一、蛋白质浓度对血液中离子钙测定的影响（论文文献综述）
何健[1]（2021）在《基于超分子结构共组装的小麦面筋蛋白增溶机制及递送性能研究》文中进行了进一步梳理小麦面筋蛋白（Wheat gluten proteins,WP）是一种营养丰富且价格低廉的优质蛋白,因其独特的粘弹性被广泛用于烘焙行业。然而,低水溶性导致其加工性能不高,应用领域单一。常用的WP增溶技术存在成本高、效果差、营养损失大等限制,亟需一种新型的绿色改性技术。本论文研究在pH循环诱导下WP与外源双亲性物质的物理结构组装行为,借助纳米技术构建亲水性蛋白构象,实现WP的水溶,并探讨结构组装促进蛋白溶解的分子机制。以该机制为基础,研究组装结构对疏水性活性分子的递送性能和机制,以拓展WP在高附加值领域的应用价值。具体研究内容如下:建立WP水溶性结构自组装方法。探究pH循环诱导下WP与虫胶的结合行为对蛋白结构自组装及水溶性的影响。将WP和虫胶混溶于pH 12的稀碱溶液后,调节pH至中性并离心获得高水溶性的WP-虫胶复合体（WSC）。SDS-PAGE证明,该方法在不改变WP一级结构的基础上,提升WP溶解度至约92%。随碱性至中性的中和反应进行,WP与虫胶分子结合,并在疏水作用的主要驱动作用下折叠和聚集,组装为粒径200 nm左右的WSC纳米粒子。荧光光谱和Zeta-电位证明,虫胶分子嵌入WP自组装结构中,使得WSC的Zeta-电位升高,疏水性降低,虫胶分子提供静电斥力以限制蛋白的折叠作用,使WSC呈现类似熔融态蛋白的展开状态。该自组装过程中WP二级结构几乎不变。因此,pH循环诱导结构组装提升WP水溶性的分子机制为,经静电解离的WP在碱性至中性过程中重新组装,嵌入的虫胶分子提供静电斥力,通过限制WP折叠重塑蛋白结构为亲水性三维构象。上述pH循环过程中如姜黄素存在,则与WSC发生相互作用,并参与WP的自组装,从而实现对姜黄素的包封,WSC对姜黄素包封量最高可达124.9mg/g,包封效率最高达71.3%。动物试验表明,WSC对姜黄素的包封有效提高其口服生物利用度。基于水溶性结构组装原理构建WP与大豆蛋白（Soy proteins,SP）的超分子共组装结构。经pH循环处理,WP与SP发生超分子结构共组装,形成可溶性球形纳米粒子。共组装促使SP几乎完全溶解,WP溶解度最高升至72.4%。不同于虫胶参与WP自组装的嵌入方式,SP与WP在疏水作用、静电作用和氢键共同驱动下通过结构共折叠进行构象组装,SP的并入限制蛋白共折叠程度,显着抑制三级结构的形成,从而赋予共组装粒子优异的水溶性。由于SP在促进WP溶解中的关键作用,结构共组装后WP的等电点偏移至pH 4～5之间,与SP类似,但共组装粒子在pH≥7时仍保持89%以上的溶解度。由于折叠受限引起的三维构象的相对展开,结构共组装显着强化WP的界面性能,其乳化活性和起泡性分别从8.2和160.0 cm3/g提升至15.7和683.3 cm3/g。借助蛋白之间的结构共组装,蛋白氨基酸组成得以改善,共组装粒子兼具两种蛋白的营养优势,必需氨基酸指数（EAAI）为58.97～64.91,高于WP（55.95）,可满足成人每日摄入需求。利用WP-SP共组装结构的油水双亲性实现油水界面的结构化。WP-SP共组装粒子的三相接触角在68.5°～79.7°之间,能够在c=1%～3%,Φ=0.7～0.8的条件下稳定凝胶状高内相Pickering乳液（HIPPE）。提高SP占比可显着促进组装粒子在水相一侧的润湿性,即可通过控制WP和SP的相对比例调节组装粒子的界面性能。流变学结果表明,共组装粒子中SP比例的提升可增强界面间的静电斥力,有效抑制油滴聚结,提升HIPPE凝胶的储存模量（G’值）。各WP:SP比例共组装粒子稳定的HIPPE均可在20 d的常温储藏期间保持长效稳定性及90°C处理时的热稳定性。受冰晶对纳米粒子吸附层的影响,HIPPE在一次冻融循环后结构崩毁。但纳米粒子仍保持其界面稳定能力,经重复均质后复乳为凝胶状HIPPE,赋予HIPPE重复加工的潜力。提升c和Φ可提升界面吸附层厚度,增强界面相互联系,并降低油滴自由度,提升HIPPE的G’值和表观粘度。利用WP与SP的超分子共组装诱导丁香酚的自乳化反应,构建具有抗菌活性的自乳化递送系统（Self-emulsified delivery systems,SEDS）。利用pH 12的稀碱溶解协同沸水浴可获得丁香酚溶液,该溶液可通过pH循环与WP-SP共组装结构发生自乳化反应,获得粒径为83.3～182.3 nm,Zeta-电位大于-21 m V的纳米乳剂。冷冻扫描和透射电镜结果表明,pH循环诱导SP和WP构象发生二维向三维的转变,形成以丁香酚为内核,WP-SP共组装结构为壁壳的核-壳结构。荧光和红外光谱证明结构共组装诱导丁香酚的自乳化机制为,WP和SP在pH循环后结构折叠,与疏水性丁香酚分子的结合可促进折叠进行,促使蛋白完成对其的包覆,诱导自乳化反应。该自乳化行为是以疏水作用主导的多种非共价作用力驱动的物理组装过程,SEDS对丁香酚的容量达约500 mg/g,自乳化反应提升丁香酚溶解度至3.5～7倍,且存在通过浓缩进一步提升浓度的空间。WP的并入增强蛋白在自乳化进程中的折叠程度,抑制蛋白热聚集,从而提升SEDS的储藏及热稳定性,使其符合食品生产及灭菌等热加工要求。SEDS的核-壳结构使得自乳化的丁香酚能够缓慢释放,同时保持其对革兰氏阴性和阳性菌的抑制活性。冻干后,粉末状SEDS溶解性优异,复溶后仍呈粒径67.6～174.6 nm的纳米结构,在喷涂于中式米糕后发挥显着抑菌保鲜作用,有效延长食品货架期。
袁红平,王立波,郜志鹏,俞晓鹏,解生彬[2]（2021）在《麋鹿血液生理生化指标的性别及年龄差异》文中提出血液生理生化指标是反应动物健康状况的重要参数。为了解不同性别和年龄麋鹿（Elaphurus davidianus）血液生理生化指标的差异,分别对大丰麋鹿保护区119头幼体、亚成体、成体麋鹿进行血液生理生化指标测定。结果显示:雄性麋鹿红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）指标和血小板总数（PLT）显着高于雌性（P <0.05）;碱性磷酸酶（ALP）和葡萄糖（GLU）指标显着高于雌性,胆固醇（CHOL）、尿酸（UA）、尿素（UREA）和甘油三酯（TG）指标显着低于雌性（P <0.05）。雄雌麋鹿幼体与亚成体、幼体与成体的多数生理和生化指标差异显着（P <0.05）,亚成体与成体只在少数生理和生化指标上存在差异。研究表明,麋鹿生理生化指标受性别和年龄的影响显着。该研究对探究麋鹿的适应能力、繁殖能力,以及疾病的诊断治疗具有重要意义。
