一、17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布（论文文献综述）
余泽磊[1]（2021）在《基于PROTAC原理合成的新型PARP1降解剂NN3对乳腺癌细胞的作用及其机制》文中研究说明目的:探究基于蛋白水解靶向嵌合体技术（PROTAC）自主合成的新型PARP1降解剂NN3对乳腺癌细胞PARP1蛋白的降解功能及抗肿瘤作用,并研究其与HSP90C端抑制剂新生霉素（Novobiocin,NB）协同杀伤乳腺癌细胞的作用及机制。方法:（1）通过Western Blotting检测NN3给药后乳腺癌细胞中PARP1蛋白的降解情况;利用E3泛素连接酶MDM2配体Nutlin-3和PARP1蛋白配体Niraparib进行竞争结合实验,并用E1泛素活化酶抑制剂MLN4924和蛋白酶体抑制剂MG132抑制泛素-蛋白酶体途径,探究NN3对PARP1蛋白的降解是否基于PROTAC原理。接着,MTT和集落形成实验评估NN3对乳腺癌细胞杀伤作用,并通过Annexin V和7-AAD染色,流式细胞仪分析其对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用。再者,用柔红霉素（Daunorubicin,DNR）对细胞进行损伤造模,流式细胞术检测NN3是否能抑制乳腺癌细胞的DNA修复。（2）Western Blotting检测NB对HSP90蛋白及其辅伴侣蛋白HSP70、p60hop、HSP27、P23等的影响,并检测客户蛋白BRCA1的表达是否受到抑制;柔红霉素预处理后,流式细胞术检测NB是否能抑制乳腺癌细胞的DNA修复。（3）MTT检测NN3和NB联合用药对乳腺癌细胞的杀伤是否存在协同作用,流式细胞术检测NN3和NB联用对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用,且两者联用是否能协同抑制乳腺癌细胞的DNA修复。（4）药代动力学实验评估NN3在动物体内的吸收分布代谢排泄情况,并构建同种移植瘤模型检测NN3在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:（1）降解剂NN3明显降解乳腺癌细胞的PARP1蛋白,竞争结合实验表明是NN3是通过泛素-蛋白酶体途径降解PARP1,符合PROTAC技术原理;MTT和集落形成实验显示NN3对乳腺癌细胞有明显的杀伤作用;流式细胞术结果显示NN3可以显着诱导乳腺癌细胞的凋亡,抑制乳腺癌细胞DNA修复。（2）NB对HSP90蛋白及其辅伴侣蛋白HSP70、p60hop、HSP27、P23的表达并无显着影响,但抑制其客户蛋白BRCA1的表达;流式细胞术显示NB作用后乳腺癌细胞DNA双链断裂标志γ-H2AX的比例明显上调,DNA修复受到抑制（3）MTT结果显示NN3和NB联用对乳腺癌细胞的杀伤有明显的协同作用（7）流式细胞术表明NN3和NB联用增强对乳腺癌细胞凋亡的诱导,并显着抑制乳腺癌细胞DNA修复。（4）NN3在动物体内有良好的药代动力学特性,并且在较高剂量下能够抑制小鼠体内肿瘤的生长。结论:基于PROTAC原理的新型PARP1降解剂NN3能够有效降解肿瘤细胞的PARP1蛋白,进而阻断BER修复通路,并且对肿瘤细胞有一定的杀伤作用;而HSP90 C端抑制剂NB能够通过影响HSP90的分子伴侣功能抑制其客户蛋白BRCA1的表达,进而阻断由BRCA1介导的HR修复通路,两者联用同时抑制BER和HR修复通路,形成“合成致死”,导致肿瘤细胞DNA断裂得不到修复,诱导肿瘤细胞凋亡。
李丹[2]（2020）在《联合抑制FLT3与Notch在FLT3-ITD突变的急性髓系白血病中作用及初步机制研究》文中认为目的FLT3的内部串联重复（ITD）突变是急性髓性白血病（AML）中最常见的遗传改变,预示着预后不良。FLT3酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）可带来短期临床缓解,但伴FLT3-ITD突变的AML患者的长期预后仍然较差。Notch信号传导在许多类型的肿瘤中非常重要。然而,Notch信号在伴FLT3-ITD突变的AML中的作用仍有待阐明。伴FLT3-ITD突变的AML患者也亟需有效的治疗方法。方法我们首先通过q PCR及western blot探索Notch途径在FLT3-ITD突变的原代标本和细胞系中作用。然后在FLT3-ITD突变或野生型AML细胞系中检测了FLT3抑制剂与Notch抑制剂联用在细胞增殖、凋亡、克隆形成等方面的作用。为了排除遗传背景影响,明确FLT3抑制剂与Notch抑制剂间协同作用局限于FLT3-ITD突变AML细胞中,我们利用CRISPR/CAS9系统在SKM-1细胞系中构建了FLT3-ITD敲入细胞株,并在SKM-1野生型和FLT3-ITD敲入细胞株中检测了FLT3抑制剂与Notch抑制剂作用。此外,我们还应用si-RNA与慢病毒技术下调Notch通路,进一步明确抑制Notch通路可以促进FLT3抑制剂的抗肿瘤作用。在AML原代标本中,体外验证了细胞系增殖与凋亡方面的结果,同时检测了AML及健康供者标本在FLT3抑制剂和/或Notch抑制剂处理后CD34+细胞比例变化。在体内,我们利用由伴FLT3-ITD突变的AML患者诱导构建的PDX小鼠模型,在NOD/SCCID小鼠中检测了FLT3抑制剂索拉非尼与Notch抑制剂DAPT单独或联用对肿瘤增殖、器官浸润、生存期等方面影响。利用表达谱测序RNA-seq,分析了FLT3抑制剂与Notch抑制剂联合效应可能的机制,筛选潜在靶基因,最后在FLT3-ITD突变细胞系中,通过模拟和挽救实验验证测序结果。结果我们发现在FLT3-ITD突变细胞系和原代细胞中FLT3-TKIs处理后Notch信号被激活。伴FLT3-ITD突变的AML细胞系和原代AML细胞中,我们观察到协同细胞毒性作用,主要表现在抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡及抑制细胞克隆形成等。此外,在基于FLT3-ITD突变患者标本构建的异种移植物（PDX）AML小鼠模型中,FLT3抑制剂与Notch抑制剂联用能显着清除白血病细胞并延长小鼠生存期。从机制上讲,RNA测序表明,CXCR3表达降低可能是FLT3抑制剂与Notch抑制剂协同作用的部分原因,蛋白水平验证则发现ERK信号传导活性下调可能是潜在机制之一。CXCR3抑制剂与FLT3抑制剂联用可以观察到与Notch抑制剂类似的抑增殖与促凋亡效果,CXCR3配体CXCL10可以部分挽救FLT3抑制剂或FLT3抑制剂联合Notch抑制剂诱导的细胞凋亡。这些结果都支持CXCR3是参与FLT3抑制剂与Notch抑制剂协同效应重要基因的测序结果。结论Notch通路在FLT3-ITD突变AML中发挥不可或缺的重要作用,FLT3抑制剂与Notch抑制剂的联合治疗可能是治疗FLT3/ITD+AML的潜在治疗策略之一。
