal组表达水平;而IL-10表达水平高于MTX组,更接近Normal组表达水平。（5）CIA小鼠在免疫的第35天时,与Model组相比,MTX组和KDYMF组小鼠的血清和关节滑膜组织中miR-21-5p相对表达水平均表现上调,但在KDYMF组小鼠中更显着。（6）CIA小鼠在免疫的第35天时,与Model组相比,MTX组和KDYMF组小鼠的血清、关节滑膜组织和关节软骨组织中TLR4和STAT3的m RNA相对表达水平均表现下调,但在KDYMF组小鼠中更显着,更接近Normal组表达水平。（7）昆断益母方能抑制初始T细胞中炎症因子IL-17、IL-1β和TNF-α表达,但促进IL-10表达。IL-6刺激能促进初始T细胞中炎症因子IL-17、IL-1β和TNF-α表达,但抑制IL-10表达;昆断益母方能降低经IL-6刺激能促进初始T细胞中炎症因子IL-17、IL-1β和TNF-α表达,而上调IL-10表达。（8）昆断益母方能上调初始T细胞分化出来的Treg细胞比例,降低Th17细胞比例。IL-6刺激会明显增加Th17细胞数目,降低Treg细胞数目;但是昆断益母方药能增加Treg细胞比例,下调Th17细胞比例,使Treg细胞和Th17细胞更接近正常水平。（9）昆断益母方能明显抑制正常条件下类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、迁移和侵袭,同时也能明显抑制T细胞经IL-6刺激后与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞共培养后细胞的增殖、迁移和侵袭。（10）昆断益母方能明显促进正常条件下类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中miR-21-5p和Foxp3的m RNA的相对表达,降低RORγt的m RNA相对表达水平。同时也能明显上调T细胞经IL-6刺激后与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞共培养后细胞中miR-21-5p和Foxp3的m RNA的相对表达,降低RORγt的m RNA相对表达水平。结论:（1）CIA模型小鼠体内存在Th17/Treg细胞功能失衡。（2）从CIA小鼠模型和体外细胞模型证实了昆断益母方能够显着提高血清或细胞中IL-10水平,下调IL-1β、IL-17和TNF-α炎症因子水平。（3）从CIA小鼠模型和体外细胞模型证实了昆断益母方能够显着抑制Th17细胞分化,促进Treg细胞生成,改善Treg/Th17失衡状态。（4）昆断益母方能够抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、迁移和侵袭。（5）昆断益母方能够促进细胞内miR-21-5p的相对表达水平。
钱凯[6]（2021）在《断藤益母汤调控miR-337-3p介导VEGF信号通路抑制CIA小鼠血管内皮细胞活化的机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种全身性慢性自身免疫性疾病,主要病理表现为滑膜侵袭性增生和血管翳的形成,最终导致关节软骨及骨质破坏。血管翳由新生微血管、增生肥大的滑膜细胞、炎性细胞及机化的纤维素构成,具有类似肿瘤组织的特性,是引起关节病变、软骨破坏的主要病理基础。滑膜血管新生在血管翳的形成和维持中起到重要作用,而内皮细胞活化是血管新生的重要物质基础,其增殖、迁移、粘附及管形成能力在促血管形成的过程中处于中心地位。中医药治疗类风湿关节炎具有多成分、多靶点的作用优势,并且类风湿关节炎患者的骨质破坏与进行性滑膜炎和血管翳的形成密切相关,本课题组在前期研究中已经证明断藤益母汤（DTYM）能够显着改善类风湿关节炎患者的临床症状和实验室指标,在动物和细胞水平的证实DTYM能有效抑制滑膜的炎性增生,然而DTYM在抑制类风湿关节炎血管翳的形成方面还没有展开深入研究。因此我们推测:DTYM可能具有对RA血管翳内皮细胞活化调控的作用。本研究采用胶原诱导性关节炎（Collagen-Induced arthritis,CIA）小鼠模型及体外人脐静脉血管内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）诱导模型,通过观察DTYM对CIA滑膜血管翳以及HUVEC细胞活化的影响,以阐明DTYM通过调控miR-337-3p介导VEGF通路抑制RA血管翳血管内皮细胞活化的机制。本研究将为DTYM临床诊疗应用提供科学依据,为RA创新药物研究奠定基础。一、断藤益母汤调控VEGF通路抑制CIA小鼠血管翳的形成目的:探讨断藤益母汤抑制CIA小鼠血管翳形成的作用及机制。方法:SPF级DBA/1雄性小鼠24只,7-8周龄,随机分为四组,分别是空白组（NC组）、模型组（CIA组）、甲氨蝶呤组（MTX组）、断藤益母汤组（DTYM组）,每组六只。除正常组外,其余组别小鼠均给予胶原与佐剂的乳化剂造模。自二次免疫起,给予灌胃等体积溶媒和药物,连续灌胃给药35天。观察小鼠的一般情况、关节炎指数。二次免疫35天后取膝、踝关节进行膝、踝关节micro CT扫描,以及进行膝、踝关节HE和番红-固绿染色并观察其病理改变,用免疫组织化学方法检测CD31、VEGF-α、VEGFR2、P-VEGFR2的表达。检测CIA小鼠血浆中miR-337-3p的表达。结果:在二次免疫后3天即有少数小鼠踝关节出现了红肿样改变,到二次免疫后7-14天时除正常组外,其他组别小鼠踝关节全部红肿,大部分小鼠出现活动受限的情况,在二次免疫后21天CIA组有部分小鼠踝关节出现了强直样改变。而与CIA组相比,DTYM组和MTX组踝关节红肿程度明显减轻。各组别关节炎指数评分结果显示:与CIA组比较,给药三周后的DTYM组和MTX组小鼠关节炎指数评分均显着下降（P<0.05或P<0.01）。HE染色结果显示:与CIA组比较,DTYM组和MTX组膝、踝关节关节面相对完整,滑膜增厚不明显,少量炎症细胞浸润。番红-固绿染色结果显示:与CIA组比较,DTYM组和MTX组小鼠膝、踝关节关节面相对完整,有部分软骨面较为粗糙,软骨厚度有明显增加。Micro CT结果显示:与CIA组比较,MTX组和DTYM组也均受到骨质破坏程度明显减轻;与CIA组比较,MTX组和DTYM组小鼠膝、踝关节骨破坏评分均明显降低（P<0.05或P<0.01）。CD31免疫组化显示:CIA组关节破坏严重,可见滑膜中明显的血管生成;而与CIA组比较,MTX组关节面正常,未见明显滑膜侵袭,仅在滑膜与骨质附着处有少量滑膜侵袭的痕迹;与CIA组比较,DTYM组关节面完整,有部分存在滑膜侵袭的迹象,但在侵袭处可明显未见棕色区域。光密度定量分析显示:与CIA组比较,DTYM组CD31光密度值显着降低（P<0.01）。VEGF-α、VEGFR2、P-VEGFR2免疫组化显示:CIA组在滑膜血管翳侵袭处可见明显VEGF-α、VEGFR2、P-VEGFR2的表达;与CIA组比较,MTX组关节面正常,未见明显滑膜侵袭,仅在滑膜与骨质附着处存在少量棕色区域;与CIA组比较,DTYM组关节面完整,有部分存在滑膜血管翳侵袭,在侵袭处可见少量棕色区域,有少量滑膜增生,滑膜与骨质附着处存在侵蚀,但未见明显棕色区域。VEGF-α、VEGFR2、P-VEGFR2光密度定量分析显示:与CIA组比较,DTYM组光密度值均显着降低（P<0.01）。CIA小鼠血浆miR-337-3p结果显示:与CIA组比较,DTYM组中小鼠血浆miR-337-3p水平则明显升高（P<0.01）。结论:DTYM可能通过调控CIA小鼠VEGF通路来起到抑制血管翳形成的作用,并且DTYM能够上调CIA小鼠中miR-337-3p的表达。二、断藤益母汤抑制体外HUVEC模型细胞活化的研究目的:验证断藤益母汤抑制体外HUVEC模型细胞活化的作用及机制。方法:采用CCK-8法检测DTYM对HUVEC细胞活力的影响,EDU细胞增殖检测试剂盒检测HUVEC细胞增殖能力,Transwell迁移法及鬼笔环肽荧光染色法检测细胞迁移功能,基质胶法检测对HUVEC细胞管形成能力。RT-q PCR检测HUVEC粘附因子E-selectin、ICAM1和VCAM1的m RNA表达。免疫印迹法检测DTYM对HUVEC细胞相关活化蛋白（VWF、CD31、ANG-1、CYR61）和VEGF信号通路蛋白表达的影响,细胞免疫荧光检测DTYM对HUVEC中CD31蛋白的表达。结果:CCK-8结果显示:和NC组比较,DTYM（200μg/ml）、DTYM（400μg/ml）、DTYM（600μg/ml）、DTYM（1000μg/ml）、DTYM（2000μg/ml）组HUVEC的细胞活力显着下降（P<0.01或P<0.05）;EDU细胞增殖结果显示:DTYM可显着降低HUVEC的增殖率（P<0.01）。Transwell小室迁移实验结果显示:与VEGF组比较,DTYM两剂量组能明显减少迁移到Transwell下室的细胞数量（P<0.01）,呈剂量依赖性;鬼笔环肽荧光染色实验结果显示:与TNF-α组比较,DTYM两剂量组能使HUVEC肌动蛋白表达明显减少（P<0.01）。