一、康复治疗脊髓损伤功能恢复的疗效观察（论文文献综述）
张彬[1]（2021）在《加味龙芪强肌饮对脊髓型颈椎病术后残余神经症状改善的疗效观察》文中研究说明
朱世婷[2]（2021）在《基于数据挖掘技术针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍临床疗效评价研究》文中认为目的:采用数据挖掘方法和技术探究针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍的辩证循经取穴规律,确定治疗方案,设计并实施临床随机对照试验,以评价针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍的临床疗效。方法:第一部分采用手工及计算机的方式检索针剌治疗不完全性脊髓损伤功能障碍的现代文献,收集近20年国内外针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍（包括下肢运动障碍、下肢感觉障碍、排尿障碍、排便障碍）的随机对照试验文献,通过Noteexpress软件,将筛选出的腧穴、部位、经脉等内容录入到MicrosoftOfficeExcel工作表中,以此来建立起数据库。使用Excle2010软件对针灸处方中的腧穴、腧穴归经、腧穴定位的统计结果进行描述性分析;使用SPSS18.0统计分析软件,对筛选的文献中的针灸处方选穴进行关联规则分析,计算穴位集合的支持度、置信度;使用SPSS22.0统计分析软件,选择聚类方法中的组间连接法,对纳入文献的穴位进行聚类分析。最后进行归纳、总结,得出针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍的选穴规律。第二部分以第一部分数据挖掘结果为基础,确定临床试验的治疗方案并且进行临床疗效评价。试验共纳入符合标准的40例受试者,治疗组20例、对照组20例,分别采用针刺治疗和康复治疗进行疗效观察,1次/日,30min/次,每周6次,连续治疗8周,并于治疗前、治疗后4w、8w进行3次评价。下肢运动功能障碍以Asia运动功能评定、运动诱发电位（潜伏期、波幅）进行疗效评价,下肢感觉功能障碍以Asia感觉功能评定、体感诱发电位（潜伏期、波幅）进行疗效评价,排尿功能障碍以排尿日记（排尿次数、日平均排尿量、日最大排尿量）、尿动力学（最大膀胱总量、残余尿量、膀胱排尿压力、逼尿肌压力）进行疗效评价,排便功能障碍以慢性便秘严重程度、便秘患者自评量表进行疗效评价,日常生活能力以脊髓损伤独立性量表、改良Barthel指数进行疗效评价,验证针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍的临床疗效。结果:本项研究共纳入164条针灸处方,总运用频次1930次,使用频次最高的腧穴和经络分别是:足三里（116次,占总运用频次6.01%）、足阳明胃经（387次,占总运用频次20.05%）,其中夹脊穴是唯一一个这四部分共同使用过的腧穴,且引用的频次均居于前五位（110次,占总运用频次5.70%）,故针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍主穴为夹脊穴,各部分的配穴具体内容如下:1、下肢运动功能障碍共纳入58条有效针灸处方,腧穴共84个,使用频次806次,使用频率最高的腧穴和经络分别是:足三里（50次,占总运用频次6.20%）、足阳明胃经（191次,占总运用频次23.70%）;根据两穴、三穴关联规则分析显示支持度最高的分别是;足三里-三阴交、足三里-三阴交-夹脊穴;将使用频次≥20次的19个腧穴进行聚类分析,形成2个有效聚类群:夹脊穴-髀关-足三里-三阴交、足三里-三阴交-血海-髀关。最终确定治疗方案为:足三里、三阴交、髀关、血海。2、下肢感觉功能障碍共纳入39条有效针灸处方,腧穴共52个,总使用频次432次,使用频率最高的腧穴和经络分别是:足三里（26次,占总运用频次6.02%）、足阳明胃经（88次,占总运用频次20.37%）;根据两穴、三穴关联规则分析显示支持度最高的分别是:百会-大椎、百会-大椎-夹脊穴;将使用频次≥10次的19个腧穴进行聚类分析,形成2个有效聚类群:百会-大椎-足三里-夹脊穴、足三里-三阴交-阳陵泉-风市。最终确定治疗方案是:百会、大椎、阳陵泉、风市。3、排尿功能障碍共纳入50条有效针灸处方,腧穴共69个,总使用频次490次,使用频率最高的腧穴和经络分别是:关元（34次,占总运用频次6.94%）、足太阳膀胱经（126次,占总运用频次25.71%）;根据两穴、三穴关联规则分析显示支持度最高的分别是:关元-中极、关元-中极-夹脊穴;将使用频次≥20次的18个腧穴进行聚类分析,形成3个有效聚类群:关元-中极-水分-水道、夹脊穴-关元-水道-水分、夹脊穴-膀胱俞-水道-水泉。最终确定治疗方案是:关元、中极、水分、水道。4、排便功能障碍共纳入17条有效针灸处方,腧穴共37个,总使用频次202次,使用频率最高的腧穴和经络分别是:肾俞（14次,占总运用频次6.93%）、任脉（46次,占总运用频次22.77%）;根据两穴、三穴关联规则分析显示支持度最高的分别是:天枢-中脘、天枢-中脘-夹脊穴;将使用频次≥10次的15个腧穴进行聚类分析,形成2个有效聚类群:夹脊穴-天枢-中脘-关元、肾俞-大肠俞-会阳-支沟。最终确定治疗方案是:天枢、中脘。根据治疗方案进行临床试验,两组患者连续治疗8周后,治疗组总有效率为85.0%,对照组总有效率为65.0%。治疗前两组患者在性别、年龄、发病时间、严重程度、损伤部位,无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。两组患者治疗4w、8w后与治疗前比较,在Asia神经功能评定（运动、感觉）,排尿日记（排尿次数、日平均排尿量、日最大排尿量）、慢性便秘严重程度、便秘患者自评量表、脊髓损伤独立性量表、改良Barthel指数、尿动力学（最大膀胱总量、残余尿量、膀胱排尿压力、逼尿肌压力）、运动诱发电位（潜伏期、波幅）、体感诱发电位（潜伏期、波幅）方面,统计学差异明显（P<0.05）,说明两种治疗方法均有效,治疗组优于对照组。按照不同发病时间比较,两组患者发病在6个月之内疗效确切,具有统计学差异（P<0.05）,其中以发病在1个月以内治疗效果最佳。发病7-12个月疗效不显着,统计学差异不明显（P>0.05）。结论:1、通过数据挖掘技术分析,针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍有明显循经取穴规律,以足阳明胃经、足太阳膀胱经、任脉居多。2、根据数据挖掘结果确定最终治疗方案:主穴为夹脊穴,下肢运动功能障碍加足三里、三阴交、髀关、血海;下肢感觉功能障碍加百会、大椎、阳陵泉、风市;排尿障碍加关元、中极、水分、水道;排便障碍加天枢、中脘。3、根据最终治疗方案进行临床试验,针刺治疗8w后,在Asia神经功能评定（运动、感觉）、排尿日记（排尿次数、日平均排尿量、日最大排尿量）、慢性便秘严重程度、便秘患者自评量表、脊髓损伤独立性评定、改良Barthel指数、尿动力学（最大膀胱总量、残余尿量、膀胱排尿压力、逼尿肌压力）、运动诱发电位（潜伏期、波幅）、体感诱发电位（潜伏期、波幅）均有明显改善,证实针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍安全有效。
王苑璇[3]（2021）在《刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难病例分析及经验总结》文中研究说明背景神经源性排尿困难是人体排尿机制的神经受损造成下尿路功能障碍,临床表现以排尿困难甚则尿潴留或伴有急迫性尿失禁为主的一类疾病,属于神经源性膀胱中的一类。中医属于“癃闭”的范畴。由于现代医学没有特效的治疗方法,目前首要治疗目标是保护肾功能,防治长期排尿困难引发的上尿路受损、合并肾积水、尿毒症等并发症。临床中普遍选择“导尿法”保护患者肾功能,但是导尿并不能促进患者膀胱功能恢复;长期导尿不仅严重影响患者生活质量和自尊,反复下尿路感染是不可避免的。新疗法如骶神经电刺激,疗效优于较保守治疗,但是毕竟属于外科手术,有创性和不良反应不可避免,高昂的价格也是多数患者难以接受的。中医治疗癃闭历史久远,用于治疗神经源性排尿困难方法多种多样,无论内服、外用、针灸、或其他外治法,在各项研究中均有明确疗效,其中以电针疗法疗效显着且应用较广。研究目的通过临床病例观察,探索电针治疗下运动神经源性排尿困难的疗效,并在此基础上分析、总结刘志顺主任医师电针治疗下运动神经源性排尿困难的诊疗思路和经验。研究方法观察并记录广安门医院针灸科刘志顺主任于2018年12月-2020年12月期间,门诊就诊的下运动神经源性排尿困难患者64例。记录患者的基本信息,就诊4周、8周、12周的诊疗情况,包含症状、体征、自主排尿情况、残余尿量、排尿困难程度的评价以及患者主观疗效评价等作为观察指标。其中,患者恢复完全自主排尿,且残余尿量<100ml,并且无反复下尿路感染,作为电针治疗有效的判定标准,即本实验的主要临床有效率,并将采集到的数据进行疗效分析。同时记录导师针灸诊疗处方、取穴特点、临证配穴、施针手法及电针参数等信息,总结导师电针治疗下运动神经源性排尿困难的疗效、临床诊疗思路和经验。研究结果1.临床疗效64例患者均完成4周治疗,52例患者完成8周治疗,37例患者完成12周治疗。基线时,患者均存在不同程度的排尿困难、无法自主排尿。治疗4周时,18例患者恢复自主排尿（28.1%）、排尿不能由12例减少至5例（7.8%）、患者主观评价好转有46例（71.9%）。治疗8周时,恢复自主排尿患者有21例（38.4%）,排尿有点困难从基线1例增至21例（40.4%）,平均排尿后残余尿量减少约100ml,患者主观评价有效占8成以上。第12周治疗结束时,有28例/64例完全恢复自主排尿,占43.7%,排尿后残余尿量较基线平均减少200ml,仅1例患者表示排尿不能,排尿无困难和有点困难患者占约60%,患者主观评价有效占约90%。在12周诊疗观察期间,无一例患者出现严重针刺不良事件,针刺局部皮下淤血发生率约6.2%。综合上述结果说明电针治疗下运动神经源性排尿困难可能疗效较好且安全。2.导师诊疗经验导师认为下运动神经源性排尿困难针灸诊疗应中西结合辨病、辨证综合诊断,即“病—症—位”结合辨治思路,包含西医诊断、中医辨主症和辨病位、辨证归经、局部取穴与循经取穴等综合辨治思路。依据“病-症-位”辨证,制定针灸处方,指导临证选穴治疗。治疗时,刘志顺主任强调穴位深刺,并接电针治疗,以强化经气传导,促进气至病所;中髎、次髎深刺也能刺激穴位深处的骶神经前支,产生与骶神经刺激时相似反应,接电针治疗30分钟以上更有助于恢复神经传导通路,减轻患者排尿困难。3.导师诊疗方案根据病-症-位综合辨证,导师选取膀胱经之中髎、次髎、膀胱经和督脉交会之会阳穴、肾经背俞穴肾俞作为主穴,三阴交远端配穴,进行针刺治疗,局部不适疼痛加取阿是穴。治疗时多选芒针进行深刺,次髎与中髎在第2和第3骶后孔外上约1cm处进针,斜向内下约70度角刺向第二、第三骶后孔,进针深度约70～95mm,至针尖出现突破感停止。会阳穴斜向外上方向刺入60～70mm,患者自觉局部酸胀为度。肾俞穴、三阴交穴直刺入25～30mm,患者自觉局部酸胀为度。主穴针刺后接电针,强度3-6.5mA,刺激量达患者大腿双侧内旋,双足跖曲或以患者耐受为度。双侧三阴交接一组电极,强度1-2mA,以患者耐受为度。电针频率为10Hz,连续波,留针30分钟。治疗频次一般在3次/周,共治疗12周。结论1研究结果显示电针疗法可促进患者恢复自主排尿功能,治疗4周约30%患者见效,治疗12周疗效显着,40%以上患者恢复完全自主排尿、患者膀胱残余尿量减少二分之一、90%患者主观评价电针治疗有效。电针疗效随治疗时增长而显着,且对于病程1年以上患者仍有效。其中以盆腔疾患术后、马尾神经损伤及糖尿病周围神经损伤患者疗效较明显。说明电针治疗可促进患者恢复自主排尿功能,有效减少膀胱残余尿量及减轻排尿困难程度;且治疗过程无严重针刺不良事件发生,患者不良反应少,疗效满意度高,电针治疗有效且安全。2刘志顺主任临床治疗下运动神经源性排尿困难患者多年,以恢复膀胱自主排尿功能为目的,治疗以“病-症-位”结合辨证准则,归经肾与膀胱;取穴以中髎、次髎、会阳、肾俞和三阴交为主,随症加减;中髎、次髎和会阳采用芒针深刺,并接电针治疗;疗程应达3个月。