周胜杰,杨蕊,于刚,马振华[3]（2021）在《黄鳍金枪鱼幼鱼体长与血液指标关系研究》文中进行了进一步梳理为积累人工养殖黄鳍金枪鱼（Thunnus albacores）幼鱼基础生理指标数据,该研究测定了不同体长黄鳍金枪鱼幼鱼（20G组:20～30 cm; 30G组:30～40 cm; 40G组:40～50 cm）血液钾离子（K+）、钙离子(Ca2+)、氯离子（Cl-）、氢离子（H+）、pH、葡萄糖、乳酸、钠离子（Na+）和总血红蛋白浓度以及红细胞比容和渗透压。结果显示,黄鳍金枪鱼幼鱼K+、Ca2+、Cl-、H+、pH、葡萄糖、红细胞比容数据组间差异不显着（P>0.05）。20G组的乳酸和总血红蛋白均显着高于其他两组（P<0.05）;30G组的标准化Ca2+显着高于其他两组（P<0.05）;Na+浓度随着体长的增加逐渐下降,相邻两组间差异不显着（P>0.05）。结果表明,黄鳍金枪鱼幼鱼在3个体长组中血液指标较稳定,在30G和40G两组之间差异较小,20G组与其他两组差异相对较大,随着体长的增加,血液指标趋于更稳定。
贾红敏,马永航,贺平丽,谯仕彦[4]（2021）在《过量赖氨酸对断奶仔猪及其肠道上皮细胞的影响》文中进行了进一步梳理旨在从体内与体外探究过量赖氨酸对断奶仔猪的影响。本试验选用144头杜×长×大三元杂交断奶仔猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复6头仔猪（3头阉公猪和3头母猪）,各组在日粮中分别添加1.3%、2.6%、3.9%和5.2%的回肠标准可消化赖氨酸（standardized ileal digestibility lysine, SID Lys）,观察其对于仔猪生长性能、器官指数以及生理生化等指标的影响。以IPEC-J2为体外模型,根据培养基与营养需要中氨基酸的种类与比例,添加赖氨酸及其他氨基酸,测定IPEC-J2细胞的增殖情况,并试图通过平衡氨基酸手段降低因过量添加赖氨酸造成的不利影响。结果显示,随着日粮SID Lys添加量的增加,断奶仔猪的生长性能显着下降（P<0.05）,血浆平均红细胞血红蛋白含量（mean corpuscular hemoglobin, MCH）、部分血清游离氨基酸含量和肠道形态受到影响。当在培养基中添加2.0 mmol·L-1赖氨酸时,IPEC-J2细胞活力显着下降（P<0.05）,培养基中原赖氨酸浓度(0.5 mmol·L-1)是IPEC-J2生长的最适浓度。当按照培养基中氨基酸平衡比例补充其他必需氨基酸时,细胞活力有一定程度的改善;当按照猪碱性氨基酸的最适比例补充相应浓度的精氨酸与组氨酸时,细胞活力随处理时间的变化而变化。综上所述,单独添加过多的赖氨酸对断奶仔猪的生长会产生负面作用,在生产实际应用中应充分考虑氨基酸之间的平衡。
高二强[5]（2021）在《围产前期不同能量日粮对奶牛产后生产和疾病的影响》文中研究指明
唐润梅[6]（2020）在《γ-[Glu](n（1-5）-Gln的酶法合成及其应用研究》文中提出γ-谷氨酰肽广泛分布于自然界中,参与生命体的多种生理活动。谷氨酰胺酶（EC3.5.1.2）是一种水解酶,同时具有转肽作用。本论文筛选出利于催化γ-谷氨酰转肽反应的谷氨酰胺酶,酶促合成一种未被报道的γ-谷氨酰肽(γ-[Glu]n（1-5）-Gln),进一步探究外部条件对其合成的影响及其钙离子螯合能力和抗冻性。实验结果如下:首先研究两种解淀粉芽孢杆菌源谷氨酰胺酶（E1和E2）的酶学特性。结果表明,E1和E2均能催化水解和转肽反应;在p H值10.0、37.0℃下,E1的水解活性优于E2,转肽活性二者无明显差别（P<0.05）;在p H值4.0-10.0、4.0-45.0℃,E1的耐受性优于E2;色氨酸、脯氨酸、精氨酸、苏氨酸和谷氨酰胺均可作为E1催化γ-谷氨酰转肽反应时的最佳γ-谷氨酰受体。因此,选用E1作为后续实验用酶。其次利用E1酶促合成γ-[Glu]n（1-5）-Gln,并探究底物浓度和初始p H值对其合成的影响。结果表明,E1具有催化合成γ-[Glu]n（1-5）-Gln的能力;UPLC-MS/MS鉴定出酶促反应产物:γ-Glu-Gln、γ-Glu-Glu-Gln、γ-Glu-Glu-Glu-Gln、γ-Glu-Glu-Glu-Glu-Gln和γ-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Gln;高底物浓度或高初始p H值,均有利于γ-[Glu]n（1-5）-Gln的酶促合成。然后采用水体系合成法用γ-[Glu]n（1-5）-Gln螯合钙离子,通过单因素实验和正交实验优化工艺,并对产物进行结构表征和细胞毒性实验。结果表明,γ-[Glu]n（1-5）-Gln具有钙离子螯合能力;螯合反应最优条件为:反应时间30.0 min,反应温度70.0℃,反应液肽浓度0.10 g/m L,反应液肽钙比20:1（w:w）;此条件下螯合率为91.84%,螯合物钙含量为4.39%;γ-[Glu]n（1-5）-Gln的氨基和羧基均参与了螯合反应;γ-[Glu]n（1-5）-Gln和γ-[Glu]n（1-5）-Gln螯合钙的浓度为0.3125-10 mg/m L时对LO2细胞无细胞毒性。最后利用降温曲线实验和DSC实验研究γ-[Glu]n（1-5）-Gln的抗冻活性,并探究其对酵母的低温保护作用以及对冷冻面团中巯基含量的影响。结果表明,γ-[Glu]n（1-5）-Gln具有抗冻性;初始p H值12.0下反应6.0 h制得的γ-[Glu]n（1-5）-Gln的抗冻活性为2.38;γ-[Glu]n（1-5）-Gln对酵母具有低温保护作用,对冷冻面团的二硫键具有保护作用。
倪明月[7]（2019）在《肺结核患者骨代谢和营养状况的临床研究》文中提出目的:结核病的发病率与死亡率位于我国传染病的第二位,结核病患者通常伴有代谢异常。本研究探讨肺结核患者存在骨代谢（血钙、血磷、碱性磷酸酶）和营养状况的异常,通过分析其异常是否可以用于评估结核病情的严重程度及抗结核治疗的临床疗效指标;为进一步通过补充维生素D3、钙及室外运动等改善骨代谢的方法,及改善营养失衡,判断是否有利于结核病患者的恢复,甚至可以缩短疗程、改善预后等奠定基础。方法:本研究采取回顾性分析,纳入2018年07月01日至2019年10月31日皖南医学院第一附属医院住院的活动性肺结核患者220例为研究对象,分为初治肺结核组与复治肺结核组。125例初治肺结核患者中,男91例,女34例;按年龄分组,其中18-39岁组:男18例,女12例;40-59岁组:男24例,女11例;60-79岁组:男49例,女11例。95例复治肺结核患者中,男57例,女38例;按年龄分组,18-39岁组:男11例,女9例;40-59岁组:男20例,女15例;60-79岁组:男26例,女14例。同时纳入120例正常体检健康人群作为对照组,其中男64例,女56例;按年龄分组,18-39岁组:男10例,女10例;40-59组:男15例,女35例;60-79组:男29例,女21例。