管形成实验结果显示:与VEGF组比较,DTYM两剂量组能使HUVEC形成的管腔节点数目及管腔连接交叉点数明显减少（P<0.01）。RT-q PCR结果显示:与TNF-α组比较,DTYM两剂量组HUVEC中E-selectin、ICAM1和VCAM1 m RNA的表达均明显降低（P<0.01）,且呈剂量依赖性。Western blot结果显示:DTYM两剂量组能明显下调VWF、CD31、ANG-1、CYR61的蛋白表达水平。细胞免疫荧光显示:与NC组比较,TNF-α组CD31细胞免疫荧光强度明显升高（P<0.01）;而与TNF-α组比较,DTYM两剂量组CD31细胞免疫荧光强度均明显下降,（P<0.01）。Western blot结果显示:与TNF-α组比较,经过DTYM干预后HUVEC中VEGF-α、P-VEGFR2蛋白相对表达水平明显降低,VEGFR2蛋白相对表达水平则无明显改变。结论:DTYM能抑制HUVEC的增殖、迁移、粘附和管形成,从而抑制内皮细胞的活化,其作用机制可能与DTYM抑制HUVEC相关活化蛋白（CD31、VWF、CYR61、Ang-1）的表达以及调控VEGF信号通路有关。三、断藤益母汤上调miR-337-3p的表达调控体外HUVEC模型细胞活化的机制研究目的:验证断藤益母汤上调miR-337-3p的表达调控体外HUVEC模型细胞活化的机制。方法:采用荧光染色法检测在HUVEC细胞中miRNA转染效率。检测断藤益母汤和脂质体转染干预后HUVEC中miR-337-3p的相对表达。EDU细胞增殖检测试剂盒检测miR-337-3p对HUVEC细胞增殖的影响。Transwell体外迁移及鬼笔环肽荧光染色法标记细胞肌动蛋白表达检测细胞体外迁移功能。基质胶法检测miR-337-3p对HUVEC细胞管形成能力的影响。用免疫印迹法检测miR-337-3p对HUVEC细胞相关活化蛋白（VWF、CD31、ANG-1、CYR61）以及对VEGF信号通路蛋白的表达。免疫印迹法检测DTYM与miR-337-3p共干预对HUVEC细胞相关活化蛋白（VWF、CD31、ANG-1、CYR61）以及对VEGF信号通路蛋白的表达。结果:转染荧光实验结果显示:倒置显微镜下观察可见转染效率良好。与NC-mimic组（NCM组）比较,转染miR-337-3p mimic（337M组）的HUVEC中miR-337-3p的水平明显升高（P<0.01）;与NC-inhibitor组（NCI组）比较,转染miR-337-3p inhibitor（337I组）的HUVEC中miR-337-3p的水平明显降低（P<0.05）;与NC组比较,DTYM两剂量组HUVEC中miR-337-3p的水平均明显升高（P<0.01）,且呈现剂量依赖性。EDU细胞增殖结果显示:与NCM组比较,337M组HUVEC的增殖率显着下降（P<0.05）,而与NCI组比较,337I组HUVEC的增殖率显着上升（P<0.01）;Transwell结果显示:与NCM组比较,337M组迁出Transwell上室的细胞数量明显减少（P<0.01）;与NCI比较,337I组迁出Transwell上室的细胞数量增加不显着（P>0.05）。鬼笔环肽荧光染色结果显示:与NCM组比较,337M组HUVEC肌动蛋白表达明显减少（P<0.05）;与NCI比较,337I组HUVEC肌动蛋白表达增加不显着（P>0.05）。管形成实验结果显示:与NCM组比较,337M组HUVEC管腔节点数目及管腔连接交叉点数目明显减少（P<0.01）;与NCI组比较,337I组HUVEC管腔节点数目及管腔连接交叉点数目增多不明显（P>0.05）;免疫印迹结果显示,与NCM组比较,在TNF-α刺激下337M组HUVEC中VWF、CD31、ANG-1、CYR61以及VEGF-α、P-VEGFR2蛋白水平均明显降低。与NCI组比较,在TNF-α刺激下337I组HUVEC中CD31、CYR61蛋白表达水平有明显升高,而VWF、ANG-1则无明显改变。与NCI组比较,在TNF-α刺激下337I组HUVEC中VEGF-α蛋白表达水平明显升高,而P-VEGFR2则无明显改变。在TNF-α刺激下,与单独给与DTYM和337M组相比,DTYM与miR-337-3p mimic共干预的HUVEC中VWF、CD31、ANG-1、CYR61以及VEGF-α、P-VEGFR2蛋白表达水平明显降低。结论:DTYM可能是部分通过上调miR-337-3p的表达,来抑制VWF、CD31、CYR61、Ang-1的表达,以及抑制VEGF通路的激活来调控内皮细胞的活化,从而达到抑制CIA小鼠血管翳生成的作用。
刘永芳[7]（2021）在《基于JAK1/STAT3信号通路探讨历节胶囊治疗RA作用机制的研究》文中研究说明目的:观察历节胶囊对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠一般情况、关节炎症程度、滑膜病理改变及滑膜组织JAK1、STAT3蛋白表达水平的影响,从JAK1/STAT3信号通路探讨历节胶囊治疗类风湿关节炎（RA）的作用机理。方法:将30只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组各10只,除正常组外,历节胶囊组和模型组均诱导建立胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型。于造模后d15天起进行灌胃,历节胶囊组予实验药液,正常组、模型组均予无菌水灌胃作为实验对照,其余饮食、饮水自由。三组大鼠连续灌胃28天后处死。实验指标检测:CIA大鼠模型建立完成后,每周称量大鼠体重,采用水容积法测量大鼠下肢容积,对大鼠关节炎指数进行评分,以大鼠体重变化、足趾关节肿胀度、关节炎指数积分（AI）作为疗效评价标准;在光镜下观察各组大鼠踝关节滑膜病理形态改变;采用Western blot技术从蛋白的角度观察大鼠滑膜组织中JAK1、STAT3的蛋白表达水平。结果:（1）体重:与正常组相比,CIA组、历节胶囊组大鼠体重在成模后降低（P<0.05）;与CIA组相比,历节胶囊组大鼠给药2周后体重升高（P<0.05）;（2）足趾肿胀度:与正常组相比,成模后各组大鼠足趾肿胀度升高（P<0.05）;与CIA组相比,历节胶囊组给药2周后减轻明显（P<0.05）;（3）AI值:比之正常组,CIA组、历节胶囊组大鼠AI指数在成模后差异显着（P<0.01）;比之CIA组,历节胶囊组大鼠给药2周后AI值降低（P<0.05）;（4）滑膜病理:与CIA组相比,历节胶囊组干预后不同程度抑制了滑膜组织的增生,炎性细胞都不同程度的减少。（5）JAK1、STAT3蛋白的表达:与正常组相比,CIA组大鼠滑膜组织中JAK1、STAT3蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与CIA组比较,历节胶囊组表达JAK1、STAT3蛋白表达均降低（P<0.05）,但与正常组相比,历节胶囊组表达JAK1、STAT3蛋白表达仍升高（P<0.05）。结论:（1）历节胶囊可使CIA大鼠体重上升,改善大鼠一般情况;（2）历节胶囊可有效减轻CIA大鼠关节炎症表现,降低小鼠的足趾肿胀度、关节炎指数,但并未达到完全消除的效果;（3）历节胶囊可有效抑制了滑膜组织的增生,炎性细胞都不同程度的减少,但不能完全消除关节滑膜炎;（4）历节胶囊能降低滑膜JAK1、STAT3蛋白的表达水平,良性调控JAK1/STAT3信号通路,可能是其实现抗炎效应的重要分子机制之一。
刘芳[8]（2021）在《诃子治疗类风湿性关节炎主要活性成分及其作用机制的初步研究》文中研究表明研究背景:类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种常见的以关节滑膜炎症为主要表现的自身免疫性疾病,其致残率高、危害性大。RA病因复杂,尚未完全阐明,也无有效治愈的特效药。临床治疗药物以改善病情抗风湿药（disease-modifying antirheumatic drugs,DMARDs）为主,包括传统合成csDMARDs、生物制剂bDMARDs和靶向合成tsDMARDs等。csDMARDs类的代表药甲氨蝶呤是国内外指南推荐的RA治疗首选药,但长期使用可发生胃肠道不适,肝毒性和心血管并发症等,导致部分患者不能坚持用药。bDMARDs和tsDMARDs是新近开发上市的药物,具有起效较快,疗效较好的特点。但个体差异显着,约20%患者在治疗结束时未达预期治疗目标。此外,药物价格昂贵,长期使用可发生感染和血液系统毒性等不良反应也限制了这两类药物的临床应用。因此,研发RA治疗新药一直是药学领域中的重点工作之一。中药是中华民族的瑰宝,有着几千年的历史传承,是寻找RA治疗新药的宝贵资源。诃子（Terminalia Chebula Retz）是一味民族药材,在藏药和蒙药中应用广泛,有“万药之王”之称。以诃子为主药组方的风湿止痛丸和扎冲十三味丸等成药制剂在临床被用于RA的治疗并显示出一定的疗效,曾有报道其症状缓解有效率在80%以上。现代药理学研究表明诃子提取物具有较好的抗炎活性。但现有关于诃子抗RA的主要活性成分还缺乏系统研究。