一、“鸡包涵体肝炎病毒引起鸡生殖和免疫功能抑制的机理及防治技术”通过专家鉴定（论文文献综述）
武宁[1]（2020）在《LMH细胞感染禽腺病毒血清4型早期miRNAs和mRNAs表达变化研究》文中提出禽心包积液肝炎综合征（hepatitis-hydropericardiμm syndrome,HHS）是一种以急性感染为主的家禽传染病。该病由高致病性禽腺病毒血清4型（Fowl Adenovirus,FAd V-4）引起,1987年在巴基斯坦的安卡拉（Angara）被首次发现,因而又被称为安卡拉病。2015年以来,我国福建、陕西、河南、河北、山东、安徽、辽宁等多个省区都发生了HHS疫情,给这些地区的禽类养殖行业带来了严重损失。FAd V-4主要侵染宿主肝细胞、内皮细胞以及淋巴细胞,能造成肝脏和心脏明显的组织病变,特别是能引起肝细胞中产生大量的嗜碱性包涵体。目前有关FAd V-4的致病机制,尤其是其进入宿主细胞的机制仍不清楚。本文以鸡肝癌细胞（Leghorn male hepatocellular,LMH）为细胞模型,开展FAd V-4进入细胞过程中宿主细胞基因变化及其调控研究,结果如下:1.FAd V-4流行株的分离鉴定和多克隆抗体的制备。从陕西省疑似心包积液-肝炎综合症发病鸡场中采集病料,用鸡胚和LMH细胞分离到一株病毒。通过对其六邻体基因（hexon）和五邻体基因（penton）进行测序,并与Gen Bank公布的序列比对,该病毒相关基因与近年来我国多省区分离的FAd V-4同源性高达99.8%～99.9%。动物试验证明,该FAd V-4分离株能引起肉鸡出现典型临床症状和组织病理变化,还能引起LMH细胞出现细胞病变。采用原核表达FAd V-4分离株的六邻体和五邻体重组蛋白,经Ni柱亲和纯化后免疫新西兰白兔获得了多克隆抗体。ELISA方法检测表明,制备的抗体效价达1:512,000,为后续的研究提供了材料。2.FAd V-4进入LMH细胞过程中宿主细胞mi RNAs表达变化研究。使用小RNA测序技术研究了FAd V-4进入LMH细胞过程中不同时间点（30 min、60 min和120 min）差异表达小RNA,筛选得到了784个差异表达mi RNAs。在30 min、60 min和120 min时,LMH细胞分别有520个、312个和246个mi RNAs显着差异表达。通过对这些差异表达mi RNAs的靶基因进行GO功能分类和pathway富集分析,发现FAd V-4进入LMH细胞过程中这些mi RNAs的靶基因主要参与了如粘附连接和受体结合等与病毒进入密切相关的细胞功能,并富集在内吞和受体相互作用等信号通路。3.FAd V-4进入LMH细胞过程中宿主细胞m RNAs表达变化研究。使用转录组测序技术,研究了FAd V-4进入LMH过程中不同时间点（30 min、60 min和120 min）差异表达基因,筛选得到了724个显着差异表达m RNAs。在FAd V-4感染30 min、60 min和120 min时,宿主LMH细胞分别有90个、259个、和625个m RNAs差异表达。通过对这些差异表达m RNAs进行GO功能分类和pathway富集分析,发现这些m RNAs参与了如粘附连接和受体结合等与病毒进入密切相关的细胞功能,并富集在Toll样受体信号通路、TNF信号通路以及MAPK信号通路。4.FAd V-4进入LMH细胞过程中宿主细胞差异共表达mi RNAs-m RNAs研究。使用多组学关联分析方法,筛选得到了FAd V-4进入LMH细胞过程中856组差异共表达的mi RNAs-m RNAs关联对。在FAd V-4感染30 min、60 min和120 min时,分别筛选出41组、154组和661组差异共表达的负相关mi RNAs-m RNAs关联对。通过GO功能分类和pathway富集分析发现,这些差异共表达mi RNAs-m RNAs关联对主要富集在MAPK信号通路、TNF信号通路以及Toll样受体信号通路。5.gga-mi R-128-2-5p与OBSL1的相关性分析以及对FAd V-4进入细胞的调控研究。从差异共表达mi RNAs-m RNAs关联对中,选择gga-mi R-128-2-5p与OBSL1之间的调控关系进行研究。结果表明FAd V-4进入LMH细胞过程中能引起gga-mi R-128-2-5p表达量的下降,而OBSL1表达量升高。使用q PCR和双荧光素酶报告基因方法,研究发现gga-mi R-128-2-5p过表达可以明显抑制OBSL1表达,而干扰gga-mi R-128-2-5p可以促进OBSL1表达。通过q PCR和CLSM方法,进一步证明了gga-mi R-128-2-5p可以通过下调OBSL1的表达,进而抑制FAd V-4进入宿主细胞。综上所述,分离鉴定到一株高致病性FAd V-4,制备出六邻体和五邻体蛋白的多克隆抗体。使用高通量测序技术,研究了FAd V-4进入LMH细胞过程中不同时间点宿主细胞mi RNAs和m RNAs的变化情况。通过多组学关联分析,筛选得到了FAd V-4进入LMH细胞过程中,细胞显着差异共表达的mi RNAs-m RNAs关联对。进一步研究,证实了宿主gga-mi R-128-2-5p可以通过下调其靶基因OBSL1的表达,抑制FAd V-4进入LMH细胞。研究结果为深入理解FAd V-4的致病机制提供了实验数据和理论依据。
魏若瑶[2]（2020）在《鸡Ⅰ群禽腺病毒三价灭活苗及卵黄抗体的研制》文中认为鸡I群禽腺病毒（FAdV-I）在临床上主要引起鸡的心包积液综合征（HHS）和包涵体肝炎（IBH）,在其12种血清型中,每种血清型都可引起鸡的包涵体肝炎,只有血清4型I群禽腺病毒（FAdV-4）可引起鸡的心包积液综合征。近五年来,这两种疾病在我国多个省份均有暴发,给养禽业带来了较大的经济损失,国内目前也无商品化疫苗进行鸡I群禽腺病毒的防控。鉴于此,本研究选取了三株优势血清型毒株FAdV-2、FAdV-4和FAdV-8b,进行FAdV-Ⅰ三价油乳剂灭活苗和卵黄抗体的制备,以期为鸡I群禽腺病毒的防控提供参考。1 FAdV-2、FAdV-4和FAdV-8b的扩增与三价灭活苗的制备本试验采用鸡肝癌细胞（LMH）扩增FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b,对收取的病毒液进行PCR鉴定和半数细胞培养物感染量（TCID50）测定后,使用终浓度0.15%的甲醛溶液进行灭活,按2:1的油水比制备FAdV-Ⅰ三价灭活苗,并对其质量进行检验。结果表明:LMH细胞可稳定传代,有利于FAdV-Ⅰ的增殖,所收获的FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b 病毒液的 TCID50 依次为 10-6.62/0.1mL、10-7.78/0.1mL、10-7.3/0.1mL;疫苗外观为乳白色均匀乳剂,油包水剂型,稳定性和无菌检验均符合要求,接种7日龄的SPF级雏鸡后一周内可被机体完全吸收,经14d的观察雏鸡精神状态良好,无不良反应。2 禽腺病毒三价油乳剂灭活苗的免疫效力评估将研究一制备的疫苗接种7日龄SPF级雏鸡,进行疫苗的最小免疫剂量、抗体水平效价和临床保护效力检测。结果显示:疫苗最小免疫剂量为0.4mL/只;免疫鸡群抗体水平在免疫后第2周开始上升,第4周达到最高,此时FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b产生的抗体效价分别为1:1230、1:1413、1:1349,而后缓慢下降;对各组鸡接种疫苗14d后分别注射0.2mL的FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b病毒液,经14d观察可见鸡只全部存活,剖检无病理变化且攻毒后第3、5、7、10、14天PCR检测均为阴性,临床保护率为100%。研究表明:所制备的三价油乳剂灭活苗免疫效果好,临床保护率高,可为FAdV-Ⅰ的防控提供参考。3 鸡Ⅰ群禽腺病毒2、4、8b血清型三价卵黄抗体的制备将上述疫苗对产蛋鸡进行三次免疫,于首次免疫后每周收取其血清和卵黄抗体进行效价监测。取抗体效价高于1:1024的卵黄抗体进行质量检验,并将检验合格的卵黄抗体效价稀释为1:1024后接种雏鸡进行预防和治疗试验。结果显示:产蛋鸡的血清和卵黄抗体效价在首次免疫后第2周开始上升,第11周达到最高,而后均维持在1:1024以上;所制备的卵黄抗体质量检验符合要求,雏鸡注射后精神状态良好,14d内无不良反应;对各组鸡只接种1.0mL效价为1:1024的卵黄抗体3d后,注射0.2mL的FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b病毒液,在14d的观察期内雏鸡无死亡现象,剖检无病理变化,且攻毒后第3、5、7、10、14天PCR检测均为阴性,临床保护率为100%;对各组鸡人工感染0.2mL的FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b病毒液1d后注射1.0mL效价为1:1024的卵黄抗体,经14d观察,FAdV-2感染鸡群治愈率达100%,FAdV-4和FAdV-8b感染鸡群治愈率均为90%。表明试验所制备的卵黄抗体质量检验合格,安全性高,对雏鸡感染FAdV-2、FAdV-4和FAdV-8b有良好的预防和治疗作用。
宋文平[3]（2020）在《E种禽腺病毒血清8a和8b型分离株致病性研究》文中认为引起鸡群发病的禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）包括5个种（A-E种）、12个血清型（1-8a,8b-11）。现今已知,不同血清型FAdV可引起鸡发生肝炎-心包积水综合征（Hepatitis-hydrop ericardium syndrome,HHS）、包涵体肝炎（Inclusion body hepatitis,IBH）和肌胃糜烂（Gizzard erosions,GE）。自2015年我国鸡群大面积暴发HHS以来,FAdV有多种血清型在我国鸡群中流行,其中,FAdV-8a和FAdV-8b型毒株在鸡群内流行趋势愈加严重,给疫病防控带来困难。为评价FAdV-8a型JL/170408株和FAdV-8b型HLJ151129株的致病特点,本试验选用SPF鸡进行人工感染。42只10日龄SPF白莱航鸡随机分成3组:第1组为JL/170408株感染组17只;第2组为HLJ/151129株感染组17只;第3组为对照组8只。感染组分别于感染后5 d剖杀5只,对照组剖杀3只,其余做临床观察。本研究以接近自然感染的滴鼻点眼途径进行感染,感染剂量为105.0 TCID50/只,对照组接种等体积无菌PBS。感染后每天观察症状,JL/170408组人工感染鸡只在感染后3 d开始出现临床症状,表现为中度沉郁,缩颈,嗜睡,喜卧,偶有鸡只出现一过性（1-2 d）呼吸困难,大约持续到感染后14 d,鸡只逐渐康复。发病率100%（12/12）,不引起鸡只死亡。感染后5 d剖检,JL/170408感染组剖检未见明显病理变化,偶有鸡出现少量心包积液和肌胃出血（1/5）,病理学检测肝脏和肌胃未见明显病理学变化。感染鸡只从在感染后3 d可检测到口腔和泄殖腔排毒,排毒时间长达60 d,且排毒具有反复性;病毒血症在感染后3 d可检测到病毒核酸存在,持续到感染后60 d,仍可在血液中检测到病毒核酸。在感染后15 d,部分鸡只开始出现抗体阳转,到感染后54 d,全部鸡只抗体转阳。JL/170408株在感染鸡各组织中均有不同程度增殖,在肌胃中病毒含量相对较高,病毒对鸡组织嗜性广泛。HLJ/151129组人工感染鸡在感染后3 d开始出现临床症状,表现为轻度沉郁,轻微缩颈,部分鸡只被毛蓬乱,采食和饮水正常,感染后6 d,鸡只逐渐开始康复。发病率83.3%（10/12）,不引起鸡只死亡。感染后5 d剖检未见明显病理变化,组织病理学检测肝脏和腺胃未见明显病理学变化。感染后3 d可检测到口腔和泄殖腔排毒,排毒时间长达60 d;病毒血症在感染后3 d即可检测到病毒核酸存在,持续到感染后60 d,仍可在血液中检测到病毒核酸。在感染后12 d,部分鸡只开始出现抗体阳转,到感染后54 d,全部鸡只抗体转阳。HLJ/151129株在感染鸡只各组织中均有不同程度增殖,病毒对鸡组织嗜性广泛。对FAdV-8a型JL/170408株和FAdV-8b型HLJ/151129株进行血清交叉中和试验,结果表明,抗JL/170408株（FAdV-8a型）血清与HLJ/151129毒株（FAdV-8b型）、抗HLJ/151129株（FAdV-8b型）血清与JL/170408株（FAdV-8a型）均具有交叉中和作用,但有抗原性差异。