实验室检查:（1）采用电感耦合等离子体发射质谱法测定钙磷等,在初治肺结核患者、复治肺结核患者与对照组血清中的含量,计算钙磷元素指标的中位数（四方位数）,分析初治肺结核患者、复治肺结核与对照组钙磷元素之间的差异,初步探讨钙磷元素与肺结核的关系;（2）测定碱性磷酸酶在初治肺结核患者、复治肺结核患者与对照组血清中的含量,计算ALP指标的中位数（四方位数）,分析初治肺结核患者、复治肺结核与对照组各元素之间的差异,初步探讨碱性磷酸酶与肺结核的关系;（3）测定血清白蛋白（serum albumin）、前白蛋白（pre-serum albumin）在初治肺结核患者、复治肺结核患者与对照组血清中的数值,计算白蛋白及前白蛋白指标的中位数（四方位数）,分析初治肺结核患者、复治肺结核与对照组各数值之间的差异,探讨白蛋白与肺结核的关系。结果:1钙测定结果:（1）18-39岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组钙测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（2）40-59岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组钙测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（3）60-79岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组钙测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;2磷测定结果:（1）18-39岁组:复治肺结核组分别与对照组及初治肺结核组磷测定值有差异（P<0.05）,特别是复治肺结核组与对照组差异显着（P<0.001）;（2）40-59岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组磷测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（3）60-79岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组磷测定值有差异（P<0.05）,并且初治肺结核组与复治肺结核组亦有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;3碱性磷酸酶测定结果:（1）18-39岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组ALP测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（2）40-59岁组:复治肺结核组分别与对照组及初治肺结核组ALP测定值有差异（P<0.05）,特别是复治肺结核组与对照组差异显着（P<0.001）;（3）60-79岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组ALP测定值有差异（P<0.05）,并且初治肺结核组与复治肺结核组亦有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;4白蛋白测定结果:（1）18-39岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组白蛋白测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（2）40-59岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组白蛋白测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）;（3）60-79岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组白蛋白测定值均有显着差异（P<0.001）;5前白蛋白测定结果:（1）18-39岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组前白蛋白测定值均有显着差异（P<0.001）;（2）40-59岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组前白蛋白测定值有差异（P<0.05）,特别是对照组与复治肺结核组差异显着（P<0.001）,并且初治肺结核组与复治肺结核组亦有差异（P<0.05）;（3）60-79岁组:对照组分别与初治肺结核组及复治肺结核组前白蛋白测定值均有显着差异（P<0.001）;结论:各年龄段肺结核患者与对照组血清中钙、磷元素和碱性磷酸酶均有差异（P<0.05）,特别是复治肺结核患者与对照组差异显着（P<0.001）,提示肺结核患者存在骨代谢异常。各年龄段肺结核患者与对照组血清中白蛋白、前白蛋白水平均有差异（P<0.05）,特别是复治肺结核患者与对照组差异显着（P<0.001）,提示肺结核患者存在营养状况异常。初治肺结核和复治肺结核患者,血清中钙磷元素、碱性磷酸酶水平和白蛋白、前白蛋白水平,均有差异,尤其是血清磷元素、碱性磷酸酶水平和白蛋白、前白蛋白水平差异显着（P<0.01）,提示复治肺结核患者骨代谢及营养状况异常程度更为明显。
郑玥[8]（2019）在《白蛋白对中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的调控作用及机制研究》文中研究表明目的:血管中血液的正常流动对维持机体的正常供血、供氧具有非常重要的意义。通常情况下,血管内无血液凝固和血栓形成;一旦血管内有血栓形成,就将导致机体组织器官的缺血、缺氧甚至损伤。中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）是中性粒细胞（neutrophil,PMN）在适宜刺激条件下释放到胞外的一种纤维网格样结构。NETs主要由PMN释放的细胞DNA和胞浆蛋白组成,其中含量最多的蛋白是组蛋白（histone）,其次是中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）和髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）。最近有越来越多的文献认为,NETs参与血管内血栓的形成,与脓毒症、自身免疫性疾病、糖尿病甚至肿瘤等疾病密切相关。因此,研究NETs参与疾病发生的分子机制、寻找有效的治疗手段具有重要意义。