张晓辉[3]（2016）在《Hsp90诱导表达对热应激损伤鸡心肌细胞的保护作用及其机理的研究》文中指出长时间、高强度的应激刺激会对机体重要组织器官（特别是心脏）造成严重病理损害。众多应激原可以影响畜禽生产和繁殖性能。热应激可以导致鸡生长速度降低、产蛋量下降,甚至导致鸡的突然性死亡,而这种死亡与应激诱导的心脏疾病密切相关。生物有机体在遭受应激刺激时会激发自身一种适应性防御性应激反应。在此过程中,机体细胞会在多种热休克因子（Heat shock factor, HSF）的调控下迅速合成一系列热休克蛋白（Heat shock proteins, HSPs）而发挥保护作用。HSPs可以有效保护组织细胞免于各种应激性病理损伤和凋亡,其中,最为重要的热休克蛋白家族之一便是HSP90家族。Hsp90有助于其客户蛋白（Clientprotein）分子结构的成熟和稳定性保持,而这些客户蛋白多为细胞促生存/抗凋亡信号转导通路的关键蛋白。阿司匹林（ASA）可以降低机体对温度的敏感性阈值,从而更好地诱导机体发生应激保护性反应,如在热应激过程中诱导Hsp70的高表达。本文在成功建立体内、外鸡心肌细胞热应激模型的基础上动态研究了阿司匹林在热应激过程中对鸡心肌细胞Hsp90表达水平的影响及其抵抗细胞病理损伤/凋亡的作用,并从HSFs表达动力曲线和Hsp90相关信号转导通路两方面深入探讨了阿司匹林在上述过程中的调控与保护机制;同时,本文利用ASA和格尔德霉素（GA）分别作为Hsp90的诱导剂和抑制剂,在鸡原代心肌细胞水平上系统证明了 Hsp90诱导表达对于鸡心肌细胞抵抗热应激损伤/凋亡的作用及其机制。在建立鸡心肌细胞的体内、体外热应激模型基础上,于试验前2 h使用药物ASA（剂量分别为1 mg/kg体重和1 mg/mL）对试验鸡或者离体培养的心肌细胞分别进行饲喂或处理,以观察其对热应激处理后体内、体外心肌细胞热应激损伤的缓解作用。鸡心肌细胞体内热应激模型的建立选取饲养至21日龄的SPF鸡,体外培养的热应激鸡心肌细胞模型则采用鸡原代心肌细胞。试验组包括热应激组（HS）,阿司匹林+热应激组（ASA+HS）和阿司匹林组（ASA）,其中HS组和ASA+HS组试验鸡/鸡原代心肌细胞均于42℃条件下分别进行热应激处理,并分别于热应激处理至0h, lh, 2 h, 3 h,5 h, 7 h, 10 h, 15 h和24 h时随机自各试验组中选取10只鸡或3个平皿的心肌细胞进行采样,采集的活体受试鸡的血清和培养皿中离体培养原代心肌细胞上清液直接送检,分别检测其中谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性。而采取的鸡心肌组织和培养皿中的心肌细胞则分别用4%多聚甲醛固定。试验结果显示,热应激开始后,HS组受试鸡出现张口呼吸、呼吸频率增加、饮水量剧增和摄食量显着下降,受试鸡体温骤升至43℃。ASA+HS组受试鸡也表现拍打翅膀,饮水量增加和呼吸频率增加等症状;热应激后HS组受试鸡血清中AST、CK和LDH的活性水平显着增加。而ASA+HS组和ASA组受试鸡的相应酶则水平变化不大;组织病理学观察结果显示,热应激导致HS组受试鸡心肌细胞产生明显的以急性变性如颗粒变性和水泡变性为特征的变化,甚至出现心肌细胞核固缩、核碎裂,而ASA+HS组受试鸡心肌细胞则没有出现明显的核固缩、核碎裂等病理变化;体外培养的心肌细胞则显示,HS组心肌细胞培养上清中AST、CK和LDH水平显着升高,心肌细胞发生明显的颗粒变性和水泡变性,甚至出现核固缩、核碎裂等明显病理变化。而经过ASA处理的心肌细胞热应激损伤明显减轻,主要表现为细胞培养上清液中损伤相关酶的活性很多恢复至正常水平,心肌细胞也没有出现明显的细胞坏死特征。上述研究表明,ASA可以在体内、体外水平上显着减轻热应激对鸡心肌细胞的损伤及其程度。通过给试验鸡提前2 h饲喂ASA （1 mg/kg . bw）,然后将受试鸡暴露于42℃环境下分别进行0,1, 2, 3,5,7, 10,15和24 h的热应激处理,利用免疫组织化学和分子生物学检测方法,观察hsp90 mRNA,Hsp90和HSF在热应激过程中的变化规律,以探讨ASA是否通过Hsp90表达量的改变参与心肌细胞抗应激性病理损伤及其机理。试验结果显示,热应激过程中,鸡心肌细胞内HSF-1的诱导与消耗、HSF-2和HSF-3的下调导致了hsp90 mRNA转录启动的推迟。而ASA的饲喂不同程度地改变了HSF-1, 2, 3的表达水平,从而使鸡心肌细胞hsp90 mRNA在整个热应激过程中处于高表达状态,进而诱导了鸡心肌细胞Hsp90蛋白的提前高表达。同时,免疫组织化学检测结果显示,饲喂ASA可明显提高热应激过程中Hsp90在鸡心肌细胞核中以及心肌组织动脉、毛细血管内皮细胞中的滞留时间。说明ASA在机体内可通过调节鸡心肌细胞中HSFs的表达,进而诱导Hsp90的显着高表达及其在细胞核中的滞留,这与ASA有效提高鸡心肌细胞抗热应激损伤能力有显着关联。利用RT-PCR,western blot, ELISA和TUNEL原位杂交技术等,分别对饲喂AS A后不同时间热应激处理的受试鸡的心脏组织中hsp90mRNA转录水平、Hsp90蛋白表达、抗凋亡关键蛋白Akt表达与激活水平,以及心肌细胞凋亡率等方面进行动态观察。试验结果显示,暴露于热应激环境后,鸡心肌细胞中hsp90 mRNA转录和Hsp90蛋白表达均出现明显延迟,抑制了 Akt的表达与激活,进而导致鸡心肌细胞内caspase-3与caspase-9活性和心肌细胞热应激凋亡率的显着升高。提前进行ASA饲喂处理后则可提前显着上调hsp90mRNA的基因转录（P<0.01）与其相应蛋白Hsp90的表达（2.3-4.1倍）。由此Akt的表达与激活水平也被相应提高,这有效抑制了心肌细胞内caspase-3与caspase-9的活性和心肌细胞的热应激凋亡率（降低2.14 - 2.56倍）。试验结果证实,提前进行ASA饲喂可以通过显着提前/提高鸡心肌细胞中Hsp90表达,诱导并激活抗凋亡信号通路关键蛋白Akt,进而有效抑制其热应激凋亡。利用PCR,western blot,免疫细胞化学和细胞学检测技术,检测经ASA处理后体外培养鸡原代心肌细胞在热应激过程中应激性病理损伤、ASA处理对鸡原代心肌细胞hsp90 mRNA转录和Hsp90表达的诱导作用,探讨ASA诱导Hsp90表达、缓解鸡原代心肌细胞热应激损伤的保护作用及其机理。结果发现,用ASA （1 mg/mL）提前2 h处理离体培养的心肌细胞,然后对体外培养心肌细胞进行热应激处理后,ASA在不影响鸡原代心肌细胞活性的条件下可显着诱导其Hsp90的高表达。而在42℃热应激处理过程中,ASA处理的鸡心肌细胞在热应激过程中出现了更强的Hsp90细胞质阳性信号,且Hsp90在细胞核内的滞留时间更为持久。相对于热应激组心肌细胞Hsp90在热应激过程中的4.1倍升高且快速下调,ASA处理的鸡心肌细胞Hsp90表达则是在高热应激前即出现显着升高（约11.1倍）,并在热应激前期一直保持较高水平。同时,在整个试验过程中ASA处理的心肌细胞内hsp90 mRNA转录保持高表达,而热应激组心肌细胞内的hsp90mRNA转录则一直低于应激前水平。结果表明,ASA处理可以显着诱导心肌细胞Hsp90的高表达,而且在热应激前用ASA诱导Hsp90提前高表达可使鸡原代心肌细胞在热应激过程中维持更高水平的Hsp90,特别是在细胞核中。在系统评价ASA对鸡原代心肌细胞Hsp90的诱导表达和GA对其Hsp90的抑制表达基础上,分别用ASA和GA预处理鸡原代心肌细胞,然后进行热应激处理。结果发现,鸡原代心肌细胞的细胞活性、凋亡率和氧化应激水平在热应激初期即受到显着影响,且随着应激时间的延长,这种损伤程度越大;0.1 μM及以上浓度的GA处理鸡原代心肌细胞可以有效抑制其Hsp90的表达水平。而ASA则可以显着（P<0.05）提高心肌细胞热应激后的Hsp90表达,同时心肌细胞的活性更高、凋亡率和氧化应激水平更低;GA可以下调细胞热应激后的Hsp90表达（P<0.05）,此时心肌细胞的活性更低、凋亡率和氧化应激水平更高;对于GA预处理的心肌细胞,与单独用GA处理的热应激心肌细胞相比,ASA处理则只能有限地提高热应激后心肌细胞Hsp90表达,这时心肌细胞的活性改善不明显、凋亡率和氧化应激水平均有一定程度的降低。研究结果说明,热应激过程中鸡原代心肌细胞活性、凋亡率和氧化应激水平均（即抗热应激损伤能力）与其Hsp90表达水平密切相关。采用Hsp90诱导剂ASA和抑制剂GA预处理体外培养的鸡原代心肌细胞,然后进行5 h的热应激处理后发现,与热应激组心肌细胞相比,ASA处理可有效上调热应激心肌细胞中Akt, STAT-3和p-IKKα/β的表达,Akt、STAT-3与Hsp90的共定位也相应提高,此时caspases酶的活性也相对较低;GA处理可显着抑制Akt表达和p-IKKα/β水平,但可诱导STAT-3的高表达,同时Akt、STAT-3与Hsp90的共定位也明显降低,伴随着相对较高的caspases酶活性;GA预处理后,再用ASA处理鸡原代心肌细胞后,热应激处理心肌细胞内caspases酶活性被部分抑制,Akt表达水平及其与Hsp90的共定位一定程度上得到恢复,STAT-3与p-IKKα/β的表达被进一步下调,其与Hsp90的共定位也没有明显恢复。试验结果表明,不同Hsp90表达水平通过其对重要靶蛋白的调节,对鸡原代心肌细胞的抗应激性损伤和细胞凋亡具有关键的调控作用,而当Hsp90表达首先被抑制时,后续的Hsp90诱导剂处理则只能有限地提升心肌细胞的抗热应激能力。
