一、脑细胞可转变为血细胞（论文文献综述）
周易[1]（2020）在《小分子化合物组合诱导造血重编程以及造血干细胞的体外扩增》文中进行了进一步梳理造血干细胞是目前临床上应用最广泛的组织特异性干细胞,造血干细胞移植是治疗许多恶性血液系统疾病的终末手段。然而供体短缺却极大的限制造血干细胞的临床应用,成为目前造血干细胞临床应用需要解决的关键问题。通过造血干细胞体外扩增和细胞重编程技术,为获得造血干细胞提供了两条途径,其中通过重编程患者的体细胞为造血干细胞,有望获得自体同基因型造血干细胞,具有降低移植时自身免疫排斥的风险的优势。近年来,过表达转录因子介导的造血干细胞扩增以及重编程获得了长足的发展。然而,转录因子介导的重编程以及扩增依赖于病毒载体的介导和外源基因的插入,因此在临床的转化上存在安全隐患。本课题使用小分子化合物进行造血干细胞的体外扩增以及造血重编程的诱导。首先使用流式分选从Scl-t TA/Teto-H2B-GFP转基因小鼠中分离GFP-骨髓细胞和脾脏细胞,分别使用两种不同小分子化合物组合激活Scl基因的表达,使GFP-细胞重编程为GFP+细胞。使用流式细胞术检测GFP+细胞中造血干祖细胞表面标志物的表达,发现诱导产生的GFP+细胞中包含Lineage阴性、Sca1阳性、C-kit（CD117）阳性的细胞群体（简称LSK细胞）。进一步通过克隆形成实验以及转录组测序分析,提示小分子化合物组合1（CC1）诱导产生的GFP+细胞具备体外克隆形成功能,并且其转录组接近原代造血干祖细胞。我们进一步通过流式分选分离了骨髓中Gr1+、Mac1+、CD19+、CD3+的细胞,经过CC1体外诱导后进行造血干祖细胞表面标志物的检测。检测发现髓系来源的Gr1+细胞以及CD11b+细胞诱导后可产生LSK细胞,LSK细胞中还包含了一群具有长程造血干细胞表型的细胞。淋系中CD3+细胞也可被诱导产生LSK细胞,而CD19+细胞被CC1处理后未能产生LSK细胞。克隆形成实验结果显示CD11b+细胞以及CD3+细胞诱导产生的LSK细胞具备多系造血克隆形成的能力。我们进一步检测该小分子化合物组合是否具备扩增造血干细胞的能力,因此我们分离了骨髓LSK细胞,在加入CC1的培养基中培养了七天。经过七天的处理后,和对照组相比,CC1处理显着地增加了LSK细胞的比例以及绝对数。更重要的是,CC1组扩增七天后的LSK细胞具备体外多系造血克隆形成能力,竞争性移植和非竞争性移植的体内结果都明显优于对照组,甚至优于原代分选的LSK细胞组。最后,我们将骨髓细胞在加入CC1的培养基中培养7天,在第0、1、3、5、7天分别取样进行单细胞转录组测序,通过谱系追踪的方式分析了各系细胞重编程到造血干祖细胞样细胞的比例,进一步证实了CC1小分子化合物组合具体扩增造血干细胞以及重编程各系已分化血细胞到造血干祖细胞样细胞的双重作用。因此,本研究结果为解决造血干细胞的来源问题提供了一种潜在的方法。
沈东辉[2]（2019）在《NF-κB调控巨噬细胞亚型在实验性自身免疫性神经炎中的作用及其机制研究》文中研究表明吉兰巴雷综合征（GBS）是一种常见的以周围神经脱髓鞘为主要病理特点的自身免疫性疾病,急性对称性弛缓性肢体瘫痪为临床表现。实验性自身免疫性神经炎（EAN）是GBS经典的动物模型,广泛应用于GBS的基础研究。目前GBS治疗包括静脉注射免疫球蛋白或血浆置换,但部分患者无效。巨噬细胞作为重要的免疫细胞,在吉兰巴雷综合征及实验性自身免疫性神经炎的病机制中起重要的作用。巨噬细胞可分为促炎型M1巨噬细胞和抗炎型M2巨噬细胞。M1型巨噬细胞分泌促炎型细胞因子,导致周围神经系统损伤。M2型巨噬细胞发挥抗炎和促进组织修复的作用。研究发现GBS急性期促炎型M1巨噬细胞占主导地位,神经病理研究发现,在EAN小鼠坐骨神经内M1型巨噬细胞增多。而靶器官中M2型巨噬细胞增多有利于EAN症状的缓解。尽管目前一些实验已经证实诱导M2型巨噬细胞可改善EAN的症状,但EAN不同时期巨噬细胞的比例变化尚未完全明确。因此,为了深入探究巨噬细胞对EAN的作用机制,我们进行以下三部分实验。第一部分EAN不同时期巨噬细胞比例及细胞因子变化目的:探究EAN不同发病时期脾脏巨噬细胞、M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞比例变化,明确巨噬细胞在EAN发病过程中的作用。方法:（1）构建EAN模型;（2）观察不同发病时期巨噬细胞比例变化;（3）检测不同发病时期细胞因子;（4）检测丙球治疗前后GBS患者外周血中细胞因子。结果:（1）P0180-199和完全弗氏佐剂（CFA）混合乳液可在C57BL/6小鼠上构建EAN小鼠模型;（2）EAN发病初期脾脏中巨噬细胞比例明显升高,其中M1型巨噬细胞增高明显,随着疾病的发展M1型巨噬细胞比例逐渐降低,M2型巨噬细胞比例逐渐增高。（3）EAN发病初期TNF-α,IL-1β和IL-17A等促炎性细胞因子表达明显升高,至高峰期达最高,而抗炎性细胞因子如IL-4和IL-10随疾病发展浓度逐渐升高。（4）GBS患者IL-1β、TNF-α和IL-17A表达显着升高,TNF-α表达水平与GBS严重程度相关。丙球治疗可以降低促炎型细胞因子的表达,提高IL-4的表达,对IL-10影响较小。结论:在EAN发病初期M1型巨噬细胞通过分泌促炎性细胞因子起促炎作用,进入高峰期M2型巨噬细胞抑制促炎性细胞因子发挥抗炎作用。第二部分M2巨噬细胞回输对EAN的治疗作用及其机制目的:探究体外诱导成熟的M2巨噬细胞回输对EAN的治疗作用及其可能的机制。方法:（1）体外诱导M2型巨噬细胞;（2）观察M2型巨噬细胞回输对EAN的治疗作用;（3）检测高峰期脾脏巨噬细胞比例;（4）检测高峰期细胞因子表达水平;（5）检测NF-κB蛋白表达水平。结果:（1）IL-4和M-CSF可诱导骨髓干细胞为成熟的M2型巨噬细胞;（2）M2型巨噬细胞回输可缓解EAN的临床症状。（3）M2型巨噬细胞回输降低EAN高峰期M1细胞比例;降低促炎性细胞因子的表达;抑制NF-κBp65磷酸化。结论:M2型巨噬细胞回输可能通过抑制NF-κB信号通路从而降低M1/M2的比例和促炎性细胞因子的表达来缓解EAN的临床症状。第三部分NF-κB抑制剂对EAN的作用及其机制目的:探究NF-κB抑制剂对EAN的预防及治疗作用及其可能的机制方法:（1）EAN发病前及发病后腹腔注射NF-κB抑制剂,观察对EAN症状的影响;（2）检测NF-κB蛋白表达水平;（3）检测脾脏巨噬细胞比例;（4）NF-κB抑制剂对M1/M2巨噬细胞增殖的影响（5）检测外周血细胞因子表达水平。结果:（1）NF-κB抑制剂预防组与治疗组都能减轻EAN临床症状,缩短症状持续时间,但预防组效果更好;（2）NF-κB抑制剂能够抑制NF-κBp65磷酸化;（3）NF-κB抑制剂降低脾脏M1型巨噬细胞比例;（4）NF-κB抑制剂能抑制体外培养的M1型巨噬细胞;（5）NF-κB抑制剂抑制促炎性细胞因子。结论:NF-κB抑制剂能通过抑制M1型巨噬细胞比例和促炎性细胞因子释放缓解EAN症状,预防性NF-κB抑制剂效果更明显。
戎宏涛[3]（2019）在《脑源性微粒激活小胶质细胞在脑外伤后神经炎症反应中作用的研究》文中研究指明研究目的:创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）不是单一的病理、生理过程,主要包括原发性和继发性损伤过程,共同导致了神经结构的破坏和功能的受损。继发性神经炎症反应是TBI后重要的继发性病理生理反应,在继发性脑损伤中发挥了重要作用。小胶质细胞作为中枢神经最重要的固有免疫细胞和主要的效应细胞,在TBI后继发性炎症反应中发挥关键性作用。更好的理解小胶质细胞表型转变的调节机制可以提高我们对TBI后神经损伤及修复的认识,并为TBI的新治疗策略的开发提供机会。但小胶质细胞激活、分化的分子调控机制极为复杂,具体机制尚不清楚。细胞微粒（Microparticles,MPs）是一类介于0.1到1?μm大小的小细胞囊泡,它们含有多种生物活性分子,包括蛋白质、生物脂类和核酸,穿梭于细胞间发挥递质作用,是导致机体产生相关炎症反应的重要介质。由于脑组织细胞膜的磷脂结构较体内其它细胞更高,因此脑组织来源的MPs（Brain-derived Microparticles,BDMPs）的促炎活性可能比血细胞源性的MPs要更高。然而BDMPs的分子生物学特点尚不十分清楚,未见其在TBI后的继发性炎症反应中作用的相关研究报道。因此,本课题借助小鼠脑皮层下注射模型及体外小胶质细胞,观察BDMPs对小胶质细胞激活的影响及相关炎性反应,探索BDMPs通过介导小胶质细胞在TBI后继发性炎症反应中的作用及其机制。研究方法（1）建立小鼠液压打击脑外伤（TBI）模型,使用酶消化梯度离心法从TBI后脑损伤区提取BDMPs,应用应用流式细胞术对TBI后脑损伤区BDMPs进行表型鉴定以及成分分析;（2）借助小鼠大脑皮层下注射模型,免疫荧光染色观察小鼠脑注射区的小胶质细胞激活情况,采用免疫组化染色观察其激活,增殖以及分化（M1/M2）情况,应用RT-PCR法检测组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-l0及单核细胞趋化因子-1（MCP-1）的RNA含量;（3）将BDMPs与小胶质细胞（BV2）中共培养,应用离子电导显微镜动态观察小胶质细胞的激活和形变情况,应用western-blot和ELISA技术检测小胶质细胞中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-l0及单核细胞趋化因子（MCP-1/CCL-2）的含量变化。（4）借助小鼠大脑皮层下注射模型,通过伊文思蓝注射观察血脑屏障破坏情况,干湿重法对比脑水肿程度。体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）模拟脑血管屏障,加入BDMPs干预,观察HUVEC屏障的通透性变化。研究结果（1）BDMPs表达数量不等的生物标记物（NSE和GFAP）,进一步发现BDMPs是由多细胞源性MPs构成,以神经元性及胶质细胞源性MPs为主,还含有血细胞及内皮细胞来源MPs;（2）小鼠脑皮层下注射区的小胶质细胞被BDMPs广泛激活,形态由分支样向球形转化,并出现M1/M2表型的动态分化。PCR结果显示脑组织中炎症因子IL-1β,TNF-a,IL-6,单核细胞趋化因子CCL2和NOS2的mRNA增多;（3）体外实验中小胶质细胞与BDMPs共培养52分钟后开始发生形变,104分钟后完全激活形变。3小时后,小胶质细胞结合并吞噬BDMPs,细胞裂解液中IL-6,TNF-α和MCP-1水平显着升高,上清液ELISA实验提示TNF-α和MCP-1水平增高,但IL-10水平均无显着变化;（4）BDMPs注射后小鼠脑组织表面可见明显水肿,依文思蓝渗漏现象也比较严重。体外加入BDMPs悬液时,HUVEC屏障对FITC-Dextran的渗漏显着增加;研究结论（1）BDMPs可以结合并介导小胶质细胞的激活、形变以及分化,促进TNF-α、IL-1β、IL-6等多种炎性因子以及单核细胞趋化因子MCP-1/CCL-2高表达,在TBI后的继发性炎症反应中发挥促炎作用。（2）BDMPs可以增加BBB的通透性,加重脑水肿。