而已有的药理活性研究主要集中在表型观察,缺乏深入的机制探讨。因此,亟需应用现代药理学研究方法,明确诃子治疗RA的主要活性成分,进而揭示其作用机制。本研究旨在推进诃子等中药的现代化研究,具有较为重要的意义和科学研究价值。研究目的:本研究首先拟通过网络药理学预测诃子治疗RA的潜在活性成分-靶点-通路。采用高分辨质谱法和高效液相色谱法结合对预测的潜在活性成分进行定性和定量分析。进而以LPS诱导RAW 264.7细胞炎症模型、IL-1β诱导MH7A细胞炎症模型和胶原诱导关节炎动物模型,从分子水平,细胞水平和整体动物水平,明确诃子抗RA的主要活性成分并初步探究其作用机制。为将诃子开发为治疗RA的新药提供新证据和新策略。研究方法与结果1.基于网络药理学预测诃子治疗类风湿性关节炎的潜在活性成分-靶点-通路1.1潜在活性成分的确定利用中药系统药理学技术平台（TCMSP）和公共数据库查找已有文献报道的诃子化学成分。潜在活性成分的确定原则为:1.同时满足口服生物利用度OB%>30%和类药性DL>0.18。2.不满足条件1但已有文献报道明确具有抗炎活性的成分。据此原则,共筛选出10个潜在活性成分,6个多酚类和4个生物碱类。1.2潜在活性成分抗RA作用靶点的确定采用反向分子对接服务器（DRAR-CPI）对初步拟定的潜在活性成分的作用靶点进行拟合,与TCMSP自带靶点合并,得到诃子活性成分靶点186个;从国家生物技术信息中心（NCBI）数据库和Genecards数据库获取RA的靶点共1953个;将RA靶点和诃子药物靶点进行映射,找出47个交集靶点,即为诃子抗RA的作用靶点。经蛋白互作分析,TP53、TNF、IL6、CASP3、ESR1、MAPK14、VEGFA、IL10、PTGS2和BCL2L1是排名前十的关键靶点。TP53、CASP3、VEGFA和BCL2L1主要与细胞增殖、凋亡相关;ESR1主要与激素调节相关;TNF、IL6、MAPK14、IL10和PTGS2主要与炎症相关。1.3通路的确定与“活性成分-靶点-通路”网络的构建将诃子抗RA的作用靶点导入DAVID数据库,通过京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析诃子抗RA的信号通路。借助Cytoscape 3.6.1软件构建诃子治疗RA的“活性成分-靶点-通路”网络。结果共有54条KEGG通路参与诃子抗RA过程中,排在前列的通路主要涉及TNF信号通路、NOD样受体（NOD like receptor,NLR）信号通路、T细胞受体（T cell receptor,TCR）信号通路、核因子 κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）信号通路、Toll 样受体（Toll like receptor,TLR）信号通路、JAK-STAT信号通路和丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路等。各条信号通路形成交汇通路,并最终通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导炎症发生,提示NF-κB和MAPK信号通路在诃子抗RA的信号通路中发挥核心作用。2.参照网络药理学预测结果对诃子提取物成分的定性定量分析与体外活性研究2.1提取物的制备我们选择产地为云南的诃子和炮制诃子（煨诃子）,采用超声提取法,以超纯水、50%乙醇水溶液和无水乙醇溶液为溶剂,分别提取得到水提物、50%醇提物和醇提物。2.2提取物成分的定性分析由于50%醇提物兼具水提物和醇提物特性,所以,我们选择诃子和炮制诃子的50%醇提物,参照网络药理学的预测结果,采用高分辨质谱仪对其成分进行定性分析。结果诃子和炮制诃子提取物中存在6个多酚类化合物,而4个生物碱类化合物未检出。2.3提取物成分的定量分析采用福林酚法和高效液相色谱法（HPLC）对诃子和炮制诃子水提物、50%醇提物和醇提物中总酚含量和各多酚类成分含量进行定量分析。总酚含量测定结果显示炮制诃子总酚含量高于未炮制诃子,其中50%醇提物的总酚含量最高,显着高于水提物和醇提物。HPLC法分析各多酚类成分含量,结果50%醇提物得到的多酚类化合物含量最高,炮制诃子50%醇提物中各化合物含量由高到低依次为诃子宁>诃黎勒酸>没食子酸>柯里拉京>鞣花酸,其中诃子宁是含量最高的单体化合物。2.4提取物与单体化合物的活性研究2.4.1提取物及单体抗氧化活性研究:采用DPPH法测定诃子和炮制诃子水提物、50%醇提物和醇提物抗氧化能力。结果诃子和炮制诃子的提取物均具有较好的抗氧化活性。炮制诃子无论水提物、50%醇提物还是醇提物,对DPPH自由基清除的活力都高于未炮制诃子。其中炮制诃子50%醇提物对DPPH自由基的清除活力最高,IC50为7.305 μg/mL。同等浓度条件下,各多酚类单体化合物抗氧化活性强于炮制诃子50%醇提物。其中没食子酸抗氧化活性最强,鞣花酸次之,其余4种抗氧化活性相当。2.4.2提取物及其单体抗炎活性研究:采用IL-1β诱导类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A炎症模型研究炮制诃子水提物、50%醇提物和醇提物及各多酚类单体化合物对促炎症因子IL-6和IL-8表达的影响。三种不同溶剂提取物对IL-1β诱导的促炎症因子IL-6和IL-8均抑制作用,其中50%醇提物效果最佳,其次为水提物,最后为醇提物。几个单体酚类化合物中,诃子宁和诃黎勒酸在考察的浓度范围内对IL-6和IL-8均有较强的抑制作用,且随着浓度的增大,抑制作用增强,呈剂量依赖性。2.5主成分分析明确主要活性成分采用主成分分析法,以含量、DPPH自由基清除IC50值和低、中、高浓度对IL-6 IL-8抑制率为指标对各单体化合物综合评分排序。结果各化合物按分值高低排序依次为诃黎勒酸（1.28）,诃子宁（1.02）,柯里拉京（-0.26）,鞣花酸（-0.35）和没食子酸（-1.70）。诃黎勒酸和诃子宁得分显着高于另外三个化合物,确定为诃子提取物抗关节炎主要活性成分。3.炮制诃子50%醇提物与主要活性成分诃子宁在胶原诱导关节炎模型大鼠体内的药效学研究因体内药效学研究需要较大的给药剂量,诃子宁和诃黎勒酸市售供货不足。本研究自提成功制备足够的诃子宁单体,故选择炮制诃子50%醇提物和主要活性成分之一的诃子宁继续进行体内药效学研究。3.1方法3.1.1模型大鼠的构建以经典的胶原诱导关节炎造模,采用牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂按1:1比例混合乳化为滴水不散开的乳剂,通过尾部皮下注射0.2 mL乳剂,进行初次免疫诱导;第7天采用同样试剂同样方式进行二次免疫诱导,构建大鼠CIA模型。3.1.2分组与给药将42只SD大鼠（雌雄各半,体重160±20 g）随机分为7组,每组6只。分别为正常组、CIA模型组、CIA+炮制诃子50%醇提物低剂量组（生药量0.625 g/kg,0.5倍临床使用量）、CIA+炮制诃子50%醇提物中剂量组（1.25 g/kg,1倍临床使用量）、CIA+炮制诃子50%醇提物高剂量组（2.5 g/kg,2倍临床使用量）、CIA+诃子宁组（60 mg/kg诃子宁单体,与高剂量组所含诃子宁等量）和CIA+阳性对照药组（甲氨蝶呤MTX 2.5 mg/kg）。诃子各剂量组和诃子宁组从造模第0天开始每天固定时段灌胃给药,MTX每7天灌胃给药,正常组和模型组每天灌胃给予同等体积的生理盐水,持续给药28天。3.2结果3.2.1炮制诃子50%醇提物与诃子宁可降低CIA大鼠发病率和改善症状模型组大鼠从第10天左右开始发病,发病以后肢肿胀为主,总体发病率显着高于其余组。而给药组虽有发病,但发病率和关节炎指数评分均显着低于模型组。在右后肢足厚度上,正常组平均足厚度为0.61±0.06 cm,模型组大鼠随着疾病的发生发展足厚度逐渐增加,到第28天时,平均足厚度为0.85±0.17 cm。其余各给药组因疾病程度较轻,足厚度水平也显着低于模型组,差异有统计学意义。3.2.2炮制诃子50%醇提物与诃子宁可降低促炎症因子的表达第21天时,模型组大鼠可见明显足肿胀,但测定血中TNF-α水平,发现并未体现出组间差异,几乎测定不到。而到第28天时,可见模型组TNF-α明显升高,显着高于正常组。而炮制诃子提取物各剂量组和诃子宁组均可抑制TNF-α的表达。IL-1β和IL-6结果与TNF-α相似。但诃子宁单体组与含有等量诃子宁的高剂量组相比,高剂量组抑制炎症因子效果更好,差异有统计学意义。3.2.3炮制诃子50%醇提物与诃子宁对肝肾功能和免疫器官指数无影响正常组、模型组、炮制诃子50%醇提物低中高三个剂量组、诃子宁组以及MTX组各间胸腺指数和脾脏指数以及肝肾功能指标（肌酐、ALT、AST和ALT/AST）差异无统计学意义。4.诃子宁抗关节炎作用机制的初步研究4.1方法4.1.1模型小鼠的构建采用牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂按1:1比例混合乳化为滴水不散开的乳剂,小鼠尾根部皮内注射0.1 mL进行初次免疫诱导;在第21天,采用牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂按1:1比例混合乳化为滴水不散开的乳剂,小鼠尾根部皮内注射0.1 mL进行二次免疫诱导;通过两次诱导构建小鼠CIA模型。