庄敏[4]（2014）在《热休克蛋白抑制剂17-DMAG在体外对人肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用研究》文中指出目的研究HSP90抑制剂17-DMAG在体外对人LX2肝星状细胞的生长增殖及凋亡机制。方法体外培养人LX2肝星状细胞作为受试细胞,实验设计为对照组和17-DMAG处理组,以24h为作用时间点,采用细胞毒试验（MTT法）观察并计算不同浓度（100.250.500.1000nmol/L）和作用时间（24h、48h、72h）的17-DMAG对LX2细胞的生长抑制率并计算IC50值；应用流式细胞仪Annexin V-FITC／PI试剂双染法检测药物作用48h、72h作用后LX2肝星状细胞的凋亡率；Western blot检测药物作用48h、72h作用后α-SMA的表达,分析灰度值并与对照组进行对比。结果LX2肝星状细胞在DMEM培养液中生长良好,并且当细胞浓度>5.0×104m1时,培养4-5天后,细胞进入平台期；17-DMAG台抑制人LX2肝星状细胞生长,且在100-1000nmol/L浓度范围内及1-5天的时间范围内呈浓度和时间依赖性（p<0.01）并且能够抑制细胞增殖,随药物浓度（100-1000nmol/L）加大和作用时间（24h、48h、72h）延长,存活细胞数量逐渐减少,并计算在24h、48h、72h的IC50值为：757.380.12lnmol/L:流式细胞仪PI双染法证实400nmol/L的17-DMAG可诱导LX2细胞凋亡,与24h、48h对照组（3.07±0.72、7.50±0.95）比较,17-DMAG处理组细胞凋亡率分别为（46.68±2.46、62.84±2.73）明显增加（p<0.01）; Westernblot研究结果表明经过17-DMAG处理作用48h、72h,可使LX2肝星状细胞α-SMA表达减少,与对照组比较差异有统计学意义（p<0.05）。结论17-DMAG在100-1000nmol/L浓度范围内及1-5天的时间范围内具有量效和时效关系；17-DMAG能够抑制LX2细胞增殖,并且流式细胞仪PI双染法证实400nmol/L的17-DMAG可以诱导该细胞凋亡,这与降低α-SMA表达有关。
吕春婉[5]（2013）在《新型HSP90抑制剂抗胃癌作用及机制研究高通量筛选eIF4E抑制剂及其抗肿瘤作用研究》文中研究指明热休克蛋白90（Hsp90）是一种广泛存在于细胞中的分子伴侣（molecular chaperone）。它通过稳定肿瘤细胞中的原癌蛋白（例如Akt和c-Raf）从而参与多种细胞内信号转导过程。Hsp90抑制剂17-AAG在临床试验中展现出颇具希望的抗肿瘤效应,但由于其潜在的毒性和不良的药代特性,进一步的应用受到限制。因此现阶段的努力集中于开发具有更强药效和更低副作用的新型Hsp90抑制剂。本研究利用荧光偏振竞争结合实验筛选了百余种小分子化合物,并筛选出一种作用较强的间苯二酚衍生物LD053,它能与Hsp90ATP结合口袋有效地结合。LD053与Hsp90的结合能将辅分子伴侣cdc37从Hsp90上解离下来,导致Akt和c-Raf的不稳定,并通过提高泛素化而使两者降解,进而抑制下游的PI3K/Akt和c-Raf/Mek/Erk信号通路。结果,LD053降低了BGC8231中瘤细胞的活力并诱导其凋亡,表现为细胞在subGO/G1期的积累,同时cleaved-caspase3和PARP的增多。但正常细胞对LD053并不敏感。与体外抗肿瘤活性一致,LD053能显着抑制裸鼠体内BGC823异种移植瘤的生长,而体重却未见明显降低。以上结果均表明,LD053是一种新型的Hsp90抑制剂,并具有潜力用于胃癌的治疗。近期研究表明,由eIF4F复合物起始的帽依赖的翻译过程对多种原癌蛋白的表达是必需的,这些原癌蛋白包括c-Myc, survivin, Cyclin D1, Mcl-1, VEGF等。因此帽依赖的翻译在人类肿瘤中常常是处于上调的状态。作为eIF4F复合物的重要组成部分,真核生物翻译起始因子4E （eIF4E）是帽依赖翻译的限速因子,并且经常因为基因扩增和转录上调而在肿瘤细胞中过表达。siRNA或反义寡核苷酸引起的eIF4E的表达下调能够有效地抑制肿瘤细胞的生长并诱导凋亡,而且没有明显毒性。这些结果使研究者们对开发新型的小分子药物产生了浓厚的兴趣,这些小分子药物能靶向于eIF4E区动的翻译起始装置。基于FRT介导的同源重组,本实验室建立了一种基于荧光素酶报告体的检测方法,能够高通量地筛选抑制eIF4E表达的小分子化合物。应用该方法我们筛选了NCI Diversity-Set化合物库,筛选出一个小分子,代号为48F10,它能在较低的微摩尔浓度显着地抑制几种乳腺癌细胞eIF4E的mRNA表达,进而剂量和时间依赖性地降低HS578T细胞中eIF4E的蛋白水平,导致下游蛋白survivin, cyclin D1, Mcl-1和c-myc的下调,同时抑制乳腺癌细胞的生长,并诱导凋亡,表现为cleaved-caspase3和cleaved-PARP的明显增多。因此,48F10代表了一类新的eIF4E抑制剂,能通过抑制eIF4E的转录而抑制帽依赖的翻译。
叶连宝[6]（2013）在《基于c-Met靶点的抗肿瘤药物的设计与合成研究》文中研究说明c-Met酪氨酸激酶是肝细胞生长因子高亲和性配体,c-Met广泛表达于多种人体正常组织,但在肺癌、结肠癌、肝癌、直肠癌、胃癌、卵巢癌、肾癌、神经胶质瘤、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤组织中呈现出异常的高表达、突变或活性改变。在多种肿瘤组织中发现HGF/c-Met信号通路异常活化-这种异常活化参与并调控这些肿瘤的发生、发展或转移。由于c-Met是导致肿瘤形成及转移的许多通路的交叉点,以c-Met为靶标可相对较容易地实现对许多通路的同时干扰,因而,c-Met是抗肿瘤转移治疗的一个极有希望的靶点,已成为抗癌药物研究的热点领域之一。目前,已经发现了许多能够阻断HGF/c-Met信号传导途径的化合物,其中小分子c-Met激酶抑制剂已经成为研究的重点。本课题以Pfizer开发的1-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪类化合物PF-04217903、Janssen开发的3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪类化合物JNJ-38877605、SGX公司的三唑哒嗪类化合物SGX-523以及课题组前期研究的2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类、螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类专利化合物为先导化合物,基于激酶的"DFG-in"构象的晶体结构和I型抑制剂的药效团模型,结合三唑类I型c-Met抑制剂的构效关系,总结了国际知名药企对该类化合物的优化改造经验,通过生物电子等排体原理、拼合原理及分子对接等手段设计合成了一系列新化合物采用定向合成和其它化合物制备技术,合成这些化合物。然后对合成的衍生物进行活性评价,筛选出活性更好的化合物,采用分子对接对设计的化合物与c-Met结合情况进行了初步的分析和探讨,结合化合物的活性情况,进行了初步构效关系分析,为开发具有临床应用价值的c-Met酪氨酸激酶抑制剂奠定基础。