文雅婷[4]（2020）在《沙眼衣原体感染相关lncRNA的筛选及其功能的初步研究》文中认为背景与目的:沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）是一种严格胞内寄生的革兰阴性菌,是世界范围内引起性传播感染的主要病原体之一。Ct生殖道感染通常呈慢性或无症状,容易形成上行性感染,导致严重并发症,例如附睾炎、前列腺炎、子宫内膜炎、输卵管炎、异位妊娠和不育。深入研究Ct的致病机制、寻找药物干预靶点,将为临床防治Ct感染提供重要的实验及理论依据。由于Ct胞内生存的特性,其在早期需要通过调控宿主相关信号通路、调节宿主细胞基因转录,改变宿主细胞生物学行为从而实现免疫逃避,完成胞内发育周期。本课题组前期发现的Ct唯一一种分泌型质粒蛋白pORF5被证明是Ct必不可少的致病因子,在衣原体感染早期阶段被分泌至宿主细胞胞浆中参与了衣原体致病过程。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）为一类重要的基因表达调控元件。本研究以人宫颈癌上皮细胞为模式细胞,构建E型Ct持续性感染模型,在此模型基础上探究宿主在衣原体急性感染和持续性感染过程中差异表达的lncRNA和mRNA及其相关信号传导通路,随后分析pORF5对宿主lncRNA 和未折叠蛋白反应（Unfolded protein response,UPR）的影响,进一步确定pORF5在Ct感染过程中的作用。本研究为Ct抵抗宿主细胞凋亡、维持细胞稳态提供了重要依据,为Ct致病机制的研究和潜在干预靶点的筛选提供了新思路。方法:1.分别应用不同浓度的人重组干扰素γ（Interferon gamma,IFN-γ）和青霉素G处理HeLa细胞后,间接免疫荧光法（Immunofluorescence assay,IFA）检测不同浓度下衣原体包涵体形态的变化,计算各浓度下子代衣原体包涵体形成单位（Inclusion-forming units,IFUs）确定最佳诱导浓度;移除处理因素,继续培养16 h观察衣原体形态恢复情况,同时收集子代衣原体进行新一轮感染,计算子代IFU。2.透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）观察不同时间点中异常体（Aberrant body,AB）的形成,实时定量PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测衣原体能量代谢、细菌分裂和膜结构等相关基因的转录水平流式细胞术（Flow cytometry,FCM）、Hoechst 染色和 AO/EB染色检测急性和持续性感染12、24、40 h时肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）诱导后的细胞;凋亡率。3.提取未感染细胞、急性感染和持续性感染12、24、40h的细胞总RNA Arraystarv4.0人类lncRNA芯片对差异表达lncRNAs和mRNAs进行检测,qRT-PCR对5个差异mRNAs（SESN2、GBP3、FZD10、PPPlR3C 和 DKK-1）和 4 个差异 IncRNAs（HIF1A-AS1、FGD5-AS1、USP30-AS1 和 LINC01556）在不同时间点的表达进行验证联合运用DAVID、KEGG、STRING、Metascape和Cytoscape等软件筛选差异表达基因富集通路,Co-lncRNA软件构建lncRNA-mRNA表达谱。4.qRT-PCR检测siRNA对FGD5-AS1的干扰效果,FCM和Hoechst染色检测干扰前后TNF-α诱导下感染细胞的凋亡率,western blot检测干扰前后FGD5-AS1共表达分子富集通路Wnt通路中β-catenin的蛋白表达情况,IFA检测β-catenin核转位情况。5.构建pORF5稳定过表达细胞株,qRT-PCR、westernblot和IFA对pORF5的表达进行验证,随后提取pORF5稳转细胞株和对照细胞株总RNA,Arraystar v4.0人类lncRNA芯片检测差异lncRNAs 和 mRNAs qRT-PCR 对 8 个差异表达 lncRNAs（GAS5、RP11-42015.3、H19、ZFAS1、BASP-AS1、FGD5-AS1、CRHR1-IT1 和 CALML3-AS1）和 8 个差异表达 mRNAs（MAPKAPK3,DDIT3、SESN2、FZD10、MAP3K13、NKRF、CASP2 和 DKK-1）进行验证;联合运用软件筛选差异表达基因富集通路。6.qRT-PCR 检测 siRNA 对 ZFAS1 表达的干扰效果,western blot检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达情况,FCM和Hoechst染色检测干扰前后TNF-α诱导下感染细胞的凋亡率,随后IFA检测干扰前后Ct子代感染率。7.分别采用ERK抑制剂（PD98059）、p38抑制剂（SB202190）和JNK抑制剂（SP600125）预处理pORF5稳转细胞株和对照细胞株后,TNF-α诱导细胞凋亡,western blot检测Bax和Bcl-2的表达情况,随后westernblot检测ZFAS1干扰前后,TNF-α诱导下稳转细胞中MAPK通路相关分子的磷酸化水平。8.分别用5 μg/mL和20 μg/mL去内毒素pORF5蛋白外源性刺激HeLa细胞,western blot检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株,以及外源性蛋白刺激的HeLa细胞在12、24、40 h 时 UPR 相关分子 BiP、p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α、p-IRE1α、IRE1α、ATF6、ATF4、CHOP 的表达水平以及自噬相关分子LC3,SQSTM1/p62和Beclin-1的蛋白表达水平,IFA检测ATF4的核转位和LC3的聚集情况,琼脂糖凝胶电泳检测qRT-PCR扩增后XBP1 mRNA的剪切情况。9.自噬抑制剂3-MA抑制自噬后,western blot检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株、外源性蛋白刺激的HeLa细胞在12、24、40 h时自噬以及UPR相关分子的表达水平,IFA检测LC3的聚集和ATF4的核转位情况,琼脂糖凝胶电泳检测qRT-PCR扩增后XBP1 mRNA的剪切情况。10.分别采用PERK 抑制剂（GSK2606414）和IRE1抑制剂（4μ8C）对UPR下游通路进行抑制,随后western blot检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株、外源性蛋白刺激的HeLa细胞在12、24、40h时自噬以及UPR相关分子的表达水平,IFA检测LC3的聚集和ATF4的核转位情况,琼脂糖凝胶电泳检测qRT-PCR扩增后XBP1 mRNA的剪接情况。11.Western blot检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株、外源性蛋白刺激的HeLa细胞在12、24、40 h时MAPK/ERK的磷酸化情况,随后应用PERK抑制剂和IRE1抑制剂分别抑制UPR下游通路,检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株、外源性蛋白刺激的HeLa细胞中ERK的磷酸化情况。12.应用ERK抑制剂（PD98059）抑制ERK后,检测Ct感染细胞、pORF5稳转细胞株及其对照细胞株、外源性蛋白刺激的HeLa细胞在12、24、40h时自噬以及UPR相关分子的表达水平,IFA检测LC3的聚集和ATF4的核转位情况,琼脂糖凝胶电泳检测qRT-PCR扩增后XBP1 mRNA的剪切情况。结果:1.IFN-γ浓度为75 U/mL,青霉素G浓度为75 U/mL时均可显着降低Ct感染能力（P<0.01）,并减小包涵体体积（P<0.05）;TEM可观察到持续性感染细胞包涵体中出现结构疏松、体积异常增大的AB而未见原体（Elementary body,EB）和网状体（Reticulate body,RB）,证实持续性感染模型的构建成功。与急性感染组（32.400±1.800）×106相比,移除IFN-γ后IFU为（12.600 ± 0.520）×106,移除青霉素 G 后 IFU 为（14.400 ±1.375）×106,而未移除 IFN-γ 组 IFU 为（3.600 ± 0.520）×106,未移除青霉素G组IFU为（3.900±0.300）×106,衣原体感染力得到部分恢复（P<0.05）。诱导凋亡后,与正常HeLa细胞相比（33.63%）,Ct急性感染和持续性感染12 h的细胞凋亡率分别为13.12%和14.77%（P<0.05）,感染24 h的细胞凋亡率分别为21.76%和18.71%（P<0.05）,感染40 h细胞凋亡率分别为 25.49%（P>0.05）和 26.32%（P>0.05）。衣原体在感染 12 和24 h时呈现抗凋亡效应,随着感染时间延长,衣原体抗凋亡能力下降。2.qRT-PCR 结果表明,筛选的差异 lncRNAs HIF1A-AS1、FGD5-AS1、USP30-AS1和LINC01556在相应感染时间点表达上调,差异mRNA GBP3在急性感染12 h和持续性感染40 h表达上调,SESN2、FZD10、PPP1R3C和DKK-1在相应感染时间点表达下调,差异基因变化趋势与芯片结果相一致;构建候选1ncRNA分子的lncRNA-mRNA表达谱,其富集通路为“Spliceosome”,“Ubiquitin Mediated Proteolysis”,“Oocyte Meiosis”和“Wnt Signaling Pathway”。3.siRNA干扰FGD5-AS1表达后,FGD5-AS1表达水平下降（P<0.01）;FCM结果表明,TNF-α诱导凋亡后,Ct感染细胞中,干扰组凋亡率（15.05%）高于未干扰组（11.08%）（P<0.05）。Hoechst染色结果表明,TNF-α 诱导凋亡后,Ct感染细胞中,干扰组凋亡率（17.70%）高于未干扰组（11.12%）（P<0.05）,Ct感染细胞抗凋亡能力减弱。4.转入pORF5慢病毒载体后,qRT-PCR、western blot和IFA结果表明pORF5蛋白在细胞中稳定过表达（P<0.01）;提取总RNA 后,qRT-PCR 结果表明,差异 lncRNAs GAS5、RP11-42015.3、H19 和 ZFAS1 表达上调,lncRNAs BASP1-AS1、FGD5-AS1、CRHR1-IT1 和 CALML3-AS1 表达下调;差异mRNAs MAP3APK3、DDIT3、SESN2、FZD10表达上调,MAP3K13、NKRF、CASP2和DKK-1表达下调,差异基因变化趋势与芯片结果相一致。siRNA干扰后,候选lncRNA分子ZFAS1表达下调（P<0.01）,western blot结果表明ZFAS1干扰组中Bcl-2/Bax 比值下调（P<0.01）,TNF-α诱导凋亡后Hoechst染色结果显示,ZFAS1干扰组凋亡率为14.49%,高于未干扰组凋亡率10.61%（P<0.05）,FCM结果中ZFAS1干扰组凋亡率（16.02%）同样高于未干扰组凋亡率（10.90%）（P<0.05）,pORF5稳转细胞株抗凋亡能力降低。干扰ZFAS1后,与对照组相比ZFAS1干扰组子代衣原体IFU为（2.280±0.227）×107,低于未干扰组子代衣原体IFU（5.880±0.289）×107,衣原体感染力显着降低（P<0.01）。5.TNF-α诱导细胞凋亡后,与对照细胞株ERK、JNK和p38磷酸化水平相比,pORF5稳转细胞株ERK磷酸化水平增加1.77倍（P<0.05）,p38磷酸化水平增加1.34倍（P<0.05）,JNK磷酸化水平变化无统计学差异（P>0.05）。