展延栋[4]（2019）在《斑马鱼尾动脉经内皮造血转化产生造血干细胞及前体细胞》文中研究说明造血干细胞（HSC）是血液系统各细胞组分的共同祖细胞,它通过不断增殖和有序分化,形成了整个血液组分,同时通过持续的自我更新维持着造血干细胞和整个血液谱系的稳态。造血干细胞形成、维持、增殖以及分化的缺陷会导致多种血液系统及免疫系统的疾病,如白血病、贫血、类风湿和红斑狼疮等。因此,造血干细胞的正常形成对于机体的健康起着至关重要的作用。与此同时,治疗血液系统疾病的一个重要方法是造血干细胞移植,对于造血干细胞的形成和调控机制需深入认知,体外诱导造血干细胞的生成及扩增是实现移植治疗的先决条件。所以,关于造血干细胞的相关研究,尤其是造血干细胞的起源过程、谱系分化和细胞形成的分子调控机制的研究一直以来都是生命科学和医学领域的热点。通过对小鼠等模式动物进行深入的研究,研究者发现原始造血发生在卵黄囊,这些血液细胞短暂存在并主要分化为原始红系和髓系祖细胞。随着胚胎的发育定向造血出现在AGM中,因为最早检测到造血干细胞的出现而被认为是造血干细胞产生的位置,其中一部分位于主动脉腹侧壁的血管内皮细胞会特化为生血内皮细胞并在特定的胚胎发育时间窗,通过内皮-造血转化过程（EHT）分化为造血干细胞。近年来通过检测造血干细胞的标记分子,谱系追踪和移植等一系列实验,科研工作者发现胚胎期小鼠的脑血管也能够原位产生造血干细胞,且这群造血干细胞的发生几乎与AGM来源同步。在胚胎阶段除了AGM区的生血内皮细胞外,其他部位的胚胎细胞能够重建成体小鼠的造血系统,这促使科研工作者怀疑在胚胎发育的特定时间段是否还存在着其他的原位产生造血干细胞的器官或组织。在对造血干细胞的发生过程和调控机制的认知中,斑马鱼扮演了不可替代的重要角色。通过对斑马鱼活体实时成像研究者直接证实了造血干细胞通过内皮-造血转化过程的方式源于背侧主动脉（DA）腹侧壁的生血内皮细胞,后会进一步迁移到后部血岛组织（caudal hematopoietic tissue,CHT）进行增殖和分化,最终这些造血干细胞会迁移到胸腺和肾脏（与高等动物的骨髓功能类似）,为整个斑马鱼一生血液系统的维持提供着源源不断的支持。CHT的功能和小鼠的胎肝相似,造血干细胞迁移到CHT后与微环境的各组成细胞之间相互作用的动态过程,是造血干细胞进一步增殖和分化的区域。但是CHT是否可以原位产生造血干细胞是从没有被研究的全新课题。本课题首先通过活体实时成像,发现在斑马鱼CHT的尾部主动脉（caudal dorsal artery,CDA）腹侧壁一些kdrl-EGFP+细胞会出现DA区类似的EHT过程,这些细胞最终会被标记HSPCs的CD41-GFP、cmyb-GFP和runx1-GFP所标记,偶尔可以观察到kdrl-EGFP+细胞出芽后会分裂。我们利用共聚焦405激发波长对转基因品系Tg（kdrl:Dendra2）进行光转化,标记部分尾部动脉腹侧壁,之后可看到造血区域如CHT,胸腺和肾脏都存在被标记的细胞。对12个胚胎斑马鱼CDA进行活体实时成像观察,其中大约在DA的EHT过程之后60 hpf（hours post fertilization）左右,CDA与尾部静脉分开,CHT的EHT过程开始,一直持续到156 hpf。CDA大部分的EHT过程发生在60 hpf-84 hpf,随时间的推移,EHT频率慢慢下降。不同时间段60-84,84-108,108-132,132-156和156-180 hpf EHT的频率（不同时间段四个体节的出芽频率）分别是5.60±0.68,3.40±0.81,1.50±0.40,0.80±0.58和0.0±0.0。在统计的15小时中,每四个体节CDA出芽频率（3.57±0.57）低于DA出芽频率（5.86±0.26）。因此,CDA在时空上独立于DA,通过EHT过程产生HSPCs。为了进一步探索CDA产生的HSPCs,我们利用Tg（CD41:GFP;coro1a:Ds Red）,Tg（kdrl:mem Cherry;coro1a:Kaede）追踪DA和CDA刚产生的HSPCs的行为特征。刚产生的细胞中含有coro1a-Ds Red信号和CD41-GFP弱信号,并且coro1a-Kaede信号也在刚出芽的kdrl-mem Cherry+细胞中表达,这说明我们可以用coro1a-Kaede光转化来标记DA和CDA刚产生的HSPCs。结果显示,CDA出芽产生的coro1a-Kaede细胞大约30%-40%很快分裂成两个子细胞,12小时内会进行第二次分裂,随后一些细胞会进入血管和血液循环,另一部分细胞会保持原位置进行第三次分裂。其中,偶尔能观察到一些细胞进入血液循环后会再次进入CHT微环境。CDA产生的细胞在细胞行为学上很像HSPCs的行为,形态上成球形分裂成前体细胞,体积分裂后会变小。相比之下,CDA产生的coro1a-Kaede+细胞一大半经过一次分裂会产生髓样的前体细胞,细胞形态呈变形虫形态而且变大。经过10个小时,这些髓样前体细胞会分裂成3-4个子细胞,迁移到CHT微环境中呈现分支装表型,一些细胞会随血管迁出CHT并迁移至皮肤,呈现典型的髓系细胞的行为。大约有2%-5%被标记的细胞在出芽时会破碎死掉。通过光转化标记DA和CDA出芽的coro1a-Kaede+细胞,经过60小时的追踪,这些细胞行为学的追踪表明CDA产生的HSPCs存在着异质性。由于DA和CDA产生的HSPCs在时空上和迁移倾向上有所不同,我们探讨其中潜在的调控分子。Runx1对于DA的EHT过程来说是必不可少的转录因子,那Runx1是如何影响CDA区的EHT过程的呢?我们利用斑马鱼突变体runx1w84x/w84xTg（kdrl:EGFP）,发现CDA无法完成EHT过程,有些细胞会有出芽的趋势,但是最后都收缩回去。这说明CDA和DA一样,EHT过程都需要转录因此Runx1来调控。在造血过程中,血流对血管剪切应力促进了造血干细胞的产生。我们利用无血流的tnnt2aswu77斑马鱼突变体,发现CDA的EHT过程被抑制,而且大部分HSPCs向CDA血管内侧出芽,而DA向腹侧出芽产生的HSPCs。上述结果表明,从DA到CDA连续发生的EHT过程,为整个动脉都有造血能力提供了证据。为了进一步探究动脉不同时间段对成体斑马鱼造血的贡献情况,我们利用Tg（kdrl:Cre ERT2;actb2:lox P-Ds Red-stop-lox P-EGFP）s928转基因系统,在五个时间点20 hpf,60 hpf,72 hpf,120 hpf和9 dpf（days post fertilization）对斑马鱼胚胎进行4-OHT（4-Hydroxytamoxifen）处理,并检测出4-OHT只诱导血管及血液细胞Cre重组酶活性。对4个月零后的成年斑马鱼的不同组织区域进行切片免疫荧光染色。利用GFP和Lcp1两个抗体共同标记出早期胚胎来源的造血细胞,20 hpf处理组中,成年斑马鱼造血组织中GFP阳性细胞占Lcp1+细胞的比例最高,肾脏中占比76%,胸腺中占比89%,随着处理时间的推移,GFP+Lcp1+细胞比例下降。相比于20 hpf处理组,60 hpf处理组中GFP+Lcp1+细胞在胸腺比例下降的幅度要比肾脏中的轻微一些,这暗示着这一时段动脉造血对成年胸腺淋巴细胞贡献较大。与此同时,大多数成年斑马鱼中脑部小胶质细胞由kdrl+细胞分化而来,这支持了定向造血来源地小胶质细胞的观点。之后,我们在Tg（kdrl:Cre ERT2;coro1a:lox P-Ds Redx-stop-lox P-GFP）s928转基因系统里用了相同处理方法,得出了上述相似的结论。因此,随着时间的推移,kdrl+动脉内皮细胞通过EHT过程对成年造血谱系的贡献能力逐渐减弱。根据我们的研究表明,在斑马鱼中位于CHT区的CDA作为新发现的造血位点,与AGM区的DA类似,具有通过EHT过程产生HSPCs的能力,并且产生的HSPCs迁移至不同造血组织器官。我们的发现扩展了斑马鱼造血发育过程的理论研究。
王玉玲[5]（2018）在《Tregs、Fas/FasL系统在帕金森病多巴胺能神经元免疫机制研究》文中指出目的:1)探讨血常规检查值或血细胞比值与帕金森病（PD）风险或发展之间的关系;2)通过检测研新疆PD患者外周血中CD3+%、CD4+%、CD8+%、CD19+%、CD56+%、Fas（%）,Tregs细胞的变化,为神经免疫与PD发病机制关系的研究提供依据;3)研究死亡受体（Fas）和Tregs细胞在帕金森病（PD）动物模型的表达,探讨Fas和Tregs在PD发病机制中的作用。方法:1)回顾性分析453例PD患者和436例对照者的病历资料。所有患者均于2002年6月至2017年7月期间被诊断。帕金森氏症的发生由改良的Hoehn-Yahr量表进行量化。在患者和对照个体中,回顾血常规检查的值,并计算血细胞比值。调整后,将453名PD患者与436名合并症患者匹配的对照个体进行比较。进行条件logistic回归分析以探讨血液价值或比值与PD风险之间的关系。并进行有序逻辑回归分析以探讨值或比率与PD之间的关系;2)应用荧光染色法测定83例维、汉两民族PD患者外周血中CD3+%、CD4+%、CD8+%、CD19+%、CD56+%、Fas（%）,Tregs细胞,并与100例健康对照组进行比较。并分析不同民族间,不同用药,不同病程及HY评分与各细胞亚群变化的相关性;3)6-羟多巴胺（6-OHDA）造模,美多芭进行治疗,设立正常对照组（n=10）、假手术组（n=10）、PD模型组（n=20）和美多芭干预组（n=20）。观察各组大鼠旋转行为,并进行黑质组织提取。用免疫印迹检测Fas、FasL、FoxP3（Tregs）变化,免疫组化检测Fas、FasL、FoxP3（Tregs）、TH变化。结果:1)453例PD患者中,女性203例,平均年龄63岁;在436名对照组中,214名女性,平均年龄为61岁。淋巴细胞与血小板比值,平均红细胞血红蛋白浓度和血小板的平均水平下降,血小板与红细胞比值和血小板分布宽度的增加与PD。中性粒细胞与淋巴细胞比值升高,中性粒细胞与血小板比值下降与PD发生有关。2)与对照组相比,PD患者外周血中CD3+,CD4+,CD8+T淋巴细胞表达明显下降,B淋巴细胞无明显变化,NK细胞、Fas及Tregs细胞表达上升。维、汉两民族间相比,各淋巴细胞数量均无明显变化。服用美多芭组Fas及Tregs细胞低于未服用组,CD3+T淋巴细胞亚群与PD患者年龄、B细胞亚群与PD患者病程相关,Fas及Tregs细胞与HY评分有一定相关性。3)与正常组相比,模型组TH表达减少,Fas、FasL和Tregs细胞在黑质区域的表达增高（P<0.01）。结论:外周血中淋巴细胞变化与PD相关。PD患者外周血的淋巴细胞、NK细胞及Fas表达水平改变。外周血淋巴细胞亚群的变化和Fas可能有助于评估PD的病情进展。Fas和Tregs细胞在黑质纹状体中的异常表达可能在PD发病机制中起着重要的作用。