项目主要研究工作及结果如下：1、将先导化合物中的1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪或3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环通过生物电子等排体原理用3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤、吲哚唑环替代,设计并合成3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤、吲哚唑系列的化合物：（1）3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶类化合物,在三唑[4,5-d]嘧啶环的5位分别引入1-甲基-1H-吡唑、1-（2-四氢-2H-吡喃-2-氧乙基）-1H-吡唑、1-（4-羟基环己基）-1H-吡唑1-[（1R,4R）-4-（正丁基二甲基硅氧基）环己基]-1H-吡唑和1-（（1R,4R）-4-羟基环己基）-1H-吡唑得到化合物6-（（5-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基）甲基）喹啉WXY001,6-（5-（2-（1-（2-四氢-2H-吡喃-2-基氧乙基）-1H-吡唑-4-基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基）甲基）喹啉WXY002,2-（4-（3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-5-基）-1H-吡唑-1-基）乙醇WXY003,6-（（5-（1-（（1R,4R）-4-（叔丁基二甲基硅氧基）环己基）-1H-吡唑-4-y1）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-3-基）甲基）喹啉WXY004,（1R,4R）-4-[4-[3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-5-基]-1H-吡唑-1-基]环己醇WXY005。此类目标化合物是通过1位取代的4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）吡唑与5-氯-3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶进行Suzuki耦合反应得到。（2）7-（喹啉-6-基甲基）嘌呤类化合物,在嘌呤环的2位分别引入1-甲基-1H-吡唑、1-（2-四氢-2H-吡喃-2-氧乙基）-1H-吡唑、1-（4-羟基环己基）-1H-吡唑1-[（1R,4R）-4-（正丁基二甲基硅氧基）环己基]-1H-吡唑和1-（（1R,4R）-4-羟基环己基）-1H-吡唑得到化合物6-[[2-（1-甲基-1H吡唑-4-基）-9H-嘌呤-9-基]甲基]喹啉WXY006,6-[[2-[1-（2-四氢-2H-吡喃-2-基氧乙基）1H-吡唑-4-基]-9H-嘌呤-9-基]甲基]喹啉WXY007,2-[4-[9-（6-喹啉基甲基）-9H-嘌呤-2-基]-1H吡唑-1-基]乙醇WXY008,6-（（2-（1-（（1R,4R）-4-（叔丁基二甲基硅氧基）环己基）-1H-吡唑-4-基）-9H-嘌吟-9-基）甲基）喹啉WXY009,（1R,4R）-4-[4-[9-（喹啉基-6-甲基）-9H-嘌呤-2-基]-1H-吡唑-1-基]环己醇WXY010。该类化合物以2-氯-N4-（喹啉-6-基-甲基）嘧啶-4,5-二胺为原料,与原甲酸三甲酯在对甲苯磺酸一水合物催化下环合后再与1位取代的4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）吡唑进行Suzuki耦合反应得到。（3）1（2）-（喹啉-6-基甲基）吲哚唑类化合物在吲哚唑6位引入1-甲基-1H吡唑、1-（2-四氢-2H-吡喃-2-氧乙基）-1H-吡唑、1-（4-羟基环己基）-1H-吡唑1-[（1R,4R）-4-（正丁基二甲基硅氧基）环己基]-1H-吡唑和1-（（1R,4R）-4-羟基环己基）-1H-吡唑得到化合物6-[[6-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-1H-吲唑-1-基]甲基]喹啉WXY011,6-[[6-[1-（2-四氢-2H-吡喃-2-基氧乙基）-1H-吡唑-4-基]吲唑-1-基]甲基]喹啉WXY012,2-[4-[1-（喹啉-6-甲基）-1H吲唑-6-基]-1H-吡唑-1-基]乙醇WXY013,6-（（6-（1-（（1R,4R）-4-（叔丁二甲硅氧基）环己基）-1H-吡唑-4-基）-1H-吲唑-1-基）甲基）喹啉WXY014,（1R,4R）-[4-[4-[1-（喹啉-6-甲基）-1H-吲唑-6-基]-1H-吡唑-1-基]环己醇WXY015,6-[[6-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-2H-吲唑-2-基]甲基]喹啉WXY016,6-[[6-[1-（2-四氢-2H-吡喃-2-基氧乙基）-1H-吡唑-4-基]-2H-吲唑-2-基]甲基]喹啉WXY017,2-[4-[1-（喹啉-6-甲基）-1H-吲唑-6-基]-1H-吡唑-1-基]乙醇WXY018,6-（（6-（1-（（1R,4R）-4-（叔丁二甲硅氧基）环己基）-1H吡唑1-4-基）-2H-吲唑-2-基）甲基）喹啉WXY019,（1R,4R）-[4-[4-[2-（喹啉-6-甲基）-2H-吲唑-6-基]-1H-吡唑-1-基]环己醇WXY020。该类化合物以1位取代的4-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）吡唑为原料,与商业可提供的6-溴-1H-吲哚唑发生Suzuki耦合反应,然后再与6-氯甲基喹啉发生亲电取代反应得到吲哚唑环1位取代的化合物及其对应的互变异构体吲哚唑环2位取代的化合物。MS和H’-NMR确认化合物的结构,对化合物进行c-Met生化半抑制浓度（IC50）实验,实验结果显示,3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶和嘌呤（咪唑并嘧啶）系列化合物活性较差,吲哚唑系列中大部分化合物对c-Met激酶有较强的抑制作用,除化合物WXY016和WXY019的IC50值超过10μM外,其余都在0.9μM以下。2、保留先导化合物中的1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪或3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环、连接臂（亚甲基）、喹啉环三个部分不变,将课题组前期研究中的专利化合物2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类化合物中的2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚结构片段引入到该类化合物中替换吡嗪环或哒嗪环上的取代基,得到新型的含1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪或3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环的2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类化合物8-[3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪-5-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚-2-甲酸叔丁酯