MAPK抑制剂处理后诱导细胞凋亡,ERK抑制组中对照细胞株Bcl-2/Bax 比值为（0.454±0.024）,pORF5 稳转细胞株比值为（0.513±0.019）,两者比值无显着差异（P>0.05）;JNK抑制组中对照细胞株Bcl-2/Bax 比值为（0.418±0.057）,pORF5稳转细胞株比值为（0.513±0.019）对照细胞株Bcl-2/Bax比值低于稳转细胞株（P<0.05）;p38抑制组中对照细胞株Bcl-2/Bax 比值为（0.427±0.110）,pORF5稳转细胞株比值为（0.380±0.072）,两者比值无显着差异（P>0.05）。TNF-α诱导细胞凋亡后,与未干扰组ERK和p38磷酸化水平相比,ZFAS1干扰组ERK磷酸化水平无显着差异（P>0.05）,p38 磷酸化水平降低 0.56 倍（P<0.01）。6.Ct感染和pORF5蛋白的内外源性刺激均可诱导LC3转化、p62表达下调、Beclin-1表达上调,同时PERK、eIF2α、IRE1的磷酸化水平增加,BiP、ATF4和CHOP的蛋白表达水平上调,ATF6出现降解,ATF4入核,XBP1 mRNA发生剪切。7.3-MA抑制自噬后,Ct感染和pORF5内外源性刺激诱导BiP蛋白表达上调,磷酸化PERK及磷酸化eIF2α、ATF4和CHOP表达增加,XBP1 mRNA发生剪切,ATF4入核;应用PERK制剂,Ct感染和pORF5刺激组中LC3转化减少,p62和Beclin-1表达未发生显着变化,细胞自噬受到抑制;抑制IRE1通路,Ct和pORF5蛋白所诱导的LC3转化减少,自噬现象受到部分抑制。8.Ct感染和pORF5均可活化MAPK/ERK信号通路;抑制PERK,Ct和pORF5诱导的磷酸化ERK水平低于对照组（P<0.05）,而抑制IRE1对ERK磷酸化水平无显着影响（P>0.05）。9.抑制MAPK/ERK通路,Ct和pORF5诱导的LC3转化相对减少,Beclin-1表达仅出现轻微增加,p62下降趋势不明显,细胞自噬受到抑制;抑制MAPK/ERK对UPR通路相关分子活化无显着影响,Ct感染和pORF5刺激后BiP蛋白表达增加,磷酸化PERK及磷酸化eIF2α、ATF4和CHOP的表达增加,XBP1 mRNA剪切形成XBP1s ATF6随时间增加而减少,ATF4发生核转位。结论:1.成功构建IFN-γ诱导的E型Ct持续性感染体外模型。2.Ct急性和持续性感染均可引起宿主细胞lncRNA和mRNA发生差异表达变化,差异lncRNAFGD5-AS1通过调控Wnt信号通路,影响宿主细胞凋亡。3.Ct分泌型质粒蛋白pORF5通过上调lncRNA ZFAS1激活p38 MAPK通路抵抗宿主细胞凋亡并影响子代衣原体感染率。4.Ct和pORF5均可活化UPR通路,pORF5经UPR激活MAPK/ERK通路参与细胞自噬。
刘蕊[5]（2019）在《禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验》文中研究说明腺病毒属中的家禽腺病毒分为众多的血清型,其中Ⅰ群的血清4型（Fowl Adenovirus Serotype 4,FAV-4）引发一种新流行的呈现急性死亡且全群传染的禽类疾病:心包积液-肝炎综合征（Hydropericardium-hepatitis Syndrome,HHS）。临床症状表现为35周龄的家禽突然出现死亡,尤其多发于肉鸡品种,大体眼观病变可见出血性肝炎和心包积液,鉴于无明显的临床症状,预判该病就十分困难。安卡拉地区首先爆发HHS,随后,中国于2015年开始在多省市爆发且广泛流行,本实验室于2016年7月首次分离鉴定出天津地区FAV-4毒株TJ1607,随后选用1日龄雏鸡,利用TJ1607毒株构建了疾病模型。总结前人的经验,本试验制备了以纯化TJ1607毒株为抗原的弗氏佐剂灭活疫苗,继疫苗质量检验合格后,多次免疫高产蛋鸡,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体,随后进行了IgY抗体的雏鸡保护试验,显示出一定的防治效果,同时建立了检测血清中TJ1607抗体的间接ELISA方法,具体试验内容如下:1.TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗的制备。以增殖和纯化的TJ1607毒株为抗原,以弗氏佐剂为油乳剂,制备TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗。疫苗经检验,滴水试验未见分散;无菌检验未见细菌生长;离心试验未见分层;动物试验显示接种健康雏鸡后无不良反应,综上表明所制备的疫苗可用于后续的试验研究。2.TJ1607 IgY抗体的制备。选用高产蛋鸡,将TJ1607弗氏佐剂灭活疫苗对其进行多次接种,第三次接种后的第17天抗体效价达到1:128且持续不变,此时收集鸡蛋,获得高效价的TJ1607卵黄抗体。对提纯条件进行优化,选用水稀释法、辛酸-硫酸铵沉淀法结合透析技术纯化TJ1607高免卵黄抗体,纯化后的IgY抗体效价不变但纯度更高,利用脂质体对其进行包裹,制备精制高免TJ1607 IgY和精制高免TJ1607 IgY脂质体。3.TJ1607血清抗体间接ELISA检测方法的建立。以纯化的TJ1607为抗原包被酶标板,TJ1607血清抗体为一抗,兔抗鸡辣根过氧化物酶为二抗,棋盘法筛选抗原、一抗及二抗的最佳稀释倍数,绘制阳性血清抗体浓度与OD值的标准曲线,计算拟合程度,重复性试验检验建立的检测方法。结果显示,TJ1607抗原的最佳包被浓度为350μg/mL,TJ1607血清抗体的最佳稀释度为1:3000,HRP-IgG（兔抗鸡）的最佳稀释度为1:2000;阳性血清抗体浓度与OD值线性关系良好,线性方程为y=21.751x-3.5781,R2=0.9993;重复性试验显示板内变异系数为1.68%4.88%,板间变异系数为4.03%9.85%,可用于后续血清样品的检测。4.TJ1607 IgY的雏鸡保护试验。攻毒雏鸡保护试验结果表明精制高免TJ1607 IgY对天津地区HHS的治愈率为85%,预防保护率为100%,可有效的防治天津地区HHS的流行。抗体消长动态试验结果表明精制高免TJ1607 IgY与粗制高免TJ1607 IgY相比,吸收较好且产生抗体迅速,达到峰值时间较快,但缓释效果不如粗制IgY,可应用于紧急情况下的防疫和免疫时的多次接种。IgY抗体口服试验结果表明精制高免TJ1607 IgY原液口服无效,制备成精制高免TJ1607 IgY脂质体后,可用于口服免疫。
庞洪泽[6]（2019）在《禽腺病毒4型核酸疫苗的构建及免疫效果初步评价》文中研究说明禽腺病毒是一种对家禽危害极大的病原体,其中血清4型禽腺病毒（FAdV-4）主要引起禽的心包积水-包涵体肝炎综合征。该病发病快、死亡率高,目前预防该病主要靠灭活苗和弱毒苗,但是这两种疫苗存在很多的缺点,所以研发一种安全、高效的新型核酸疫苗对该病的防控很有帮助。本研究对其结构蛋白Hexon和Penton进行了串联,分别进行了原核表达和真核表达,获得了Hexon-Penton串联蛋白,对其免疫效果进行了初步研究,其结果如下:1.禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多抗制备本研究根据NCBI GenBank中公布的Hexon基因和Penton基因序列设计引物,克隆出Hexon基因和Penton基因并串联,得到Hexon-Penton（HP）串联基因,将HP基因导入表达载体pET32a（+）,获得重组质粒pET32a-HP,将其转化表达菌株BL21经IPTG诱导表达,得到分子质量约为108kDa的HP原核蛋白,HP原核蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,说明HP原核蛋白具有良好的免疫原性,为进一步建立FAdV-4的血清学检测方法奠定了基础。2.禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的真核表达与分析为了获得293T细胞表达的FAdV-4 HP串联蛋白,本研究将FAdV-4 HP串联基因导入表达质粒pcDNA3.1（+）,获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白,经间接免疫荧光试验（IFA）和Western Blot鉴定。真核蛋白免疫印迹分析和IFA鉴定表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质分子质量约为90kDa,HP真核蛋白在293T细胞中获得了良好表达。本研究构建了重组质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定了基础。3.核酸疫苗免疫效果初步研究本研究制备了FAdV-4 HP串联基因核酸疫苗,使用不同的剂量免疫雏鸡。对雏鸡产生的抗体进行了免疫原性与效价检测,结果表明,该疫苗免疫雏鸡后在雏鸡体内传产生了特异性抗体,抗体水平在免疫后21天达到最高,免疫剂量为100μg效果较好。
王珊珊[7]（2019）在《FAdV-4致鸡胚肝脏炎症损伤的研究》文中研究表明血清4型禽腺病毒（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）为禽类安卡拉病的病原,该病毒感染家禽后会引起心包积液—肝炎综合征（HHS）。FAdV-4侵袭的主要靶器官是肝脏,可引起肝细胞的变性和坏死,及嗜碱性核内或胞浆内包涵体。目前对FAdV-4的研究主要集中于FAdV-4病原学及预防免疫学等方面,而鲜有FAdV-4致鸡胚肝脏炎症损伤的相关研究。本试验将FAdV-4接种11日龄SPF鸡胚,于感染后第7 d剖取肝脏,制备病理切片,观察鸡胚感染FAdV-4后肝脏的病理变化;并通过qRT-PCR方法检测炎性细胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）及TLRs/NF-κB信号通路相关细胞因子（TLR2、TLR3、TLR4、p65、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12α、IL-12β）mRNA的表达量,以明确FAdV-4感染后致鸡胚肝脏炎症损伤相关基因表达水平的变化,并探索肝脏损伤与炎症相关因子表达之间的关系。本试验结果显示:1.将病毒滴度为10-5.41TCID50/0.1 ml的FAdV-4以0.2 ml每只的剂量,接种于11日龄SPF鸡胚的尿囊腔,每日照蛋观察鸡胚生命体征,接种后第7d从培养箱中取出,4℃过夜,并于第二日从蛋壳中取出鸡胚胎,剖检观察肝脏的眼观病理变化。剖检可见感染FAdV-4后,鸡胚肝脏肿大,边缘钝圆,质地变脆易碎,色泽变淡,呈土黄色,表面偶见淤血及出血。镜检可见,肝索排列紊乱,肝细胞肿大,呈现空泡变性,有些发生坏死,肝脏细胞中可见嗜碱性包涵体;肝小叶中心的中央静脉及肝窦红细胞增多;枯否氏细胞也增多。2.采用qRT-PCR方法检测FAdV-4感染鸡胚后肝脏中炎症相关细胞因子mRNA的表达水平。结果表明,感染FAdV-4后鸡胚肝脏中促炎因子IFN-γ表达量上调;抗炎因子IL-4表达量下降,IL-10表达量上调;趋化因子IL-2表达量下降,且与对照组相比差异性均为极显着（P<0.01）。说明FAdV-4感染鸡胚肝脏后,引起肝脏发生炎症反应,并导致相关炎症细胞因子的表达产生变化。3.为了进一步探索NF-κB炎症信号通路在FAdV-4感染鸡胚过程中的作用,采用qRT-PCR方法检测FAdV-4感染鸡胚后肝脏中NF-κB炎症信号通路相关基因mRNA的表达水平。结果表明,感染FAdV-4后鸡胚肝脏中TLR3、TLR4表达量上调,且与对照组相比差异性均为极显着（P<0.01）,TLR2的表达量无明显变化;NF-κB p65表达量上调;NF-κB信号通路下游细胞因子-促炎因子IL-1β、IL-6表达量上调;NF-κB信号通路下游细胞因子-趋化因子IL-8、IL-12α、IL-12β表达量上调,且与对照组相比差异性均为极显着（P<0.01）。说明FAdV-4可激活鸡胚肝细胞中的TLR4及TLR3的表达,介导NF-κB炎症信号通路的活化,促进促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子IL-8、IL-12α、IL-12β的表达量增多,促使血管通透性增加,血管内皮肿胀,造成淤血,坏死等,促进炎症的发生及发展。综上所述,鸡胚感染FAdV-4后,肝脏发生实质性肝炎病变,肝组织中的多种炎性细胞因子表达发生变化,其中NF-κB炎症信号通路也被活化,介导产生的大量的炎性细胞因子,诱发肝脏的炎症反应,导致鸡胚肝脏的炎症损伤。本研究为开展细胞因子对症疗法提供了理论依据,若能在治疗过程中减少炎性细胞因子的释放,则能有效地改善FAdV-4致肝炎的损伤作用,从而保护肝脏,减少因肝损伤而导致的死亡。