4.1.2分组与给药将DBA/1小鼠随机分为5组,每组10只,正常组,CIA模型组,CIA+诃子宁预防给药组,CIA+诃子宁治疗给药组和CIA+阳性对照组（来氟米特）。其中诃子宁预防给药组从二次免疫后开始每天固定时段灌胃给药,连续给药21天;诃子宁治疗给药组和阳性对照组从大多数动物发病时开始给药,剔除未发病小鼠,保证每组8只以上,连续给药21天。正常组和模型组每天灌胃给予同等体积的不含药溶液,持续给药21天。4.1.3 LPS诱导RAW 264.7细胞炎症模型研究诃子宁对MAPK通路和NF-κB通路的调控作用选择不抑制细胞增殖但能明显抑制炎症因子表达的低、中、高三个浓度梯度（25、50和100 μM）诃子宁干预LPS刺激RAW 264.7细胞,以激光共聚焦观察诃子宁对MAPK通路p38和NF-κB通路p65的核转录影响;采用核蛋白提取试剂盒分离核蛋白,Westen bloting分别检测核蛋白中MAPK通路p38和NF-κB通路p65表达量的变化。最后选择p38通路抑制剂和NF-κB通路抑制剂进一步验证诃子宁对通路的影响。4.2结果4.2.1诃子宁给药可降低CIA小鼠发病率并减缓关节肿胀程度关节炎模型组从24天左右开始发病,并持续增加,最终90%的小鼠发展为关节炎。而诃子宁预防组在给药期间无关节炎发生,与模型组有显着的统计学差异（p<0.05）。从关节肿胀严重程度上来看,诃子宁预防给药组的肿胀程度也显着低于CIA模型组。诃子宁治疗组和阳性对照药来氟米特组在给药后均可效缓解关节肿胀。4.2.2诃子宁能延缓关节滑膜炎症以及软骨与骨损伤通过Micro-CT扫描重建的3D图发现正常对照组小鼠的骨表面光滑,结构完整。CIA模型组小鼠的趾骨和跖骨连接处,以及跖骨和楔状骨连接处的关节溶蚀明显。而诃子宁以及阳性对照药来氟米特显着延缓了这一损伤。HE染色结果也从病理学角度进一步证实了诃子宁可有效抑制关节炎症,延缓关节破坏。4.2.3诃子宁可降低促炎症因子的表达模型组促炎因子IL-6和TNF-α的表达水平显着增高,而诃子宁预防和治疗给药均可降低促炎症因子水平,其中尤以治疗给药效果最佳,与阳性药来氟米特效果相当。4.2.4诃子宁可抑制p38、JNK、p65和IκBα磷酸化Western bloting测定小鼠关节组织蛋白结果显示,与对照组相比,CIA模型组MAPK通路的p38、JNK、ERK的磷酸化和NF-κB的p65与IκBα磷酸化水平显着增高。而诃子宁给药可明显抑制NF-κB的p65与IκBα的磷酸化以及MAPK通路的p38与JNK的磷酸化,但对ERK的磷酸化无影响。4.2.5诃子宁抑制p38和p65核转录细胞实验结果显示,LPS可激活RAW264.7细胞,使p38和p65明显核转移,触发炎症反应。而在诃子宁干预后,激光共聚焦下观察到p38和p65核转移明显降低,Western bloting检测到核蛋白中p38和p65的含量也显着下降。4.2.6诃子宁与通路抑制剂有协同作用单独使用诃子宁或p38抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂BAY 11-7082能抑制LPS诱导的促炎症因子TNF-α和IL-6的表达,而诃子宁联用上述抑制剂具有协同作用,抑制效果进一步加强。结论:1.采用网络药理学的方法,预测出诃子抗RA的10个潜在活性成分,通过作用于TP53、TNF-α和IL6等47个靶点,调控NF-κB和MAPK为主的54条信号通路发挥抗RA作用。2.以超纯水,50%乙醇水溶液和无水乙醇溶液为提取溶剂,系统比较了诃子与炮制诃子提取物在总酚含量、各多酚化合物含量以及抗氧化和抗炎活性的区别。明确炮制诃子在总酚含量、抗氧化和抗炎活性方面均优于未炮制诃子。相较于水提物和醇提物,50%醇提物得到多酚含量最高,抗氧化和抗炎活性最强。3.首次对炮制诃子50%醇提物体内抗关节炎活性进行研究,结果显示炮制诃子50%醇提物能呈剂量依赖性的延缓CIA大鼠关节炎的发生发展,缓解关节肿胀,降低促炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达。4.对诃子提取物中的5个活性成分没食子酸、柯里拉京、诃子宁、诃黎勒酸和鞣花酸进行较为系统地比较,从含量、DPPH自由基清除IC 50值和低、中、高浓度对IL-6与IL-8抑制率等方面综合评估,明确诃黎勒酸和诃子宁为诃子提取物主要活性成分。5.首次明确诃子宁是诃子提取物中的主要活性成分之一并对其治疗RA的药效学和作用机制进行了较为系统地研究。结果诃子宁对CIA诱导的大鼠和小鼠关节炎模型都有缓解和治疗作用。可通过抑制MAPK和NF-κB相关蛋白的磷酸化与核转录,进一步抑制促炎症因子的表达,缓解关节炎症,发挥治疗关节炎作用。
裴冰[9]（2021）在《IL-38通过SIRT1/HIF-1α信号通路调节Th17/Treg平衡抑制胶原诱导性关节炎大鼠炎性反应》文中研究指明目的:类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是临床常见的风湿免疫疾病之一,其发病率居首位,目前,我国患病率为0.32%-0.36%,全世界患病率为0.5%-1.0%,且逐年上升。类风湿关节炎的高发病率和高致残率严重地影响患者的生活质量。目前研究发现Th17/Treg细胞失衡在类风湿关节炎起着关键作用,调整Th17细胞和Treg细胞亚群的失衡是治疗RA的核心靶点。Interleukin-38（IL-38）是IL-1家族新成员,对炎症性免疫过程有抑制作用,有研究发现,IL-38可以在多种自身免疫性疾病中发挥重要作用。本研究通过建立胶原诱导性关节炎大鼠（CIA）模型,观察IL-38通过SIRT1/HIF-1α信号通路抑制胶原诱导性关节炎大鼠炎性反应,从而为类风湿关节炎的治疗方式提供新的理论依据。研究方法:1.SPF级SD大鼠30只,随机分为对照组（CON组）、CIA模型组（CIA组）、CIA+IL-38（5ng/g）组（IL-38组）,每组10只;在鼠尾根部皮下注射牛II型胶原乳剂建立CIA大鼠模型;连续观察大鼠后足情况,关节症状评分采用关节炎指数积分法进行评定,算出每组大鼠关节炎评分平均值;待给药结束后,通过HE染色观察大鼠滑膜组织的病理变化;ELISA检测各组大鼠血清中Th 17细胞因子及分化相关因子和Treg细胞因子水平的变化;流式细胞检测Th17/Treg细胞情况;q RT-PCR检测Th17/Treg相关基因及Th17/Treg细胞因子的表达情况,免疫组化、免疫荧光观察SIRT1/HIF-1α的表达变化。2.SPF级SD大鼠30只,随机分为CIA模型组（CIA组）、CIA+IL-38（5ng/g）组（IL-38组）、CIA+IL-38（5ng/g）+SIRT1抑制剂（EX527 1ug/kg）组（SIRT1i组）,每组10只;在鼠尾根部皮下注射牛II型胶原乳剂建立CIA大鼠模型;观察各组大鼠关节炎评分;通过HE染色观察关节滑膜组织病理变化;ELISA检测血清中Th17细胞因子及分化相关因子和Treg细胞因子水平的变化;流式细胞检测Th17/Treg细胞;q RT-PCR检测Th17/Treg相关基因及细胞因子的表达情况;免疫荧光和Western Blot检测SIRT1/HIF-1α信号通路相关蛋白。结果:1.第一部分:1)关节炎指数评分:各造模组大鼠关节炎指数积分明显增高,在同一时间点与空白对照组比较,均有显着性差异（P<0.05）,与CIA组相比,IL-38组大鼠的关节炎指数评分明显降低（P<0.05）;2)HE染色显示:对照组大鼠踝关节结构完整,未见明显损伤。CIA组大鼠踝关节结构紊乱,滑膜细胞增生明显,间质内大量炎性细胞浸润,血管翳形成,部分甚至侵蚀到软骨表面破坏关节。与CIA模型组相比,IL-38组关节损伤明显减轻,滑膜组织细胞的炎性细胞明显减少;3)血清细胞因子水平:与对照组相比,CIA组大鼠IL-17、IL-21、IL-22、IL-6、IL-23的表达均升高,TGF-β、IL-10的表达则降低（P<0.05）;与CIA组相比,IL-38组大鼠IL-17、IL-21、IL-22、IL-6、IL-23的表达下降,TGF-β、IL-10的表达则升高（P<0.05）。4)流式细胞检测:与CIA组相比,IL-38组大鼠的脾MNCs CD4+IL-17A+细胞的细胞百分数回落,CD4+CD25+Foxp3+细胞的细胞百分数回升（P<0.05）;IL-38组Treg/Th17细胞比值比CIA有所升高（P<0.05）;5)Th17/Treg相关基因:与CIA组相比,IL-38组大鼠Th17细胞的转录因子RORγt的m RNA表达降低,Treg细胞的转录因子Foxp3的m RNA表达升高（P<0.05）;Th17细胞因子IL-17、IL-21、IL-22的m RNA表达下降,促进Th17细胞分化的IL-6、IL-23 m RNA表达下降,Treg细胞因子TGF-β、IL-10的m RNA表达则升高（P<0.05）。