白蛋白（albumin,ALB）是血管中含量最高的蛋白质,在维持机体内环境中发挥重要作用,具有维持血浆胶体渗透压和血容量、运输和结合药物或内源性物质以及抗氧化的作用,临床上用于失血性休克、肝硬化伴腹水水肿、成人呼吸窘迫综合征、恶性肿瘤等治疗。我们实验室偶然发现,在无血清培养基中PMN可以释放NETs,但是在加入血清后NETs生成受到抑制,提示血清中存在某种具有抑制NETs生成的成分。我们知道,血管中有着大量的PMN,但在正常生理状态下却很少有NETs生成,如果自发生成大量的NETs,则可造成血管栓塞甚至休克、DIC。基于我们的上述发现,我们推测血管中应该存在对NETs生成具有精密调控作用的物质,但是该物质及其参与的调控机制尚不清楚。为此,我们设计了一系列实验开展血浆中具有抑制NETs生成的物质基础以及分子机制的研究,旨在阐明血管内抑制NETs生成的物质基础及调控机制。方法:一、人中性粒细胞的分离与NETs的检测1健康人中性粒细胞（PMN）的分离:采取健康人外周静脉血,采用人中性粒细胞分离液试剂盒分离中性粒细胞。2中性粒细胞培养基体系:将100%DMEM培养液作为标准PMN培养基体系,加于35mm激光共聚焦培养皿中;培养基体系中PMN细胞终浓度为5.0 × 105/ml。3中性粒细胞的鉴定:采用瑞氏染色和台盼蓝实验鉴定分离后的细胞种类及PMN的存活率。4NETs的检测:将PMN在CO2培养箱（37℃、5%CO2）中孵育 2h 后,加入 DNA 染料 sytox 绿/sytox 橙色[sytox green/sytox orange,培养基中终浓度为5 mM（后面涉及的浓度均为培养基中的终浓度）],并在激光共焦显微镜下观察绿色/红色荧光情况,采用ZEN widefield软件进行平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）的测定（后续实验中均采用此方法进行NETs的检测,方法不再赘述）。二、血清抑制NETs生成作用的再确认与成分筛选1确认血清对NETs的作用:检测在标准PMN培养基体系、含有10%胎牛血清（FBS）、10%人血清（HBS）的标准PMN培养基体系中NETs的生成量。2血浆成分的超滤:使用不同分子量规格（3 kDa、30 kDa、50 kDa、100 kDa）的超滤离心管对人血清进行超滤,获得不同分子量段的人血清组分。3各分子量段血浆组分对NETs作用的确认:将不同分子量段人血浆组分加入标准PMN培养基体系中培养2 h,检测各个分子量血浆组分实验组中NETs的生成量,初步确认具有抑制NETs作用的血浆组分的分子量范围。三、血浆中具有抑制NETs生成作用的蛋白质成分的筛选与确认1血液中蛋白的选取:通过复习文献在有抑制NETs作用的血浆组分分子量范围中选取血液中常见且重要的蛋白,并在该蛋白的生理浓度范围内选取某一值作为实验生理浓度。2血液蛋白对NETs生成的影响:将上述选取的蛋白以10%实验生理浓度加入标准PMN培养基体系,检测对NETs作用的影响;分析有NETs抑制作用的蛋白中最常见且重要的蛋白,将其作为主要研究对象。四、抑制NETs关键蛋白酶后白蛋白对NETs作用的研究1抑制MPO后白蛋白对NETs作用:将MPO抑制剂（终浓度为100 nM）加入含 BSA（0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量的变化。2抑制NE后白蛋白对NETs作用:将NE抑制剂（终浓度为100 nM）加入含 BSA（0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）的标准 PMN培养基体系中,检测NETs生成量的变化。3抑制PAD4后白蛋白对NETs作用:将PAD4抑制剂（终浓度为 100 nM）加入含 BSA（0.5mg/ml、1.5mg/ml、4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量的变化。五、抗人血清白蛋白抗体对白蛋白抑制NETs作用的影响1抗人血清白蛋白抗体与人白蛋白的预孵:配置200 μg/ml HSA,将抗人血清白蛋白抗体加入200 μg/ml HSA溶液,放入CO2培养箱（37℃、5%CO2）过夜。2检测孵育抗体后对白蛋白抑制NETs的影响:将4种PMN培养基体系（无白蛋白,抗人血清白蛋白抗体,200 μg/ml HSA,200 μg/ml结合抗体的HSA）进行NETs检测。六、氧化或还原状态的牛血清白蛋白的抗NETs作用1氧化状态的BSA的制备:将BSA（40mg/ml）与H2O2（45mM）在室温孵育1h,将孵育后的BSA进行冻干,获得氧化状态的BSA。通过BCA蛋白浓度测定法测定氧化状态BSA浓度,并将其浓度调整为 40 mg/ml。2还原状态的BSA的制备:将BSA（40 mg/ml）与胱氨酸（17mM）在37℃孵育24 h后,采用PD-10脱盐柱脱去残留的胱氨酸;将柱流出液进行冻干,获得还原状态的BSA。通过BCA蛋白浓度测定法测定还原状态BSA浓度,并将其浓度调整为40 mg/ml。3氧化或还原状态的BSA对NETs的影响:对氧化或还原状态BSA（4 mg/ml）加入标准PMN培养基体系进行NETs生成量的检测,并与正常的BSA结果进行比较,确定氧化或还原状态的BSA对NETs的影响。七、脂多糖和大肠埃希菌存在情况下牛血清白蛋白抑制NETs的作用1 脂多糖存在情况下牛血清白蛋白抑制NETs的作用1.1 LPS存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用1.1.1低浓度LPS存在情况下实验生理浓度BSA抑制NETs的作用:将 LPS（终浓度:20ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml、160 ng/ml）加入含有生理浓度BSA（40mg/ml）的标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量。1.1.2高浓度LPS存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用:将 LPS（终浓度:160ng/ml,320ng/ml,640ng/ml）加入含有 BSA（40 mg/ml,5mg/ml）的标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量。1.2 LPS存在情况下BSA抑制NETs的量效关系:将LPS（终浓度:320 ng/ml）加入含有 BSA（0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）的PMN培养基体系中,检测NETs的生成量。