张云丹[8]（2019）在《安卡拉病毒贵州株分离培养与基因组分子特征研究》文中认为安卡拉病毒（Ankara virus）即I群C种血清4型禽腺病毒（FAdV-4）是引起鸡安卡拉病的病原,感染鸡主要特征症状为心包积液和肝炎,又叫心包积液-肝炎综合征（Hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis,HHS）。FAdV-4病毒为无囊膜的双链DNA病毒,主要结构蛋白有五邻体蛋白（penton）,六邻体蛋白（hexon）和纤突蛋白（Fiber）。2015年7月首次有文献报道中国有HHS病例发生,并在山东、河南、河北等地流行。2016年7月以来,贵州省三个不同地区的养鸡场先后出现疑似HHS病例,此前,贵州省无相关文献报道该病的发生。为明确贵州省疑似HHS病原及其基因组特征,本研究开展FAdV-4快速检测方法、FAdV-4贵州株分离鉴定和全基因组测序与分析,为探讨贵州省HHS流行规律、病原致病特征、病原基因组分子特征及进化关系提供研究资料,为FAdV-4的诊断和检测提供技术手段,为研究安卡拉病流行和防控提供理论资料。1.安卡拉病毒快速检测方法的建立禽腺病毒根据抗原性的不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ群,Ⅰ群禽腺病毒又分为A、B、C、D、E5个种和12个血清型（FAdV-1-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9-11）,安卡拉病毒为I群禽腺病毒C种血清4型（FAdV-4）。为实现疑似病例和临床样本中FAdV-4的快速检测,本研究基于FAdV-4六邻体基因（Hexon）设计并合成特异性引物和探针,分别建立FAdV-4普通PCR检测方法和实时荧光定量PCR方法,并对所建方法进行性能评价。结果可见,建立的普通PCR体系能扩增出大小为269bp的Hexon目的基因片段;最佳模板质量浓度确定为4.38×10-2g/L;最适退火温度确定为58℃;检测灵敏度为4.39×10-6g/L;性能评价显示,该PCR体系具有良好的敏感性、特异性和应用性。基于FAdV-4 Hexon基因设计并合成的特异性引物和探针,建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR体系能检测到质粒标准品,并形成规则的扩增曲线。反应体系最佳引物终浓度为0.5 pmol/μL,探针浓度为0.4 pmol/μL,退火温度为59℃。该方法具有良好的可重复性及临床应用性、特异性好、灵敏度高,最低检测浓度为2.03×100copies/μL,较普通PCR检测方法灵敏度高。研究结果表明,所建立的两种方法均可用于FAdV-4的检测,而TaqMan探针实时荧光定量PCR灵敏度高,且可用于组织中病毒含量的定量分析。研究结果为FAdV-4快速检测和病原组织嗜性研究提供关键技术。2.安卡拉病毒贵州流行株的分离鉴定安卡拉病毒不同地区分离株存在致病性和基因组差异,为研究安卡拉病毒贵州流行株致病特征,本文基于FAdV-4核酸阳性临床样本,应用LMH细胞对FAdV-4贵州株分离培养,分别用细胞病变观察、核酸检测技术、间接免疫荧光技术、透射电镜技术和病毒血凝性试验对分离病毒进行鉴定,并对纯化病毒进行SPF鸡胚和雏鸡致病性试验。结果可见,应用LMH细胞从来源于贵州省2个地区的样本分离获得的FAdV-4毒株均能引起细胞变大变圆、折光性增强、脱落等细胞病变,多次传代细胞培养物经PCR检测结果呈核酸阳性,免疫荧光试验提示细胞中病毒粒子的存在,透射电镜观察到典型的病毒粒子,病毒血凝性试验显示,病毒不能与鸡、鸭、鼠红细胞发生凝集反应。上述结果提示,本研究成功分离到FAdV-4贵州株,分别命名为FAdV-4 GZ-BJ株和FAdV-4GZ-QL株。FAdV-4贵州分离毒株经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,并盲传5代。剖检可见鸡胚发育不良,胚体卷缩矮小,体表大面积潮红,肝脏肿大出血;感染1日龄的SPF雏鸡,试验鸡在感染第3 d开始发病、死亡,死亡感染鸡呈现典型的心包积液、肝炎症状。组织切片分析,感染鸡心脏呈现心肌纤维断裂,肌原纤维条理不清晰,肝脏出现很大的脂肪空泡,病变细胞可见嗜酸性或嗜碱性包涵体,脾脏、肺脏和肾脏均有不同程度的病变。FAdV-4贵州分离株动物回归试验结果表明,病毒分离株具有较强的致病性,能引起感染鸡胚和雏鸡死亡,并出现心包积液、肝炎的典型症状。3.安卡拉病毒贵州株全基因序列分析FAdV-4为双链DNA病毒,基因组长度约为4046 kb,G+C含量在53.8%57.9%之间。为研究FAdV-4贵州分离株基因组分子特征,本文应用基因组分段扩增、克隆和测序技术对2株安卡拉贵州分离株进行全基因测序,并应用生物信息学软件对测序序列进行分析。结果可见,FAdV-4GZ-BJ株全基因序列长度为43352bp,基因组G+C含量为54.82%,全基因组共编码36个开放性阅读框（ORF）;FAdV-4 GZ-QL全基因序列长度为43723 bp,G+C含量为54.87%,全基因组包括42个ORF;其主要结构蛋白基因大小均为hexon,2815bp,penton,1578bp,fiber 1,1296bp,fiber 2,1440bp。为了进一步明确2株分离株与早期加拿大分离株（NO1）和国内FAdV-4不同毒株的亲缘关系和分子特征,我们比较分析了FAdV-4GZ-BJ株和FAdV-4GZ-QL株全基因组序列、六邻体基因（hexon）、纤突基因（fiber1、fiber2）与其他分离株氨基酸序列的同源性和亲缘关系,结果显示:FAdV-4GZ-BJ和FAdV-4GZ-QL分离株与I群禽腺病毒属于同一分支,与I群C种血清4型禽腺病毒在同一分支,遗传距离最近;Hexon基因序列遗传进化分析结果显示,FAdV-4GZ-BJ与分离株（HNSQ、HN、GX）等国内分离株在同一分支,亲缘关系近;FAdV-4GZ-QL分离株与（N01、SD1601、JSJ13）等分离株在同一分支,亲缘关系最近;fiber1和fiber2都属于Ⅰ群C种禽腺病毒,fiber 1 FAdV-4GZ-BJ株与FAdV-10（登录号:KC750800）亲缘关系最近,fiber1 FAdV-4GZ-QL株与FAdV-4（登录号:GU188428）亲缘关系最近;2株贵州分离株与I群禽腺病毒同源性在51.6%100%之间,其中与FAdV-A、FAdV-B、FAdV-D、FAdV-E同源性在51.6%70.9%之间,而与FAdV-C分离株同源性达到89.8100%。其中与毒株血清4型禽腺病毒（FAdV-4）经典毒株NO1（登录号:GU188428）同源性为89.8%,FAdV-4GZ-QL株与GX-1株同源性最高,FAdV-4GZ-BJ和SD/1601FAdV-4株同源性为100%;2株分离株全基因组序列推导氨基酸与经典毒株（NO1）和中国分离株（SD/1601FAdV-4）比对结果显示,在802713680位存在明显突变和38个氨基酸缺失,氨基酸1195513400位置处高度突变和缺失,13401位氨基酸之后,2株贵州分离株与分离株SD/1601FAdV-4比对发生大范围突变;在1520115360位置处,2株贵州分离株之间比对结果显示,FAdV-4GZ-BJ较FAdV-4GZ-QL株在1520115345位置处有120个氨基酸缺失,16个突变。对2株贵州分离株编码的ORF预测结果显示,FAdV-4GZ-BJ株比FAdV-4GZ-QL株缺少ORF42、ORF28、ORF17等6个ORF,与毒株（NO1）相比,存在ORF19、ORF27、ORF30缺失的现象。结论:本文成功建立了可用于FAdV-4快速检测的PCR方法和定量分析qPCR方法;从临床样本中分离获得2株FAdV-4贵州分离株,两毒株均具有较强的致病性。2株FAdV-4贵州分离株全基因组长度分别为:FAdV-4GZ-BJ 43352 bp、FAdV-4GZ-QL 43723bp,与国内外毒株比较存在一定变异和进化。研究结果为安卡拉病毒致病机理和防控研究奠定基础。
魏志鹏[9]（2019）在《一株鸭源血清4型I群禽腺病毒的分离鉴定及其对鹅的致病性》文中指出心包积液-肝炎综合征（Hydropericardium hepatitis syndrome,HHS）主要是由血清4型Ⅰ群禽腺病毒（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）引起的一种家禽传染性疾病。该病主要侵害35周龄肉鸡,其典型病变为心包积液和包涵体肝炎。自2015年6月以来,我国许多省份的肉鸡群先后爆发此病,并且从肉鸡群逐渐蔓延至蛋鸡、种鸡群和樱桃谷肉鸭群,严重危害我国养禽业的健康发展。近年来,国内有个别鹅只感染禽腺病毒的报道,但都没有进行深入的研究。本研究中,我们从自然感染的病鸭中分离到一株FAdV-4,并将其命名为SDJN株。通过动物试验确定了其对鹅的致病性,从而证实血清4型禽腺病毒可以同时感染鸭和鹅,为养禽生产上该病的防控提供了一定的流行病学资料。主要研究内容如下:1、本研究采用鸡胚卵黄囊接种法从山东济南以心包积液为主要特征的疑似FAdV-4感染的商品鸭肝脏组织中分离到病毒,并对分离毒株进行PCR鉴定、血凝试验、EID50测定、纯净度检测以及Hexon基因序列测定与分析等试验。PCR结果显示该毒株呈禽腺病毒阳性;该分离株不能够凝集鸡的红细胞;纯净度检测结果表明其他常见病毒PCR检测阴性;病毒的EID50为10-7.15/0.2 mL;将分离株的Hexon基因进行测序,确定该分离毒株为血清4型I群腺病毒,并与已发表的血清4型I群禽腺病毒Hexon基因进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,表明该毒株与另外两个中国大陆分离株在同一分支上,同源性为99.9%,而与韩国、欧洲、美洲株同源性为98.3%98.6%,相对较远。2、为探究FAdV-4分离株对鹅的致病性,本试验将225只1日龄泰州鹅（75只作为对照鹅,150只作为感染鹅）随机分成9个不同的组（6组作为实验组,另外3组作为阴性对照组）。在其10、20和30日龄时,分别通过口服途径和皮下注射途径人工感染6个实验组的鹅,每只鹅接种1mL含病毒的尿囊液,生理盐水接种鹅作为对照组。连续观察15 d,记录感染后的临床症状,并分别在3、6、9、12和15 dpi时,每组随机选择三只鹅进行剖杀,收集组织器官和血液样本。HE染色观察组织病理学变化、提取组织DNA检测各组织中病毒载量。同时以采集的血液分离血清检测生化指标（ALT,AST,LDH,ALP和UREA）和细胞因子（IL-2和IFN-α）。研究结果表明,10日龄皮下攻毒组的鹅临床症状较为明显,表现为精神抑郁和瘫痪,剖检病变表现为心包积液,肝脏、肺脏、肾脏、胸腺均呈现不同程度的出血或肿胀现象,病理组织学结果显示心肌间质水肿和轻度炎性细胞浸润;肝脏细胞核中出现嗜碱性包涵体;脾脏出淋巴细胞减少和局灶性坏死;肺部动脉壁增厚和肺毛细血管充血;肾脏大量液泡坏死,肾小球肿胀和发炎,肾小管脱落和炎性细胞浸润;法氏囊和胸腺均显示淋巴细胞减少和间质水肿。各日龄口服攻毒组和30日龄皮下攻毒组未表现出明显的临床症状和剖检变化。另外,实时定量PCR检测结果显示,收集的各组织器官均检测到了病毒的存在,其中以肝脏和肾脏中病毒含量较高,小日龄攻毒组鹅的病毒载量高于大日零攻毒组。细胞因子水平检测结果为各攻毒组鹅IL-2和IFN-α水平均先上升后下降,表明鹅对FAdV-4的入侵产生了较为强烈的免疫应答。血液生化指标检测显示,10日龄攻毒组的各项指标显着高于对照组,FAdV-4对鹅的心肝肾造成严重损伤,20日龄攻毒组各项指标稍低于10日龄攻毒组,而30日龄攻毒组各指标和对照组差异不显着。以上结果说明鹅对于FAdV-4的感染呈现一种与年龄相关的抵抗力。