6)免疫荧光和免疫组化结果显示:与对照组相比,CIA组大鼠的NF-κb、AP-1的表达明显升高（P<0.05）,与CIA组相比,IL-38组大鼠的NF-κb、AP-1的表达显着降低（P<0.05）;7)免疫荧光结果显示:与对照组相比,CIA组大鼠的SIRT1的阳性表达减少,HIF-1α的阳性表达升高（P<0.05）;与CIA组相比,IL-38组大鼠的SIRT1的阳性表达降低,HIF-1α的阳性表达降低（P<0.05）。2.第二部分:1)关节炎指数评分:IL-38组大鼠的关节炎指数积分明显较CIA组降低,而SIRT1i的大鼠关节炎积分较IL-38组高（P<0.05）;2)HE染色结果:IL-38组大鼠踝关节明显较CIA组有所改善,而SIRT1i组大鼠踝关节的结构明显增生,且结构紊乱,间质内可见大量炎性细胞浸润,软骨表面局灶性变性程度较重,甚至破坏关节;3)血清细胞因子:与CIA组相比,IL-38组Th17分泌的细胞因子IL-17、IL-21和IL-22的表达水平均下降,而Treg细胞分泌的细胞因子TGF-β和IL-10的表达水平则升高（P<0.05）。与IL-38组相比,SIRT1i组,Th17分泌的细胞因子IL-17、IL-21和IL-22的表达均增加,Treg细胞分泌的细胞因子TGF-β和IL-10的表达则减少（P<0.05）。与CIA组相比,IL-38组的促进Th17分化的细胞因子IL-6和IL-23的表达水平下降（P<0.05）,与IL-38组相比,SIRT1i组IL-6、IL-23的表达升高（P<0.05）。4)流式细胞检测:SIRT1i组大鼠的脾MNCs CD4+IL-17A+细胞的细胞百分数较IL-38组升高（P<0.05）,CD4+CD25+Foxp3+细胞的细胞百分数有所降低（P<0.05）,而SIRT1i组与CIA组无明显差异（P>0.05）,Treg/Th17细胞比值在SIRT1i组中明显较IL-38组降低（P<0.05）;而SIRT1i组与CIA组相比,Treg/Th17细胞比值无统计学意义（P>0.05）;5)Th17/Treg相关基因:与IL-38组相比,SIRT1i组大鼠的Th17细胞的转录因子RORγt的m RNA表达升高,Treg细胞的转录因子Foxp3的m RNA表达降低（P<0.05）,Th17细胞因子IL-17、IL-21、IL-22的m RNA表达升高,Treg细胞因子TGF-β、IL-10的m RNA表达则降低（P<0.05）,SIRT1i组大鼠的IL-6、IL-23的m RNA表达升高（vs.IL-38组,P<0.05）;6)SIRT1/HIF-1α相关蛋白:免疫荧光和Western Blot结果显示,与CIA组相比,IL-38组SIRT1阳性表达较高,HIF-1α、Myd88、NF-κb及AP-1阳性表达较低（P<0.05）,与IL-38组相比,SIRT1i组大鼠滑膜组中HIF-1α、Myd88、NF-κb及AP-1阳性表达较为明显增加,SIRT1阳性表达较少（P<0.05）。结论:IL-38可以缓解CIA关节损伤,抑制炎症反应,改善CIA的Th17/Treg失衡,其作用机制可能与调控SIRT1/HIF-1α信号通路有关。
郭帅[10]（2020）在《不完全佐剂和完全佐剂分别与牛二型胶原蛋白制备的SD大鼠CIA模型的比较研究》文中研究说明目的:制作胶原诱导的类风湿关节炎（Collagen-induced rheumatoid arthritis,CIA）模型;动态比较不完全弗氏佐剂（Incomplete Freund’s adjuvant,IFA）和完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）分别与牛II型胶原蛋白（Calf II collagen,CII）充分乳化后形成的的乳化剂诱导形成的两种SD大鼠CIA模型的效果。方法:选用35只8周龄雌性SPF级SD大鼠,随机分为生理盐水对照组（7只）,CII+IFA模型组（14只）和CII+CFA模型组（14只）。生理盐水对照组皮内注射生理盐水,CII+IFA模型组皮内注射CII+IFA乳化剂,CII+CFA模型组皮内注射CII+CFA乳化剂,建立SD大鼠CIA模型。在初次免疫前及免疫后每3天观察一次大鼠一般状态;测量三组大鼠体重,足爪体积,评价关节炎指数。在免疫第0,7,14,21,28,35,42天不同时间点收集胸腺,肾上腺,脾脏,膝关节处滑膜组织和踝关节及血液标本。测量测胸腺,肾上腺,脾脏的质量指数;采用魏氏血沉法检测红细胞沉降率（Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR）变化;采用苏木精和伊红（HE）染色后观察膝关节处滑膜组织和踝关节病理学改变并进行病理分析;酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay;ELISA）检测血清炎性因子肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor,TNF-α）、白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和白介素-17（Interleukin-17,IL-17）在RA中的表达变化。结果:（1）与生理盐水组一般状态相比,两模型组大鼠均有出现不同程度精神萎靡,倦怠少动,蜷缩,皮毛杂乱无光,摄食、饮水量减少,踝关节和足趾关节肿胀、变形,部分大鼠注射部位出现多个炎性小溃疡,溃疡多可自愈。（2）在体重方面上与对照组比较CFA+CII组对SD大鼠体重影响不明显,IFA+CII组体重下降比CFA+CII组明显。（3）在足爪体积变化上两模型组与对照组比较均有统计学意义。IFA+CII组和CFA+CII组有差异,且CFA+CII组模型组相对于IFA+CII组肿胀明显。（4）各组组内SD大鼠左右肢体积变化没有明显差异性;（5）在关节炎指数方面上两模型组与对照组比较均有统计学意义。且在第36,39天时,IFA+CII组与CFA+CII组也有差异（p<0.05）;（6）在脏器质量指数方面上CFA+CII对SD大鼠胸腺的影响较IFA+CII大;CFA+CII对SD大鼠脾脏的影响比IFA+CII大;IFA+CII和CFA+CII对肾上腺均有一定的影响。（7）在血沉方面上与对照组相比,IFA+CII组血沉升高比CFA+CII组明显。（8）在病理学方面上生理盐水组膝关节滑膜细胞仅1-3层,滑膜下组织未见炎性细胞,无或仅少量血管增生,关节软表面光滑,关节软骨及软骨下骨质无破坏,关节间隙正常;模型组膝关节滑膜细胞增生明显,有多层,滑膜下组织见大量的炎性细胞浸润,血管和纤维结缔组织增生,形成的血管翳破坏软骨及软骨下骨质,关节结构可被破坏。（9）TNF-α,IL-1β,IL-17表达水平均均增加,且TNF-α,IL-1β和IL-17表达变化有明显的统计学意义。结论:CII+IFA乳化剂和CII+CFA乳化剂均可制备大鼠CIA模型,效果有所不同。CII+IFA乳化剂制备的模型副反应更小,更适合作为大量复制的CIA动物模型,可为研究RA的病因、发病机制、和治疗方法提供有力的帮助。
二、软骨胶原诱导实验性关节炎及与类风湿关节炎关系的研究概况（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、软骨胶原诱导实验性关节炎及与类风湿关节炎关系的研究概况（论文提纲范文）
（1）二妙散水提物调控CIA大鼠FLS NF-κB信号通路的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词中英文对照 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 动物分组 |
| 1.5 CIA模型的构建及取材 |
| 1.6 体重变化 |
| 1.7 关节炎评分 |
| 1.8 大鼠足容积检测 |
| 1.9 Masson染色 |
| 1.10 CIA-FLS分离纯化培养 |
| 1.11 CIA-FLS传代培养、形态学观察 |
| 1.12 EMS水提物制备 |
| 1.13 实验分组 |
| 1.14 不同浓度EMS水提物对CIA-FLS细胞活力的影响 |
| 1.15 不同浓度EMS水提物对CIA-FLS细胞迁移的影响 |
| 1.16 不同浓度EMS水提物干预组CIA-FLS总 RNA提取 |
| 1.17 cDNA合成 |
| 1.18 引物设计、合成与PCR检测 |
| 1.19 不同浓度EMS水提物对CIA-FLS中 NF-κB通路m RNA水平检测 |
| 1.20 不同浓度EMS水提物干预组NF-κBp65 蛋白水平检测 |
| 1.21 数据分析及图片处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 不同实验组大鼠体重结果 |
| 2.2 不同实验组大鼠关节炎评分结果 |
| 2.3 不同实验组大鼠足跖容积结果 |
| 2.4 不同实验组大鼠关节组织病理学检测 |
| 2.5 EMS水提物对CIA-FLS生长的影响 |