2大肠埃希菌存在情况下牛血清白蛋白抑制NETs的作用2.1 EC存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用2.1.1高浓度EC存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用:将高浓度EC（2.9×107）加入含有不同浓度BSA（0.16mg/ml,0.5 mg/ml,1.5 mg/ml,4.5mg/ml,40mg/ml）的 PMN 培养基体系中,检测 NETs生成量的变化。2.1.2低浓度EC存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用:由于之前实验中EC浓度过高,于是降低EC浓度进行实验,将EC（2.5×105）加入含有不同浓度 BSA（0.16mg/ml,0.5 mg/ml,1.5mg/ml,4.5 mg/ml,40 mg/ml）的PMN培养基体系中,检测NETs生成量的变化。2.2 EC存在情况下BSA抑制NETs生成的动态观察:将50 μl EC（5.0×106）加入含有BSA（1.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,在三个时像点（30min、60min、120min）进行NETs观察以检测EC是否会影响NETs的生成速率。八、Ca2+浓度与Ca2+通道阻断剂对白蛋白抑制NETs作用的影响1有Ca2+和无Ca2+培养基对NETs的生成的影响:PMN分别在有钙PMN培养基体系和无钙PMN培养基体系中孵育,观察NETs生成情况。2不同Ca2+浓度对NETs生成的影响:将有Ca2+、无Ca2+ DMEM作为基础养基,配置成含有不同Ca2+浓度（0%、0.625%、1.25%、2.5%、5%、10%、20%）的PMN培养基体系,将PMN在上述浓度培养基中孵育2 h,观察NETs生成情况的差异。3钙离子通道阻断剂对NETs生成的影响3.1 2-氨乙氧基二苯酯硼酸（2-APB）对HSA抑制NETs作用的影响:将2-APB（终浓度为5μM）加入含有HSA（1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量。3.2维拉帕米对NETs生成的影响:将维拉帕米（终浓度为10 μM）加入标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量。九、牛血清白蛋白对中性粒细胞胞内总活性氧和线粒体活性氧水平的影响1BSA对PMN胞内总活性氧（ROS）水平的影响1.1 PMN内ROS水平的检测:将PMN加入含10%BSA的标准PMN培养基体系,并于CO2培养箱（37℃、5%CO2）孵育20min,在培养基体系加入ROS荧光探针DCFH-DA（10 μM）并孵育30 min后取出,轻轻吹打使贴壁的PMN脱落,将其避光收集至1.5ml EP管内,采用流式细胞仪检测ROS活性氧探针的荧光强度。1.2不同种类蛋白对PMN内ROS的影响:标准PMN培养基体系中分别加入 B SA（4 mg/ml）、HSA（4 mg/ml）、apo Al（0.14 mg/ml）、HDL（0.3 mg/ml）,采用流式细胞仪检测ROS活性氧探针的荧光强度。2 BSA对PMN内线粒体活性氧（mitoROS）水平的影响2.1 PMN内mitoROS水平的检测:将含10%FBS的标准PMN培养基体系,并于CO2培养箱（37℃、5%CO2）孵育20min,在培养基体系加入mitoROS荧光探针MitoSOX Red并孵育30 min后取出,轻轻吹打使贴壁的PMN脱落,将其避光收集至1.5 ml EP管内,采用流式细胞仪检测mitoROS活性氧探针荧光强度。2.2线粒体呼吸链干扰剂对白蛋白抑制NETs生成的影响:呼吸链干扰剂中抗霉素A（antimycin A）是mitoROS生成抑制剂,鱼藤酮（rotenone）是mitoROS生成促进剂。在标准PMN培养基体系中分别加入2 μl抗霉素（终浓度为20 μM）、5 μl鱼藤酮（终浓度为10μM）,通过检测mitoROS荧光探针及NETs生成量的变化,进一步明确mitoROS在NETs生成中的作用。2.3不同种类蛋白对PMN内mitoROS水平的影响:标准PMN培养基体系中分别加入BSA（终浓度为4 mg/ml）、HSA（终浓度为4 mg/ml）、apo A1（终浓度为 0.14 mg/ml）、HDL（终浓度为 0.3 mg/ml）,采用流式细胞仪检测荧光探针的荧光强度。十、自噬干扰剂对白蛋白抑制NETs作用的影响1自噬抑制剂对白蛋白抑制NETs作用的影响:将3-MA（终浓度为 1 mM）加入含有 BSA（0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,观察NETs生成情况。2自噬激动剂对白蛋白抑制NETs作用的影响:将RAPA（5 mM）加入含有 3 种不同浓度的 BSA（0.5 mg/ml、1.5 mg/ml、4.5 mg/ml）PMN培养基体系中,观察NETs生成情况。3 CaMKK抑制剂对NETs生成的影响:将STO 609（50 μM）加入标准PMN培养基体系中,检测NETs生成量。结果:一、人中性粒细胞的分离与NETs的检测1健康人中性粒细胞（PMN）的分离、培养与鉴定:通过人外周血PMN分离液试剂盒按照说明分离出目标细胞;并通过瑞士染色观察到该细胞核呈杆状和4分叶状,胞质中含有紫红色颗粒,可以确认分离得到的细胞为PMN,通过台盼蓝排斥实验显示其存活率高于93%。2NETs的检测:在激光共聚焦显微镜下可观察到,共聚焦皿中的PMN周围生成绿色/红色网状或丝状的NETs。二、血清抑制NETs生成作用的再确认与成分筛选1标准PMN培养基体系中可以观察到NETs的大量生成,但在含10%FBS的PMN培养基体系中几乎观察不到NETs。上述结果表明,10%FBS对NETs的生成具有显着的抑制作用。2血浆成分的超滤:通过超滤离心获得超滤离心管下层滤液,该下层滤液即为含有不同分子量规格的血浆组分。3含有不同分子量规格的血浆组分对NETs作用的观察:3 kDa、30 kDa超滤离心管所得的血浆组分对NETs无明显作用,而50 kDa以上超滤离心管所得的血浆组份对NETs具有抑制作用,其中以100 kDa超滤离心管所得的血浆组份对NETs的抑制效果最强。上述结果表明,血浆中具有抑制NETs生成的成分,且可能为大分子量的物质。三、血液中具有抑制NETs生成作用的蛋白质成分的确认1血液中蛋白的选取:经过复习文献,血液中该分子量段中的常见和重要的蛋白分别为人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein,HDL）、转脂蛋白 a-1（apolipoprotein Al,apoAl）、纤溶酶原（fibrinogen,FIB）、γ-球蛋白（γ-globulin）、转铁蛋白（transferrin,TRF）、IgG。