毕靖征[10]（2017）在《两株Ⅰ群禽腺病毒致病性和免疫原性研究》文中研究指明2015年6月以来,我国多数省份发生了以心包积液、包涵体肝炎为特征的禽腺病毒病。该病主要发生于3～5周龄肉鸡,10～20周龄蛋鸡也有发生,但死亡率低于肉鸡。发病后4～8天为死亡高峰,病程8～15天。死亡率约为30%～70%,给我国养鸡业造成了较大的经济损失。2016年鸭、鹅也有发病报道。该病病原主要为Ⅰ群血清4型禽腺病毒,也有分离到血清8型病毒的。在对本实验室分离自发病鸡的两株4型腺病毒进行培养扩增、序列分析的基础上,研究了两株病毒的致病性和免疫原性,为禽腺病毒病疫苗的研发提供参考和帮助。为了提高腺病毒的病毒含量,将本实验室保存的PZ毒株和HN毒株病料研磨液,卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,0.2mL/枚,盲传三代,经PCR鉴定正确后,收集尿囊液,分别标记为PZ、HN。死亡鸡胚主要表现为鸡胚发育不良,鸡胚明显偏小,胚体卷曲,全身出血,肝脏肿大出血。尿囊液无血凝性。序列分析发现,两株病毒Hexon基因各存在一个核苷酸突变,PZ毒株650位的氨基酸也发生了突变。两株病毒Hexon基因序列同源性高达99.9%,与血清4型病毒同源性最高。在对PZ和HN两株禽腺病毒的致病性研究中,将48只29日龄SPF鸡随机平均分为8组,每组6只。采用静脉注射和口服两种途径进行攻毒,同时设阴性对照组。攻毒后每日定时观察鸡的发病情况和症状,死亡鸡解剖观察,采集肝脏等器官进行PCR检测和组织病理观察。结果显示,攻毒发病鸡的临床症状和剖检变化与自然发病鸡一致。病死鸡具有特征性的心包积液-肝炎综合征的表现,腺病毒在机体各组织中均有分布,不同组织病毒含量有差异。肝细胞出现大量的脂肪变性和嗜碱性包涵体。结果表明,PZ和HN两株病毒均为高致病性,能够引起鸡的心包积液-肝炎综合征。选取致病性强的HN毒株制成油乳剂灭活疫苗,初步研究腺病毒的免疫原性,将60只22日龄SPF鸡随机平均分为A、B、C、D、E五组,每组12只,前四组为免疫组,皮下注射制备的腺病毒油乳剂灭活疫苗（HN株）,E组注射灭菌的PBS溶液0.5mL作为空白对照。A、B、C、D组免疫剂量分别为0.2mL、0.3mL、0.5mL、0.8mL,免疫后1、2、3周每组各随机取4只采血后静脉注射攻毒,攻毒量为0.5mL/只。结果表明,当免疫剂量为0.8mL,免疫后3周攻毒的保护率为100%,即能完全抵抗Ⅰ群血清4型禽腺病毒的攻击。表明研制的油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护效果。
二、“鸡包涵体肝炎病毒引起鸡生殖和免疫功能抑制的机理及防治技术”通过专家鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、“鸡包涵体肝炎病毒引起鸡生殖和免疫功能抑制的机理及防治技术”通过专家鉴定（论文提纲范文）
（1）LMH细胞感染禽腺病毒血清4型早期miRNAs和mRNAs表达变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 禽腺病毒血清4型研究进展 |
| 1.1.1 FAdV-4的分类和生物学特性 |
| 1.1.2 FAdV-4的结构特点 |
| 1.1.3 FAdV-4的防治 |
| 1.2 高通量测序技术在病毒感染中的应用 |
| 1.2.1 转录组测序研究进展 |
| 1.2.2 microRNAs研究进展 |
| 1.2.3 miRNAs-mRNA联合分析在病毒感染研究中的应用 |
| 1.3 腺病毒进入宿主细胞机制研究进展 |
| 1.3.1 腺病毒入宿主细胞过程 |
| 1.3.2 腺病毒受体研究进展 |
| 1.3.3 腺病毒入侵宿主细胞方式 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 禽腺病毒血清4型的分离鉴定和多克隆抗体的制备 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 病料、病毒及实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器及实验溶液配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 病毒的分离鉴定 |
| 2.2.2 病毒血凝性测定 |
| 2.2.3 动物回归实验 |
| 2.2.4 细胞病变实验和病毒滴度测定 |
| 2.2.5 多抗制备 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 病毒的传代与分离 |
| 2.3.2 分离病毒目的基因的PCR鉴定 |
| 2.3.3 目的基因的同源序列比对和进化树的分析 |
| 2.3.4 分离株血凝性鉴定 |
| 2.3.5 动物回归实验 |
| 2.3.6 LMH细胞感染FAdV-4 后的CPE观察 |
| 2.3.7 FAdV-4 分离毒株TCID_(50)的测定 |
| 2.3.8 重组六邻体蛋白和五邻体蛋白的鉴定 |
| 2.3.9 原核表达蛋白的纯化 |
| 2.3.10 多克隆抗体的纯化 |
| 2.3.11 多克隆抗体的效价测定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 LMH细胞感染禽腺病毒血清4型后miRNAs表达变化研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 病毒与细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及实验溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 测序样品的准备 |
| 3.2.2 小RNA测序 |
| 3.2.3 测序信息分析 |
| 3.2.4 数据过滤 |
| 3.2.5 数据比对 |
| 3.2.6 小RNA分类和预测 |
| 3.2.7 靶基因预测 |
| 3.2.8 差异表达miRNA分析 |
| 3.2.9 GO显着性富集分析 |
| 3.2.10 KEGG Pathway显着性富集分析 |
| 3.2.11 LMH细胞感染FAdV-4 后差异表达miRNAs的检测 |
| 3.2.12 数据处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 小RNA测序情况分析 |
| 3.3.2 小RNA分类注释 |
| 3.3.3 新miRNAs分析 |
| 3.3.4 小RNA的靶基因预测 |
| 3.3.5 显着差异表达miRNAs分析 |
| 3.3.6 差异表达miRNAs的 GO功能分类 |
| 3.3.7 差异表达miRNAs的 pathway分析 |
| 3.3.8 LMH细胞感染FAdV-4 后差异表达miRNAs的检测 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 LMH细胞感染禽腺病毒血清4型后mRNAs表达变化研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 病毒与细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器及实验溶液配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 测序样品的准备 |
| 4.2.2 转录组测序 |
| 4.2.3 数据过滤 |
| 4.2.4 参考基因组比对 |
| 4.2.5 基因表达注释和定量 |
| 4.2.6 差异表达基因的筛选 |
| 4.2.7 差异表达基因的生物信息学分析 |
| 4.2.8 LMH细胞感染FAdV-4 后差异基因的检测 |
| 4.2.9 数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 样本测序数据分析 |
| 4.3.2 测序数据与参考基因组的比对 |
| 4.3.3 基因分类注释和表达量分析 |
| 4.3.4 差异基因表达分析 |
| 4.3.5 差异表达基因的GO功能分类 |
| 4.3.6 差异表达基因的KEGG Pathway分析 |
| 4.3.7 显着差异表达mRNAs的验证 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 LMH细胞感染禽腺病毒血清4型后miRNAs-mRNAs关联分析 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 病毒与细胞 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器及实验溶液配制 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 miRNAs-mRNAs关联分析 |
| 5.2.2 miRNAs-mRNAs差异共表达分析 |
| 5.2.3 差异共表达基因的生物信息学分析 |
| 5.2.4 关联miRNAs-mRNAs的调控网络分析 |
| 5.2.5 差异共表达 miRNAs-mRNAs 的检测 |
| 5.2.6 数据处理 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 miRNAs-mRNAs关联分析统计 |
| 5.3.2 差异共表达miRNAs-mRNAs关联分析统计 |
| 5.3.3 差异共表达基因的GO分类 |
| 5.3.4 差异共表达基因的KEGG显着性富集分析 |
| 5.3.5 miRNAs-mRNAs关联网络分析 |
| 5.3.6 差异共表达miRNAs-mRNAs关联对的验证 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 gga-miR-128-2-5p与OBSL1 的相关性分析以及对FAdV-4 进入细胞的调控研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 病毒与细胞 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器及实验溶液配制 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 FAdV-4 感染过程中gga-miR-128-2-5与OBSL1 表达水平的测定 |
| 6.2.2 gga-miR-128-2-5 调控OBSL1 表达水平的测定 |
| 6.2.3 gga-miR-128-2-5与OBSL1 结合位点的预测和鉴定 |
| 6.2.4 双荧光素酶鉴定gga-miR-128-2-5与OBSL1 的结合位点 |
| 6.2.5 qPCR检测gga-miR-128-2-5对FAdV-4 进入细胞的调控 |
| 6.2.6 激光共聚焦显微镜检测gga-miR-128-2-5对FAdV-4 进入细胞的调控 |
| 6.2.7 统计学分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 FAdV-4 感染对gga-miR-128-2-5p与 OBSL1 的影响 |
| 6.3.2 gga-miR-128-2-5p对 OBSL1 表达的影响 |
| 6.3.3 gga-miR-128-2-5p与 OBSL1 结合位点的预测 |
| 6.3.4 gga-miR-128-2-5p与 OBSL1 结合位点的验证 |
| 6.3.5 gga-miR-128-2-5p与 OBSL1对FAdV-4 进入的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 本文的创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 主要仪器及常用试剂配制 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）鸡Ⅰ群禽腺病毒三价灭活苗及卵黄抗体的研制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 腺病毒病原学研究 |
| 1.1 腺病毒的分类 |
| 1.2 AdV的结构 |
| 1.3 AdV的理化特性 |
| 1.4 AdV的复制 |
| 2 FAdV-Ⅰ的流行病学研究 |
| 2.1 FAdV-Ⅰ的流行现状 |
| 2.2 FAdV-Ⅰ的剖检变化 |