涂镇波[6]（2017）在《miR-146b-5p靶向IL-17A抑制急性T淋巴细胞白血病侵袭性的机制研究》文中研究表明研究背景及目的:急性T淋巴细胞白血病（T cell Acute Lymphoblastic Leukemia,T-ALL）是一种恶性血液系统肿瘤,占儿童急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL）病例的10-15%和成人ALL病例的20-25%。T-ALL的发生与发展是一个涉及细胞增殖以及侵袭与浸润的多步骤过程。目前越来越多的研究发现miRNA在T-ALL的发生发展中发挥重要作用。本课题旨在筛选T-ALL患者临床样本与对照样本间差异性表达最明显的miRNA,研究此miRNA在T-ALL中的生物学功能并筛选、鉴定其靶基因,深入探讨此miRNA靶基因在T-ALL中的作用及机制。研究内容和方法:利用生物信息学方法筛选GEO数据集中T-ALL与对照样本间差异性表达的miRNA（miR-146b-5p）,并进一步采用实时荧光定量PCR检测miR-146b-5p在T-ALL患者及T-ALL细胞系中的表达水平。在线miRNA靶基因网站（miRanda、miRWalk 和 Targetscan）预测 miR-146b-5p 的潜在靶基因,GeneAnalytics 分析miR-146b-5p潜在靶基因的生物学功能,并分别通过细胞增殖、凋亡、周期、迁移与侵袭实验验证miR-146b-5p的生物学功能。为了进一步缩小靶基因的预测范围,本研究采用四个miRNA靶基因网站（miRanda、miRWalk、Targetscan和 miRDB）预测 miR-146b-5p 的潜在靶基因,并采用实时荧光定量PCR、Western Blot及双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-146b-5p的靶基因IL-17A,通过细胞增殖及Transwell实验探究miR-146b-5p的靶基因IL-17A在T-ALL中的作用,悬液芯片检测T-ALL细胞系中IL-17A的表达水平,实时荧光定量PCR和ELISA分别检测T-ALL患者外周血细胞和血清中IL-17A的表达水平,普通RT-PCR和流式细胞术检测T-ALL细胞系和患者中外周血细胞IL-17RA的表达水平。GSEA分析IL-17A在T-ALL中可能参与的生物学过程,实时荧光定量PCR筛选IL-17A介导的T-ALL转移相关分子,Western Blot实验进一步验证转移相关分子,STRING分析IL-17A可能涉及的信号通路,Western Blot实验验证IL-17A对NF-κB信号通路的激活作用,以及验证NF-κB信号通路对转移相关分子MMP9的表达水平的影响。动物实验验证IL-17A对T-ALL细胞系（MOLT-4）的侵袭与浸润能力的影响,流式细胞术检测小鼠外周血、肝和脾组织细胞中CD7阳性细胞的比例（MOLT-4细胞特异性分子标志）,以及检测小鼠肝和脾组织细胞中髓系抑制性细胞（Myeloid-Derived Suppressor Cell,MDSC）的细胞比例,从而验证 IL-17A对MOLT-4细胞的侵袭作用的影响。研究结果:生物信息学结果表明miR-146b-5p为T-ALL细胞（T-ALL患者外周血细胞及T-ALL细胞系）与正常对照者T细胞中的差异性表达miRNA,进一步实验发现T-ALL患者中miR-146b-5p表达水平较正常对照人群明显下降,GeneAnalytics结果显示miR-146b-5p靶基因与基因的转录调控密切相关,肿瘤细胞功能学实验结果表明过表达miR-146b-5p可抑制T-ALL细胞侵袭与浸润。四个在线靶基因预测网站预测到145个miR-146b-5p的靶基因,进一步验证发现IL-17A为miR-146b-5p的靶基因。T-ALL细胞可自分泌IL-17A,同时,T-ALL细胞表达其受体IL-17RA。抑制T-ALL细胞内源性IL-17A的分泌后,外源性IL-17A促进T-ALL细胞的侵袭与浸润能力。GSEA分析发现IL-17A主要通过金属内肽酶发挥促进T-ALL细胞侵袭与浸润的作用,STRING分析发现IL-17A与NF-κB1密切相关。当给予外源性IL-17A处理后,T-ALL细胞中NF-κB信号通路被激活,金属内肽酶相关分子MMP9表达上调,当给予NF-κB的抑制剂PDTC处理后,MMP9的表达水平显着下降。在小鼠尾静脉注射肿瘤细胞模型中,结果提示IL-17A-/-小鼠外周血和肝组织中CD7阳性细胞比例减少,而IL-17A-/-rescue组CD7阳性细胞比例增加,表明IL-17A促进MOLT-4细胞向肝脏侵袭。脾脏中各组CD7阳性细胞比例无明显变化;IL-17A-/-小鼠脾脏组织中MDSC细胞数量最低,提示IL-17A促进MDSC细胞在小鼠脾脏中浸润。结论:1.miR-146b-5p在T-ALL患者及T-ALL细胞系中低表达,过表达miR-146b-5p可抑制T-ALL细胞侵袭与浸润。2.IL-17A 为 miR-146b-5p 的靶基因。3.T-ALL细胞可自分泌IL-17A,同时表达IL-17RA。IL-17A与IL-17RA的相互作用可促进T-ALL细胞的侵袭与浸润。4.IL-17A通过NF-κB信号通路上调MMP9的表达,促进T-ALL细胞发生侵袭与浸润。5.体内实验证实IL-17A促进MOLT-4细胞向肝脏侵袭,IL-17A促进MDSC细胞在小鼠脾脏中浸润。
魏晨曦[7]（2014）在《甲醛在有无苯的作用下致小鼠造血毒性的研究》文中进行了进一步梳理甲醛是一种普遍存在的环境污染物。国际癌症研究中心和美国国家毒理学项目组根据流行病学研究结果,已将甲醛列为人类白血病致病原。然而,甲醛诱发白血病在生物学机制上存在争议,少有令人信服的动物实验报道甲醛可导致白血病或相关疾病。现有的甲醛致动物造血毒性研究几乎仅停留在血液和骨髓这两个层面,并没有深入到造血干/祖细胞水平。本研究从小鼠的血液、造血器官和造血祖细胞三个层面全面评价甲醛致小鼠的造血毒性,并深入研究甲醛是否对造血调控中的部分关键集落刺激因子及受体产生影响,初步探讨甲醛致造血毒性的机制。另外,一些动物实验未发现甲醛有明显的造血毒性。由于动物实验一般只涉及单一暴露因子,而许多其它因素却不可避免地同时在流行病学研究中发挥作用,这可能是甲醛在动物实验研究和流行病学研究中表现出造血毒性不一致的原因所在。基于此点,我们提出甲醛可能作为一种白血病辅助因子,通过与其它某些物质协同作用促进造血毒性或白血病发生的假说。为了验证该假说,本研究以已知的白血病致病原——苯建立小鼠造血毒性模型,在此模型的基础上研究甲醛在有无苯的作用下对小鼠造血毒性的差异,为甲醛与白血病关系的研究提供新的有力证据。研究结果显示,甲醛单独作用（3mg/m3,8hr/天,5天/周,2周）不引起BALB/c小鼠外周血全血细胞数量（CBC）显着变化,但与苯（150mg/kgbw/day,5天/周,2周）联合作用时却导致外周血各类白细胞数和血红蛋白含量急剧减少,且与苯单独染毒（BZ）组相比,总白细胞、淋巴细胞、单核细胞和粒细胞数分别下降了 59.0%（p<0.01）、55.5%（p<0.01）、59.7%（p>0.05）和66.0%（p<0.05）。BZ组、甲醛单独染毒（FA）组和苯与甲醛联合染毒（BZ+FA）组小鼠骨髓有核细胞数均急剧减少（与对照组相比,p<0.01）,且BZ+FA组减少最显着。各染毒组骨髓有核细胞活性氧（ROS）,BZ组骨髓有核细胞的丙二醛（MDA）含量、DNA-蛋白质交联（DPC）系数,以及FA组脾脏有核细胞ROS水平,与对照组相比都大幅升高（p<0.05,pp<0.01）,但脾脏有核细胞MDA含量仅BZ+FA组上升显着（p<0.05）。BZ+FA组骨髓有核细胞ROS水平和DPC含量比BZ组和FA组都高（pp<0.01）。甲醛单独作用未导致小鼠骨髓有核细胞显着凋亡,而苯单独作用以及苯与甲醛联合作用导致骨髓有核细胞凋亡程度明显（与对照组比,p<0.05）,但两组间无统计学差异。甲醛和苯都能显着上调脾脏有核细胞cleaved caspase-3表达量（与对照组比,p<0.05）,诱导细胞凋亡。为了深入阐明苯或/和甲醛导致外周血CBC和骨髓有核细胞减少的原因,本研究检测了小鼠髓系祖细胞集落形成情况。结果显示各染毒组粒细胞-单核细胞共同前体集落形成单位（CFU-GM）和爆发样红系前体形成单位（BFU-E）数量与对照组相比都急剧降低（p<0.01）,且BZ+FA组髓系祖细胞集落数下降最明显,其CFU-GM集落与BZ组和FA相比,分别减少了18.3%（p<0.05）和 22.1%（p<0.01）;其BFU-E集落与 BZ 组和 FA 相比,分别减少了 33.3%（p>0.05）和49.2%（p<0.01）。各染毒组CFU-GM细胞ROS和凋亡水平均高于对照组（p<0.05,p<0.01）,细胞DPC含量仅BZ+FA组有所上升（p<0.01）。BZ组BFU-E细胞ROS和DPC含量高于对照组（p<0.05,p<0.01）,其余各组变化不大。BZ组和BZ+FA组脾脏有核细胞上清中集落刺激因子IL-3和GM-CSF含量都明显下降（与对照组相比,pp<0.05,p<0.01）,且BZ+FA组下降得更显着（与BZ组相比,p<0.01）,而FA组这两种集落刺激因子含量无显着改变。与对照组相比,BZ组和BZ+FA组EPOmRNA以及髓系祖细胞IL-3Rα蛋白表达明显上调（p<0.05,p<0.01）,FA组和BZ+FA组髓系祖细胞GM-CSFRα和EPOR表达严重下调（p<0.01）。为了进一步评价甲醛致白血病的风险,在小鼠末次染毒后设置1周的恢复期,观察各组小鼠造血功能的恢复情况。结果表明:经过1周的恢复期,各组小鼠造血功能有较大程度的恢复。外周血细胞除了 BZ+FA组的单核细胞数目和红细胞平均体积与对照相比有变化（p<0.05）,所有染毒组其余各类血细胞都与对照组无显着差异。各染毒组骨髓和脾脏有核细胞ROS、DPC、MDA以及凋亡水平都与对照组持平。H&E染色显示骨髓恢复良好,但脾脏仍有一定程度的病变。髓系祖细胞的增殖能力也得到了恢复,BZ组、FA组和BZ+FA组CFU-GM与BFU-E集落数都不再减少,相反,CFU-GM集落数还有增加的趋势,与对照组相比,分别增加了 12.3%（p>0.05）、10.7%（p>0.05）和21.7%（p<0.01）,这与小鼠骨髓c-Kit免疫组化染色显示的结果基本一致。各染毒组IL-3生成量以及CFU-GM细胞ROS水平、DPC含量、凋亡程度、IL-3Rα和GM-CSFRα表达量与对照组相比都无显着差异,BFU-E细胞DPC和凋亡水平也与对照组持平。但FA组和BZ+FA组GM-CSF生成量比对照组低（p<0.05）,各染毒组BFU-E细胞内ROS处于较高水平（与对照组相比,p0.05,pp<0.01）,其中BZ+FA组最高（与BZ组相比,p<0.05）。各染毒组EPOR的表达量依旧下调（与对照组相比,p<0.05,p<0.01）。综上所述,甲醛的造血毒性是明显的,可使骨髓和脾脏发生病变、造成氧化应激、下调髓系祖细胞GM-CSFRα和EPOR的表达量,从而减少CFU-GM、BFU-E集落数和骨髓有核细胞数,但未引起外周血CBC的显着减少。在白血病致病原苯存在的情况下,甲醛可加剧苯导致的造血毒性,不仅使骨髓和和脾脏发生严重的病变、氧化损伤、DNA损伤以及细胞凋亡,急剧降低IL-3和GM-CSF的生成量,下调GM-CSFRα和EPOR的表达量,从而造成CFU-GM、BFU-E集落数和骨髓有核细胞数的大幅减少,同时还导致外周血各类白细胞数和血红蛋白含量极显着降低。说明甲醛与苯对小鼠的造血毒性具有协同作用,甲醛可促进造血毒性的发生。染毒的小鼠经过1周的恢复期后,虽然造血功能得到很大程度的恢复,但甲醛似乎仍显示出一定的造血毒性风险。无论是在有无苯的条件下,甲醛均显着降低小鼠GM-CSF的生成量和EPOR的表达量,然而髓系祖细胞集落形成数并未减少,特别是苯与甲醛联合作用时CFU-GM集落还显着增加。说明此时的髓系祖细胞已能响应微量的集落刺激因子进行快速增殖,这可能意味着正常造血干/祖细胞有向白血病干/祖细胞转变的风险。因此,甲醛潜在的造血毒性不容忽视。