WXY021,8-[3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3三唑[4,5-b]吡嗪-5-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚WXY022,8-[3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪-5-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚-2-甲醛WXY023,8-[3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪-5-基]-2,3,4,5-四氢吡啶[4,3-b]吲哚-2-甲酰胺WXY024,8-[3-（6-喹啉基甲基）-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚-2-甲酸叔丁酯WXY025,8-[3-（6-喹啉基甲基）-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚WXY026,8-[3-（6-喹啉基甲基）-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基]-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚-2-甲醛WXY027,8-[3-（6-喹啉基甲基）-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基]-2,3,4,5-四氢吡啶[4,3-b]吲哚-2-甲酰胺WXY028。8-（4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基）-1,3,4,5-四氢吡啶并[4,3-b]吲哚-2-甲酸叔丁酯与6-[（5-溴三唑[4,5-d]嘧啶-3-基）甲基]喹啉和6-[（6-氯-[1,2,4]三唑[3,4-f]哒嗪-3-基）甲基]喹啉发生Suzuki耦合反应得到WXY021和WXY022,然后再与甲酸及1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐发生甲酰化反应得到WXY023和WXY027,化合物WXY021和WXY022也与三甲基硅基异氰酸酯发生氨甲酰化反应得到WXY024,WXY028,同时得到化合物WXY025,WXY026。MS和H1-NMR确认化合物的结构,对化合物进行c-Met生化半抑制浓度（IC50）实验,实验结果显示,该类化合物对c-Met激酶有很强的抑制作用,化合物WXY022和WXY023的IC50值分别达到了0.0145和0.0995gM,其它化合物大部分在1gM以下。3、保留先导化合物中的1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪或3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环以及其生物电子等排体3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤环、连接臂（亚甲基）、喹啉环三个部分不变,将课题组前期研究中的专利化合物螺环化合物中的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮结构片段引入到该类化合物中替换吡嗪环、哒嗪环、嘧啶环上的取代基,结合前期通过分子对接得到的结果,得到新型的含1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪、3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环、3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤环的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类化合物1’-甲基-5-[1-（6-喹啉基甲基）-1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪-6-基]螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY029、1’-甲基-6-[1-（6-喹啉基甲基）-1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪-6-基]螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY030、1’-甲基-5-（3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY031、1’-甲基-6-（3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪-6-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY032、1’-甲基-5-（3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-5-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY033、1’-甲基-6-（3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶-5-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY034、1’-甲基-5-（7-（喹啉-6-基甲基）-嘌呤-2-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY035、1’-甲基-6-（7-（喹啉-6-基甲基）-嘌呤-2-基）-螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮WXY036,该类化合物由5位和6位硼酸吡呐醇酯与溴取代的1-（6-喹啉基甲基）三唑[4,5-b]吡嗪、3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,4]三唑[4,3-b]哒嗪、3-（喹啉-6-基甲基）-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、7-（喹啉-6-基甲基）-嘌呤发生Suzuki耦合反应得到。MS和H1-NMR确认化合物的结构,对化合物进行c-Met生化半抑制浓度（ICso）实验,实验结果显示,该类化合物对c-Met激酶有很强的抑制作用,化合物WXY029、WXY030、WXY031、WXY032对c-Met的抑制作用较化合物WXY033、WXY034、WXY035、WXY036作用强,化合物WXY029、WXY030较化合物WXY031、WXY032化合物作用强,WXY030的IC50值达到了0.0145μM较化合物WXY029（IC50=0.227μM）强,WXY032（IC50=0.22μM）较化合物WXY021（IC50=0.28μM）强,这表明含1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪、3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物较含3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤环的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物有作用强,含有1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物较含有3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪的螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮化合物作用强,螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮的6位取代较5为取代作用强。