| 2.3 FAdV-Ⅰ的病理变化 |
| 3 FAdV-Ⅰ的诊断 |
| 3.1 病毒分离 |
| 3.2 血清学检测 |
| 3.3 分子生物学检测 |
| 4 FAdV-Ⅰ疫苗研究进展 |
| 4.1 弱毒活疫苗 |
| 4.2 灭活疫苗 |
| 4.3 基因工程亚单位疫苗 |
| 5 FAdV-Ⅰ卵黄抗体研究进展 |
| 5.1 卵黄抗体的结构 |
| 5.2 卵黄抗体的优势 |
| 5.3 卵黄抗体在禽病中的应用 |
| 6 研究目的及意义 |
| 第二章 实验研究 |
| 研究一 鸡Ⅰ群禽腺病毒2、4、8b血清型病毒的扩增与三价灭活苗的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂与耗材 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 SPF级雏鸡、细胞及毒株 |
| 1.4 试验相关溶液制备 |
| 1.5 LMH细胞扩毒 |
| 1.6 PCR鉴定 |
| 1.7 病毒的半数细胞培养物感染量(TCID_(50))测定 |
| 1.8 疫苗的制备 |
| 1.9 油乳剂灭活苗质量检验 |
| 2 结果 |
| 2.1 细胞扩毒结果 |
| 2.2 PCR检测结果 |
| 2.3 病毒的半数细胞培养物感染量(TCID_(50))测定结果 |
| 2.4 油乳剂灭活苗质量检验 |
| 3 讨论 |
| 研究二 鸡Ⅰ群禽腺病毒2、4、8b血清型三价油乳剂灭活苗的免疫效力评估 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂与耗材 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 SPF级雏鸡、鸡胚、细胞及毒株 |
| 1.4 雏鸡最小免疫剂量试验 |
| 1.5 免疫雏鸡抗体效价监测 |
| 1.6 雏鸡攻毒保护试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 雏鸡最小免疫剂量试验结果 |
| 2.2 免疫雏鸡血清抗体效价监测结果 |
| 2.3 雏鸡攻毒保护试验结果 |
| 3 讨论 |
| 研究三 鸡Ⅰ群禽腺病毒2、4、8b血清型三价卵黄抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂与耗材 |
| 1.2 仪器与设备 |
| 1.3 产蛋鸡、SPF级雏鸡、细胞及毒株 |
| 1.4 产蛋鸡免疫 |
| 1.5 产蛋鸡血清抗体效价监测 |
| 1.6 卵黄抗体的制备与效价监测 |
| 1.7 卵黄抗体质量检验 |
| 1.8 卵黄抗体效力检验 |
| 2 结果 |
| 2.1 产蛋鸡血清抗体效价监测结果 |
| 2.2 产蛋鸡卵黄抗体效价监测结果 |
| 2.3 卵黄抗体质量检验结果 |
| 2.4 卵黄抗体效力检验结果 |
| 3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（3）E种禽腺病毒血清8a和8b型分离株致病性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 禽腺病毒病原学 |
| 1.1.1 禽腺病毒分类 |
| 1.1.2 禽腺病毒形态学及理化特征 |
| 1.1.3 禽腺病毒蛋白的结构及功能 |
| 1.1.4 禽腺病毒的复制 |
| 1.2 禽腺病毒的流行病学 |
| 1.2.1 流行特点 |
| 1.2.2 禽腺病毒引起的疾病 |
| 1.3 禽腺病毒的诊断 |
| 1.3.1 血清学诊断 |
| 1.3.2 分子生物学诊断 |
| 1.4 禽腺病毒的防控 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 第二章 血清8a型 JL/170408 毒株和血清8b型 HLJ/151129 毒株的致病性研究 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 毒株、细胞和试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 病毒增殖 |
| 2.2.2 病毒滴度测定 |
| 2.2.3 动物实验分组 |
| 2.2.4 临床症状观察及样品采集 |
| 2.2.5 病理学检测 |
| 2.2.6 排毒和病毒血症检测 |
| 2.2.7 ELISA抗体检测 |
| 2.2.8 病毒在感染鸡中的组织分布 |
| 2.2.9 荧光定量PCR检测方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 病毒增殖及病毒滴度测定 |
| 2.3.2 临床症状 |
| 2.3.3 剖检变化和病理组织学 |
| 2.3.4 排毒和病毒血症情况 |
| 2.3.5 血清抗体水平的变化 |
| 2.3.6 病毒的组织嗜性及各组织中的病毒载量 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 JL/170408毒株对鸡的致病性 |
| 2.4.2 HLJ/151129毒株对鸡的致病性 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 血清8a和8b型交叉中和作用 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 毒株、血清和细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 中和试验 |
| 3.2.2 FAd V-8a和 FAd V-8b型毒株血清交叉中和试验 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 体外中和试验 |
| 3.3.2 体外交叉中和试验 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）沙眼衣原体感染相关lncRNA的筛选及其功能的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一章 E型沙眼衣原体持续性感染模型的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 菌株、质粒和细胞株 |
| 1.3 主要试剂盒 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 其他 |
| 2 方法 |
| 2.1 衣原体与宿主细胞培养 |
| 2.2 IFA检测衣原体感染率 |
| 2.3 持续性感染模型鉴定 |
| 2.4 qRT-PCR分析 |
| 2.5 Hoechst染色分析细胞凋亡率 |
| 2.6 AO/EB染色检测细胞凋亡率 |
| 2.7 FCM检测细胞凋亡 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 IFN-γ和青霉素G诱导Ct持续性感染最佳浓度的确定 |
| 3.2 持续性感染状态下Ct包涵体的形态变化 |
| 3.3 移除持续性感染诱导因素后Ct感染能力的恢复 |
| 3.4 TEM观察AB的形成 |
| 3.5 持续性感染状态下Ct代谢相关基因的转录表达 |
| 3.6 Ct急性和持续性感染抵抗宿主细胞凋亡 |
| 4 讨论 |
| 第二章 沙眼衣原体急性感染和持续性感染lncRNA差异表达筛选及其功能的初步研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 菌株、质粒和细胞株 |
| 1.3 主要试剂盒 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 其他 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 衣原体感染 |
| 2.3 RNA提取和质检 |
| 2.4 标记反应准备 |
| 2.5 标记RNA的纯化与芯片杂交 |
| 2.6 数据分析与提取 |
| 2.7 qRT-PCR验证差异表达基因 |
| 2.8 Wnt信号通路的检测 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞RNA提取 |
| 3.2 差异基因原始数据归一化 |
| 3.3 层次聚类分析 |
| 3.4 Ct急性感染差异基因筛选 |
| 3.5 Ct急性和持续性感染差异基因筛选 |
| 3.6 qRT-PCR验证 |
| 3.7 差异lnc RNA功能验证 |
| 4 讨论 |
| 第三章 沙眼衣原体pORF5 蛋白调控宿主lncRNA |
| 1 材料 |
| 1.1 仪器设备 |
| 1.2 菌株、质粒和细胞株 |
| 1.3 主要试剂盒 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要抗体 |
| 2 方法 |
| 2.1 pORF5基因稳定过表达细胞株的构建 |
| 2.2 pORF5稳定过表达细胞株的鉴定 |
| 2.3 LncRNA芯片鉴定p ORF5 稳转细胞株与对照组的差异lnc RNAs和mRNAs |
| 2.4 FCM |
| 2.5 RNA干扰 |
| 2.6 IFA检测子代衣原体感染力 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 pORF5稳转株的构建 |
| 3.2 pORF5 稳转细胞中差异表达的lncRNAs和 mRNAs |
| 3.3 qRT-PCR验证差异lncRNAs和 m RNAs的表达 |
| 3.4 差异表达mRNAs的生物信息学分析 |
| 3.5 抑制ZFAS1 的表达降低了p ORF5 的抗凋亡效应和Ct的感染性 |
| 3.6 MAPK/p38 通路参与了ZFAS1 抗凋亡过程 |
| 4 讨论 |
| 第四章 沙眼衣原体pORF5 蛋白经未折叠蛋白反应激活MAPK/ERK信号通路诱导细胞自噬 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验仪器 |
| 1.2 菌株、质粒和细胞株 |
| 1.3 主要试剂盒 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要抗体 |
| 1.6 其他 |
| 2 方法 |
| 2.1 pORF5融合蛋白的表达、纯化与鉴定 |
| 2.2 pORF5蛋白去内毒素处理 |
| 2.3 UPR抑制试验及p ORF5 蛋白刺激实验 |
| 2.4 Western blot检测自噬和UPR通路活化 |
| 2.5 qRT-PCR分析XBP1 mRNA剪切 |
| 2.6 荧光免疫分析 |
| 2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Ct感染和p ORF5 蛋白活化UPR通路 |
| 3.2 Ct感染和p ORF5 蛋白诱导细胞自噬 |
| 3.3 抑制自噬对Ct感染和p ORF5 诱导的UPR活化并无显着影响 |
| 3.4 抑制UPR通路可部分抑制Ct和 p ORF5 诱导的自噬 |
| 3.5 Ct感染和p ORF5 均可活化MAPK/ERK信号通路 |
| 3.6 抑制ERK通路可抑制Ct和 p ORF5 诱导的自噬,但不影响UPR通路的活化 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| References |
| 攻读学位期间的科研成果 |
| 本研究受以下基金资助 |
| 致谢 |
（5）禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 本试验的目的和意义 |
| 2 禽心包积液-肝炎综合征(HHS)的基本概述 |
| 2.1 病原体的生物学特性 |
| 2.2 流行病学 |
| 2.3 致病性 |
| 2.4 诊断技术 |
| 3 禽心包积液-肝炎综合征(HHS)的防治 |
| 3.1 油乳剂灭活疫苗 |
| 3.2 基因工程疫苗 |
| 3.3 DNA重组疫苗 |
| 3.4 防治措施 |
| 4 卵黄抗体概述 |
| 4.1 IgY的产生 |