翟翔[8]（2012）在《昆虫血细胞通过表达cathepsin L参与脂肪体的降解》文中指出研究背景及研究意义全变态昆虫的一生要经历多次蜕皮,包括幼虫各龄期之间的蜕皮、末龄幼虫到蛹的变态蜕皮、以及蛹到成虫的羽化蜕皮。昆虫蜕皮和变态主要受两种激素的调控：蜕皮激素（20-hydroxyecdysone,20E）和保幼激素（Juvenile hormone, JH）。这两种激素相互作用,共同决定着昆虫不同发育阶段生理活动和形态变化。在没有JH存在的情况下,20E启动变态过程。在变态过程中,幼虫的组织发生降解,而成虫的组织逐渐形成。在幼虫组织降解过程中发现了血细胞的参与,但血细胞如何影响组织降解却并不清楚。阐明血细胞与变态期幼虫组织水解的关系,并探索血细胞中特异表达的蛋白cathepsin L的功能,可以阐明血细胞在变态期组织重建中的作用及机理。研究进展昆虫的血细胞被认为主要参与免疫反应,包括在病原微生物周围形成包囊和结节以及吞噬病原微生物,清除外源物质,然而也有报道表明血细胞可以在昆虫的生长发育以及变态过程的组织重建中发挥重要作用。我们实验室前期研究也发现组织蛋白酶L在血细胞中特异表达,并在变态时期高表达,受蜕皮激素上调。在棉铃虫幼虫进行RNA干扰沉默cathepsin L之后,导致循环的颗粒细胞减少,脂肪体中没有颗粒细胞进入而不能降解,形成不正常的嵌合蛹,提示20E促进cathepsin L在血细胞中表达从而参与组织解体。存在的科学问题虽然前人研究已经发现了20E促进cathepsin L表达,决定颗粒细胞数量、进而决定脂肪体降解,但cathepsin L在颗粒细胞中的功能及作用机理不清楚,干扰cathepsin L导致颗粒细胞减少的原因尚不清楚,血细胞进入脂肪体以及在脂肪体解体中的作用机理也需要进一步实验证据。研究结果针对存在的科学问题,本论文运用分子生物学和细胞生物学技术开展研究,取得如下结果：1.通过细胞形态观察,发现血细胞在变态过程中会发生明显变化,主要表现为颗粒细胞数量增加,体积增大,且所含颗粒数目增多,转变为大颗粒细胞。与此同时,浆血细胞的数量急剧减少。2.利用Western blot检测发现cathepsin L在蜕皮变态过程中表达量显着增加。免疫细胞化学结果显示cathepsin L主要定位于颗粒细胞和浆血细胞的细胞质中。3.通过血细胞进体外培养的方法,证明20E可以促进浆血细胞的铺展,促进颗粒细胞转变为大颗粒细胞并迁移粘附到铺展的浆血细胞上。Western blot显示20E同时使cathepsin L上调表达。4.运用RNAi在体外培养的血细胞中干扰cathepsin L,导致大多数颗粒细胞漂浮死亡在培养液中,不能形成大颗粒细胞。同时浆血细胞的铺展也受到了抑制。5.通过活细胞荧光标记血细胞后重新注射到虫体内,证明血细胞可以进入变态期的幼虫脂肪体中,使脂肪体降解和水解。6通过在棉铃虫表皮细胞系中过表达cathepsin L的蛋白酶功能域,发现其过表达可导致细胞凋亡,说明cathepsin L可通过蛋白酶活性参与脂肪体降解。7.变态时期血细胞凋亡率明显增加,且凋亡细胞主要为颗粒细胞。8. Cathepsin L可以在6th-96h和6th-120h幼虫的血浆和脂肪体中检测到,说明凋亡细胞可能将cathepsin L释放到血浆中,并参与脂肪体的降解。结论及意义本研究证明了棉铃虫颗粒细胞在变态时期数量增加并转变为大颗粒细胞；cathepsin L在变态期高表达,主要分布在颗粒细胞及浆血细胞中；20E促进cathepsin L表达和颗粒细胞的形态转化；干扰cathepsin L之后导致20E激素不能促进颗粒细胞转变为大颗粒细胞而死亡；变态时期的血细胞可以进入到幼虫脂肪体中；棉铃虫表皮细胞系中过表达cathepsin L可以引起细胞凋亡；变态时期血细胞凋亡率增加,；凋亡的血细胞可以释放cathepsin L到血浆中参与组织的降解。本研究阐明了血细胞在昆虫变态过程的组织重建中发挥作用,其作用机理是20E调控cathepsin L表达,促进颗粒细胞形态转化并进入脂肪体,同时cathepsinL还可以引起血细胞的凋亡,并释放到血浆中,参与脂肪体降解。
许翼麟[9]（2012）在《干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究》文中研究表明本课题在建立雌雄嵌合体小鼠模型的基础上通过多因素联合攻击法建立嵌合体小鼠胃癌模型并通过Y染色体荧光原位杂交（FISH）检测是否发生细胞融合。通过机械法联合酶消化化学法分离小鼠胃粘膜上皮细胞,并通过免疫磁珠法分选骨髓源干细胞,最终通过化学融合法（聚乙二醇）将此两种细胞进行体外融合实验及培养。同时分离培养脐带血间充质干细胞（CB-MSCs）及人正常胃粘膜上皮细胞系（GES-1）并通过化学融合法（聚乙二醇）将此两种细胞进行体外融合实验并进行相关检测。以研究骨髓源性干细胞融合在小鼠胃癌发生与发展过程中的作用。第一部分雌雄嵌合体小鼠模型的建立及诱癌实验目的：通过雌雄嵌合体小鼠胃癌模型了解骨髓源干细胞在胃癌发生及进展过程中的作用。方法：采用雌性C57BL/6-GFP转基因小鼠为供体、雄性C57BL/6小鼠为受体通过性别交叉骨髓移植建立雌雄嵌合体小鼠。分别于术后1w及4w取嵌合体小鼠骨髓及外周血行流式细胞术鉴定骨髓移植模型是否成功,同时通过荧光显微镜观察骨髓移植后GFP+细胞在不同组织器官中的分布。在雌雄嵌合体小鼠基础上采用多因素联合攻击法建立嵌合体小鼠胃癌模型,并通过HE染色法及CK-18免疫组化法确定小鼠成瘤情况,同时采用Y染色体荧光原位杂交检测是否存在细胞融合。结果：小鼠骨髓移植术后小鼠存活率100%，流式细胞术结果示骨髓移植术后1周嵌合体小鼠骨髓GFP+细胞为（7.48±1.38）%,术后4周为（73.92±5.57）%。嵌合体小鼠外周血检测T细胞亚群结果显示1wk时仅有少量GFP+细胞且CD8+细胞恢复较CD4+细胞快,4wk时GFP+细胞升高、但CD4+细胞仍较少。嵌合体小鼠经多因素联合攻击法诱癌后总体存活率为72.9%（35/48）。诱癌后18.2%（2/11）小鼠诱发重度不典型增生及25.0%（3/12）小鼠成功诱发胃癌,其中2只腺癌、1只鳞癌。荧光显微镜结果示嵌合体小鼠正常胃组织可见少量GFP表达,而嵌合体小鼠非典型增生胃组织可见大量GFP表达。嵌合体小鼠嵌合体小鼠肾,脑,肝及脾组织中均可见不同程度GFP表达。通过Y染色体FISH检测结果示嵌合体小鼠正常胃组织于间质部位可见少量GFP表达,但均未见GFP及Y染色体双阳性细胞。嵌合体小鼠胃癌癌前病变及胃癌组织中均存在GFP及Y染色体双阳性细胞,但胃癌癌前病变组织中双阳性细胞比例较胃癌组织高。结论：通过性别交叉骨髓移植成功构建雌雄嵌合体小鼠模型,并通过多因素联合攻击法成功诱导小鼠胃部炎症、胃癌前病变及胃癌。骨髓源干细胞参与了不同脏器器官中血管内皮细胞的生成与更新。胃粘膜损伤早期及癌前病变时骨髓源干细胞参与胃粘膜组织的修复且部分细胞与胃粘膜细胞发生融合。当肿瘤发生时大量骨髓源性干细胞参与胃黏膜上皮细胞的修复后可取代原有胃黏膜上皮细胞且细胞融合减少。第二部分小鼠骨髓源干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验目的：通过小鼠骨髓源性干细胞与原代胃黏膜上皮细胞体外融合探讨骨髓源性干细胞融合参与肿瘤形成的可能机制。方法：通过机械法联合化学消化法分离胃粘膜上皮细胞并采用免疫荧光法鉴定细胞表型。通过免疫磁珠分离纯化小鼠骨髓谱系抗原阴性细胞,并通过流式细胞术检测细胞纯度。后通过聚乙二醇化学融合法进行小鼠骨髓源性干细胞与小鼠胃黏膜上皮细胞的细胞融合实验并通过流式细胞术检测细胞融合率并进行融合细胞的分选。结果：通过机械法联合化学消化法分离小鼠胃黏膜上皮细胞,每只小鼠腺胃部分可获得（5.27±2.92×106）个细胞、细胞活力为（97.05±2.20%）。其增殖在7天达到最佳状态,且角蛋白-18（Cytokeratin-18,CK-18）免疫荧光阳性率为（93.21±3.35）%。通过胫骨及股骨可分离出（8.88±4.22×107）个骨髓细胞、细胞活力为（98.35±1.23）%。以（4.43±2.47×107）个骨髓细胞进行免疫磁珠Lin-细胞分选可分出（1.36±1.03×106）个Lin-骨髓细胞。通过FCM检测分选前骨髓细胞Lin+细胞比例为76.21±4.89%、分选后磁珠标记的Lin+细胞比例为（69.23±5.79）%、分选后磁珠未标记Lin-细胞比例为（93.93±3.35）%。胃粘膜上皮细胞通过CFSE绿色荧光染色后可见细胞均表达绿色荧光,Lin-及Lin+骨髓细胞通过PKH26红荧光染色后细胞均表达红色荧光。两种细胞混合培养后未见细胞融合。PEG融合后荧光显微镜观察可见细胞融合,通过流式细胞术检测细胞融合率为（5.77±1.91）%。结论：通过机械法联合化学消化法成功分离小鼠胃粘膜上皮细胞,且其增殖在第7天达到最佳状态。通过免疫磁珠法成功分离小鼠骨髓Lin-细胞。通过PEG化学融合法成功融合小鼠胃粘膜上皮细胞及小鼠骨髓Lin-细胞。但因小鼠骨髓源干细胞及胃粘膜细胞均为原代细胞,融合后未造成细胞的转化,子代细胞未获得持续增殖的表型,另一方面可能因为融合效率较低,细胞融合致细胞表型改变的效率也较低,即使融合造成少量细胞的转化,在实验系统中未能观察到。第三部分人脐血间充质干细胞与人胃粘膜上皮细胞体外融合实验目的：通过人脐血间充质干细胞（CB-MSCs）与人正常胃粘膜上皮细胞系（GES-1）体外融合探讨间充质干细胞融合参与上皮细胞恶性转化的可能及肿瘤干细胞的起源。方法：体外培养GES-1细胞并通过免疫荧光染色鉴定CK-18在GES-1细胞表达情况。分离脐血单个核细胞进行脐血来源间充质干细胞的培养并探索其培养条件,观察脐血间充质干细胞生长特性。通过流式细胞分析脐血间充质干细胞表型分子Thy-1（CD90）、SH2（CD105）、SH4（CD73）、HLA-ABC、HLA-DR、CD34、CD45等的表达。通过聚乙二醇化学融合法进行CB-MSCs与GES-1的细胞融合实验并通过流式细胞术分选融合细胞。观察融合细胞生长特性,通过免疫荧光鉴定融合细胞CK-18表达情况。通过流式细胞术检测细胞融合率、表面抗原CD90表达情况及DNA倍体分析,通过划痕实验及侵袭实验检测融合细胞的迁移及侵袭能力,并通过MTT细胞增殖实验检测细胞增殖率。BALB/c裸鼠皮下注射融合细胞检测融合细胞成瘤率。结果：脐带血可分离并培养出CB-MSCs、其第一代形态为圆形及梭形,传代后为纺锤形及多角形且贴壁能力增强、具有很强的自我更新能力,本实验观察其可在体外传至25代。通过流式细胞技术分析CB-MSCs细胞表面免疫表型特征为：SH2（CD105）、SH4（CD73）、HLA-ABC强阳性,CD90弱阳性,、HLA-DR、CD45、CD34阴性。CB-MSCs及GES-1细胞经聚乙二醇体外融合后可通过流式细胞仪分选融合细胞、其融合率为8.7%。融合细胞形态不规则且可见巨大融合细胞,两周后细胞开始增殖、生长迅速且可稳定传代。免疫荧光检测CK-18显示融合细胞胞浆高表达CK-18,且形态发生改变,细胞核增大,胞浆减少,呈现恶性肿瘤细胞特性。流式检测显示融合细胞表达CD90,而DNA倍体分析结果示融合细胞为多倍体及非整倍体细胞且随细胞代数的增长、非整倍体细胞所占比例增加。MTT结果显示融合细胞增殖活性较GES-1明显增强,并获得向基质胶侵袭的能力且其迁移与侵袭能力均有所增强。裸鼠皮下成瘤实验显示融合细胞可形成带有腺体结构的上皮源性肿物。结论：成功分离并培养出脐带血间充质干细胞,且通过PEG体外与GES-1融合后通过流式细胞成功分选出融合细胞。细胞融合后形态及表型均发生改变,细胞形态呈典型肿瘤细胞且兼具GES-1及MSCs二者的表型、即胞浆表达CK-18且其表面抗原CD90阳性。融合细胞增殖活性较GES-1明显增强,并获得向基质胶侵袭的能力且其迁移与侵袭能力均有所增强。融合细胞与GES-1及MSCs相比可形成皮下肿物。