鉴于蛋白质结构和保守性和获得的难易度,在本实验中牛血清白蛋白（bovine serum albumin,B SA）替代 HSA 进行实验。在上述蛋白的生理浓度范围中选取其中值作为实验工作浓度,浓度值分别为 40mg/ml（HSA/BSA）、3 mg/ml（HDL）、1.4mg/ml（apo A1）、22mg/ml（FIB）、17mg/ml（γ-globulin）、3mg/ml（TRF）、50 mg/ml（Ig G）。2血液中重要和常见的蛋白对NETs作用的观察:将实验蛋白的终浓度定为10%生理浓度的蛋白浓度,即4mg/mlHSA/BSA、0.3 mg/ml HDL、0.14 mg/ml apo A1、2.2 mg/ml FIB、1.7 mg/ml γ-globulin、0.3 mg/ml TRF、5mg/ml IgG),分别加入标准PMN培养基体系中检测NETs生成量。结果表明,10%实验生理浓度的HSA/BSA、HDL、FIB 对 NETs 有较强抑制作用,而 γ-globulin、apo A1、TRF、IgG 对NETs无明显抑制作用。3主要研究对象的选取:由于HSA在血液中含量最高且具有重要的生理意义,故选取HSA作为主要研究对象,但由于HSA价格昂贵,于是选取BSA替代进行后续相关实验。四、抑制NETs关键蛋白酶后白蛋白对NETs作用的研究1抑制MPO关键蛋白酶后白蛋白对NETs作用的研究:（1）在标准PMN培养基体系中NETs可大量生成,将MPO抑制剂加入标准培养基体系中NETs生成量略有降低,但仍有大量生成;（2）在低浓度BSA（0.5 mg/ml）的培养基体系中NETs仍可生成,MPO抑制剂加入含有低浓度BSA（0.5 mg/ml）的培养基体系中NETs生成量无明显变化;（3）较低浓度BSA（1.5 mg/ml）的PMN培养基体系中仍有少量NETs生成,将MPO抑制剂加入较低浓度BSA（1.5 mg/ml）的PMN培养基体系中后NETs生成量没有明显变化;（4）含BSA（4.5 mg/ml）的PMN培养基体系中仅有非常少量的NETs生成,将MPO抑制剂加入高浓度BSA（4.5mg/ml）的标准PMN培养基体系中则几乎不能观察到NETs生成。结果表明,加入MPO抑制剂后可减少NETs生成量,加入BSA后可加强对NETs的抑制,且抑制作用随着BSA浓度的增加而加强。2抑制NE关键蛋白酶后白蛋白对NETs作用的研究:（1）NE抑制剂加入标准PMN培养基体系中后NETs生成量略有降低,但仍有大量生成;（2）NE抑制剂加入含低浓度BSA（0.5mg/ml）的培养基体系中后,NETs虽有生成但生成量降低;（3）NE抑制剂加入较低浓度BSA（1.5 mg/ml）的培养基体系中后仅能观察到丝状NETs;（3）NE抑制剂加入高浓度BSA（4.5mg/ml）的标准PMN培养基体系中几乎不能观察到NETs生成。结果表明,NE抑制剂本身抑制NETs作用很低,但是可增强BSA抑制NETs的作用。上述实验说明加入NE抑制剂后可减少NETs生成量,加入BSA后可加强对NETs的抑制,且抑制作用随着BSA浓度的增加而加强。3抑制PAD4关键蛋白酶后白蛋白对NETs作用的研究:（1）PAD4抑制剂加入标准PMN培养基体系中NETs生成量略有降低,但仍有大量生成;（2）PAD4抑制剂加入含低浓度BSA（0.5 mg/ml）的培养基体系中,NETs虽有生成但生成量降低;（3）PAD4抑制剂加入较低浓度BSA（1.5 mg/ml）的培养基体系中仅能观察到丝状NETs;（4）PAD4抑制剂加入高浓度BSA（4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中几乎不能观察到NETs生成。结果表明,PAD4抑制剂本身抑制NETs作用很低,但是可增强BSA抑制NETs的作用。上述实验说明在加入PAD4抑制剂后可减少NETs生成量,加入BSA后可加强对NETs的抑制,且抑制作用随着BSA浓度的增加而加强。五、抗人血清白蛋白抗体对白蛋白抑制NETs的影响1抗人血清白蛋白抗体与白蛋白的预孵:成功获得结合抗体的HSA。2抗人血清白蛋白抗体对白蛋白抑制NETs的影响:与抗体共同孵育后的BSA（结合抗体的BSA）加入PMN培养体系后,仍然可以观察到丝网状的NETs生成,表明结合抗体的BSA对NETs的抑制功能下降。六、氧化或还原状态的牛血清白蛋白的抗NETs作用1氧化状态BSA的制备:获得氧化状态的BSA。2还原状态的白蛋白的制备:获得氧化状态的BSA。3氧化或还原状态的BSA对NETs的影响:在含有氧化状态或还原状态的白蛋白（4 mg/ml）的标准PMN培养基体系中,NETs生成量均明显高于含正常BSA（4mg/ml）的标准PMN培养基体系。结果表明,改变白蛋白的氧化、还原状态会影响白蛋白对NETs的抑制作用。七、脂多糖和大肠埃希菌存在情况下牛血清白蛋白抑制NETs的作用1 LPS存在情况下BSA抑制NETs的作用1.1低浓度LPS存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用1.1.1低浓度LPS存在情况下实验生理浓度BSA抑制NETs的作用:结果表明,实验生理浓度BSA环境中,LPS刺激PMN生成NETs受到明显抑制,升高LPS浓度会导致PMN大量死亡且有极少量丝状NETs生成。1.1.2高浓度LPS存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用:实验结果表明,在高浓度BSA环境中即使有极高浓度LPS刺激,PMN也很难生成NETs;在低浓度BSA环境中,极高浓度LPS可弓起大量NETs生成。1.2 LPS存在情况下BSA与NETs生成的量效关系:NETs的生成量随着BSA浓度升高而降低,在含BSA（4.5mg/ml）PMN培养基体系中几乎不能观察到NETs生成。加入LPS的PMN培养基体系中NETs的生成量增多;但随着BSA浓度的升高,LPS诱导生成的NETs量逐渐减少。结果表明,BSA对LPS诱导的NETs抑制作用具有显着的量效关系。2 EC存在情况下BSA抑制NETs的作用2.1 EC存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用2.1.1低浓度EC存在情况下BSA抑制NETs的作用:结果表明,实验生理浓度BSA环境中,加入EC也无NETs生成,而低浓度BSA环境中NETs变化不明显。2.1.2高浓度EC存在情况下不同浓度BSA抑制NETs的作用:实验结果显示,在未加入EC的PMN培养体系中,NETs的生成量随着BSA浓度增高而降低;加入了高浓度EC的PMN培养体系中,PMN直接死亡并不伴有NETs的生成。