| 2.6 EMS水提物对CIA FLS增殖及迁移能力的影响 |
| 2.7 IL-6、TNF-α和 NF-κBp65 扩增曲线与熔解曲线 |
| 2.8 EMS水提物对NF-κB通路m RNA水平表达的影响 |
| 2.9 EMS水提物对CIA-FLS中 NF-κBp65 蛋白水平表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CIA大鼠模型的构建 |
| 3.2 EMS水提物对CIA-FLS增殖及迁移能力的影响 |
| 3.3 NF-κB信号转导在类风湿关节炎病理进程中的作用 |
| 3.4 二妙散调控NF-κB信号通路的机制 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 基于CAP与NF-κB信号转导的中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）傅山风湿外治方对CIA大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及CIA模型构建 |
| 2.2 药膏制备 |
| 2.3 给药方法及取材 |
| 2.4 大鼠一般情况观察 |
| 2.5 体质量观测 |
| 2.6 关节直径测定 |
| 2.7 关节炎评分 |
| 2.8 FS-med对 CIA大鼠关节组织的影响 |
| 2.9 FS-med对 CIA大鼠关节软骨组织的影响 |
| 2.10 ELISA血清检测 |
| 2.11 Notch1、Jagged1、Hes1 特异性引物设计及合成 |
| 2.12 不同实验组大鼠关节总RNA提取 |
| 2.13 cDNA合成 |
| 2.14 qRT-PCR检测Notch1、Jagged1、Hes1 m RNA水平 |
| 2.15 不同实验组大鼠关节组织总蛋白提取 |
| 2.16 Western Blot检测Notch1、Jagged1和Hes1 蛋白表达量 |
| 2.17 Notch1、Jagged1和Hes1 免疫组化分析 |
| 2.18 统计学分析及图像处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 FS-med对不同实验组大鼠足肿胀的影响 |
| 3.2 FS-med对不同实验组大鼠体重的影响 |
| 3.3 FS-med对不同实验组大鼠关节直径的影响 |
| 3.4 FS-med对不同实验组大鼠关节炎评分的影响 |
| 3.5 FS-med对 CIA大鼠关节组织的影响 |
| 3.6 FS-med对 CIA大鼠关节软骨组织的影响 |
| 3.7 FS-med对不同实验组大鼠细胞因子的影响 |
| 3.8 Notch1、Jagged1和Hes1 引物检测 |
| 3.9 qRT-PCR扩增曲线和熔解曲线 |
| 3.10 不同实验组大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1 m RNA水平表达 |
| 3.11 不同实验组大鼠关节中Notch1、Jagged1和Hes1 蛋白表达 |
| 3.12 不同实验组大鼠关节免疫组化检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 动物模型的建立 |
| 4.2 傅山风湿外治方对CIA大鼠的药效作用 |
| 4.3 傅山风湿外治方对CIA模型大鼠血清中Th1/ Th2 细胞因子的影响 |
| 4.4 傅山风湿外治方对CIA模型大鼠Notch1/ Jagged1 信号通路表达的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 类风湿关节炎外治法研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）甘草制祖师麻炮制工艺及其抗类风湿性关节炎作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号及缩略词英汉对照 |
| 前言 |
| 第一章 甘草炙祖师麻工艺的研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试药和试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 2.方法 |
| 2.1 祖师麻甲素定量测定 |
| 2.2 甘草炙祖师麻炮制工艺单因素实验 |
| 2.3 响应曲面实验 |
| 2.4 工艺验证 |
| 3.结果 |
| 3.1 甘草炙祖师麻炮制工艺单因素结果 |
| 3.2 响应曲面结果 |
| 3.3 工艺验证 |
| 4 讨论 |
| 第二章 甘草烘制祖师麻工艺的研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试药和试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2.方法 |
| 2.1 祖师麻甲素定量测定 |
| 2.2 甘草烘制祖师麻炮制工艺单因素实验 |
| 2.3 响应曲面 |
| 3.结果 |
| 3.1 甘草烘制祖师麻炮制工艺单因素结果 |
| 3.2 响应曲面结果 |
| 3.3 工艺验证 |
| 4.讨论 |
| 第三章 祖师麻不同炮制品抗弗式完全佐剂并牛Ⅱ胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎对比研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试药和试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 炮制品的制备 |
| 2.2 药液的制备 |
| 2.3 动物分组与给药 |
| 2.4 体重和脏器指数的测定 |
| 2.5 影像学评估 |
| 2.6 踝关节组织病理切片 |
| 2.7 数据处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 大鼠一般体征的变化结果 |
| 3.2 大鼠足肿胀度与AI评分结果 |
| 3.3 大鼠脏器指数结果 |
| 3.4 影像学评价大鼠踝关节损伤影响 |
| 3.5 大鼠踝关节组织病理学检测结果 |
| 4.讨论 |
| 4.1 类风湿性关节炎常用疗法 |
| 4.2 类风湿性关节炎疾病常用动物模型 |
| 4.3 甘草炙祖师麻对类风湿性关节炎大鼠踝关节与关节软骨病理损伤模型治疗作用 |
| 第四章 基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路的祖师麻甘草制品作用机制研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试药和试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 血清炎症相关因子TNF-α、IL-6、IL-10、IL-1β表达的测定 |
| 2.2 血清免疫相关因子含量测定 |
| 2.3 免疫组化实验检测大鼠踝关节NLRP3、NF-κB表达 |
| 2.4 大鼠滑膜组织TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达的测定 |
| 2.5 数据处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 祖师麻不同炮制品对CIA大鼠血清中炎症因子的影响 |
| 3.2 祖师麻不同炮制品对CIA大鼠血清风湿相关因子的影响 |
| 3.3 祖师麻不同炮制品对CIA大鼠踝关节内NLRP3、NF-κB表达的影响 |
| 3.4 祖师麻不同炮制品对CIA大鼠滑膜组织TLR4/NF-κB/NLRP3通路的表达 |
| 4.讨论 |
| 第五章 祖师麻不同炮制品改善LPS诱导的Raw264.7细胞炎症的作用机制研究 |
| 1.材料 |
| 1.1 试药和试剂 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 细胞 |
| 2.方法 |
| 2.1 祖师麻不同提取物及供试品溶液的制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞上清液的制备 |
| 2.4 LPS诱导Raw细胞炎症模型的建立 |
| 2.5 CCK8法测定Raw264.7细胞系的存活率 |
| 2.6 细胞上清液中NO与炎性因子的含量测定 |
| 2.7 细胞中蛋白的表达 |
| 2.8 数据处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 祖师麻不同炮制品对LPS诱导Raw264.7细胞的活力和NO含量的影响 |
| 3.2 祖师麻调节LPS诱导的Raw264.7细胞炎性因子的表达 |
| 3.3 祖师麻不同炮制品对细胞蛋白表达的影响结果 |