黄芳[10]（2009）在《半闭弯尾姬蜂调控寄主小菜蛾的生理机制研究》文中研究说明本文对十字花科蔬菜重要害虫一小菜蛾Plutella xylostella幼虫的优势种寄生蜂半闭弯尾姬蜂Diadegma semiclausum对寄主的生理调控机制进行了研究，取得以下结果：一、半闭弯尾姬蜂寄生对寄主免疫系统的影响寄主小菜蛾幼虫被寄生后，其造血器官内原血细胞结构受到一定程度的破坏，是造成血细胞数量显着下降的原因之一；但是血腔内成熟血细胞并不出现坏死或加速凋亡的现象。被寄生的寄主幼虫的血细胞总量在寄生后12 h呈现出相对于对照的显着低水平，且这种水平一直维持至寄主幼虫死亡。此外，寄生后1 h的寄主幼虫血细胞体外培养30 min后，不能延展，所有的细胞均呈现圆饼状，不具有包囊能力，黑化作用受到抑制，但噬菌能力并未受到影响；而寄生后24 h的寄主幼虫血细胞虽然已经能够进行正常的延展，恢复部分包囊能力，黑化作用的抑制程度减轻，但是其噬菌能力却显着降低。被半闭弯尾姬蜂寄生后的寄主体液免疫能力降低，如酚氧化酶酶原的激活受抑制、血淋巴抗菌效能降低等。二、半闭弯尾姬蜂寄生对寄主解毒酶系统和保护酶的影响半闭弯尾姬蜂寄生对寄主幼虫的解毒酶系统产生一定程度的影响，主要结果为：1)寄生能够显着提高寄主幼虫体内谷胱甘肽-s-转移酶的活性；2)多功能氧化酶和羧酸酯酶的酶活力不受影响；3)半闭弯尾姬蜂寄生显着降低乙酰胆碱酯酶的活性。另外，寄生后小菜蛾幼虫的保护酶活性也发生一定的变化：1)过氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）的活性在寄生后12 h显着降低至对照的50%左右，但是在此后12 h该酶活性恢复至正常水平；2)过氧化氢酶（Catalase，CAT）的活力不受半闭弯尾姬蜂寄生的影响；3)过氧化物酶（Peroxisome，POD）活力变化显着，寄生后1 h即与对照呈显着差异。三、半闭弯尾姬蜂寄生对寄主营养代谢的影响在小菜蛾-半闭弯尾姬蜂系统中，寄主幼虫血淋巴内海藻糖浓度升高的同时脂肪体内糖原积累受到抑制；在小菜蛾-菜蛾盘绒茧蜂系统中，寄主幼虫血淋巴内海藻糖浓度也显着升高，而且这种现象的产生与寄主幼虫体内脂肪体糖原的加速降解和脂滴转移有关。在两个系统中，虽然寄生后幼虫的糖原磷酸化酶及海藻糖酶的活力发生一定程度的变化，但是这两种酶的变化并不直接导致海藻糖浓度的升高。寄生后小菜蛾幼虫的血淋巴内蛋白总量发生显着变化，同时中肠内各类消化酶之间的协调性被打破。总胰蛋白酶、弱碱性类胰蛋白酶、强碱性类胰蛋白酶活力均发生不同程度的改变，且这些酶类对酸碱环境的适应性也发生了一定程度上的变化。在脂类代谢方面，半闭弯尾姬蜂寄生对小菜蛾脂肪体重量的影响主要发生在幼虫后期及预蛹期。在4龄后期，对照幼虫脂肪体开始不断积累营养物质，脂肪体重量逐渐增大；而寄生后幼虫体内的脂肪体总量却呈现下降的趋势。半闭弯尾姬蜂对寄主脂肪体的利用分寄主幼虫期和寄主预蛹期两个阶段进行：寄主幼虫期阶段，幼蜂的总脂滴含量与小菜蛾幼虫的血淋巴总脂滴含量显着相关（P=0．2976H+4．9877，r2=0．9824；P代表幼蜂总脂滴含量，H代表小菜蛾幼虫血淋巴的总脂滴含量）；寄主预蛹阶段，幼蜂的总脂滴含量与寄主脂肪体的总脂滴含量显着相关（P=476．61-56．705 Ln（F），r2=0．9887；P代表幼蜂总脂滴含量，F代表小菜蛾预蛹脂肪体中总脂滴含量），但与血淋巴内总脂滴含量的相关性并不显着。对小菜蛾幼虫及预蛹的血淋巴及脂肪体和半闭弯尾姬蜂幼虫体内所含有机质进行抽提及GC-MS分析后结果发现，寄生及未寄生小菜蛾幼虫的血淋巴、脂肪体及半闭弯尾姬蜂幼蜂体内的有机质组分相似；但是，寄生与未寄生小菜蛾预蛹的脂肪体内有机质组分却存在很大差异。四、半闭弯尾姬蜂寄生对寄主取食、生长及代谢效率的影响被半闭弯尾姬蜂寄生后的小菜蛾幼虫的代谢率明显提高，且显着高于被菜蛾盘绒茧蜂寄生后寄主的代谢率。在小菜蛾-半闭弯尾姬蜂系统中，寄主的取食、生长及其他营养代谢相关参数受到一定程度的影响，但这些变化的显着性相对弱于小菜蛾-菜蛾盘绒茧蜂系统。被菜蛾盘绒茧蜂寄生后小菜蛾幼虫的相对生长率、取食量、排泄量显着降低，同化作用被显着抑制。寄主的呼吸作用，在寄生后的24 h内受抑制，但针对于整个寄生期而言，受抑制现象并不显着；在寄主和寄生蜂共生期间，寄主的消化食物转化率、摄入食物转化率降低，而近似消化率则上升。五、半闭弯尾姬蜂寄生对寄主部分内部器官变化的影响半闭弯尾姬蜂寄生后寄主幼虫内部器官的结构变化不明显。但是，菜蛾盘绒茧蜂寄生后的小菜蛾幼虫部分内部器官结构发生显着变化，如丝腺上的功能细胞在未完全转化成为功能型细胞之前发生凋亡，即分泌细胞丧失分泌功能。寄主脑内神经细胞的超微结构也发生一些变化，如核畸形或肿胀，电子密度发生变化，胞膜消失，内容物降解，染色质溶解，核仁呈降解状；细胞间隙变大，胞间质稀薄，胞间连接（如细胞桥粒等）消失；突触囊泡内内容物的泡状结构被破坏，数量减少，大小不均一；寄生后的神经分泌类物质较未寄生的幼虫明显减少等。六、半闭弯尾姬蜂个体发育及寄生因子研究半闭弯尾姬蜂蜂卵属于膜翅目型，卵表面无附属物。幼虫龄期分为4龄。蛹期分为两个阶段：第一阶段形似于5龄幼虫，但其体表会出现一些弱的突起；第二阶段形态呈裸蛹，其蛹体表各部位的着色顺序依次为：复眼-单眼-下颚-胸-腹-触角。首次发现半闭弯尾姬蜂的寄生因子除了毒液外，还携有另一个重要的寄生因子—多分DNA病毒（Diadegma semiclausum ichnivirus，DsIVs）。每个毒液囊的蛋白含量为1．016μg左右，大部分毒液蛋白的分子量集中在35-220 kDa范围内。DsIVs粒子是典型的姬蜂病毒，病毒粒子在萼细胞内获得第一层外膜，而在以出芽的方式进入萼区内腔时获得第二层外膜；成熟的病毒粒子呈圆柱状，横截面直径为130-150 nm而长度在300-400 nm之间，中间为高浓度的核质。半闭弯尾姬蜂卵巢由12根卵巢小管组成，属多滋式。超微结构表明卵巢管内配子囊中含多个细胞，但只有一个细胞可发育成为卵细胞，而其他细胞则分化为滋养细胞为卵细胞的发育提供营养，在卵细胞接近成熟的同时逐步消亡。刚羽化的雌蜂体内萼区为空，不含有成熟的卵；在羽化后2-3 d，萼区即充满了成熟的卵细胞。成熟卵细胞进入萼区后，被含DsIVs粒子的萼液包裹，但DsIVs粒子并不会附着到蜂卵绒毛膜表面。
二、脑细胞可转变为血细胞（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脑细胞可转变为血细胞（论文提纲范文）
（1）小分子化合物组合诱导造血重编程以及造血干细胞的体外扩增（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 小分子化合物组合诱导造血重编程 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.结论 |
| 6.讨论 |
| 第三章 小分子化合物组合扩增造血干祖细胞和单细胞测序谱系追踪 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.结论 |
| 6.讨论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表学术论文 |
（2）NF-κB调控巨噬细胞亚型在实验性自身免疫性神经炎中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 GBS和EAN概述 |
| 1.2 巨噬细胞 |
| 1.2.1 巨噬细胞的基本功能 |
| 1.2.2 巨噬细胞的分型 |
| 1.3 巨噬细胞在GBS及EAN中的作用 |
| 1.3.1 M1巨噬细胞在EAN和GBS中的作用 |
| 1.3.2 M2巨噬细胞在EAN和GBS中的作用 |
| 1.4 巨噬细胞转化的传导通路 |
| 1.5 M2巨噬细胞治疗GBS和EAN |
| 1.6 巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）在GBS和EAN中的作用 |
| 1.7 NF-ΚB信号通路在GBS中的作用 |
| 第2章 EAN模型构建，测定M1/M2及细胞因子 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 EAN模型构建 |
| 2.2.2 EAN模型坐骨神经HE染色 |
| 2.2.3 小鼠脾脏巨噬细胞测定 |
| 2.2.4 EAN外周血细胞因子测定 |
| 2.2.5 GBS患者血清中细胞因子测定 |
| 2.2.6 数据处理及分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 EAN模型构建 |
| 2.3.2 EAN 模型坐骨神经病理改变 |
| 2.3.3 EAN不同时期脾脏巨噬细胞M1和M2测定 |
| 2.3.4 EAN不同时期外周血细胞因子测定 |
| 2.3.5 GBS患者丙球治疗前后血清细胞因子测定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.2 EAN不同时期M1和M2 |
| 2.4.3 EAN不同时期外周血细胞因子 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 M2巨噬细胞诱导及回输治疗EAN |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 EAN动物模型的构建 |
| 3.2.2 M2巨噬细胞的诱导及鉴别 |
| 3.2.3 M2巨噬细胞的回输 |
| 3.2.4 脾脏M1及M2巨噬细胞比例测定 |
| 3.2.5 外周血细胞因子测定 |
| 3.2.6 脾脏细胞NF-κB蛋白表达检测 |
| 3.2.7 数据处理及分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 M2型巨噬细胞诱导及测定 |
| 3.3.2 M2型巨噬细胞回输EAN评分 |
| 3.3.3 两组小鼠脾脏巨噬细胞比例变化 |
| 3.3.4 M2回输后外周血细胞因子测定 |
| 3.3.5 两组小鼠脾脏NF-κB表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 M2型巨噬细胞对EAN的治疗作用 |
| 3.4.2 M2型巨噬细胞回输对脾脏巨噬细胞比例的影响 |
| 3.4.3 M2型巨噬细胞治疗对细胞因子影响 |
| 3.4.4 NF-κB在M2回输中的作用 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 NF-ΚB抑制剂对EAN的作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 数据处理及分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 NF-κB抑制剂预防及治疗EAN |
| 4.3.2 NF-κB抑制后脾脏NF-κB表达 |
| 4.3.4 小鼠脾脏巨噬细胞检测 |
| 4.3.5 NF-κB抑制剂对巨噬细胞增殖的影响 |
| 4.3.6 外周血细胞因子测定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 NF-κB抑制剂对EAN的治疗 |
| 4.4.2 NF-κB抑制剂对脾脏巨噬细胞比例的影响 |
| 4.4.3 NF-κB抑制剂对细胞因子的影响 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）脑源性微粒激活小胶质细胞在脑外伤后神经炎症反应中作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、小鼠脑外伤模型的建立和脑源性微粒(BDMPs)的分离制备 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物、仪器 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 小鼠液压打击(FPI)脑外伤(TBI)模型的制备 |
| 1.1.4 TBI后脑损伤区BDMPs的制备(酶消化法) |
| 1.1.5 流式细胞术对TBI后脑损伤区BDMPs的鉴定 |
| 1.1.6 通过流式细胞术确定TBI后脑损伤区各种细胞MPs的含量 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 流式细胞术鉴定BDMPs |