吴子健[4]（2021）在《通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究》文中研究说明目的 本次研究结合急性脊髓损伤（acute spinal cord injury,ASCI）的研究现状和热点,基于导师的临床经验,以通过抑制水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达从而减轻ASCI后脊髓水肿为切入点,旨在探讨通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减治疗ASCI的可能作用机制,以期为推广通腑逐瘀法治疗ASCI提供理论依据。方法 第一部分:10周龄SD大鼠30只,按随机数字表法随机分为假手术组（A组）、自制打击器2cm组（B1组）、自制打击器4cm组（B2组）、NYU组1.25cm组（C1组）、NYU组2.5cm组（C2组）,每组各6只。除Sham组外,其余各组采用改良Allen’s法造模。B1、B2组将9g打击杆分别从2cm、4cm处自由坠落撞击T10脊髓,C1、C2组使用NYU打击器分别从1.25cm、2.5cm处撞击T10脊髓。各组造模完成后分别于1、3、5、7d进行BBB评分和Reuter评分,7d后行灌注取材,石蜡包埋切片,尼氏染色,观察各组组织受损程度和神经元存活率。第二部分:10周龄SD大鼠60只按随机分配方法随机分为假手术组（Sham）、模型组（Model）、抵当汤组（DDD）、TGN-020组（TGN-020）和抵当汤联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,每组各12只。Sham组仅打开椎板暴露脊髓但不损伤脊髓;其余各组均采用自制脊髓打击器从40mm高度对脊髓进行打击。Sham组和Model组术后不予任何治疗措施干预,DDD组于术后3d予以抵当汤加减每日灌胃,持续3d,根据大鼠与人用药剂量体表面积换算法,DDD组大鼠每日用药剂量为5.04g/kg,采用蒸馏水进行稀释一定比例配制后予以灌胃处理,每日早晚各1次。TGN-020组处理方法:腹腔注射给药,每日用药剂量为5mg/kg,给药时间为3d。DDD+TGN-020组处理方法:予TGN-020腹腔注射给药,随后给予DDD灌胃处理。干预结束后进行行为学评价（BBB评分、斜板实验及Reuter评分）观察大鼠神经功能恢复情况,取材后进行脊髓组织大体观察和含水率检测、HE染色观察组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,免疫荧光检测各组脊髓组织AQP4、GFAP共表达的阳性细胞个数,Western Blot法检测各组脊髓组织中AQP4、GFAP、CSPG、PCNA、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,q PCR法检测各组脊髓组织中CSPG、PCNA基因的表达量,电镜下观察各组髓鞘和神经元组织形态,高尔基染色观察树突和树突棘形态。第三部分:8周龄SD大鼠40只随机分为空白血清组和含药血清组,含药血清组给予5.04g/kg DDD灌胃,持续3d,空白血清组予等剂量超纯水灌胃,持续3d,干预结束后提取血清备用。每次取胚胎大鼠8-12只,通过机械-酶消化法提取星形胶质细胞（Astrocytes,AS）,细胞采用10%的高糖培养基培养,观察细胞传代至第3代进行后续实验。首先,免疫荧光鉴定细胞中GFAP含量,随后进行实验分组:空白组（Control group,CG）、模型组（Model group,MG）、空白血清组（Blank serum group,BSG）、DDD含药血清组（DDD）、TGN-020干预组（TGN-020）、DDD联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,除MG外,其余各组均以划痕法进行造模,造模完成后DDD予以含药血清干预,BSG予以等剂量空白血清干预,TGN-020予以100nm TGN-020干预,DDD+TGN-020先予TGN-020干预后再予DDD干预。MTT法检测DDD含药血清干预AS的安全干预浓度、最佳干预时间和干预浓度,MTT法检测各组对RAS活性的影响,免疫荧光染色法检测RAS中AQP4和GFAP共表达的细胞数,Western Blot法检测各组RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,镜下观察DDD含药血清对RAS迁移率的影响。统计学方法:实验所得数据均使用SPSS21.0软件进行统计学处理,计量资料以均值±标准误（`X±S）表示,所得数据均经过正态性分布检测,若符合正态分布,则采用单因素方差分析,方差齐则采用LSD法,方差不齐则采用Games-Howell法;若不符合正态分布,则采用非参检验。以P<0.05提示差异具有统计学意义。结果 第一部分:自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究1.各组脊髓外观形态比较A组T10节段处硬脊膜完整,脊髓组织呈均匀乳白色,形态饱满圆润;B1、B2、C1、C2组T10节段处硬脊膜均完整,颜色呈不同程度的鲜红色或暗红色,损伤处可见水肿、瘀血及瘢痕组织增生,相对于B1、C1组,B2、C2组水肿更严重、瘀血范围更广、颜色更深、瘢痕组织更多。2.行为学评分比较BBB评分结果显示,A组术后除因手术致运动量减少外,未出现双下肢功能异常的表现,评分为21分;其余各组均出现不同程度的运动功能障碍,具体表现为:B2与B1、C2与C1相比,BBB评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）;B1与C1、B2与C2相比,BBB评分无显着差异（P>0.05）。Reuter评分结果显示,A组术后未发现感觉功能异常现象;其余各组术后均出现不同程度的感觉功能异常现象,具体表现为B2、C2组术后1d牵张反射消失,肌力、肌张力减弱或消失,疼痛回缩反射迟钝,背部感觉存在或消失;B1、C1组术后1d除肌力消失外,牵张反射、肌张力、疼痛回缩反射、背部感觉均存在,术后3d肌力开始恢复。B2与B1、C2与C1相比,Reuter评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）。B1与C1、B2与C2相比,Reuter评分无显着差异（P>0.05）。3.尼氏染色尼氏染色结果显示,A组脊髓组织结构完整,灰白质边界清晰,神经元细胞形态规则、胞核大、核仁清晰可见、数量多,胞质内可见斑块样尼氏体。相比A组,其余各组结构破坏更严重,灰白质结构不清,组织空白间隙更大,损伤处可见细胞呈空泡样改变或细胞皱缩、体积减小,神经元数量减少,尼氏体模糊或消失。4.脊髓受损面积比结果表明,A组未见受损区域,比值为0,其余各组均高于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2损伤面积比值明显升高,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2损伤面积比值差异不具有统计意义（P>0.05）。5.各组脊髓前、后角神经元损伤程度比较通过分析前、后角神经元阳性细胞数结果显示,A组神经元数目多,尼氏体含量多,其余各组均少于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2神经元阳性细胞数明显减少,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2神经元阳性细胞数差异不具有统计意义（P>0.05）。第二部分:抵当汤加减调节AQP4表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究1.各组脊髓组织的大体观察从大体观察上来看,Sham组脊髓组织颜色鲜白,组织完整,未见瘀血部位和水肿;Model组在打击损伤部位可见明显的瘀血区域,瘀血颜色深红,瘀血范围较大,并可见明显脊髓水肿;DDD组在打击损伤部位可见较小的瘀血区域,瘀血部位颜色淡红,可见轻度水肿;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组大体观察相似,肉眼见无显着差异。2.各组脊髓组织含水率与Sham组相比,其余各组脊髓组织含水率均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓组织含水率均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较,脊髓组织含水率没有显着差异（P>0.05）。3.行为学观察结果各组大鼠BBB评分、斜板实验结果以及Reuter评分显示,与Sham组相比,其余各组BBB评分和斜板实验得分均显着降低（P<0.05）,Reuter评分均显着升高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组BBB评分均显着升高（P<0.05）,Reuter评分均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。4.HE染色Sham组组织结构完整,神经元等细胞形态结构良好,未见瘢痕组织或空洞形成,未见瘀血区域或炎性物质渗出。Model组损伤部位可见组织结构离乱,大量瘢痕组织和脊髓空洞的形成,可见明显的瘀血区域,并伴有大量的炎性细胞浸润,神经元等细胞皱缩,数量减少。其余三组可见组织形态结构较完整,可见少量脊髓空洞的形成,瘀血区域范围较小,炎性细胞清润较少,神经元等细胞形态结构较完整。使用Image J软件对各组空洞面积进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组脊髓空洞面积显着增加（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓空洞面积显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓空洞面积组间比较不具有显着差异（P>0.05）。5.尼氏染色观察各组神经元形态Sham组脊髓形态结构完整,灰质呈蝴蝶状,灰白质界限清晰,可见较多的神经元分布,神经元胞质内可见染色清晰的斑块状尼氏体,神经元胞体饱满,细胞核大,核仁明显。