上述结果表明,在高浓度EC环境中,PMN直接死亡并不释放NETs。2.2 EC存在情况下BSA对NETs抑制的动态观察:结果显示,在低浓度BSA（4.5mg/ml）的环境中,无EC诱导的NETs随着时间的推移纤维样结构逐渐呈网状张开;NETs在EC诱导下的生成速率变化不明显,在60min时可观察到NETs纤维状结构更广,但在120 min时可观察到EC诱导的NETs纤维状结构局部则呈团状。上述结果表明EC对NETs的生成速率与生成量无明显作用,但可能会影响NETs纤维状结构的形态,推测可能与NETs捕捉细菌时需要变化形态有关。八、Ca2+浓度与Ca2+通道阻断剂对白蛋白抑制NETs作用的影响1 Ca2+浓度对白蛋白抑制NETs作用的影响1.1有Ca2+和无Ca2+培养基对NETs的生成的影响:含Ca2+的标准PMN培养基体系中NETs大量生成,而在无Ca2+的标准PMN培养基体系中NETs生成较少。结果表明,在无Ca2+的环境中PMN无法生成NETs,说明NETs的生成与Ca2+密切相关。1.2不同Ca2+浓度对NETs生成的影响:标准PMN培养基体系中Ca2+ 浓度为265mg/dl。在无Ca2+ 和含低浓度Ca2+（1.66mg/dl～3.31 mg/dl）的培养基体系中NETs的生成量显着减少,在Ca2+浓度高于6.62mg/dl的PMN培养基体系中NETs即可大量生成。结果表明,在一定的Ca2+浓度范围内,NETs的生成与Ca2+浓度呈正相关。2 Ca2+通道阻断剂对NETs生成的影响2.1维拉帕米对NETs生成的影响:标准PMN培养基体系中NETs可大量生成;在低浓度HSA（1.5 mg/ml）的标准培养基体系中有较多NETs的生成,将维拉帕米加入标准培养基体系中NETs生成降低,但仍有NETs生成。结果表明,维拉帕米可略微降低NETs生成量,NETs生成可能与钙离子通道相关。2.22-氨乙氧基二苯酯硼酸（2-APB）对白蛋白抑制NETs作用的影响:在标准PMN培养基体系中NETs可大量生成;在低浓度HSA（1.5mg/ml）的标准培养基体系中有较多NETs的生成;将2-APB加入含低浓度HSA（1.5mg/ml）的标准培养基体系中NETs的生成量无明显变化;在含HSA（4.5mg/ml）的标准培养基体系中几乎无NETs的生成,将2-APB加入含HSA（4.5 mg/ml）的标准培养基体系中NETs的生成量也无明显变化。结果表明,2-APB对NETs的生成无显着影响、对白蛋白抑制NETs的作用也无显着影响。九、不同血浆蛋白对中性粒细胞胞内总活性氧和线粒体活性氧水平的影响1BSA对PMN胞内总活性氧（ROS）水平的影响1.1 PMN胞内ROS水平的检测:标准PMN培养基体系中的PMN胞内产生大量ROS（1183429±136026）,含10%BSA的标准PMN培养基体系中PMN胞内ROS水平较低（368608±12145）。1.2不同蛋白对PMN胞内ROS水平的影响:含HDL和apoAl的培养基体系中的PMN产生大量的ROS（HDL,1107035±179906;apoAl,1178918±114703）。上述结果表明,BSA/HSA可明显抑制PMN胞内ROS生成,而HDL、apoAl对PMN胞内ROS无明显作用。2 BSA对PMN胞内线粒体活性氧（mitoROS）水平的影响2.1 PMN胞内mitoROS水平的检测:标准PMN培养基体系中的PMN胞内产生大量mitoROS（20878±8270）,含10%BSA的标准PMN培养基体系中PMN胞内ROS水平较低（6977±139）。2.2不同蛋白对PMN胞内mitoROS水平的影响:含BSA、HDL的PMN培养基体系中的PMN胞内mitoROS水平均有不同程度的降低。2.3线粒体呼吸链干扰剂对白蛋白抑制NETs生成作用的影响2.3.1线粒体呼吸链干扰剂对PMN胞内mitoROS水平的影响:抗霉素A可明显抑制PMN胞内mitoROS水平,鱼藤酮可以显着增加PMN胞内mitoROS水平.2.3.2线粒体呼吸链干扰剂对白蛋白抑制NETs生成作用的影响抗霉素A、鱼藤酮对NETs的生成均无明显影响,表明改变中性粒细胞胞内mitoROS水平与NETs的生成无明显关系。十、自噬干扰剂对白蛋白抑制NETs生成的影响1自噬激动剂对白蛋白抑制NETs作用的影响:将自噬激动剂雷帕霉素（RAPA）加入不含BSA和含有BSA（4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中。结果显示,BSA可以抑制NETs的生成,但是RAPA可显着增加NETs的生成,并且RAPA可消除BSA对NETs生成的抑制作用。结果表明,BSA抑制NETs生成的作用与抑制自噬有关,增强自噬则可消除BSA的抑制NETs生成的作用。2自噬抑制剂对白蛋白抑制NETs作用的影响:将自噬抑制剂3-MA加入不含BSA和含有BSA（4.5 mg/ml）的标准PMN培养基体系中。结果显示,在上述培养体系中3-MA、BSA均可显着抑制NETs的生成,但是3-MA的加入并未显着改变BSA对NETs生成的抑制作用。结果再次表明,BSA抑制NETs生成的作用与抑制自噬有关,因此抑制自噬并不影响BSA的抑制NETs生成的作用。3 CaMKK抑制剂对NETs生成的影响:标准PMN培养基体系中NETs可大量生成;在含BSA（4mg/ml）的PMN培养基体系中NETs生成量明显减少;将CaMKK抑制剂STO609加入标准PMN培养基体系后NETs仍可大量生成。结果表明,STO609对NETs的生成无显着影响、对白蛋白抑制NETs的作用也无显着影响。结论1正常人血浆中存在具有抑制NETs生成的物质,其中常见且重要的蛋白质为白蛋白,其对NETs生成具有显着的抑制作用,而Ig G、γ-globulin、TRF、apo Al 对 NETs 无明显作用。2 LPS可诱导NETs的大量生成,EC可改变NETs的形态,在LPS、EC存在情况下,白蛋白可有效抑制NETs的生成。3胞外Ca2+浓度与NETs的生成密切相关,降低胞外Ca2+浓度可有效抑制NETs生成,非选择性Ca2+通道抑制剂维拉帕米可降低NETs生成量。4白蛋白抑制NETs生成的作用机制可能与其降低PMN胞内ROS和mitoROS水平、抑制自噬有关,与CaMKK通路无关系。
卢虹,叶丽颖[9]（2018）在《血液离子钙检测结果的影响因素》文中研究说明离子钙在血液中发挥着重要的生理功能,临床上多采用离子选择电极法来检测血液中离子钙的含量。血液中的蛋白质、添加的抗凝剂肝素以及采血在空气中放置的时间都会对离子钙的检测产生影响,而这对于临床上诊断疾病产生一定的影响。