| 1.2.2 BDMPs中各种细胞MPs含量分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 MPs的来源和结构特点 |
| 1.3.2 MPs的分子生物学功能 |
| 1.3.3 MPs的形成机制 |
| 1.3.4 BDMPs的制备和鉴定 |
| 1.4 小结 |
| 二、利用小鼠皮层下注射模型,体内观察BDMPs对小胶质细胞的激活、分化的影响,以及相关炎症因子和趋化因子的表达 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物、仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 小鼠皮层下注射模型的建立 |
| 2.1.4 小鼠脑组织切片的制备 |
| 2.1.5 免疫荧光染色观察注射区域小胶质细胞的激活情况 |
| 2.1.6 免疫组化染色观察注射区域小胶质细胞的分化情况 |
| 2.1.7 RT-PCR法检测注射区域相关炎性因子及趋化因子的表达 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 小鼠皮层下注射模型的建立 |
| 2.2.2 BDMPs可以体内激活小胶质细胞 |
| 2.2.3 BDMPs可以在体内诱导小胶质细胞表型(M1/M2)变化 |
| 2.2.4 BDMPs促进脑损伤区炎症因子及单核细胞趋化因子表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 TBI后继发性炎症反应 |
| 2.3.2 TBI的损伤相关分子模式(DAMPs) |
| 2.3.3 TBI相关炎性介质 |
| 2.3.4 小胶质细胞在TBI继发性反应中的作用 |
| 2.3.5 TBI后小胶质细胞的极化动力学 |
| 2.3.6 脑内注射模型的建立 |
| 2.4 小结 |
| 三、提取BDMPs体外干预小胶质细胞,观察BDMPs对小胶质细胞的激活、分化的影响,检测相关炎症因子的表达情况 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 主要实验仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 体外培养小胶质细胞系(BV2) |
| 3.1.4 PKH-26对BDMPs进行体外荧光标记 |
| 3.1.5 共聚焦显微镜观察小胶质细胞对BDMPs的吞噬作用 |
| 3.1.6 体外免疫荧光染色观察BDMPs激活小胶质细胞 |
| 3.1.7 HPICM动态观察小胶质细胞激活后形态变化 |
| 3.1.8 Western-blot检测BV2 激活后相关炎症及趋化因子表达的变化…… |
| 3.1.9 ELISA检测BV2 上清液中炎性因子及趋化因子的表达 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 BDMPs与小胶质细胞结合并被吞噬 |
| 3.2.2 BDMPs可以激活小胶质细胞并促进其形变 |
| 3.2.3 BV2 激活后细胞中相关炎症因子及趋化因子表达增强 |
| 3.2.4 BV2 激活后上清液中炎性因子及趋化因子的表达增强 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 CNS小胶质细胞的起源和标记 |
| 3.3.2 MPs介导小胶质细胞的激活与形变 |
| 3.3.3 CNS小胶质细胞的运动和迁移能力 |
| 3.3.4 小胶质细胞的激活信号通路 |
| 3.4 小结 |
| 四、BDMPs在体内、外对血脑屏障(BBB)渗漏的影响 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验动物、仪器 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 伊文思蓝实验检测大脑皮层注射区的血脑屏障(BBB)渗漏情况… |
| 4.1.4 小鼠脑组织水肿程度的测定(干湿重法) |
| 4.1.5 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)模拟脑血管屏障 |
| 4.1.6 体外血管内皮渗漏实验检测BDMPs对血管内皮渗漏的影响 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 BDMPs可以促进小鼠脑损伤区BBB通透性增加 |
| 4.2.2 BDMPs可以加重脑水肿 |
| 4.2.3 BDMPs增加体外HUVEC屏障的通透性 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 BBB的结构与功能 |
| 4.3.2 BBB的通透性体内外评价方法 |
| 4.3.3 TBI后 BBB的开放增加 |
| 4.3.4 BDMPs在体内外增加BBB的通透性 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 脑外伤后继发性神经炎症反应 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）斑马鱼尾动脉经内皮造血转化产生造血干细胞及前体细胞（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 模式生物斑马鱼 |
| 1.1.1 斑马鱼概述 |
| 1.1.2 斑马鱼作为模式生物的优势 |
| 1.2 脊椎动物造血系统的发育过程 |
| 1.2.1 哺乳动物造血过程 |
| 1.2.2 斑马鱼造血过程 |
| 1.3 斑马鱼造血基因调控 |
| 1.3.1 原始造血相关基因 |
| 1.3.2 定向造血相关基因 |
| 1.3.3 斑马鱼血液相关突变体及药筛研究 |
| 1.4 造血干细胞的起源 |
| 1.4.1 造血干细胞概述 |
| 1.4.2 血液血管母细胞 |
| 1.4.3 生血内皮细胞 |
| 1.5 造血调控 |
| 1.5.1 Notch信号通路 |
| 1.5.2 Wnt信号通路 |
| 1.5.3 BMP信号通路 |
| 1.5.4 炎症相关信号通路 |
| 1.5.5 HOX家族相关基因 |
| 1.5.6 造血关键因子 |
| 1.5.7 血流和一氧化氮对造血过程的影响 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物及其饲养 |
| 2.2 实验耗材、试剂、仪器 |
| 2.3 相关试剂的配制 |
| 2.3.1 斑马鱼饲养 |
| 2.3.2 RNA原位杂交相关试剂 |
| 2.3.3 LB培养基 |
| 2.3.4 DNA电泳相关试剂 |
| 2.3.5 细胞组织裂解液(NP40裂解缓冲液)制备 |
| 2.3.6 感受态细胞DH5α相关试剂制备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 斑马鱼基因组DNA提取 |
| 2.4.2 斑马鱼总RNA提取 |
| 2.4.3 PCR反应 |
| 2.4.4 大肠杆菌DH5α化学感受态细胞的制备 |
| 2.4.5 分子克隆 |
| 2.4.6 逆转录合成c DNA |
| 2.4.7 反义RNA探针合成 |
| 2.4.8 整体胚胎RNA原位杂交 |
| 2.4.9 Kaede荧光蛋白标记单个细胞 |
| 2.4.10 利用4-OHT诱导Cre方法 |
| 2.4.11 石蜡切片 |
| 2.4.12 抗体染色 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 CHT区 CDA附近存在cmyblow HSPCs |
| 3.2.2 CDA血管内皮细胞具有出芽的表型 |
| 3.2.3 CDA可以通过EHT过程产生HSPCs |
| 3.2.4 CDA腹侧壁EHT的出芽频率和时间窗 |
| 3.2.5 CDA产生的HSPCs在细胞行为学上具有异质性 |
| 3.2.6 CDA的 EHT过程受Runx1 调控 |
| 3.2.7 在血流缺陷条件下CDA的 EHT受影响程度轻于DA |
| 3.2.8 追踪在斑马鱼胚胎阶段Kdrl+动脉血管对成年斑马鱼血液贡献 |
| 第4章 结论与讨论 |
| 4.1 实验结论 |
| 4.2 实验讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士在读期间发表论文及科研工作 |
（5）Tregs、Fas/FasL系统在帕金森病多巴胺能神经元免疫机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 血常规检查值及血细胞比值与帕金森病的相关分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 新疆地区维汉民族淋巴细胞亚群、FAS/FASL与帕金森病的相关性研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 技术路线图 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 PD模型鼠黑质FAS/FASL及 TREGS检测及分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物与材料 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.3 实验步骤 |
| 1.4 技术路线图 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（6）miR-146b-5p靶向IL-17A抑制急性T淋巴细胞白血病侵袭性的机制研究（论文提纲范文）
| 博±生自认为的论文创新点 |
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1. 研究背景 |
| 2. 研究目的 |
| 3. 国内外研究现状 |
| 4. 研究内容与方法 |
| 第一部分 miR-146b-5p在T-ALL中的表达及生物学作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 miR-146b-5p的靶基因筛选与鉴定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 IL-17A促进T-ALL侵袭性的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四部分 IL-17A促进T-ALL侵袭性的体内研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文结论 |
| 中外文参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）甲醛在有无苯的作用下致小鼠造血毒性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1. 文献综述 |
| 1.1 甲醛概述 |
| 1.1.1 甲醛的理化性质 |
| 1.1.2 甲醛的来源及用途 |
| 1.1.3 甲醛的暴露情况 |
| 1.1.4 甲醛在生物体内的代谢 |
| 1.1.5 甲醛对人体健康的负面影响 |
| 1.2 造血及调控 |
| 1.2.1 造血干细胞 |
| 1.2.2 造血组织的发育 |