| 4.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录:文献综述 祖师麻化学成分及药理作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）基于NF-κB信号通路探讨siRNA干扰联合BMSCs对类风湿关节炎治疗作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 类风湿关节炎致病机理及其治疗的研究进展 |
| 1 类风湿关节炎模型建立、评价 |
| 2 类风湿关节炎致病机制的研究进展 |
| 3 信号通路与RA |
| 4 类风湿关节炎治疗方法的研究进展 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 NF-κB信号通路在类风湿关节炎发病中动态变化的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 siRNA干扰IL-1β、TNF-α表达以及BMSCs对炎症细胞调节的体外研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于NF-κB信号通路探讨siRNA联合BMSCs对类风湿关节炎治疗作用的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）昆断益母方调控Treg/Th17细胞失衡和抗类风湿关节炎的机制研究（论文提纲范文）
| 答辩委员会名单及评定意见 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 类风湿关节炎研究概况 |
| 1.2 中医药治疗类风湿关节炎研究概况 |
| 1.3 TH17/TREG细胞平衡与类风湿关节炎的研究进展 |
| 1.4 研究目的 |
| 第二章 实验研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验细胞 |
| 2.1.3 主要实验试剂和耗材 |
| 2.1.4 主要实验仪器和设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 药物的准备和保存 |
| 2.2.2 CIA模型制备 |
| 2.2.3 动物实验分组及处理方法 |
| 2.2.4 小鼠踝关节HE染色 |
| 2.2.5 血清和PBMC细胞分离 |
| 2.2.6 组织RNA提取 |
| 2.2.7 细胞总RNA提取与定量 |
| 2.2.8 cDNA第一链合成 |
| 2.2.9 荧光定量PCR |
| 2.2.10 ELISA法检测细胞因子 |
| 2.2.11 细胞培养与传代 |
| 2.2.12 细胞的冻存与复苏 |
| 2.2.13 CD~(4+)T细胞磁珠分选及培养 |
| 2.2.14 细胞实验分组与药物干预 |
| 2.2.15 流式细胞术 |
| 2.2.16 细胞实验分组与药物干预 |
| 2.2.17 CCK8法检测细胞增殖 |
| 2.2.18 Transwell检测细胞迁移能力 |
| 2.2.19 Transwell检测细胞侵袭能力 |
| 2.2.20 数据统计处理 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 CIA小鼠关节指数评分 |
| 3.2 CIA小鼠踝关节组织HE染色 |
| 3.3 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时PBMC中Foxp3和RORγt mRNA表达水平的影响 |
| 3.4 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时关节滑膜组织中Foxp3和RORγt mRNA表达水平的影响 |
| 3.5 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时PBMC中IL-1β、IL-17、TNF-α、IL-10表达水平的影响 |
| 3.6 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时血清中MIR-21-5P表达水平的影响 |
| 3.7 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时关节滑膜组织中MIR-21-5P表达水平的影响 |
| 3.8 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时血清中TLR4和STAT3 mRNA表达水平的影响 |
| 3.9 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时关节滑膜组织中TLR4和STAT3 mRNA表达水平的影响 |
| 3.10 昆断益母方对CIA小鼠在免疫的第35天时关节软骨组织中TLR4和STAT3 mRNA表达水平的影响 |
| 3.11 昆断益母方对初始T细胞中炎症因子IL-17、IL-1β、TNF-α和IL-10 mRNA表达水平的影响 |
| 3.12 昆断益母方对初始T细胞分化的TH17细胞和TREG细胞比例的影响 |
| 3.13 昆断益母方对初始T细胞与滑膜细胞共培养后细胞的增殖的影响 |
| 3.14 昆断益母方对初始T细胞与滑膜细胞共培养后细胞迁移和侵袭的影响 |
| 3.15 昆断益母方对初始T细胞与滑膜细胞共培养后细胞中MIR-21-5P表达的影响 |
| 3.16 昆断益母方对初始T细胞与滑膜细胞共培养后细胞中Foxp3和RORγt mRNA表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 昆断益母方能改善CIA小鼠类风湿性关节炎症状 |
| 4.2 昆断益母方能改善CIA小鼠体内TREG/TH17细胞比例 |
| 4.3 昆断益母方能改善CIA小鼠体内炎症因子表达水平 |
| 4.4 昆断益母方能上调CIA小鼠体内MIR-21-5P表达水平 |
| 4.5 昆断益母方能降低CIA小鼠体内TLR4和STAT3表达水平 |
| 4.6 昆断益母方能抑制FLS细胞的迁移和侵袭 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（6）断藤益母汤调控miR-337-3p介导VEGF信号通路抑制CIA小鼠血管内皮细胞活化的机制研究（论文提纲范文）
| 广州中医药大学研究生学位(毕业)论文答辩委员会名单及评定意见 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 类风湿关节炎的研究进展 |
| 一、中医对类风湿关节炎的研究进展 |
| 二、现代医学对类风湿关节炎治疗的进展 |
| 三、断藤益母汤对类风湿关节炎的研究进展 |
| 四、小结 |
| 第二节 类风湿关节炎中血管翳血管新生的研究概述 |
| 一、类风湿关节炎血管翳形成的概述 |
| 二、影响血管翳血管内皮细胞活化中的关键细胞因子 |
| 三、中西医对血管翳血管新生的研究进展 |
| 四、小结 |
| 第三节 miRNA在类风湿关节炎中的研究概述 |
| 一、miRNA在类风湿关节炎中的研究进展 |
| 二、miRNA在血管新生中的研究 |
| 三、中医药对miRNA调控的研究进展 |
| 四、小结 |
| 第二章 断藤益母汤调控VEGF通路抑制CIA小鼠滑膜血管翳的生成 |
| 一、目的 |
| 二、实验对象与材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学分析 |
| 五、结果 |
| 六、讨论 |
| 第三章 断藤益母汤抑制体外HUVEC模型细胞活化的研究 |
| 一、目的 |
| 二、实验对象与材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学分析 |
| 五、结果 |
| 六、讨论 |
| 第四章 断藤益母汤上调miR-337-3p表达调控体外HUVEC模型细胞活化的机制研究 |
| 一、目的 |
| 二、实验对象与材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、统计学分析 |
| 五、结果 |
| 六、讨论 |
| 结语 |
| 一、结论 |
| 二、创新点 |
| 三、存在的问题 |
| 四、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）基于JAK1/STAT3信号通路探讨历节胶囊治疗RA作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及药材 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 2 实验方式 |