Model组脊髓组织破坏严重,结构不完整,灰、白质界限不清,可见大量的炎性细胞浸润,神经元皱缩、液化、坏死,形成较多的空泡,尼氏体较小或消失。相对Model组,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓结构较完整,隐约可见灰白质界限,神经元仍可见,数量较多,空泡样改变减少,尼氏体数量较多、较饱满。但相对于Sham组,神经元仍存在固缩,胞浆减少,核变小,尼氏体减少等病理改变。6.免疫荧光检测各组AQP4、GFAP的阳性细胞表达量AQP4阳性细胞表达呈绿色,GFAP阳性细胞表达呈红色,DAPI染色呈深蓝色,AQP4+/GFAP+细胞表达呈黄色树枝状,各组染色背景干净,表达清晰,细胞核数量无显着差异（P>0.05）,具有可比性。Sham组少见或未见明显的AQP4+/GFAP+细胞,Model组可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,且细胞亮度高,胞体肿胀程度严重。与模型组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组细胞数量较少,亮度较低,细胞肿胀程度减轻。对各组的AQP4+/GFAP+细胞进行计数和统计,与Sham组相比,其余各组AQP4与GFAP的阳性细胞占比均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4与GFAP的阳性细胞占比显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组间相比较,AQP4与GFAP的阳性细胞占比无显着差异（P>0.05）。7.Western Blot法检测各组AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43的蛋白表达量各组蛋白条带背景清晰,无杂带现象,蛋白表达量趋势明显,具有可比性。与Sham组相比,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.各组脊髓组织中PCNA和CSPG基因表达量各组基因检测的扩增曲线变化平稳,溶解曲线为平滑的单峰形态,说明引物设计好,模板未见污染,实验结果具有可比性。各组目的基因相对表达量结果显示,与Sham组相比,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量差异不具有统计学意义（P>0.05）。9.透射电子显微镜观察髓鞘和神经元组织形态Sham组脊髓组织在透射电镜下可见髓鞘外形规则,厚薄均一,形似同心圆状,结构完整,未见破裂、缺失等改变,板层结构均匀致密,胞内线粒体丰富,胞浆饱满,清晰可见。Model组髓鞘结构不规则,部分髓鞘断裂缺失,厚薄不一,局部可见褶皱卷曲,板层结构松散、融合,线粒体肿胀,甚至部分溶解消失;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见髓鞘结构较完整,形态部分不规则但较Model组改善,部分髓鞘可见卷曲、厚薄不一,板层结构较均匀,虽有部分缺失,但松散程度相对Model组较轻,仍可见清晰的线粒体,但数量较Sham组少,胞体较小。10.电镜观察树突和树突棘形态各组脊髓经高尔基染色后结果显示:Sham组脊髓树突结构完整、形态规则、长度较长,树突上密布树突棘,树突棘分布整齐、均匀致密、数量较多;Model组脊髓树突形态不规则,部分断裂缺失,长度较短,较为纤细,树突棘数量少,稀疏分布,排列紊乱;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓树突形态有所改善、树突较长、结构较完整、周经较粗,树突棘数量较多,排列更为规则、整齐。对各组脊髓树突长度及树突棘进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组树突长度明显降低（P<0.05）,树突棘数量明显减少（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组树突长度明显增加（P<0.05）,树突棘数量显着增多（P<0.05）;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组组间相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。第三部分:抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用1.原代AS镜下观察原代细胞培养2d,镜下可见AS细胞呈不规则形状散在分布,部分细胞形似星形,细胞核大、呈椭圆形,细胞胞浆丰富,从胞体向四周发出长而有分支的突起;将原代细胞传代至第三代可见细胞生长状态良好,适宜进行后续实验。2.AS鉴定免疫荧光染色结果显示,GFAP染色呈阳性,阴性对照组未见任何阳性染色,提示GFAP呈特异性表达,所提取的细胞为AS。3.DDD含药血清对AS的安全干预浓度,以及干预RAS的最佳干预时间和最佳干预浓度DDD含药血清干预AS的安全浓度范围为:0-15%,DDD含药血清干预RAS最佳的干预浓度为10%,最佳干预时间为48h。4.DDD含药血清对RAS活性的影响MTT结果显示,与CG组相比,其余各组RAS活性均降低（P<0.05）;与MG相比,BSG组RAS活性无显着差异（P>0.05）,DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组RAS活性均显着下降（P<0.05）;DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组间比较无显着差异（P>0.05）。5.DDD含药血清对RAS迁移率的影响损伤24h后,各组RAS与对侧细胞完全分离,中间形成一条空白的划痕区域,划痕区未见或少见RAS;48h后部分细胞开始向对侧延伸突触,划痕区域出现部分肥大的RAS,细胞胞浆丰富,胞体呈球形,发亮,细胞加速分裂;72h后划痕区域缩小,部分RAS与对侧RAS突触交织,划痕开始愈合。在整个愈合过程中,24h各组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）;自48h开始,与MG组相比,BSG划痕区域面积比无显着差异,其余各组均明显较大（P<0.05）。DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。72h后,MG组与BSG组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）。与MG组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组划痕区域面积比明显较大（P<0.05）,组间比较无显着差异（P>0.05）。以上划痕区域面积比的改变反映了RAS在损伤发生后向受损区域的迁移速率。6.各组对RAS中AQP4、GFAP荧光表达量的影响使用免疫荧光染色法对RAS中AQP4、GFAP和细胞核进行了标记。染色结果显示,AQP4+细胞呈绿色,GFAP+细胞呈红色,细胞核呈蓝色,荧光双标的细胞呈黄色的不规则树枝状。其中,CG组仅见12个零星分布的AQP4+/GFAP+细胞;MG组和BSG可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较高,细胞肿胀程度严重;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见较少的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较低,细胞肿胀程度较轻。对AQP4+/GFAP+细胞进行计数统计,结果表明,与CG相比,其他各组阳性细胞占比显着增多（P<0.05）;与MG相比,除BSG组无显着差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比显着减少（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比组间相比无显着差异（P>0.05）。7.各组对RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量的影响结果显示,与CG组相比,其余各组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;与MG组相比,除BSG组无明显差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,3组组间比较无显着差异（P>0.05）。结论 1.自制简易脊髓打击器从20mm、40mm高处垂直撞击脊髓组织具有和NYU打击器从12.5mm、25mm处打击脊髓损伤程度相似的脊髓损伤动物模型,自制简易脊髓打击器安全性高,稳定性好,操作简便,价格低廉,可供科研工作者参考。2.通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减可有效消除SCI大鼠损伤处水肿,促进神经功能康复。其具体的作用机制为:通过抑制AQP4的表达可抑制反应性星形胶质细胞活化,减少胶质瘢痕形成,提高神经营养因子、神经生长因子及细胞膜生长相关蛋白的表达,促进神经功能康复。3.DDD含药血清能通过抑制AQP4的表达,有效减轻RAS水肿,减少RAS活化和减缓RAS迁移,促进RAS中神经营养因子的分泌。
张刘波[5]（2021）在《基于Meta分析和网络药理学探讨补阳还五汤治疗脊髓损伤的疗效和机制》文中研究说明研究背景据估计,全世界每年有近80万SCI患者,SCI会损害其运动、感觉、免疫等功能,而且慢性SCI患者的功能恢复非常有限,因此许多患者处于瘫痪状态。据统计,在美国,每一位SCI患者一生的直接护理需花费110-460万美元。SCI患者的生活和生存质量严重下降,易出现抑郁、焦虑状态、睡眠障碍和自主神经反射异常等,通常会致患者的的自杀率上升。SCI不仅会对人的生理和心理产生消极影响,而且会给家庭和社会造成重大损失。虽然许多学者对SCI进行不断的探索,并且提出多种尝试方法来治疗SCI,但SCI是一个复杂且动态变化的疾病,受到许多不同的机制共同影响,目前的临床治疗方法无法同时作用于SCI的多种病理机制。补阳还五汤是祖国传统医学治疗SCI的经典方剂,可以通过不同成分、不同靶点及不同通路治疗SCI,增加SCI患者恢复的可能性。研究一补阳还五汤治疗SCI的系统评价研究目的:基于Meta分析,探讨补阳还五汤干预SCI是否有效及安全,为进一步的研究提供循证医学证据和参考。研究方法:以“脊髓损伤”、“Spinal Cord Injuries”、“补阳还五汤”、“随机对照”等为检索词,建库至2021年1月为检索时间,通过电子计算机检索CNKI、PubMed等中英文数据库,依据纳排标准筛选补阳还五汤加减干预SCI的随机对照试验（RCT）。通过2名专业人员检索、筛选数据,并对其质量评价,借助Revman5.3和STATA16.0软件对数据进行敏感性分析、亚组分析、回归分析、合并效应量、发表偏倚检测等。研究结果:共检索到291篇补阳还五汤治疗SCI的RCT,依据纳排标准共纳入11篇文献,共777名患者,合并效应量结果表明:观察组的ASIA评分明显高于对照组（SMD=5.59,95%CI（3.92,7.27）,P<0.00001）。