| 1.2.3 造血调节因子 |
| 1.2.4 造血过程中表观遗传调控 |
| 1.2.5 骨髓造血微环境 |
| 1.3 化学因素导致的白血病 |
| 1.4 甲醛与白血病的关系 |
| 1.4.1 流行病学研究 |
| 1.4.2 动物实验研究 |
| 1.4.3 研究现状分析 |
| 1.4.4 甲醛致白血病机制的假说 |
| 1.5 选题目的及意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验耗材 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 主要溶液 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.0 气态甲醛的发生及暴露 |
| 2.2.1 实验动物分组与暴露方案 |
| 2.2.2 全血细胞计数 |
| 2.2.3 骨髓和脾脏有核细胞悬液的制备 |
| 2.2.4 髓系祖细胞集落形成实验 |
| 2.2.5 细胞内ROS水平的测定 |
| 2.2.6 MDA含量的测定 |
| 2.2.7 细胞内DPC系数的测定 |
| 2.2.8 细胞凋亡的检测 |
| 2.2.9 骨髓和脾脏组织石蜡切片的制备 |
| 2.2.10 骨髓和脾脏组织切片H&E染色 |
| 2.2.11 骨髓组织c-Kit免疫组化染色 |
| 2.2.12 IL-3和GM-CSF生成量的测定 |
| 2.2.13 EPO mRNA表达量的检测 |
| 2.2.14 髓系祖细胞IL-3Rα、GM-CSFRα和EPOR表达量的检测 |
| 2.2.15 统计学分析 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 小鼠体重变化 |
| 3.2 全血细胞计数 |
| 3.3 骨髓有核细胞计数 |
| 3.4 脾脏脏器系数 |
| 3.5 骨髓和脾脏组织切片的H&E染色 |
| 3.6 骨髓和脾脏有核细胞的ROS水平 |
| 3.7 骨髓和脾脏有核细胞的MDA含量 |
| 3.8 骨髓和脾脏有核细胞的DPC含量 |
| 3.9 骨髓和脾脏有核细胞的凋亡 |
| 3.10 IL-3和GM-CSF的生成量 |
| 3.10.1 接种细胞种类、数量、刺激培养时间以及ConA浓度的选择 |
| 3.10.2 脾脏有核细胞上清IL-3和GM-CSF的含量 |
| 3.11 EPO mRNA的表达量 |
| 3.12 骨髓组织切片c-Kit免疫组化染色 |
| 3.13 髓系祖细胞集落形成数 |
| 3.14 髓系祖细胞的ROS水平 |
| 3.15 髓系祖细胞的DPC含量 |
| 3.16 髓系祖细胞的凋亡 |
| 3.17 髓系祖细胞IL-3Rα、GM-CSFRα和EPOR的表达量 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 甲醛的暴露方式 |
| 4.2 甲醛对外周血全血细胞数量的影响 |
| 4.3 甲醛致骨髓和脾脏的损伤 |
| 4.3.1 甲醛致骨髓和脾脏的组织病变 |
| 4.3.2 甲醛致骨髓和脾脏有核细胞的氧化损伤及DNA损伤 |
| 4.3.3 甲醛致骨髓和脾脏有核细胞的凋亡 |
| 4.4 甲醛对髓系祖细胞的损伤 |
| 4.4.1 甲醛显着减少髓系祖细胞的集落形成数 |
| 4.4.2 甲醛导致髓系祖细胞的氧化应激、DNA损伤及细胞凋亡 |
| 4.4.3 甲醛对集落刺激因子及其受体的影响 |
| 4.5 甲醛在有无苯的作用下导致造血毒性的可能机制 |
| 4.6 甲醛或/和苯暴露后小鼠造血功能的恢复情况 |
| 5. 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 主要英文缩写词 |
| 攻读学位期间完成的学术论文 |
| 致谢 |
（8）昆虫血细胞通过表达cathepsin L参与脂肪体的降解（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 前言 |
| 一. 昆虫蜕皮变态的分子机制 |
| 1. 昆虫蜕皮变态概述 |
| 2. 蜕皮激素信号转导途径 |
| 2.1 蜕皮激素的合成 |
| 2.2 鋭皮激素核受体 |
| 2.3 蜕皮激素信号途径的级联反应 |
| 3. 保幼激素信号转导途径 |
| 3.1 Met (Methoprene-tolerant) |
| 3.2 Kr-h1(Krupple homolog 1) |
| 4. 蜕皮激素与保幼激素信号途径的相互作用 |
| 4.1 E75 |
| 4.2 BR-C |
| 二. 昆虫变态发育过程中的组织降解与重建 |
| 1. 脂肪体的水解与重建 |
| 2. 中肠的水解与重建 |
| 三. 昆虫血细胞的起源及其在昆虫发育中的作用 |
| 1. 昆虫血细胞的分类及特征 |
| 3. 血细胞的分化起源 |
| 3.1 胚胎时期血细胞起源 |
| 3.2 幼虫时期血细胞的发育 |
| 4. 果蝇血细胞发育的调控 |
| 4.1 转录因子 |
| 4.2 血细胞增殖的调控 |
| 4.3 JAK-STAT和Toll途径 |
| 5. 血细胞的迁移 |
| 6. 血细胞在昆虫变态发育过程中的作用 |
| 四. 参与昆虫变态发育的组织蛋白酶 |
| 1. 蛋白酶概述 |
| 2. 组织蛋白酶研究进展 |
| 3. 组织蛋白酶在昆虫生长发育中的作用 |
| 4. 昆虫血细胞中组织蛋白酶的研究 |
| 五. 存在的科学问题及研究意义 |
| 第二章 棉铃虫血细胞在变态发育中的作用 |
| 一. 前言 |
| 二. 材料与方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 血细胞形态观察及计数 |
| 2.2 血细胞染色 |
| 2.3 细胞体外培养 |
| 2.4 dsRNA合成 |
| 2.5 体外培养的血细胞干扰 |
| 2.6 细胞总RNA提取 |
| 2.7 cDNA第一链合成和半定量RT-PCR |
| 2.8 免疫印迹 |
| 2.9 免疫细胞化学 |
| 2.10 表皮细胞系过表达 |
| 三. 实验结果 |
| 1. 棉铃虫循环血细胞的分类及特征 |
| 2. 幼虫发育时期血细胞的形态和数量变化 |
| 3. Cathepsin L在颗粒细胞和浆血细胞中特异性表达,且在变态时期高表达 |
| 4. 20E使体外培养的血细胞形态发生改变并上调cathepsin L的表达 |
| 5. 干扰cathepsin L后影响颗粒细胞向大颗粒细胞的转化 |
| 6. 变态时期的脂肪体中存在大量血细胞 |
| 7. 表皮细胞系中过表达cathepsin L引起细胞凋亡 |
| 8. 变态时期血细胞发生凋亡 |
| 9. 6th-96 h和6th-120 h幼虫的血浆和脂肪体中可检测到cathepsin L |
| 四. 讨论 |
| 1. 在变态时期颗粒细胞可以转变为大颗粒细胞并大量表达cathepsin L |
| 2. Cathepsin L对于颗粒细胞向大颗粒细胞的转变是必需的且受20E调控 |
| 3. 颗粒细胞可以进入脂肪体中并通过cathepsin L参与其水解 |
| 参考文献 |
| 论文创新点总结及意义 |
| 致谢 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（9）干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、雌雄嵌合体小鼠模型的建立及诱癌实验 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验材料和试剂 |
| 1.1.3 主要实验仪器 |
| 1.1.4 实验步骤技术路线图 |
| 1.1.5 实验原理和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 雌雄嵌合体小鼠模型的建立 |
| 1.2.2 嵌合体小鼠胃癌模型的建立 |
| 1.2.3 小鼠Y染色体FISH检测结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 骨髓源性干细胞 |
| 1.3.2 针对本实验结果的讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、骨髓源干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验材料和试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.1.4 实验步骤技术路线图 |
| 2.1.5 实验原理和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 原代胃粘膜上皮细胞的培养 |
| 2.2.2 小鼠Lin~-骨髓源性干细胞的分选 |
| 2.2.3 小鼠胃粘膜上皮细胞与小鼠骨髓源性Lin~-细胞的融合 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 小鼠胃黏膜上皮细胞分离,鉴定与原代培养 |
| 2.3.2 小鼠骨髓源性干细胞的分离与纯化 |
| 2.3.3 细胞融合与肿瘤 |
| 2.4 小结 |
| 三、脐带血间充质干细胞与胃粘膜上皮细胞体外融合实验 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验用细胞系 |
| 3.1.2 主要实验材料和试剂 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.1.4 实验步骤技术路线图 |
| 3.1.5 实验原理和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 人胃黏膜细胞GES-1培养及鉴定 |
| 3.2.2 脐带血间充质干细胞培养及鉴定 |
| 3.2.3 人脐带血间充质干细胞及胃黏膜上皮细胞融合实验 |
| 3.2.4 融合细胞CK-18鉴定 |
| 3.2.5 融合细胞流式鉴定 |
| 3.2.6 融合细胞DNA倍体分析 |
| 3.2.7 融合细胞增殖实验 |
| 3.2.8 融合细胞划痕迁移实验 |
| 3.2.9 融合细胞Transwell细胞迁移与侵袭实验 |
| 3.2.10 裸鼠体内成瘤实验 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 人胃黏膜细胞GES-1 |
| 3.3.2 脐带血间充质干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 3.3.3 细胞融合与肿瘤干细胞 |
| 3.3.4 细胞融合与上皮细胞间质样变 |
| 3.3.5 针对本实验结果的讨论 |
| 3.3.6 展望 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 骨髓源性干细胞与肿瘤干细胞 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（10）半闭弯尾姬蜂调控寄主小菜蛾的生理机制研究（论文提纲范文）
| 致射 |
| 前言 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 寄生蜂寄生对寄主免疫功能的影响 |
| 1.1 寄主的免疫组成 |
| 1.2 寄生蜂寄生对寄主免疫过程的影响 |
| 2 寄生蜂寄生对寄主营养、发育、代谢的调控 |