| 2.1 动物饲养 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 建立II型胶原诱导性关节炎模型 |
| 2.4 给药剂量及方法 |
| 3 疗效指标 |
| 3.1 大鼠的一般情况 |
| 3.2 大鼠足趾肿胀容积变化 |
| 3.3 关节炎指数 |
| 4 实验室指标检测 |
| 4.1 大鼠关节滑膜病理检测 |
| 4.2 Western blot检测滑膜组织JAK1、STAT3 的蛋白含量 |
| 5 统计分析 |
| 6 实验结果 |
| 6.1 各组大鼠体重的变化 |
| 6.2 各组大鼠足趾肿胀容积变化 |
| 6.3 各组大鼠关节炎指数变化 |
| 6.4 历节胶囊对CIA大鼠滑膜病理的影响 |
| 6.5 历节胶囊对CIA大鼠滑膜组织中JAK1、STAT3 蛋白表达的影响 |
| 7 讨论 |
| 7.1 现代医学对RA的认识 |
| 7.2 传统医学对RA的认识 |
| 7.3 中医药对JAK/STAT信号通路的影响 |
| 7.4 历节胶囊的研究 |
| 7.5 研究结果的分析 |
| 8 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 综述 简述虫类药物治疗类风湿关节炎的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（8）诃子治疗类风湿性关节炎主要活性成分及其作用机制的初步研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词对照表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 基于网络药理学预测诃子治疗类风湿性关节炎的活性成分-靶点-通路 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 参照网络药理学预测结果对诃子提取物成分的定性定量分析与体外活性研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 诃子提取物与主要活性成分诃子宁在胶原诱导关节炎模型大鼠体内的药效学研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 诃子宁抗关节炎作用机制的初步研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述类风湿性关节炎研究现状及诃子治疗作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）IL-38通过SIRT1/HIF-1α信号通路调节Th17/Treg平衡抑制胶原诱导性关节炎大鼠炎性反应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 IL-38 减轻胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物与分组 |
| 2.2.2 CIA动物模型建立 |
| 2.2.3 大鼠关节炎评分 |
| 2.2.4 实验动物取材 |
| 2.2.5 HE染色观察大鼠滑膜组织病理变化 |
| 2.2.6 ELISA检测血清细胞因子(TGF-β、IL-10与IL-17、IL-21和IL-22)以及促进IL-17 细胞分化的相关因子(IL-6、IL-23) |
| 2.2.7 流式细胞仪检测Th17/Treg |
| 2.2.8 qRT-PCR检测滑膜 Th17 相关基因、滑膜 Treg相关基因 |
| 2.2.9 免疫组化检测大鼠滑膜组织NF-κB、AP-1 的表达变化 |
| 2.2.10 免疫荧光检测大鼠滑膜组织SIRT1、HIF-1α、NF-κB和 AP-1 的表达变化 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 CIA大鼠关节炎指数变化 |
| 3.2 HE染色结果 |
| 3.3 ELISA检测血清中Th17 细胞因子(IL-17、IL-21和IL-22)及Th 17 分化相关因子(IL-6、IL-23)和Treg细胞因子(TGF-β、IL-10)水平的变化 |
| 3.4 流式细胞检测大鼠脾Th17/Treg |
| 3.5 qRT-PCR检测Th17/Treg相关基因及细胞因子的表达情况 |
| 3.6 免疫组化观察大鼠关节滑膜NF-κb、AP-1 |
| 3.7 免疫荧光观察关节滑膜NF-κb、AP-1 的表达 |
| 3.8 免疫荧光观察关节滑膜SIRT1、HIF-1α的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 IL-38 通过SIRT1/HIF-1α信号通路抑制胶原诱导性关节炎 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器和试剂 |
| 2.1.1 主要实验仪器 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物与分组 |
| 2.2.2 CIA动物模型建立 |
| 2.2.3 关节炎指数评分 |
| 2.2.4 HE染色 |
| 2.2.5 ELISA检测血清中的细胞因子(TGF-β、IL-10、IL-17、IL-21及IL-22)以及促进IL-17 细胞分化的相关因子(IL-6、IL-23) |
| 2.2.6 流式细胞仪检测脾Th17/Treg细胞比列 |
| 2.2.7 qRT-PCR方法检测滑膜Th17 相关的基因及Treg相关的基因表达情况 |
| 2.2.8 免疫荧光检测SIRT1、HIF-1α、myd88、NF-κb及 AP-1 水平 |
| 2.2.9 WB检测SIRT1、HIF-1α、myd88、NF-κb及 AP-1 蛋白水平 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 关节炎指数评分 |
| 3.2 HE染色 |
| 3.3 ELISA检测血清中Th17 细胞因子(IL-17、IL-21和IL-22)及其分化相关细胞因子(IL-6、IL-23)和Treg细胞因子(TGF-β、IL-10)水平的变化 |
| 3.4 流式细胞检测大鼠脾Th17/Treg细胞 |
| 3.5 qRT-PCR检测Th17/Treg相关基因及细胞因子的表达情况 |
| 3.6 免疫荧光检测SIRT1、HIF-1α、myd88、NF-κb及 AP-1 |
| 3.7 WB检测SIRT1、HIF-1α、myd88、NF-κb、AP-1 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 白细胞介素-1 家族新成员:IL-38的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究结果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）不完全佐剂和完全佐剂分别与牛二型胶原蛋白制备的SD大鼠CIA模型的比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 实验技术路线图 |
| 附录 B 个人简历 |
| 附录 C 综述 |
| 参考文献 |
四、软骨胶原诱导实验性关节炎及与类风湿关节炎关系的研究概况（论文参考文献）
- [1]二妙散水提物调控CIA大鼠FLS NF-κB信号通路的机制研究[D]. 刘进. 山西中医药大学, 2021(09)
- [2]傅山风湿外治方对CIA大鼠Notch1/Jagged1通路表达的影响[D]. 赵彩虹. 山西中医药大学, 2021(09)
- [3]甘草制祖师麻炮制工艺及其抗类风湿性关节炎作用机制研究[D]. 张晓燕. 山西中医药大学, 2021(09)
- [4]基于NF-κB信号通路探讨siRNA干扰联合BMSCs对类风湿关节炎治疗作用的实验研究[D]. 吴秉星. 扬州大学, 2021(02)
- [5]昆断益母方调控Treg/Th17细胞失衡和抗类风湿关节炎的机制研究[D]. 范氏绒. 广州中医药大学, 2021
- [6]断藤益母汤调控miR-337-3p介导VEGF信号通路抑制CIA小鼠血管内皮细胞活化的机制研究[D]. 钱凯. 广州中医药大学, 2021
- [7]基于JAK1/STAT3信号通路探讨历节胶囊治疗RA作用机制的研究[D]. 刘永芳. 广西中医药大学, 2021(02)
- [8]诃子治疗类风湿性关节炎主要活性成分及其作用机制的初步研究[D]. 刘芳. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021
- [9]IL-38通过SIRT1/HIF-1α信号通路调节Th17/Treg平衡抑制胶原诱导性关节炎大鼠炎性反应[D]. 裴冰. 中国医科大学, 2021(02)
- [10]不完全佐剂和完全佐剂分别与牛二型胶原蛋白制备的SD大鼠CIA模型的比较研究[D]. 郭帅. 蚌埠医学院, 2020(01)