观察组的 ASIA 感觉评分较对照组提高显着（SMD=8.21,95%CI（5.81,10.62）,P＜0.00001）。观察组的 ASIA 分级较对照组显着提高（RR=1.68,95%CI（1.28,2.19）,P=0.0002）。观察组的 ASIA 总分明显高于对照组（SMD=12.62,95%CI（4.38,20.87）,P=0.003）。观察组 FIM 评分明显高于对照组（SMD=1.93,95%CI（1.18,2.68）,P＜0.00001）。观察组的 SEP 波幅较对照组无显着提高（SMD=0.36,95%CI（-0.40,1.11）,P=0.35>0.05）。观察组的MEP 波幅较对照组显着提高（SMD=0.54,95%CI（0.11,0.97）,P=0.01＜0.05）。观察组的SEP潜伏期与对照组有显着性差异（SMD=-4.27,95%CI（-5.78,-2.75）,P<0.00001）。观察组的MEP潜伏期显着短于对照组（SMD=-4.83,95%CI（-7.64,-2.03）,P=0.0007<0.05）。观察组有效率明显高于对照组（RR=1.14,95%CI（1.03,1.26）,P=0.01<0.05）。观察组和对照组的不良反应发生率无明显差异（RR=0.87,95%CI（0.32,2.35）,P=0.78>0.05）。Egger 法的结果显示:P=0.011<0.05,且 95%CI[0.750,3.570]不包含0,考虑存在发表偏倚的可能性较大。研究结论:1.补阳还五汤加减辅助治疗SCI可显着提升ASIA运动评分、ASIA感觉评分、ASIA分级、ASIA总评分、MEP波幅、FIM评分及有效率,降低SEP潜伏期及MEP潜伏期,无显着不良反应。2.补阳还五汤加减辅助治疗可促使SCI患者运动和感觉功能的恢复,改善其生活质量,增加生活自理能力,减少临床症状,且具有安全性。3.本次研究有发表偏倚的可能,需要RCT再次验证。研究二基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗SCI的机制研究目的:基于网络药理学,筛选补阳还五汤治疗SCI可能的靶点和通路,阐释补阳还五汤治疗SCI的机制,给更深入的研究和和应用提供参考。研究方法:首先,以“黄芪”、“当归”、“赤芍”、“地龙”、“川芎”、“红花”、“桃仁”7味中药的拉丁文、中文标准名或拼音为检索词,通过电子计算机检索T CMSP、TCMID和SymMap数据库,搜集其主要化学成分。其次,通过PubChem数据库检索化学成分的Canonical SMILES,将Canonical SMILES上传至SwissADME平台,筛选有生物学意义的化合物。然后通过SwissTargetPrediction、SEA及PubChem数据库搜索和筛选主要成分的靶点。以“Spinal cord injury”为检索词,检索OMIM、DrugBank、TTD和D isGeNET数据库,搜集SCI的靶点信息。通过Venny2.1获得二者的交集靶点,即考虑为补阳还五汤干预SCI的潜在靶点。借助软件Cytoscape3.7.1,构建相关网络图,并通过拓扑分析筛选补阳还五汤的主要成分。借助String11.0数据库分析交集靶点,Cytoscape 3.7.1的CytoHubba插件,计算出补阳还五汤干预SCI的Top10关键靶点。通过DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG富集分析,Graphpad Prism8.0.1软件对其进行图像化处理。最后,借助AutoDock Vina软件对补阳还五汤的10个主要活性成分与top5关键靶点进行分子对接,并预测结合能。研究结果:1.共检索到1146个补阳还五汤的化合物,通过SwissADME平台共筛选到447个有生物学意义的化合物,包括黄芪的54个化合物;当归的121个化合物;川芎的139个化合物;红花的69个化合物;赤芍的64个化合物;桃仁的66个化合物;地龙的0个化合物。作用于593个靶点。2.通过4个疾病数据库共检索到SCI疾病的197个靶点,与补阳还五汤的靶点取交集,共获得23个潜在治疗靶标。黄芪的13个化合物是干预SCI的有效成分,当归的13个化合物是干预SCI的有效成分,川芎的13个化合物是干预SCI的有效成分,红花的20个化合物是干预SCI的有效成分,赤芍的15个化合物是干预SCI的有效成分,桃仁的10个化合物是干预SCI的有效成分。3.通过拓扑分析获得10个补阳还五汤主要化学成分:木犀草素（Luteolin）、槲皮素（Quercetin）、山奈酚（kaempferol）、姜黄素（Curcumin）、黄芩素（Baical ein）、视黄醇（retinol）、亚麻酸（Linolenic Acid）、腺嘌呤（Adenine）、野黄芩黄素（Scutellarein）、月桂酸（Lauric Acid）。通过 CytoHubba 插件 Top10 关键靶点:肿瘤坏死因子（TNF）、白介素8（CXCL8）、细胞肿瘤抗原p53（TP53）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、干扰素γ（IFNG）、糖皮质激素受体（NR3C1）、前列腺素G（P TGS2）、干扰素β1（IFNB1）、白介素2（IL2）、雄激素受体（AR）。4.GO富集分析和KEGG富集分析的结果如下:补阳还五汤治疗SCI的机制可能与RNA聚合酶II启动子转录的正调控等生物学过程,蛋白质结合等分子功能,细胞质、细胞外空间等细胞组分条目有关。补阳还五汤治疗SCI的机制可能与RIG-I样受体信号通路、NF-kappa B信号通路等有关。5.补阳还五汤的10种活性成分与5个关键靶蛋白有较好的结合活性。研究结论:补阳还五汤的66个化学成分作用于SCI的23个靶点,TNF、CXCL8、TP53、MMP9、IFNG、NR3C1、PTGS2、IFNB1、IL2、AR为补阳还五汤治疗SCI的关键靶点,主要作用于RIG-I样受体通路、NF-kappa B通路、T细胞受体通路等,可能通过抑制炎症反应及神经细胞凋亡,推动轴突再生,进而促进SCI患者功能的恢复。
李芳[6]（2021）在《ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad/PLOD2信号通路修复脊髓损伤的机制研究》文中研究说明研究背景脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）是指由于外界直接或间接因素导致的中枢神经系统疾病,受累神经细胞的结构和功能受损,最终导致损伤部位以下运动功能和感觉的缺失,严重影响患者生活质量,降低患者生命预期,给家庭和社会带来沉重的负担。由于神经细胞的再生能力较低,损伤后微环境改变等不良因素,脊髓损伤治疗预后较差,使脊髓损伤的治疗成为了世界性的医学难题。传统的脊髓损伤治疗方法手术减压、药物对症治疗及术后康复治疗,不能促进神经细胞和轴突的再生,没有从根本上恢复神经功能,因此需要联用新的有效治疗方法共同作用。随着近几年分子生物学和细胞生物学研究的巨大进步,细胞移植作为脊髓损伤的一种新型治疗手段受到了广泛关注和研究,间充质干细胞（mesenchymal stromal cells,MSCs）由于其低免疫原性,体外容易培养,能分泌大量生物活性分子,成为研究的热点。体内外实验表明,脂肪来源的间充质干细胞（adipose tissue-derived stromal cells,ADSCs）移植在治疗脊髓损伤中具有良好的应用前景。在脊髓损伤动物模型中,与骨髓间充质干细胞相比,脂肪来源的间充质干细胞体内移植到脊髓损伤部位时具有更高的存活率。也有研究表明,ADSCs可以通过分泌细胞因子和生长因子,促进轴突再生,减少炎症细胞的浸润和空洞形成,从而促进脊髓损伤的恢复。尽管已有研究证明ADSCs在治疗脊髓损伤中的作用,但ADSCs促进脊髓损伤修复的具体机制尚不完全清楚。Torres-Espin等研究发现,大鼠脊髓损伤后MSCs体内移植可促进前胶原赖氨酸-2-酮戊二酸 5-双加氧酶 2（procollagen-lysine,2-oxoglutarate 5-dioxygenase 2,PLOD2）表达,PLOD2可能通过促进胶原纤维的交联和细胞外基质重塑起到组织修复的作用。越来越多的研究表明,在肿瘤的侵袭和迁移过程中,HIF-1α、TGF-β1 和 microRNA-26a/b 等分子通过 PI3K-AKT、TGF-β/Smad 信号通路,调控PLOD2的表达。但是PLOD2在治疗脊髓损伤中发挥的作用,目前还未见文献报道。ADSCs可以通过分泌多种细胞因子促进脊髓损伤的修复,TGF-β1作为ADSCs分泌的重要因子,具有抗炎、修复和神经保护功能。ADSCs能否通过分泌TGF-β1,上调PLOD2的表达,进而促进脊髓损伤的恢复,成为本研究的重点。本研究分为三个部分,第一部分:ADSCs体外共培养对损伤神经细胞的修复作用,第二部分:ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进损伤神经细胞的修复,第三部分:ADSCs通过激活神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进脊髓损伤大鼠功能恢复。第一部分ADSCs体外共培养对损伤神经细胞的修复作用研究目的1.从人脂肪组织中分离培养间充质干细胞,通过成脂成骨分化能力和细胞表面标志的表达对其进行鉴定。2.培养PC12细胞和大鼠皮质神经元原代细胞,体外建立神经细胞机械损伤模型。3.体外建立ADSCs和损伤神经细胞共培养体系,通过相关检测,明确ADSCs对损伤神经细胞的修复作用,以及PLOD2在ADSCs治疗神经损伤中的表达变化。研究方法1.ADSCs的分离培养及鉴定间充质干细胞从健康志愿者脂肪组织培养获得。P3-P5代的细胞用于后续实验。ADSCs经成脂成骨诱导分化后,Oil Red O染色,观察成脂诱导分化情况,Alizarin Red S和Von Kossa染色,观察成骨诱导分化情况。流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达情况。2.神经细胞机械损伤模型制备（mechanical injury,MI）150ng/mLNGF诱导PC12细胞向神经细胞分化,MAP2染色鉴定。取Wistar新生鼠大脑皮质,分离培养原代神经细胞,NeuN染色鉴定。使用10ul枪尖于6孔板内“井”字划割,造成神经元机械性损伤。3.ADSCs共培养对损伤神经细胞的影响ADSCs接种Transwell上室,每孔接种3×105细胞,接种24h后与机械损伤的PC12细胞或大鼠皮质神经元共培养3天,EdU实验检测ADSCs对神经细胞的促增殖情况。微板试剂盒检测细胞培养上清中LDH表达变化,qRT-PCR和western blot检测PLOD2和神经相关分子MAP2、NSE、GAP43和GFAP的表达。研究结果1.ADSCs的分离培养及鉴定镜下观察从脂肪组织中分离出的细胞,呈典型的成纤维样梭形细胞;经成脂和成骨诱导培养基诱导分化后,Oil Red O染色成阳性,表明ADSCs具有成脂分化的能力,Alizarin Red S和Von Kossa染色成阳性,表明ADSCs具有成骨分化的能力;流式细胞仪检测其表面抗原的表达,结果显示ADSCs高表达CD13、CD44、CD73、CD90 和 CD105,低表达 HLA-DR、CD34 和 CD45。