| 4.2 IgY的特性 |
| 4.3 IgY的优势 |
| 4.4 IgY的应用 |
| 5 脂质体概述 |
| 5.1 脂质体的发现 |
| 5.2 脂质体的特性 |
| 5.3 脂质体的分类 |
| 5.4 脂质体的制备 |
| 5.5 脂质体的应用 |
| 第二章 TJ1607 毒株的纯化与免疫疫苗的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TJ1607 毒株PCR鉴定结果 |
| 2.2 TJ1607 纯化毒株ELD_(50)测定结果 |
| 2.3 剂型检验结果 |
| 2.4 无菌检验结果 |
| 2.5 稳定性检验结果 |
| 2.6 安全性检验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 天津地区HHS的发病原因 |
| 3.2 TJ1607 毒株的增殖 |
| 3.3 TJ1607 毒株的纯化 |
| 3.4 疫苗佐剂 |
| 4 小结 |
| 第三章 精制高免卵黄抗体与IgY脂质体的制备 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 免疫前抗体检测结果 |
| 2.2 免疫后抗体检测结果 |
| 2.3 卵黄免疫球蛋白的检测结果 |
| 2.4 卵黄免疫球蛋白提纯前后的检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 TJ1607 IgY脂质体的制备 |
| 3.2 TJ1607 IgY的提纯 |
| 3.3 SDS-PAGE配置 |
| 4 小结 |
| 第四章 TJ1607 血清抗体间接ELISA方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 TJ1607 最佳包被抗原和最佳一抗稀释度的选择结果 |
| 2.2 最佳二抗工作浓度的选择结果 |
| 2.3 重复性试验结果 |
| 2.4 标准曲线的绘制结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 ELISA试验中酶标板的选择 |
| 3.2 ELISA试验中抗原的选择 |
| 3.3 ELISA试验中误差的分析 |
| 4 小结 |
| 第五章 TJ1607 卵黄抗体液的动物保护试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 精制TJ1607 卵黄抗体液攻毒动物保护试验结果 |
| 2.2 TJ1607 卵黄抗体液被动抗体动态消长试验结果 |
| 2.3 TJ1607 卵黄抗体液口服试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 IgY对抗体水平的影响 |
| 3.2 IgY脂质体的优势 |
| 3.3 综合防治措施 |
| 4 小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（6）禽腺病毒4型核酸疫苗的构建及免疫效果初步评价（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 禽腺病毒的分类 |
| 1.2 禽腺病毒病原学 |
| 1.3 禽腺病毒的复制 |
| 1.4 禽腺病毒的基因组及蛋白结构 |
| 1.4.1 六邻体蛋白 |
| 1.4.2 纤突蛋白 |
| 1.4.3 五邻体蛋白 |
| 1.4.4 非结构蛋白 |
| 1.5 禽腺病毒病的研究现状 |
| 1.5.1 心包积水-包涵体肝炎综合征 |
| 1.5.2 包涵体肝炎 |
| 1.6 禽腺病毒的诊断方法 |
| 1.6.1 酶联免疫吸附试验 |
| 1.6.2 琼脂凝胶扩散试验 |
| 1.6.3 中和试验 |
| 1.6.4 常规PCR检测技术 |
| 1.6.5 LAMP检测技术 |
| 1.6.6 荧光定量PCR检测技术 |
| 1.6.7 CAPS技术 |
| 1.6.8 核酸探针检测技术 |
| 1.7 禽腺病毒疫苗的研究进展 |
| 1.7.1 灭活疫苗 |
| 1.7.2 弱毒活疫苗 |
| 1.7.3 基因工程亚单位疫苗 |
| 1.8 本课题研究的目的和意义 |
| 第二章 禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的原核表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 河北株血清4 型禽腺病毒 |
| 2.1.2 质粒、菌株、细胞及试验动物 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 病毒基因组DNA的提取 |
| 2.2.2 Hexon与 Penton基因的扩增与串联 |
| 2.2.3 重组表达质粒pET32a-HP的构建 |
| 2.2.4 HP蛋白的原核表达和Western blot验证 |
| 2.2.5 HP原核蛋白的可溶性分析及纯化 |
| 2.2.6 多抗血清的制备及抗体效价 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Hexon、Penton基因的扩增与串联HP基因的PCR扩增 |
| 2.3.2 重组表达质粒pET32a-HP的构建 |
| 2.3.3 HP蛋白的原核表达及Western blot验证 |
| 2.3.4 HP原核蛋白表达形式鉴定和蛋白纯化 |
| 2.3.5 鼠源HP多抗Western blot验证和抗体效价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 禽腺病毒血清4型Hexon-Penton串联蛋白的真核表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 河北株血清4 型禽腺病毒 |
| 3.1.2 质粒、菌株及细胞 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 Hexon与 Penton基因的扩增与串联 |
| 3.2.2 重组表达质粒pcDNA3.1-HP的构建 |
| 3.2.3 重组质粒pcDNA3.1-HP的瞬时转染 |
| 3.2.4 间接免疫荧光检测pcDNA3.1-HP的表达 |
| 3.2.5 Western blot鉴定pcDNA3.1-HP的表达情况 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 Hexon、Penton基因的扩增与串联HP基因的PCR扩增 |
| 3.3.2 重组质粒pcDNA3.1-HP的构建 |
| 3.3.3 IFA检测pcDNA3.1-HP在293T细胞中的表达 |
| 3.3.4 WB检测pcDNA3.1-HP在293T细胞中的表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 禽腺病毒血清4型核酸疫苗免疫效果初步研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 质粒及试验动物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 核酸疫苗的制备 |
| 4.2.2 试验设计 |
| 4.2.3 抗体及抗体水平的检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 血清抗体特异性的检测 |
| 4.3.2 血清抗体水平的检测 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 致谢 |
（7）FAdV-4致鸡胚肝脏炎症损伤的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 FAdV-4 研究进展 |
| 1.1.1 禽腺病毒分型 |
| 1.1.2 禽腺病毒基因形态结构及理化特性 |
| 1.1.3 禽腺病毒的复制 |
| 1.1.4 FAdV-4 的流行病学与致病性 |
| 1.1.5 FAdV-4 感染机体后病理变化 |
| 1.1.6 FAdV-4 的诊断与防治 |
| 1.2 炎症及其信号通路 |
| 1.2.1 炎症的生物学意义 |
| 1.2.2 NF-κB信号通路简介 |
| 1.2.3 病毒介导TLRs激活NF-κB信号通路致相关炎症因子的表达 |
| 1.3 炎症相关细胞因子 |
| 1.3.1 促炎因子 |
| 1.3.2 抗炎因子 |
| 1.3.3 趋化因子 |
| 1.4 NF-κB信号通路炎症相关细胞因子 |
| 1.4.1 NF-κB信号通路下游促炎因子 |
| 1.4.2 NF-κB信号通路下游趋化因子 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验鸡胚与试验毒株 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 溶液配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 试验分组及处理 |
| 2.2.2 FAdV-4 TCID50 的测定 |
| 2.2.3 FAdV-4 接种于SPF鸡胚 |
| 2.2.4 试验样本的采集 |
| 2.2.5 利用PCR技术检测接毒后鸡胚肝脏中FAdV-4 的感染情况 |
| 2.2.6 肝脏石蜡切片的制作 |
| 2.2.7 鸡胚肝脏总RNA的提取 |
| 2.2.8 反转录 |
| 2.2.9 炎症相关细胞因子mRNA表达水平 |
| 2.2.10 TLRs相关基因TLR2、TLR3、TLR4 mRNA表达水平 |
| 2.2.11 NF-κB信号通路相关基因p65 mRNA表达水平 |
| 2.2.12 NF-κB信号通路炎症相关细胞因子mRNA表达水平 |
| 2.2.13 目的基因表达量的计算 |
| 2.2.14 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 FAdV-4 TCID50 测定结果 |
| 3.2 接毒后鸡胚肝脏中FAdV-4 的检测结果 |
| 3.3 接毒后鸡胚及肝脏眼观病理变化 |
| 3.3.1 鸡胚的眼观变化 |
| 3.3.2 鸡胚肝脏的病理变化 |
| 3.4 炎症相关细胞因子mRNA表达水平 |
| 3.4.1 促炎因子mRNA表达水平 |
| 3.4.2 抗炎因子mRNA表达水平 |
| 3.4.3 趋化因子mRNA表达水平 |
| 3.5 TLRS相关基因TLR2、TLR3、TLR4 mRNA表达水平 |
| 3.6 NF-κB信号通路相关基因p65 mRNA表达水平 |
| 3.7 NF-ΚB信号通路炎症相关细胞因子mRNA表达水平 |
| 3.7.1 NF-κB信号通路促炎因子mRNA表达水平 |
| 3.7.2 NF-κB信号通路趋化因子mRNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 鸡胚感染FAdV-4 后肝炎症损伤及炎症因子表达变化 |
| 4.2 鸡胚感染FAdV-4 后肝脏激活TLRs/NF-κB信号通路相关因子表达 |
| 4.3 鸡胚感染FAdV-4 后肝脏中NF-κB信号通路炎症因子表达的变化 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）安卡拉病毒贵州株分离培养与基因组分子特征研究（论文提纲范文）
| 课题来源 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 第一章 安卡拉病毒快速检测方法的建立 |
| 1 材料 |
| 1.1 样本材料 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 试验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 安卡拉病毒PCR检测方法的建立 |
| 2.1.1 引物设计与合成 |
| 2.1.2 FAdV-4 基因组DNA提取 |
| 2.1.3 FAdV-4 PCR检测方法体系构建 |