4、对分子水平对c-Met酶有强抑制作用的吲哚唑、2,3,4,5-四氢-1H-吡啶[4,3-b]吲哚、螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类化合物进行MKN45细胞中c-Met半抑制浓度（IC50）实验,实验结果表明,大部分化合物对细胞中c-Met有较强的抑制作用,部分化合物的ICso值在10μM以下。5、对五大类合成的36个化合物进行了分子对接研究,分子对接结果显示,所有化合物与c-Met位点均采取“U”型结合模式,具备Ⅰ型c-Met抑制剂的典型特征,喹啉环上的氮与Met1160主链羰基形成氢键,喹啉环C-8与Pro1158羰基上的氧形成一个非经典的C-H-O=C氢键。这种作用与其他ATP-竞争性酶作用相似,稠合环（1H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡嗪环、3H-[1,2,3]三唑[4,3-b]哒嗪环、3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶、嘌呤、吲哚唑环）在Tyr1230和Met1211之间通过π-π堆积作用形成一个夹心结构,喹啉环和稠环之间的连接臂（亚甲基）刚好与Leu1157,Arg1086和Tyr1230或11109,Lys1110,A1a1226和Va11092组成的疏水口袋嵌合,该部分主要是影响稠合环的π-π堆积作用,在所有稠环中,以三唑吡嗪环效果最好,因为三唑哒嗪环作为一个缺电子母核在Tyr1230和Met1211之间通过π-π堆积作用形成一个夹心结构,三唑吡嗪环上的两个氮原子与Asp1222骨架上的NH形成两个氢键,因而与只能形成一个氢键的其它稠环相比其有较高的亲和力和较低的IC50值,而且与Asp1222间的氢键因其具有较低能量可以稳定该类化合物的构型。另外螺环上的哌啶环主要指向u型折叠构型的亲水表面,而该表面远离铰链区。因为在491个酪氨酸激酶中仅仅有c-Met,Axl和Mer三个激酶有两个氨基酸存在,来自Met1211和Tyr1230的疏水作用增加了该类化合物的选择性,螺环5位或六位取代的亲水稠环延伸到结合口袋,与WXY030相比,因螺环的张力存在使得WXY029不能与活性位点匹配,从而导致构型的改变以及增加N原子和Asn1167间的距离而不能形成氢键,因此WXY029的活性较WXY030低,同样的原因可以解释WXY031、WXY033、WXY035活性较WXY032、WXY034、 WXY036低。综上所述,本课题主要针对c-Met设计了118个信化合物,合成出了36个新化合物,未见文献报道,此外还合成了17个关键中间体。所有目标化合物合成中都用到了Suzuki耦合反应,该反应在在DMF/H2O的混合溶剂中、Pd （PPh3）4催化下进行获得较高的收率,得到的的目标化合物以吲哚唑类、2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类、螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类化合物有较好的抗肿瘤活性,WXY030、WXY022和WXY023对c-Met生化半抑制浓度（ICso）达到了10nM,显示强的抗肿瘤活性,对分子水平抑制作用强的化合物进行细胞研究显示部分化合物对MKN45细胞中c-Met的抑制作用达到了10μM。分子对接研究证实和解释了这些化合物的活性。为开发具有临床应用价值的c-Met酪氨酸激酶抑制剂奠定基础。
黄英[7]（2001）在《17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布》文中指出
二、17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布（论文提纲范文）
（1）基于PROTAC原理合成的新型PARP1降解剂NN3对乳腺癌细胞的作用及其机制（论文提纲范文）
| 附录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 基于PROTAC技术合成的新型PARP1 降解剂的功能探究和验证 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株及培养条件 |
| 1.2 药物及试剂 |
| 1.2.1 细胞培养主要试剂 |
| 1.2.2 Western Blot实验主要试剂 |
| 1.2.3 MTT实验主要试剂 |
| 1.2.4 竞争结合、凋亡抑制实验主要试剂 |
| 1.2.5 集落形成实验主要试剂 |
| 1.2.6 流式检测细胞凋亡实验主要试剂 |
| 1.2.7 细胞损伤实验主要试剂 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞总蛋白提取定量 |
| 2.2 蛋白免疫印迹(Western Bloting) |
| 2.3 MTT法检测药物对细胞的增殖抑制作用 |
| 2.4 集落形成实验 |
| 2.5 Annexin-V-APC和7-AAD双染检测细胞凋亡 |
| 2.6 流式细胞仪检测细胞DNA损伤 |
| 2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 基于PROTAC原理,以Nutlin-3 为配体的新型PARP1 降解剂的筛选 |
| 3.2 新型PARP1 降解剂NN3 对乳腺癌细胞PARP1 蛋白的降解作用 |
| 3.3 验证新型PARP1 降解剂NN3 是基于PROTAC原理降解PARP1 蛋白 |
| 3.4 新型PARP1 降解剂NN3 对乳腺癌细胞的杀伤作用 |
| 3.5 降解剂NN3 可以抑制乳腺癌细胞的DNA修复 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 HSP90 C端抑制剂Novobiocin可以抑制乳腺癌细胞DNA的修复 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株及培养条件 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.2.1 细胞培养主要试剂 |
| 1.2.2 体外实验药物 |
| 1.2.3 细胞损伤实验主要试剂 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 蛋白免疫印迹(Western Blotting) |
| 2.2 流式细胞仪检测细胞DNA损伤 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Novobiocin可以降低HR修复通路蛋白BRCA1 的表达 |
| 3.2 Novobiocin可以增加乳腺癌细胞DNA损伤并抑制其修复 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 降解剂NN3与Novobiocin联合阻断乳腺癌细胞 DNA修复,并杀伤乳腺癌细胞 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株及培养条件 |