2.神经细胞的培养及鉴定PC12细胞经150ng/mL NGF诱导分化5-7天后,有神经突起长出,细胞形态类似于神经细胞,MAP2染色结果阳性。大鼠皮质神经元体外培养6-8天,细胞体较小,从胞体延伸出轴突和树突,轴突细长,NeuN染色结果阳性。3.ADSCs共培养促进损伤神经细胞的修复ADSCs与损伤神经细胞共培养三天,结果显示神经细胞伤口愈合率显着升高;EdU结果显示,ADSCs共培养能促进大鼠皮质神经元的增殖;LDH检测结果显示,ADSCs共培养可以抑制神经细胞LDH的释放;qRT-PCR和western blot结果显示,ADSCs共培养可以促进PLOD2和神经细胞相关分子MAP2、NSE和GAP43的表达,降低GFAP表达。研究结论1.我们成功地从脂肪组织中分离出间充质干细胞。2.ADSCs共培养可以提高损伤神经细胞伤口愈合率,促进大鼠皮质神经元的增殖。ADSCs共培养可以促进损伤神经细胞神经相关分子MAP2、NSE和GAP43的表达,降低GFAP表达。提示ADSCs可能通过提高神经元的存活率,促进神经细胞生长和轴突再生,减少胶质瘢痕的形成而促进损伤神经细胞的恢复。3.神经细胞机械损伤以后,PLOD2表达降低,ADSCs共培养可以促进损伤神经细胞PLOD2的表达。第二部分ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进损伤神经细胞的修复研究目的1.通过米诺地尔抑制神经细胞PLOD2的表达,检测抑制PLOD2表达对ADSCs神经修复作用的影响。2.ELISA检测共培养体系中TGF-β1的表达情况,同时使用外源性TGF-β1作用于损伤的神经细胞,明确TGF-β1的神经修复作用。3.SB431542 抑制 TGF-β1/Smad 信号通路,LY294002 抑制 PI3K/AKT 信号通路,明确PLOD2具体的信号调控通路。研究方法1.米诺地尔抑制神经细胞PLOD2的表达,检测PLOD2下调对ADSCs神经修复作用的影响不同浓度米诺地尔（0.25mM,0.5mM,1.0mM）作用于PC12细胞,筛选米诺地尔抑制PLOD2表达的最佳作用浓度。在ADSCs与神经细胞共培养体系中加入米诺地尔,免疫细胞化学技术、EdU实验和LDH释放实验检测抑制PLOD2基因表达对ADSCs神经保护作用的影响,qRT-PCR和western blot检测PLOD2以及神经相关分子MAP2、NSE、GAP43和GFAP的表达变化。2.TGF-β1对受损神经细胞的修复作用ELISA检测损伤神经细胞及ADSCs共培养上清中TGF-β1的表达。外源性TGF-β1（浓度分别为 0.31,0.62,1.25,2.5,5.0,10,20 ng/mL）作用于划痕损伤的 PC12 细胞,qRT-PCR 和 western blot 检测 PLOD2、P-AKT、AKT、P-Smad3和Smad2/3的表达变化。3.抑制TGF-β1/Smad、PI3K/AKT信号通路,对PLOD2表达的调控ADSCs与损伤神经细胞共培养体系中加入SB431542,抑制TGF-β1/Smad信号通路。PC12细胞经NGF诱导分化后,加入LY294002抑制PI3K/AKT信号通路。ELISA检测上清中TGF-β1的表达变化,qRT-PCR和western blot检测PLOD2、TGF-β1、P-Smad3、Smad2/3、P-AKT、AKT 和神经相关分子 MAP2、NSE、GAP43、GFAP的表达变化。研究结果1.抑制PLOD2的基因表达,体外实验结果显示ADSCs的神经细胞修复作用减弱根据qRT-PCR及western blot结果,我们最终确定米诺地尔实验浓度为0.5mM。在共培养体系中,MAP2的免疫荧光染色结果显示,抑制PLOD2表达,ADSCs的神经修复作用减弱。EdU结果显示,米诺地尔可以降低ADSCs对大鼠皮质神经元增殖的刺激作用。LDH释放实验表明,米诺地尔可增加共培养体系中LDH含量。qRT-PCR和western blot实验进一步证实,米诺地尔可以抑制神经细胞PLOD2、MAP2、NSE和GAP43的表达,促进GFAP表达。2.TGF-β1在修复神经细胞损伤中的作用ELISA检测结果显示,ADSCs共培养可以提高损伤神经细胞培养上清中TGF-β1含量。qRT-PCR和western blot检测结果显示,外源性TGF-β1作用于划痕损伤的PC12细胞,低浓度TGF-β1（0.31-2.5 ng/mL）促进PLOD2的表达,当TGF-β1浓度达到5 ng/mL时这一作用减弱,当TGF-β1浓度为10和20 ng/mL时则抑制PLOD2表达。Western blot检测结果显示,低浓度TGF-β1抑制P-AKT的表达,促进P-Smad3的表达,而高浓度TGF-β1则相反。3.TGF-β1/Smad信号通路在ADSCs促进损伤神经细胞修复中的作用共培养体系中加入SB431542可以降低共培养上清中TGF-β1的含量,抑制神经细胞TGF-β1、P-Smad3和PLOD2的表达,降低神经相关分子MAP2、NSE、GAP43的表达,提高GFAP表达水平。加入LY294002抑制P-AKT表达后,PLOD2表达下降。上述结果进一步证实了 AKT信号通路可以调控PLOD2的表达,但是当低浓度TGF-β1存在时,PLOD2主要受TGF-β1/Smad信号通路调控。研究结论1.米诺地尔抑制神经细胞PLOD2基因表达后,ADSCs的神经细胞修复作用减弱,提示PLOD2在ADSCs修复神经细胞损伤中发挥重要作用。2.ADSCs共培养可以增加细胞培养上清中TGF-β1的含量,低浓度TGF-β1抑制P-AKT的表达,促进P-Smad3和PLOD2的表达,而高浓度TGF-β1则相反。3.体外实验显示SB431542抑制TGF-β1/Smad信号通路后,降低ADSCs神经修复作用及PLOD2表达。ADSCs通过分泌低剂量TGF-β1,激活Smad3信号通路促进PLOD2表达,发挥神经修复作用。第三部分ADSCs通过激活神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进脊髓损伤大鼠功能恢复研究目的1.建立脊髓损伤动物模型,体内实验验证ADSCs输注对脊髓损伤动物模型的治疗作用。2.大鼠体内输注SB431542,验证ADSCs通过激活神经细胞TGF-β1/Smad/PLOD2信号通路促进脊髓损伤功能恢复的作用。研究方法1.大鼠脊髓损伤模型制备大鼠腹腔麻醉后,以大鼠T8-T10棘突为中心取后正中切口切开,剥离并咬除棘突、椎板暴露脊髓,血管夹夹击脊髓30s,建立脊髓损伤模型。2.实验分组脊髓损伤模型制备成功3天后,大鼠分别给予PBS、ADSCs和SB431542原位注射。实验具体分为5组:假手术组,PBS对照组,ADSCs治疗组,ADSCs治疗+SB431542 组,SB431542 组。3.ADSCs输注对脊髓损伤的治疗作用在治疗后 3、7、14、21、28 天根据 BBB（Basso,Beattie,and Bresnahan）量化评分标准对所有动物运动功能进行评定。大鼠心脏取血,离心收集血清,ELISA检测血清中TGF-β1的含量。移植后3天随机取各组动物,取出脊髓组织,4%多聚甲醛固定,制作石蜡和冰冻切片,进行HE染色,尼氏染色,免疫组织化学染色检测脊髓组织中MAP2的表达。取出治疗3天后的脊髓组织,提取总RNA和总蛋白。qRT-PCR和western blot检测神经细胞相关分子（MAP2、NSE、GAP43和 GFAP）和 PLOD2、TGF-β1、P-Smad3 和 Smad2/3 的表达变化。研究结果1.ADSCs移植可以促进脊髓损伤大鼠功能恢复ADSCs移植可以促进大鼠运动功能的恢复,减少脊髓病变体积及空泡的形成,增加尼氏小体数量,促进脊髓神经细胞神经相关分子MAP2、NSE和GAP43表达,抑制GFAP表达。2.ADSCs通过激活神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进脊髓损伤大鼠功能恢复ADSCs移植可以显着提高大鼠血清中TGF-β1的含量,促进脊髓神经细胞PLOD2、TGF-β1、P-Smad3的基因和蛋白表达。抑制剂SB431542输注明显抑制ADSCs对大鼠运动功能的恢复作用,脊髓组织结构损伤加重,神经细胞PLOD2、TGF-β1、P-Smad3 和神经相关分子（MAP2、NSE、GAP43）表达降低,GFAP表达增加,ADSCs的神经修复作用减弱。研究结论1.脊髓损伤动物实验研究结果显示,ADSCs移植可以促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,同时也能促进神经元的存活,促进损伤结构的恢复。2.体内实验表明,ADSCs的治疗作用会被SB431542抑制。体内实验进一步证实ADSCs通过激活TGF-β1/Smad3信号通路促进神经细胞PLOD2表达,从而促进脊髓损伤的修复。
吴承杰[7]（2021）在《基于NgR/RhoA/ROCK通路探究温肾通督方促进脊髓损伤修复的机制》文中认为目的:观察损伤神经元Nogo受体（NgR）的动态表达变化及温肾通督方（脊髓康）对脊髓损伤的干预作用,探究温肾通督方通过调控NgR/RhoA/ROCK信号通路促进脊髓损伤修复的机制。方法:第一部分:以浸泡时间、加水量、煎煮时间、煎煮次数为影响因素,通过正交试验进行分组。采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷、丹参酮ⅡA,并结合出膏率分析各因素对温肾通督方水提工艺的影响。第二部分:大鼠神经元体外分离后,进行纯化培养,使用免疫荧光法对其神经核抗原（NeuN）进行鉴定。采用谷氨酸制备神经元损伤模型,并使用TUNEL法进行鉴定。实验分为1d、3d、7d、14d、对照组,使用NgR与NeuN免疫荧光双重标记染色、Western blot、qPCR观察损伤神经元表达NgR的情况;采用PC12细胞替代神经元,制备损伤模型后分别使用大鼠含药血清（空白对照组、强的松组、温肾通督方组）干预,并于1d、3d、7d进行NgR免疫荧光标记染色、qPCR观察NgR的表达情况。第三部分:采用改良Allen’s法制备SD大鼠脊髓损伤模型,将实验分为模型组、强的松组、温肾通督方组、假手术组。大鼠的运动功能采用BBB评分和斜板试验评价,高尔基染色和透射电镜观察神经组织的微观结构,TUNEL与NeuN的荧光双标法检测神经元的凋亡。第四部分:制备大鼠脊髓损伤模型,将实验分为模型组、强的松组、温肾通督方组、假手术组。采用NeuN与NgR的荧光双标法检测局部NgR的表达与定位,免疫组化、Western blot、qPCR检测损伤区NgR、RhoA、ROCK 的表达。结果:第一部分:温肾通督方的最佳水提工艺为浸泡时间1h,加12倍水量,煎煮3次,每次1h。第二部分:免疫荧光、Western blot、qPCR结果均表明损伤神经元在1d时NgR表达最高,与对照组相比具有明显差异（P<0.05）,3d、7d、14d逐渐下降;免疫荧光、qPCR结果均表明温肾通督方组的PC12细胞在7d时NgR表达减少,与空白对照组相比具有明显差异（P<0.05）。第三部分:在28d与模型组相比,BBB评分和斜板试验均表明温肾通督方可促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复（P<0.05）;高尔基染色和透射电镜均提示温肾通督方可改善脊髓损伤大鼠神经元的微观结构（线粒体、内质网、树突棘等）;TUNEL与NeuN的荧光双标表明温肾通督方可降低脊髓损伤大鼠神经元的凋亡率（P<0.05）。第四部分:NeuN与NgR的荧光双标法表明温肾通督方可抑制脊髓损伤大鼠神经元NgR的表达（P<0.05）;免疫组化、Western blot、qPCR表明温肾通督方可抑制脊髓损伤大鼠损伤区NgR、RhoA和ROCK的表达（P<0.05）。结论:温肾通督方的最佳水提工艺为浸泡时间1h,加12倍水,煎煮3次,每次1h;温肾通督方可通过抑制NgR/RhoA/ROCK通路促进神经元轴突再生,进而改善脊髓损伤大鼠的运动功能。