| 2.1.4 PCR检测方法反应条件的优化 |
| 2.1.5 PCR检测方法的性能评估 |
| 2.2 Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用 |
| 2.2.1 引物、探针的设计与合成 |
| 2.2.2 标准质粒构建 |
| 2.2.3 标准质粒制备和拷贝数计算 |
| 2.2.4 q-PCR反应体系的建立与反应条件优化 |
| 2.2.5 标准曲线建立 |
| 2.2.6 Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法性能评估 |
| 3 结果 |
| 3.1 安卡拉病毒PCR检测方法的建立 |
| 3.1.1 PCR方法体系的构建结果 |
| 3.1.2 PCR反应条件的优化 |
| 3.1.3 PCR方法性能评估 |
| 3.2 Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 3.2.1 质粒标准品的制备 |
| 3.2.2 q-PCR反应体系构建结果 |
| 3.2.3 反应条件优化结果 |
| 3.2.4 标准曲线的建立 |
| 3.2.5 FAdV-4TaqMan探针实时荧光定量检测方法性能评价 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于安卡拉病毒 |
| 4.2 关于安卡拉病病毒的检测方法 |
| 4.3 关于PCR与 q-PCR应用 |
| 第二章 安卡拉病毒贵州流行株的分离鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料、试验动物和细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 病料的采集与处理 |
| 2.2 FAdV-4 细胞分离培养与鉴定 |
| 2.2.1 LMH传代细胞培养 |
| 2.2.2 FAdV-4的LMH分离培养 |
| 2.2.3 FAdV-4 病原核酸检测 |
| 2.2.4 FAdV-4 分离株间接免疫荧光试验检测 |
| 2.2.5 FAdV-4 细胞培养物的电镜观察 |
| 2.2.6 FAdV-4 血凝性检测 |
| 2.3 动物回归试验 |
| 2.3.1 鸡胚感染试验 |
| 2.3.2 FAdV-4 雏鸡感染试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 FAdV-4 细胞分离培养与鉴定结果 |
| 3.1.1 LMH培养与FAdV-4 感染细胞病变观察 |
| 3.1.2 细胞培养物FAdV-4 核酸检测 |
| 3.1.4 FAdV-4 病毒粒子电镜观察 |
| 3.1.5 凝集实验结果 |
| 3.2 动物回归试验结果 |
| 3.2.1 FAdV-4 SPF鸡胚感染试验结果 |
| 3.2.2 鸡胚尿囊液PCR检测结果 |
| 3.2.3 FAdV-4 雏鸡感染试验结果 |
| 3.2.4 组织样本q-PCR检测结果 |
| 3.2.5 病理组织切片观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于FAdV-4 分离培养技术 |
| 4.2 关于FAdV-4 的鉴定技术 |
| 4.3 关于FAdV-4 引起的细胞病变与组织病变 |
| 第三章 安卡拉病毒贵州分离株全基因序列分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 FAdV-4 全基因组序列分段扩增 |
| 2.1.1 引物设计与合成 |
| 2.1.2 FAdV-4 基因组DNA提取 |
| 2.1.3 FAdV-4 基因分段扩增 |
| 2.2 FAdV-4 基因的分段克隆 |
| 2.2.1 PCR产物的回收 |
| 2.2.2 目的片段与T载体连接 |
| 2.2.3 连接产物转化 |
| 2.2.4 阳性重组质粒的筛选 |
| 2.3.4 重组质粒酶切鉴定 |
| 2.3.5 序列测定与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 全基因组PCR分段扩增结果 |
| 3.2 重组质粒克隆结果 |
| 3.3 全基因组序列分析 |
| 3.3.1 全基因组序列大小和ORF预测 |
| 3.3.2 全基因组核苷酸序列比对与系统遗传进化分析 |
| 3.3.3 全基因推导得到的氨基酸序列分析 |
| 3.3.4 Hexon、fiber1和fiber2 系统遗传进化分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于禽腺病毒分类与基因分型 |
| 4.2 关于FAdV-4 基因同源性和遗传进化分析 |
| 4.3 关于FAdV-4 基因变异与致病性关系分析 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录一 FAdV-4GZ-BJ、FAdV-4GZ-QL全基因组比对结果 |
| 附录二 主要培养基、溶液及试剂配制 |
| 附录三 攻读硕士学位期间发表论文及参加科研项目 |
（9）一株鸭源血清4型I群禽腺病毒的分离鉴定及其对鹅的致病性（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 禽腺病毒感染的病原学 |
| 1.1.1 禽腺病毒分类 |
| 1.1.2 形态学 |
| 1.1.3 理化特性和培养特性 |
| 1.1.4 分子生物学特性 |
| 1.1.5 禽腺病毒对宿主免疫系统影响 |
| 1.1.6 禽腺病毒对宿主生理生化指标的影响 |
| 1.2 禽腺病毒感染的研究进展 |
| 1.2.1 流行病学 |
| 1.2.2 临床症状 |
| 1.2.3 病理变化 |
| 1.2.4 禽腺病毒的实验室诊断方法 |
| 1.2.5 防控措施 |
| 1.3 本研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物、鸡胚、载体、菌株及毒株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 血清4型I群禽腺病毒的分离鉴定 |
| 2.2.1.1 引物的设计与合成 |
| 2.2.1.2 病料处理与病毒的传代 |
| 2.2.1.3 病毒DNA的提取和PCR鉴定 |
| 2.2.1.4 病毒Hexon基因测序 |
| 2.2.2 血清4型I群禽腺病毒对鹅的致病性 |
| 2.2.2.1 病毒的EID50 测定 |
| 2.2.2.2 试验方案 |
| 2.2.2.3 组织病理学检查 |
| 2.2.2.4 病毒载量检测 |
| 2.2.2.5 细胞因子的检测 |
| 2.2.2.6 血液生化指标检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 血清4型I群禽腺病毒的分离鉴定 |
| 3.1.1 病毒分离 |
| 3.1.2 PCR鉴定 |
| 3.1.3 Hexon基因序列分析 |
| 3.2 血清4型I群禽腺病毒对鹅的致病性 |
| 3.2.1 临床症状 |
| 3.2.2 剖检病变 |
| 3.2.3 组织病理学检查 |
| 3.2.4 病毒载量检测 |
| 3.2.5 血清中细胞因子的检测 |
| 3.2.6 血清中生化指标的检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
（10）两株Ⅰ群禽腺病毒致病性和免疫原性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号和缩略词 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 Ⅰ群禽腺病毒的研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 Ⅰ群禽腺病毒的特点 |
| 2.1 病原分类 |
| 2.2 形态学和理化特性 |
| 3 Ⅰ群禽腺病毒的致病性与流行病学 |
| 4 Ⅰ群禽腺病毒病的病理学研究 |
| 4.1 病理剖检病变 |
| 4.2 组织病理学变化 |
| 5 Ⅰ群禽腺病毒的诊断方法 |
| 5.1 病原分离 |
| 5.2 组织病理学诊断 |
| 5.3 血清学诊断方法 |
| 5.4 分子生物学检测 |
| 5.5 中兽医辩证 |
| 6 Ⅰ群禽腺病毒的防治 |
| 6.1 Ⅰ群禽腺病毒油乳剂灭活疫苗的研制 |
| 6.2 Ⅰ群禽腺病毒基因工程重组亚单位疫苗 |
| 7 本研究的目的和意义 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 两株Ⅰ群禽腺病毒的扩增鉴定及序列分析 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 毒株、鸡胚和1%红细胞 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 病毒繁殖与传代 |
| 2.2 病毒DNA的提取 |
| 2.3 病毒的纯净性检测 |
| 2.4 引物设计与合成 |
| 2.5 Hexon基因的PCR扩增 |
| 2.6 目的片段回收测序 |
| 2.7 序列分析与进化树绘制 |
| 3 结果分析 |
| 3.1 病毒繁殖与传代 |
| 3.2 病毒纯净性检测结果 |
| 3.3 病毒的血凝性 |
| 3.4 Hexon基因的PCR扩增 |
| 3.5 Hexon基因的序列分析 |
| 3.6 氨基酸序列对比分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三篇 试验研究 |
| 第三章 Ⅰ群禽腺病毒的致病性和免疫原性研究 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 病毒、实验动物、细胞 |
| 1.2 仪器设备与试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 SPF鸡分组与攻毒 |
| 2.2 组织病理学观察 |
| 2.3 PCR检测鸡病变组织中病毒分布 |
| 2.4 鸡胚原代肝细胞的制备 |
| 2.5 禽腺病毒分离株在CELi上的增殖 |
| 2.6 禽腺病毒病油乳剂灭活疫苗的效力测定 |
| 3 结果分析 |
| 3.1 FAdV-4对SPF鸡的致病性 |
| 3.2 剖检病变 |
| 3.3 组织病理学变化 |
| 3.4 PCR检测死亡鸡病变组织中病毒分布 |
| 3.5 禽腺病毒在CELi上的增殖 |
| 3.6 禽腺病毒病油乳剂灭活疫苗的效力测定 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
四、“鸡包涵体肝炎病毒引起鸡生殖和免疫功能抑制的机理及防治技术”通过专家鉴定（论文参考文献）
- [1]LMH细胞感染禽腺病毒血清4型早期miRNAs和mRNAs表达变化研究[D]. 武宁. 西北农林科技大学, 2020(03)
- [2]鸡Ⅰ群禽腺病毒三价灭活苗及卵黄抗体的研制[D]. 魏若瑶. 扬州大学, 2020(04)
- [3]E种禽腺病毒血清8a和8b型分离株致病性研究[D]. 宋文平. 中国农业科学院, 2020
- [4]沙眼衣原体感染相关lncRNA的筛选及其功能的初步研究[D]. 文雅婷. 南华大学, 2020
- [5]禽心包积液-肝炎综合征IgY脂质体的制备及其雏鸡保护试验[D]. 刘蕊. 天津农学院, 2019(07)
- [6]禽腺病毒4型核酸疫苗的构建及免疫效果初步评价[D]. 庞洪泽. 河北科技师范学院, 2019(08)
- [7]FAdV-4致鸡胚肝脏炎症损伤的研究[D]. 王珊珊. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [8]安卡拉病毒贵州株分离培养与基因组分子特征研究[D]. 张云丹. 贵州大学, 2019(09)
- [9]一株鸭源血清4型I群禽腺病毒的分离鉴定及其对鹅的致病性[D]. 魏志鹏. 山东农业大学, 2019(01)
- [10]两株Ⅰ群禽腺病毒致病性和免疫原性研究[D]. 毕靖征. 南京农业大学, 2017(05)