| 1.2 药物与主要试剂 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 MTT法评估两药联用对细胞的增殖抑制的协同作用 |
| 2.2 Annexin-V-FITC和 PI双染检测细胞凋亡 |
| 2.3 流式细胞仪检测细胞DNA损伤 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 NN3与Novobiocin联用协同抑制乳腺癌细胞的增殖 |
| 3.2 NN3和Novobiocin联用加强诱导乳腺癌细胞的凋亡 |
| 3.3 NN3和Novobiocin联用可以协同阻断乳腺癌细胞的DNA修复 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四部分 新型PARP1 降解剂NN3 在动物体内的药代动力学特征及抗肿瘤活性 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株及培养条件 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 药物与主要试剂 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 NN3 的体内药代动力学实验 |
| 2.2 乳腺癌4T1 细胞同种移植瘤实验 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 NN3 在动物体内有良好的药代动力学特征 |
| 3.2 NN3 在小鼠体内的抗肿瘤活性 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)在肿瘤治疗方面的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）联合抑制FLT3与Notch在FLT3-ITD突变的急性髓系白血病中作用及初步机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第一部分 研究FLT3 抑制剂对Notch通路的影响 |
| 第二部分 联合应用FLT3 抑制剂与Notch抑制剂对AML细胞的作用 |
| 第三部分 小鼠体内联合应用FLT3 抑制剂与Notch抑制剂的作用 |
| 第四部分 FLT3 抑制剂与Notch抑制剂协同作用的机制探索 |
| 第五部分 FLT3-ITD+AML细胞系中验证CXCR3 的作用 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 急性髓性白血病对FLT3抑制剂的耐药性:分子机制和克服耐药策略 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 :攻读学位期间参与发表的文章 |
| 附录2 :中英文缩略词 |
| 致谢 |
（3）Hsp90诱导表达对热应激损伤鸡心肌细胞的保护作用及其机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 部分缩写的中英文对照 |
| 引言 |
| 第一章 热应激与热休克蛋白 |
| 1 热应激 |
| 1.1 应激概述 |
| 1.2 应激的生理调控 |
| 1.3 环境应激 |
| 1.4 热应激对细胞的损伤 |
| 1.5 热应激对机体的影响 |
| 2 热休克蛋白及其调控 |
| 2.1 热休克蛋白的概念 |
| 2.2 热休克蛋白的分类及特性 |
| 2.3 热休克蛋白的调控 |
| 2.4 热休克蛋白的作用 |
| 3 Hsp90的研究进展 |
| 3.1 Hsp90的基因与蛋白质结构 |
| 3.2 Hsp90的生物活性和靶蛋白 |
| 3.3 Hsp90与其靶蛋白的作用机制 |
| 3.4 Hsp90相关的主要信号转导通路 |
| 3.5 Hsp90与疾病治疗 |
| 4 阿司匹林与格尔德霉素的研究进展 |
| 4.1 阿司匹林的研究进展 |
| 4.2 格尔德霉素的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 阿司匹林对体内、体外热应激损伤鸡心肌细胞的药物保护作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 试验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 阿司匹林对热应激状态下受试鸡临床表现的影响 |
| 2.2 阿司匹林对热应激处理受试鸡血清心肌细胞损伤相关酶水平的影响 |
| 2.3 阿司匹林对热应激鸡心肌细胞的病理组织学变化的影响 |
| 2.4 阿司匹林对热应激离体培养鸡原代心肌细胞损伤程度的影响 |
| 2.5 阿司匹林对热应激鸡原代心肌细胞病理损伤的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞中Hsp90表达与定位的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞中HSFs表达量的影响 |
| 2.2 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内hsp90 mRNA转录水平的影响 |
| 2.3 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内Hsp90表达水平的影响 |
| 2.4 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞中Hsp90定位与分布的影响 |
| 2.5 阿司匹林对热应激处理鸡心脏血管内皮细胞中Hsp90定位与分布的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 阿司匹林诱导Hsp90表达对热应激处理鸡心肌细胞抗凋亡作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内hsp90 mRNA转录水平的影响 |
| 2.2 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内Hsp90表达的影响 |
| 2.3 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内Akt表达及其激活的影响 |
| 2.4 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞内caspase-3,8,9活性水平的影响 |
| 2.5 阿司匹林对热应激处理鸡心肌细胞凋亡率的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 阿司匹林对热应激处理体外培养鸡原代心肌细胞Hsp90表达与定位的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 阿司匹林对体外培养鸡原代心肌细胞Hsp90表达水平的诱导作用 |
| 2.2 阿司匹林对热应激处理体外培养鸡心肌细胞hsp90 mRNA转录的影响 |
| 2.3 阿司匹林对热应激处理体外培养鸡心肌细胞Hsp90表达的影响 |
| 2.4 阿司匹林对热应激处理体外培养鸡心肌细胞Hsp90定位与分布的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 Hsp90表达对体外培养鸡原代心肌细胞的抗热应激保护作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 热应激对鸡原代心肌细胞活性的影响 |
| 2.2 格尔德霉素对鸡原代心肌细胞Hsp90表达抑制作用的研究 |
| 2.3 阿司匹林和格尔德霉素对热应激处理鸡原代心肌细胞Hsp90表达的影响 |