杜凯然[8]（2021）在《陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达》文中进行了进一步梳理目的:通过成功构建大鼠脊髓损伤模型,探讨陇中消肿止痛合剂对大鼠脊髓损伤的保护作用,及对lnc RNA MALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达变化的影响。方法:1.选取成年雄性清洁级SD大鼠175只,按照Allen’s法建立脊髓损伤大鼠模型。2.SD大鼠脊髓损伤模型建立后,将其随机分为7组,分别为对照组25只,假损伤组25只,模型组25只,七叶皂苷钠组25只和陇中消肿止痛合剂干预组75只,陇中消肿止痛合剂干预组（75只）按给药剂量随机分为陇中消肿止痛合剂高剂量组25只,陇中消肿止痛合剂中剂量组25只和陇中消肿止痛合剂低剂量组25只。采取灌胃给药的方式,根据BBB（Basso,Beattie&Bresnahan locomotor rating scale,BBBscal）评分标准,每隔3d观察评分,并记录,总计观察15d。利用干湿法测定脊髓含水量,及Belayev法血-脊髓屏障（blood spinal cord barrier,BSCB）破坏定量分析。3.在上述7组随机分别选取SD大鼠15只,提取损伤脊髓样本,分别进行RT-PCR、Western Blot、免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK,得出相关数据及结果,进行统计分析。结果:1.陇中消肿止痛合剂能够有效治疗SD大鼠继发性脊髓损伤（Secondary spinal cord injury,SSCI）后肢体功能;与七叶皂苷钠比较,陇中消肿高剂量对于治疗SSCI效果优于七叶皂苷钠以及陇中消肿止痛合剂中、低剂量组。2.陇中消肿止痛合剂能够有效的减轻脊髓水肿,SD大鼠的双下肢功能逐渐的恢复。3.SSCI后,脊髓组织中AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK表达均升高,与脊髓损伤程度呈正相关。陇中消肿止痛合剂通过抑制AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK在脊髓组织表达含量,以此减轻脊髓水肿。4.陇中消肿止痛合剂通过降低AQP-4、MALAT1、ERK、p38MAPK在脊髓组织中的表达,从而减轻脊髓水肿,促进神经功能恢复。结论:1.陇中消肿止痛合剂具有防治SSCI的作用,主要作用机制是通过减轻脊髓水肿对神经的压迫,恢复SD大鼠双下肢肢体功能。2.SSCI后血-脊髓屏障被破坏,AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK的表达量升高则脊髓损伤加重,降低AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK基因表达则脊髓水肿减轻,肢体功能恢复。3.陇中消肿止痛合剂能够抑制lnc RNA MALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴的表达变化。通过药物干预降低AQP-4、ERK、MALAT1、p38MAPK基因在脊髓组织中表达量,减轻脊髓水肿及部分神经功能及恢复血脊髓屏障的功能。4.SSCI后,七叶皂苷钠与陇中消肿止痛合剂都具有防治SSCI的疗效。通过两者药物间比较,陇中消肿止痛合剂利水消肿的作用及降低AQP-4、MALAT1、ERK、p38MAPK的表达要优于七叶皂苷钠。
刘凡[9]（2020）在《针刺配合雷火灸治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效观察》文中研究指明目的:通过对比观察针刺配合雷火灸与间歇性导尿治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效,寻求治疗肾阳虚型神经源性膀胱的更优方法。方法:本研究共纳入符合研究标准的60例肾阳虚型神经源性膀胱患者,随机分为试验组（针刺配合雷火灸）与对照组（间歇性导尿）,每组各30例。两组均予口服弥可保片为基础治疗,同时每日饮水量也做具体规定。试验组:治疗穴位分为两组,每位患者分别针刺A、B两组穴位。A组:中极、关元、气海、三阴交（双）,同时配合雷火灸关元、气海两穴;B组:次髎、膀胱俞、肾俞、气海俞、委中（均双侧）,同时配合雷火灸命门、腰阳关两穴。针刺治疗每日1次,每次30min,雷火灸治疗为每穴各10min,每周连续治疗6天,休息1天,1周为1疗程,共治疗4个疗程。对照组:采用间歇性导尿治疗,具体依据患者膀胱残余尿量来决定实施。观察两组患者治疗前、治疗后中医证候积分、膀胱残余尿量、最大尿流率、生活舒适度评分的变化,并进行统计分析,对针刺配合雷火灸治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效进行评估。结果:1.两组患者治疗前中医证候积分、膀胱残余尿量、最大尿流率及生活舒适度评分均无统计学差异（P>0.05）。2.膀胱残余尿量:治疗后,试验组患者膀胱残余尿量较前下降明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;而对照组残余尿量下降不明显,差异无统计学意义（P>0.05）;两组比较,试验组膀胱残余尿量改善程度优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.最大尿流率:治疗后,试验组患者最大尿流率较前有所改善,差异具有统计学意义（P<0.05）;而对照组最大尿流率改善不明显,差异无统计学意义（P>0.05）;两组比较,试验组最大尿流率改善程度优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.生活舒适度评分:治疗后,试验组患者生活舒适度评分较治疗前改善明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;而对照组患者生活舒适度评分改善不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。两组比较,试验组生活舒适度评分改善程度优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.中医证候积分:治疗后,试验组患者中医证候积分较治疗前下降明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;而对照组中医证候积分下降不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。两组比较,试验组中医证候积分改善程度优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。6.临床疗效比较:试验组有效率为86.2%,对照组有效率为64.3%。两组差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.针刺配合雷火灸能有效改善肾阳虚型神经源性膀胱患者的中医证候积分、膀胱残余尿量、最大尿流率,能显着改善患者生活舒适度评分。2.针刺配合雷火灸治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效优于间歇性导尿术。
王舒鹤,樊晓靖,吴雷,肖震心,徐家淳[10]（2021）在《针刺治疗脊髓损伤研究进展》文中认为脊髓损伤是常见致死、致残原因,给患者带来身体、心理困扰,以及巨大的经济负担。近年来,针刺对脊髓损伤的治疗起到积极作用,在其治疗中扮演重要地位,故该文从选穴规律、针刺手法、针刺方法等方面总结近年来针刺治疗脊髓损伤的特点,发现针刺治疗脊髓损伤选穴灵活,多取俞募穴、背部穴、八髎穴、远近配穴以及辨证选穴;针刺方法多样,可用电针、芒针、耳针、温针等;针刺时可在进针时辅以一定手法、配合单式及复式补泻手法等加强疗效。
二、康复治疗脊髓损伤功能恢复的疗效观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、康复治疗脊髓损伤功能恢复的疗效观察（论文提纲范文）
（2）基于数据挖掘技术针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍临床疗效评价研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 综述 |
| 1 祖国医学对脊髓损伤的认识 |
| 1.1 对病名的认识 |
| 1.2 对症状的认识 |
| 1.3 对病因病机的认识 |
| 1.4 针刺治疗脊髓损伤 |
| 1.5 中药治疗脊髓损伤 |
| 2 现代医学对脊髓损伤的认识 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 脊髓损伤的机制 |
| 2.3 脊髓损伤的治疗方法 |
| 3 数据挖掘技术在中医领域中的应用 |
| 3.1 数据挖掘技术常用分析方法 |
| 3.2 数据挖掘技术在针刺治疗中的应用 |
| 3.3 数据挖掘技术在中医药中的应用 |
| 第一部分 数据挖掘技术针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍选穴规律 |
| 1 研究方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 文献检索 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 2 数据处理 |
| 2.1 数据库建立 |
| 2.2 数据挖掘方法 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果与分析 |
| 第二部分 数据挖掘技术针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍临床疗效评价 |
| 1 试验部分 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除与脱落标准 |
| 1.6 剔除与脱落病例的处理 |
| 1.7 病例中止标准 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验设计 |
| 2.2 样本量估算 |
| 2.3 治疗方法 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.5 受试者权益保护 |
| 3 统计学分析 |
| 4 试验结果 |
| 讨论 |
| 1 本课题针刺治疗方案的确定 |