| 3 寄生蜂寄生对寄主神经系统的影响 |
| 4 国内小菜蛾寄生蜂系统研究概况 |
| 第二部分 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 昆虫与寄主植物 |
| 1.2 试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 寄生与寄生蜂的饲养 |
| 2.2 供试验昆虫的选取 |
| 2.3 幼虫血淋巴抽提 |
| 2.4 扫描及透射电镜处理 |
| 2.5 数据分析 |
| 第三部分 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主的影响 |
| 第一章 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主免疫功能的影响 |
| 第一节 寄主细胞免疫的变化 |
| 1.1.1 材料与方法 |
| 1.1.1.1 激光共聚焦扫描成像及透射电镜超微观察 |
| 1.1.1.2 小菜蛾血细胞原代培养 |
| 1.1.1.3 寄生蜂寄生后血细胞总数及各类型血细胞数的计算 |
| 1.1.1.4 寄生蜂寄生后血细胞延展能力检测 |
| 1.1.1.5 寄生蜂寄生后血细胞包囊能力检测 |
| 1.1.1.6 寄生蜂寄生后血细胞噬菌能力检测 |
| 1.1.1.7 寄生蜂寄生后血细胞基因组电泳分析 |
| 1.1.2 结果 |
| 1.1.2.1 小菜蛾血细胞的种类及结构 |
| 1.1.2.2 寄生对寄主血细胞数量的影响 |
| 1.1.2.3 寄生对寄主血细胞延展及包囊能力的影响 |
| 1.1.2.4 寄生对寄主血细胞噬菌能力的影响 |
| 1.1.2.5 寄生对寄主血细胞凋亡的影响 |
| 1.1.2.6 寄生对寄主造血器官的影响 |
| 1.1.3 讨论 |
| 第二节 寄主体液免疫的变化 |
| 1.2.1 材料与方法 |
| 1.2.1.1 细胞裂解液及细胞碎片的制备 |
| 1.2.1.2 酚氧化酶活性的测定 |
| 1.2.1.3 黑化作用 |
| 1.2.1.4 小菜蛾血淋巴的抑菌实验 |
| 1.2.1.5 小菜蛾感菌能力研究 |
| 1.2.2 结果 |
| 1.2.2.1 寄生对寄主PO活力的影响 |
| 1.2.2.2 寄生对小菜蛾血淋巴黑化作用的影响 |
| 1.2.2.3 寄生对小菜蛾血淋巴抑制细菌生长能力的影响 |
| 1.2.2.4 寄生对小菜蛾感菌能力的影响 |
| 1.2.3 讨论 |
| 第二章 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主解毒酶及保护酶系统的影响 |
| 第一节 寄主解毒酶系统的变化 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.1.1 谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GST)活性测定 |
| 2.1.1.2 多功能氧化酶(mixed-function oxidases,MFOs)酶活性测定 |
| 2.1.1.3 羧酸酯酶(carboxyesterase,CE)活性测定 |
| 2.1.1.4 乙酰胆碱酯酶(acethylcholinesterase.AchE)酶活性测定 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.1.2.1 寄生对寄主GST活性的影响 |
| 2.1.2.2 寄生对寄主MFOs活性的影响 |
| 2.1.2.3 寄生对寄主CE活性的影响 |
| 2.1.2.4 寄生对寄主AchE活性的影响 |
| 2.1.3 讨论 |
| 第二节 寄主保护酶系统的影响 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.1.1 血淋巴过氧化物浓度变化 |
| 2.2.1.2 过氧化物歧化酶(superoxide dismutase.SOD)活性测定 |
| 2.2.1.3 过氧化氢酶(catalase.CAT)活性测定 |
| 2.2.1.4 过氧化物酶(peroxidase.POD)活性测定 |
| 2.2.2 结果 |
| 2.2.2.1 寄生对血淋巴过氧化物浓度的影响 |
| 2.2.2.2 寄生对保护酶活力的影响 |
| 2.2.3 讨论 |
| 第三章 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主营养代谢的影响 |
| 第一节 寄主糖代谢的变化 |
| 3.1.1 材料与方法 |
| 3.1.1.1 血淋巴内海藻糖含量测定 |
| 3.1.1.2 糖原及总还原糖含量测定 |
| 3.1.1.3 糖原含量测定 |
| 3.1.1.4 血淋巴海藻糖酶酶活测定 |
| 3.1.1.5 糖原磷酸化酶酶活测定 |
| 3.1.2 结果 |
| 3.1.2.1 寄生对寄主血淋巴内海藻糖含量的影响 |
| 3.1.2.2 寄生对寄主总还原性糖类物质含量变化 |
| 3.1.2.3 寄生对寄主糖原磷酸化酶活性的影响 |
| 3.1.2.4 寄生对寄主海藻糖酶活性的影响 |
| 3.1.3 讨论 |
| 第二节 寄主蛋白代谢的变化 |
| 3.2.1 材料与方法 |
| 3.2.1.1 血淋巴蛋白分析 |
| 3.2.1.2 中肠总胰蛋白酶酶活的测定 |
| 3.2.1.3 中肠类胰蛋白酶酶活的测定 |
| 3.2.1.4 中肠总胰蛋白酶和类胰蛋白酶酶活酸碱度适应范围的检测 |
| 3.2.2 结果 |
| 3.2.2.1 寄生对寄主血淋巴蛋白含量及组分的影响 |
| 3.2.2.2 寄生对寄主蛋白酶活性的影响 |
| 3.2.2.3 寄生对寄主中肠蛋白酶酸碱环境适应性的影响 |
| 3.2.3 讨论 |
| 第三节 寄主脂代谢的变化 |
| 3.3.1 材料与方法 |
| 3.3.1.1 脂肪体重量测定 |
| 3.3.1.2 小菜蛾血淋巴和脂肪体中总脂滴浓度的测定 |
| 3.3.1.3 抽提物GC-MS分析 |
| 3.3.2 结果 |
| 3.3.2.1 寄生对小菜蛾脂肪体重量的影响 |
| 3.3.2.2 寄生对小菜蛾脂肪体脂滴含量的影响 |
| 3.3.2.3 寄生蜂脂滴含量与寄主组织脂滴含量的关系 |
| 3.3.2.4 脂肪酸GC-MS分析结果 |
| 3.3.3 讨论 |
| 第四章 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主生长、取食及代谢效率的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 取食行为观察 |
| 4.1.2 寄生对寄主体重的影响 |
| 4.1.3 取食量及排泄量测量 |
| 4.1.4 消化相关参数计算 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 寄生对寄主取食行为有抑制作用 |
| 4.2.2 寄生对寄主营养消化相关系数的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 半闭弯尾姬蜂寄生对寄主部分内部器官的影响 |
| 第一节 寄主脑的变化 |
| 5.1.1 材料与方法 |
| 5.1.2 结果 |
| 5.1.2.1 正常小菜蛾幼虫脑细胞超微结构 |
| 5.1.2.2 寄生对小菜蛾幼虫脑细胞结构及神经分泌物的影响 |
| 5.1.2.3 寄生对脑蛋白含量的影响 |
| 5.1.3 讨论 |
| 第二节 寄主丝腺的变化 |
| 5.2.1 材料与方法 |
| 5.2.2 结果 |
| 5.2.2.1 寄生对寄主小菜蛾丝腺形态的影响 |
| 5.2.2.2 寄生对寄主小菜蛾丝腺长度及蛋白浓度的影响 |
| 5.2.2.3 寄生对寄主小菜蛾丝腺蛋白组分的影响 |
| 5.2.3 讨论 |
| 第三节 寄主脂肪体结构的变化 |
| 5.3.1 材料与方法 |
| 5.3.2 结果 |
| 5.3.3 讨论 |
| 第四部分 半闭弯尾姬蜂幼期发育及寄生因子研究 |
| 第六章 半闭弯尾姬蜂卵巢结构及卵子发育 |
| 6.1. 材料与方法 |
| 6.2. 结果 |
| 6.2.1 卵巢概况 |
| 6.2.2 卵巢小管 |
| 6.2.2.1 末端纤丝 |
| 6.2.2.2 原卵区 |
| 6.2.2.3 生长区 |
| 6.2.3 萼区结构 |
| 6.3.讨论 |
| 第七章 半闭弯尾姬蜂幼蜂的幼期发育 |
| 7.1.材料与方法 |
| 7.1.1 卵观察 |
| 7.1.2 胚胎发育 |
| 7.2.结果 |
| 7.2.1 卵的发育 |
| 7.2.2 胚胎发育 |
| 7.2.3 幼虫 |
| 7.2.3.1 一龄幼虫 |
| 7.2.3.2 二龄幼虫 |
| 7.2.3.3 三龄幼虫 |
| 7.2.3.4 四龄幼虫 |
| 7.2.3.5 蛹 |
| 7.3.讨论 |
| 第八章 半闭弯尾姬蜂主要寄生因子研究 |
| 8.1.材料与方法 |
| 8.1.1 光镜及透射电镜观察 |
| 8.1.2 DNA琼脂糖凝胶电泳 |
| 8.1.3 毒腺、杜氏腺分泌物蛋白SDS-PAGE电泳 |
| 8.2.结果 |
| 8.2.1 半闭弯尾姬蜂萼液内病毒粒子的基因组分析 |
| 8.2.2 毒液器官 |
| 8.2.3 杜氏腺 |
| 8.3.讨论 |
| 附章 |
| 第九章 半闭弯尾姬蜂、菜蛾盘绒茧蜂的雄性生殖系统结构 |
| 9.1.材料与方法 |
| 9.2.结果 |
| 9.2.1 半闭弯尾姬蜂雄性生殖系统结构 |
| 9.2.1.1 概况 |
| 9.2.1.2 精巢和附腺的超微结构 |
| 9.2.1.3 精巢及附腺内容物蛋白分析 |
| 9.2.2 菜蛾盘绒茧蜂雄性生殖系统结构 |
| 9.2.2.1 概况 |
| 9.2.2.2 精巢和附腺的超微结构 |
| 9.2.2.3 精巢及附腺内容物蛋白分析 |
| 9.3.讨论 |
| 第五部分 总结 |
| 一、总讨论 |
| 二、创新点 |
| 三、不足之处 |
| 四、未来的研究方向 |
| 第六部分 参考文献 |
| 附 博士学位攻读期间发表学术论文目录 |
四、脑细胞可转变为血细胞（论文参考文献）
- [1]小分子化合物组合诱导造血重编程以及造血干细胞的体外扩增[D]. 周易. 上海交通大学, 2020(01)
- [2]NF-κB调控巨噬细胞亚型在实验性自身免疫性神经炎中的作用及其机制研究[D]. 沈东辉. 吉林大学, 2019(10)
- [3]脑源性微粒激活小胶质细胞在脑外伤后神经炎症反应中作用的研究[D]. 戎宏涛. 天津医科大学, 2019(02)
- [4]斑马鱼尾动脉经内皮造血转化产生造血干细胞及前体细胞[D]. 展延栋. 西南大学, 2019(01)
- [5]Tregs、Fas/FasL系统在帕金森病多巴胺能神经元免疫机制研究[D]. 王玉玲. 新疆医科大学, 2018(07)
- [6]miR-146b-5p靶向IL-17A抑制急性T淋巴细胞白血病侵袭性的机制研究[D]. 涂镇波. 武汉大学, 2017(06)
- [7]甲醛在有无苯的作用下致小鼠造血毒性的研究[D]. 魏晨曦. 华中师范大学, 2014(06)
- [8]昆虫血细胞通过表达cathepsin L参与脂肪体的降解[D]. 翟翔. 山东大学, 2012(02)
- [9]干细胞融合与胃癌发生和进展的实验研究[D]. 许翼麟. 天津医科大学, 2012(02)
- [10]半闭弯尾姬蜂调控寄主小菜蛾的生理机制研究[D]. 黄芳. 浙江大学, 2009(11)