| 2.4 Hsp90诱导表达对热应激状态下鸡原代心肌细胞活性、凋亡率及氧化应激水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第七章 Hsp90诱导表达对热应激体外培养鸡原代心肌细胞抗凋亡机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Hsp90诱导表达对热应激处理鸡原代心肌细胞凋亡相关酶caspase-3,8,9活性的影响 |
| 2.2 Hsp90表达对热应激处理鸡原代心肌细胞Akt和STAT-3表达的影响 |
| 2.3 Hsp90表达对热应激处理鸡原代心肌细胞Akt、STAT-3与Hsp90共定位的影响 |
| 2.4 Hsp90表达对热应激状态下鸡原代心肌细胞p-IKKα/β表达水平的影响 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 主要试剂配制 |
| 硕博连读期间发表文章 |
| 致谢 |
（4）热休克蛋白抑制剂17-DMAG在体外对人肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验仪器 |
| 1.1.2 主要药品与试剂 |
| 1.1.3 自配试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 人肝星状细胞株培养 |
| 1.2.2 细胞生长曲线测定 |
| 1.2.3 细胞毒试验(MTT法)检测17-DMAG对LX2细胞的作用 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 1.2.5 Western blot检测α-SMA表达 |
| 1.3 统计分析 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 人肝星状细胞在显微镜下观察的结果 |
| 2.2 细胞生长曲线测定 |
| 2.3 17DMAG对肝星状细胞生长的影响 |
| 2.4 流式细胞仪凋亡检测的结果 |
| 2.5 Western blot检测α-SMA表达 |
| 第三章 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（5）新型HSP90抑制剂抗胃癌作用及机制研究高通量筛选eIF4E抑制剂及其抗肿瘤作用研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词(Abbreviations) |
| 第一部分 新型HSP90抑制剂抗胃癌作用及机制研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 1. 荧光偏振竞争结合实验(FPA)对间苯二酚衍生物Hsp90结合活性的筛选 |
| 2. LD053能解离Hsp90-cdc37复合物并促进Akt和c-Raf的蛋白酶体降解 |
| 3. LD053抑制c-Raf和Akt介导的原癌信号通路 |
| 4. LD053对BGC823细胞凋亡及周期分布的影响 |
| 5. 间苯二酚衍生物LD053的体外抗肿瘤活性研究 |
| 6. LD053的体内抗肿瘤活性研究 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 髙通量筛选eIF4E抑制剂及其抗肿瘤作用研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 1. 通过检测荧光素酶报告体活性高通量筛选eIF4E抑制剂 |
| 2. 48F10在A549细胞中对eIF4E的抑制作用 |
| 3. 48F10在乳腺癌细胞中对eIF4E的抑制作用 |
| 4. 48F10通过eIF4E启动子的特定区域执行转录抑制作用 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 已发表文章及专利 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）基于c-Met靶点的抗肿瘤药物的设计与合成研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 第二章 化合物设计 |
| 第一节 基于c-Met靶点的3-(喹啉-6-基甲基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶类新化合物的设计 |
| 第二节 基于c-Met靶点的7-(喹啉-6-基甲基)嘌呤类新化合物的设计 |
| 第三节 基于c-Met靶点的1(2)-(喹啉-6-基甲基)吲哚唑类新化合物的设计 |
| 第四节 基于c-Met靶点2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类新化合物的设计 |
| 第五节 基于c-Met靶点的螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮类新化合物的设计 |
| 第六节 小结 |
| 第三章 化合物的合成研究 |
| 第一节 基于c-Met靶点的3-(喹啉-6-基甲基)-3H-[1,2,3]三唑[4,5-d]嘧啶类新化合物的合成 |
| 第二节 基于c-Met靶点的7-(喹啉-6-基-甲基)嘌呤类新化合物的合成 |
| 第三节 基于c-Met靶点的1(2)-(喹啉-6-基甲基)吲哚唑类新化合物的合成 |
| 第四节 基于c-Met靶点2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类新化合物的合成 |
| 第五节 基于c-Met靶点的螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮类新化合物的合成 |
| 第六节 实验部分 |
| 第七节 小结 |
| 第四章 生物活性评价 |
| 第一节 生化水平的酶抑制活性筛选 |
| 第二节 细胞水平的酶抑制活性筛选 |
| 第三节 小结 |
| 第五章 分子对接研究及初步构效关系分析 |
| 第一节 分子对接研究 |
| 第二节 初步构效关系分析 |
| 第三节 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 附图 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
| 统计学审稿证明 |
四、17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布（论文参考文献）
- [1]基于PROTAC原理合成的新型PARP1降解剂NN3对乳腺癌细胞的作用及其机制[D]. 余泽磊. 福建医科大学, 2021(02)
- [2]联合抑制FLT3与Notch在FLT3-ITD突变的急性髓系白血病中作用及初步机制研究[D]. 李丹. 华中科技大学, 2020(01)
- [3]Hsp90诱导表达对热应激损伤鸡心肌细胞的保护作用及其机理的研究[D]. 张晓辉. 南京农业大学, 2016(12)
- [4]热休克蛋白抑制剂17-DMAG在体外对人肝星状细胞生长增殖及细胞凋亡的作用研究[D]. 庄敏. 青岛大学, 2014(05)
- [5]新型HSP90抑制剂抗胃癌作用及机制研究高通量筛选eIF4E抑制剂及其抗肿瘤作用研究[D]. 吕春婉. 北京协和医学院, 2013(11)
- [6]基于c-Met靶点的抗肿瘤药物的设计与合成研究[D]. 叶连宝. 南方医科大学, 2013(04)
- [7]17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素在CD2F1小鼠中的血浆药代动力学及组织分布[J]. 黄英. 国外医学.药学分册, 2001(06)