| 2 针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍临床疗效探讨 |
| 3 针刺治疗不完全性脊髓损伤机制探讨 |
| 4 不足与展望 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间学术成果 |
| 个人简历 |
（3）刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难病例分析及经验总结（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 神经源性排尿困难的现代医学研究进展 |
| 1 定义 |
| 2 病理生理机制 |
| 3 分型 |
| 4 诊断 |
| 5 治疗 |
| 6 小结 |
| 综述二 神经源性排尿困难的中医研究进展 |
| 1 中医对神经源性排尿困难的认识 |
| 2 古籍针药证治方法 |
| 3 中医现代治疗进展 |
| 4 小结 |
| 第二部分 刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难的病例分析 |
| 前言 |
| 电针治疗下运动神经源性排尿困难的观察性研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究方法 |
| 3 研究对象 |
| 4 研究方案 |
| 5 统计学分析 |
| 6 研究结果 |
| 7 讨论 |
| 8 小结 |
| 第三部分 刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难的经验总结 |
| 前言 |
| 研究方法和技术路线 |
| 刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难经验总结 |
| 1 “病—症—位”的中西结合诊疗思路 |
| 2 深刺配合电针的诊疗方案 |
| 3 同质性研究疗效分析 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.不足和展望 |
| 第二部分 抵当汤加减调节AQP4 表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足与展望 |
| 第三部分 抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足和展望 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1 自制简易打击器与NYU打击器 |
| 附件2 脊髓打击损伤模型 |
| 附录3 BBB评分 |
| 附录4 Reuter评分 |
| 附录5 综述 水通道蛋白在急性脊髓损伤中的作用机制 |
| References |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）基于Meta分析和网络药理学探讨补阳还五汤治疗脊髓损伤的疗效和机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 脊髓损伤中医药研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 2 病位病性 |
| 3 分期分型 |
| 4 专病专方 |
| 5 并发症诊治 |
| 6 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 脊髓损伤的临床治疗进展 |
| 1 SCI后病理生理变化 |
| 2 现代医学治疗进展 |
| 3 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 补阳还五汤治疗脊髓损伤的Meta分析 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 检索策略 |
| 2.2 纳入标准 |
| 2.3 排除标准 |
| 2.4 数据提取 |
| 2.5 质量评价 |
| 2.6 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 纳入文献 |
| 3.2 纳入文献的基本特征 |
| 3.3 纳入文献的质量评价 |
| 3.4 临床疗效分析 |
| 3.5 安全性分析 |
| 3.6 发表偏倚分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 补阳还五汤方解 |
| 4.2 补阳还五汤治疗SCI的作用机制 |
| 4.3 补阳还五汤治疗SCI的疗效分析 |
| 4.4 局限与不足 |
| 4.5 总结与展望 |
| 5 结论 |
| 第三章 基于网络药理学的补阳还五汤治疗脊髓损伤的疗效机制研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 补阳还五汤活性成分的检索 |
| 2.2 补阳还五汤化学成分的筛选 |
| 2.3 补阳还五汤化学成分靶点的预测 |
| 2.4 SCI靶点的收集 |
| 2.5 治疗潜在靶点的筛选 |
| 2.6 补阳还五汤有效成分靶点和SCI靶点网络的构建的分析 |
| 2.7 相互作用网络 |
| 2.8 GO富集分析和KEGG富集分析 |
| 2.9 分子对接验证 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 补阳还五汤化学成分收集 |
| 3.2 补阳还五汤化学成分的筛选 |
| 3.3 补阳还五汤预测靶点分析 |
| 3.4 SCI预测靶点分析 |
| 3.5 补阳还五汤治疗SCI的潜在靶点 |
| 3.6 补阳还五汤不同药物的化学成分-疾病潜在作用靶点网络图 |
| 3.7 PPI网络的构建 |
| 3.8 GO富集分析和KEGG通路富集分析 |
| 3.9 分子对接结果分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 补阳还五汤干预SCI的主要化学成分 |
| 4.2 补阳还五汤干预SCI的作用机制 |
| 4.3 局限与不足 |
| 5 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 Cochrane协作网偏倚风险评价的具体标准 |
| 附录2 PubMed检索策略 |
| 附录3 Embase检索策略 |
| 附录4 Cochrane检索策略 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad/PLOD2信号通路修复脊髓损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 ADSCs体外共培养对损伤神经细胞的修复作用 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进损伤神经细胞的修复 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 ADSCs通过激活神经细胞TGF-β1/Smad3/PLOD2信号通路促进脊髓损伤大鼠功能恢复 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 五、总论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文一 |
| 外文论文二 |
（7）基于NgR/RhoA/ROCK通路探究温肾通督方促进脊髓损伤修复的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 温肾通督方水提工艺的优化 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验药材 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 正交试验分组及药液制备 |
| 2.2 浸膏得率的测定 |
| 2.3 黄芪甲苷的含量测定 |
| 2.4 丹参酮ⅡA的含量测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 小结 |
| 第二部分 脊髓损伤后神经元表面NgR的动态表达及含药血清的干预作用 |
| 1 脊髓损伤后神经元表面NgR的动态表达情况 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 大鼠原代神经元的分离及培养 |
| 1.2.2 大鼠原代神经元的形态观察及免疫荧光鉴定 |
| 1.2.3 大鼠损伤神经元模型的制备及TUNEL法鉴定 |
| 1.2.4 免疫荧光双重标记染色法检测损伤神经元NgR蛋白的表达 |
| 1.2.5 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测损伤神经元NgR蛋白的表达 |
| 1.2.6 实时荧光定量法(qPCR)检测损伤神经元NgR mRNA的表达 |
| 1.2.7 统计学分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 大鼠原代神经元的形态观察及鉴定结果 |
| 1.3.2 大鼠原代损伤神经元的鉴定结果 |
| 1.3.3 大鼠原代损伤神经元NgR蛋白的表达情况 |
| 1.3.4 大鼠原代损伤神经元NgR mRNA的表达情况 |
| 1.4 小结 |
| 2 温肾通督方含药血清对神经元样PC12细胞NgR表达的干预作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验细胞 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠含药血清的制备 |
| 2.2.2 PC12细胞的培养及诱导分化 |
| 2.2.3 CCK-8法检测不同浓度谷氨酸对神经元样PC12细胞增殖的影响 |
| 2.2.4 神经元样PC12细胞的模型制备及含药血清干预 |
| 2.2.5 免疫荧光标记染色法检测神经元样PC12细胞NgR蛋白的表达 |
| 2.2.6 实时荧光定量法检测神经元样PC12细胞NgR mRNA的表达 |
| 2.2.7 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 PC12细胞诱导前后的形态观察 |
| 2.3.2 不同浓度谷氨酸对神经元样PC12细胞存活率的影响 |
| 2.3.3 含药血清干预后神经元样PC12细胞NgR蛋白的表达情况 |
| 2.3.4 含药血清干预后神经元样PC12细胞NgRmRNA的表达情况 |
| 2.4 小结 |
| 第三部分 温肾通督方对脊髓损伤大鼠运动功能及脊髓组织病理结构的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 脊髓损伤大鼠模型的制备及药物干预 |
| 2.2 Basso,Beattie和Bresnahan (BBB)运动量表评分 |
| 2.3 斜板测试 |
| 2.4 高尔基染色观察脊髓损伤大鼠脊髓组织的病理结构 |
| 2.5 透射电镜观察脊髓损伤大鼠神经元的显微结构 |
| 2.6 免疫荧光标记染色法检测神经元的凋亡情况 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 脊髓损伤大鼠运动功能的恢复情况 |
| 3.2 脊髓损伤大鼠脊髓组织的病理结构观察 |
| 3.3 脊髓损伤大鼠神经元的微观结构观察 |
| 3.4 脊髓损伤大鼠神经元的凋亡率分析 |
| 4 小结 |
| 第四部分 温肾通督方通过调控NgR/RhoA/ROCK通路促进脊髓损伤修复的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 脊髓损伤大鼠模型的制备及药物干预 |
| 2.2 免疫荧光染色标记法检测神经元NgR蛋白的表达 |
| 2.3 免疫组化法检测脊髓组织NgR蛋白的表达 |
| 2.4 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NgR、RhoA、ROCK蛋白的表达 |
| 2.5 实时荧光定量法(qPCR)检测NgR、RhoA、ROCK mRNA的表达 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 脊髓损伤大鼠神经元NgR蛋白的表达情况 |
| 3.2 脊髓损伤大鼠脊髓组织NgR、RhoA、 ROCK蛋白的表达情况 |
| 3.3 脊髓损伤大鼠脊髓组织NgR、RhoA、ROCK mRNA的表达情况 |
| 4 小结 |
| 第五部分 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词 |
| 脊髓损伤后神经源性肠道功能障碍发生机制及诊疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 立题依据 |
| 1.SSCI发病机理及对BSCB水代谢机制的研究 |
| 1.1 SSCI的研究现状 |
| 1.2 中医对SSCI的认识 |
| 1.2.1 病因病机 |
| 1.2.2 治法治则 |
| 2.中医治疗SCI |
| 2.1 针灸治疗SCI |
| 2.2 中药治疗SSCI |
| 2.3 康复训练治疗SCI |
| 2.4 中医药调控基因表达治疗SSCI |
| 第二部分 实验研究 |
| 技术路线图 |
| 实验一 陇中消肿止痛合剂对SSCI的保护作用 |
| 1 实验对象及方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂及实验设备 |
| 1.3 实验模型建立 |
| 1.4 术后护理 |
| 1.5 评判标准 |
| 1.5.1 模型评判标准 |
| 1.5.2 脊髓的提取 |
| 1.5.3 脊髓含水量的测定 |
| 1.5.4 BSCB完整性检测 |
| 2.统计分析 |
| 3.研究结果 |
| 3.1 治疗前后7 组SD大鼠BBB评分比较 |
| 3.2 干湿法测定脊髓含水量比较 |
| 3.3 BSCB完整性检测 |
| 实验二 陇中消肿止痛合剂对于lncRNAMALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达的影响 |
| 1.实验对象及方法 |
| 1.1 RT-PCR检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4在脊髓组织中的表达实验步骤 |
| 1.2 蛋白质印迹法检测脊髓组织AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 1.3 HE及免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达实验步骤 |
| 2.结果 |
| 2.1 RT-PCR检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4在脊髓组织中的表达 |
| 2.1.1 p38MAPK在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.2 ERK在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.3 MALAT1 在脊髓组织的表达量 |
| 2.1.4 AQP-4在脊髓组织的表达量 |
| 2.2 WB技术检测ERK/p38MAPK-AQP-4在脊髓组织表达 |
| 2.2.1 ERK在脊髓组织中相对表达量 |
| 2.2.2 p38MAKE在脊髓组织相对表达量 |
| 2.2.3 AQP-4脊髓组织相对表达量 |
| 3. |
| 3.1 HE染色及免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2 免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2.1 免疫组织化学染色检测p38MAPK蛋白表达 |
| 3.2.2 免疫组织化学染色检测ERK蛋白表达 |
| 3.2.3 免疫组织化学染色检测AQP-4 蛋白表达 |
| 第三部分 讨论 |
| 1.陇中消肿止痛合剂的组方分析 |
| 2.阳性对照药物的研究 |
| 3.研究结果分析 |
| 3.1 对于SD大鼠脊髓损伤模型给药后BBB评分结果分析 |
| 3.1.1 陇中消肿止痛合剂与模型组比较 |
| 3.1.2 陇中消肿止痛合剂高、中、低与七叶皂苷钠组BBB评分比较结果分析 |
| 3.1.3 陇中消肿止痛合剂组内比较 |
| 3.2 干湿法测定脊髓含水量数据比较 |
| 3.3 BSCB完整性检测数据比较 |
| 3.4 陇中消肿止痛合剂对于lncRNAMALAT1-ERK/p38MAPK-AQP-4轴表达的影响实验结果分析 |
| 3.4.1 RT-PCR技术检测lncRNAMALAT1、ERK、p38MAPK、AQP-4 在脊髓组织中的表达 |
| 3.4.2 Western Blot技术检测ERK、p38MAPK、AQP-4 在脊髓组织中的表达 |
| 3.5 HE染色 |
| 3.6 免疫组织化学染色检测AQP-4、ERK、p38MAPK蛋白表达 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 继发性脊髓损伤中的发生机制及相关分子生物学机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录1 攻读硕士期间的成果 |
| 附录2 BBB评分(大鼠脊髓损伤)评分标准 |
（9）针刺配合雷火灸治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效观察（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 资料与方法 |
| 1 研究资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 脱落和剔除标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 课题器械与药品 |
| 2.3 治疗方法 |
| 3 不良反应处理方案 |
| 4 观察指标 |
| 4.1 中医症状积分 |
| 4.2 膀胱残余尿量 |
| 4.3 最大尿流率 |
| 4.4 生活舒适度评分 |
| 5 疗程观测时间 |
| 6 疗效评定标准 |
| 7 统计学数据分析 |
| 研究结果 |
| 1 研究病例完成情况 |
| 2 基线资料比较 |
| 3 观察指标比较 |
| 3.1 中医症状积分比较 |
| 3.2 残余尿量比较 |
| 3.3 最大尿流率比较 |
| 3.4 生活舒适度评分比较 |
| 4 临床疗效比较 |
| 5 不良反应比较 |
| 讨论与分析 |
| 1 现代医学认识 |
| 1.1 NB的定义 |
| 1.2 病理机制 |
| 1.3 NB的病因 |
| 1.4 现代医学治疗方法 |
| 2 传统医学认识 |
| 2.1 病名认识 |
| 2.2 病因病机 |
| 2.3 治疗方法 |
| 3 针刺疗法选择依据 |
| 4 雷火灸疗法选择依据 |
| 5 证型选择依据 |
| 6 穴位选择依据 |
| 6.1 文献记载的选穴规律 |
| 6.2 本课题选穴 |
| 6.3 穴位属性 |
| 7 基础药物选择依据 |
| 8 间歇性导尿选择依据 |
| 9 研究结果分析 |
| 9.1 病例完成情况及基线情况分析 |
| 9.2 中医症状积分结果分析 |
| 9.3 膀胱残余尿量分析 |
| 9.4 最大尿流率分析 |
| 9.5 生活舒适度评分分析 |
| 9.6 临床疗效分析 |
| 10 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 传统医学对NB的研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）针刺治疗脊髓损伤研究进展（论文提纲范文）
| 1 选穴规律 |
| 1.1 俞募配穴 |
| 1.2 背部取穴 |
| 1.3 八髎穴 |
| 1.4 远近配穴 |
| 1.5 辨证选穴 |
| 2 针刺方法 |
| 2.1 电针 |
| 2.2 芒针 |
| 2.3 耳针 |
| 2.4 温针 |
| 3 针刺手法 |
| 3.1 进针手法 |
| 3.2 单式补泻 |
| 3.3 复式补泻 |
| 4 总结 |
四、康复治疗脊髓损伤功能恢复的疗效观察（论文参考文献）
- [1]加味龙芪强肌饮对脊髓型颈椎病术后残余神经症状改善的疗效观察[D]. 张彬. 广州中医药大学, 2021
- [2]基于数据挖掘技术针刺治疗不完全性脊髓损伤功能障碍临床疗效评价研究[D]. 朱世婷. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [3]刘志顺主任电针治疗下运动神经源性排尿困难病例分析及经验总结[D]. 王苑璇. 北京中医药大学, 2021(08)
- [4]通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究[D]. 吴子健. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]基于Meta分析和网络药理学探讨补阳还五汤治疗脊髓损伤的疗效和机制[D]. 张刘波. 北京中医药大学, 2021(08)
- [6]ADSCs通过调控神经细胞TGF-β1/Smad/PLOD2信号通路修复脊髓损伤的机制研究[D]. 李芳. 山东大学, 2021(11)
- [7]基于NgR/RhoA/ROCK通路探究温肾通督方促进脊髓损伤修复的机制[D]. 吴承杰. 南京中医药大学, 2021(01)
- [8]陇中消肿止痛合剂对继发性脊髓损伤的保护作用及LncRNAMALAT1-ERKp38MAPK-AQP4轴的表达[D]. 杜凯然. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [9]针刺配合雷火灸治疗肾阳虚型神经源性膀胱的临床疗效观察[D]. 刘凡. 福建中医药大学, 2020(04)
- [10]针刺治疗脊髓损伤研究进展[J]. 王舒鹤,樊晓靖,吴雷,肖震心,徐家淳. 辽宁中医杂志, 2021(02)