甘晶[10]（2017）在《多组分共存及乳酸菌发酵对豆浆中钙存在形式及体外吸收的影响研究》文中研究指明豆浆作为高植物蛋白饮品,因其具有人体所必须的氨基酸、异黄酮、矿物质等营养素深受人们的喜爱,近几年更成为了补钙的重要来源。豆浆不仅可以直接饮用,也可以通过加入水果及果味添加剂制成花式豆浆。随着乳酸菌功能特性的不断研究,豆浆也可通过加入乳酸菌发酵剂制成发酵豆浆,提高豆浆中的营养成分。到目前为止,关于豆浆的研究都主要集中在蛋白质、异黄酮及低聚糖的功能特性方面。然而如果添加水果等组分,或者发酵处理也会对钙的吸收造成影响。因此,本文以豆浆为研究对象,采用ICP-AES、HPLC-ICP-MS、Caco-2细胞模型的方法检测豆浆及发酵豆浆中不同形态钙的分布及钙的体外消化,并通过分析酚酸与不同亚基蛋白相互作用、不同种类稳定剂对Ca2+的络合作用,来探讨豆浆制品中不同成分间的相互作用对豆浆中钙吸收的影响。通过检测不同类型乳酸菌发酵豆浆中的钙吸收率,探讨钙在发酵过程中形态的变化,为开发补钙豆浆制品提供理论基础。本文主要的工作内容及结论如下:1.豆浆中钙的存在形式研究。利用离心的方法将豆浆分为不同组分,通过ICP-AES、钙离子电极检测不同类型钙的含量。采用HPLC-ICP-MS方法分析豆浆中水溶性物质分子量的分布及钙形态的分布。结果表明,钙与肽、有机酸等小分子物质通过离子键结合存在于豆浆中,分子量主要集中在1-3KDa。2.不同组分共存对于豆浆吸收率的影响。将不同结构的酚酸与含有不同亚基的7S大豆蛋白、11S大豆蛋白的相互作用,分析相互作用对7S大豆蛋白及11S大豆蛋白结构的影响,并探讨7S-酚酸、11S-酚酸复合物对钙吸收的影响。结果表明,酚酸会与7S、11S相互作用,这种相互作用受酚酸结构的影响,苯环上的羟基含量决定了蛋白的结合能力,但酚酸与蛋白的结合不会影响胃蛋白酶与胰蛋白酶对大豆蛋白的酶解,同时,也不会影响蛋白酶解液提高钙吸收率的作用。通过分析不同浓度、不同种类稳定剂对Ca2+的络合能力发现,不同种类稳定剂对Ca2+的络合能力受温度影响较大,温度越低络合能力越强,比较五种不同稳定剂的络合能力发现,结冷胶的络合能力最强。3.不同类型发酵剂对豆浆中钙吸收率的影响。本文从食堂购买的酸菜中筛选出一株代谢途径为异型发酵的植物乳杆菌,并将该菌株与实验室原有的同型发酵的粪肠球菌作为发酵剂,分别发酵豆浆,利用Caco-2细胞体外模拟人体小肠,检测发酵前后钙吸收率的变化。结果表明,植物乳杆菌B2发酵豆浆中钙的吸收率高于粪肠球菌发酵豆浆。4.不同类型发酵剂对豆浆中成分的影响。为了进一步探讨不同发酵剂发酵豆浆中钙吸收率的差异,本文对两种菌株发酵豆浆前后成分的变化进行检测。结果显示,两种菌株发酵豆浆都会引起蛋白结构的改变,而酸性氨基酸含量的增加是提高钙吸收的主要原因。异型发酵相比较同型发酵产生的乳酸含量较高,但不是引起植物乳杆菌发酵豆浆钙吸收率高于粪肠球菌发酵豆浆钙吸收率的原因,相对而言,植物乳杆菌特有的金属吸附能力是产生钙吸收率高的原因。5.植物乳杆菌发酵豆浆中钙的存在形式研究。利用HPLC-ICP-MS分析植物乳杆菌发酵豆浆中钙形态的分布,研究表明,发酵后的钙主要与酶解后的肽结合,两者复合体分子量在1500Da左右。为了提高钙结合肽的利用率,本文利用金属离子亲和层析柱分离纯化出具有耐消化的钙结合肽,并通过LC-MS/MS进行序列测定。得到五个肽段序列,分别为DEDEQIPSHPPR,ESEESEDSELR,GEKEEDEGEQPR,PQHPEREPQQPGEKEED,FVDAQPK。6.豆浆及发酵豆浆对前成骨细胞系MC3T3-E1增殖效应的影响研究。本文利用前成骨细胞系MC3T3-E1,证明了豆浆及发酵豆浆可以有效的分化标志物碱性磷酸酶的活性,对成骨细胞分化具有促进作用,而相对于原始豆浆,发酵可以显着提高对成骨细胞的增殖。
二、蛋白质浓度对血液中离子钙测定的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、蛋白质浓度对血液中离子钙测定的影响（论文提纲范文）
（1）基于超分子结构共组装的小麦面筋蛋白增溶机制及递送性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 小麦面筋蛋白组成和结构 |
| 1.2.1 麦醇溶蛋白 |
| 1.2.2 麦谷蛋白 |
| 1.3 小麦面筋蛋白溶解性和研究现状 |
| 1.3.1 小麦面筋蛋白的溶解性 |
| 1.3.2 蛋白增溶技术研究现状 |
| 1.4 蛋白结构组装及其应用 |
| 1.4.1 蛋白超分子结构组装概述 |
| 1.4.2 pH循环法制备蛋白结构组装粒子 |
| 1.4.3 蛋白纳米颗粒对油-水界面的稳定作用 |
| 1.5 立题背景和意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 第二章 虫胶介导小麦面筋蛋白的结构自组装及其递送性能研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 主要设备及仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 WP的提取 |
| 2.3.2 WP-虫胶纳米粒子的制备 |
| 2.3.3 WP-虫胶纳米粒子的溶解性 |
| 2.3.4 WP-虫胶纳米粒子的表观形态 |
| 2.3.5 WP-虫胶纳米粒子的结构表征 |
| 2.3.6 姜黄素在WP-虫胶纳米粒子中的包封 |
| 2.3.7 姜黄素的口服生物利用度 |
| 2.3.8 数据处理 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 WP-虫胶纳米粒子的溶解性 |
| 2.4.2 WP-虫胶纳米粒子的表观形态 |
| 2.4.3 pH循环对WP亚基组成的影响 |
| 2.4.4 WP内源荧光变化 |
| 2.4.5 WP外源荧光变化 |
| 2.4.6 WP-虫胶纳米粒子的表面性质 |
| 2.4.7 虫胶介导WP自组装的分子机制 |
| 2.4.8 WSC对姜黄素的递送性能 |
| 2.4.9 姜黄素的口服生物利用度 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 小麦面筋蛋白-大豆蛋白的超分子共组装及其增溶机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 主要设备及仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 样品制备 |
| 3.3.2 WP的溶解度变化 |
| 3.3.3 WP-SP共组装粒子的亚基组成 |
| 3.3.4 WP-SP共组装粒子的表观形态 |
| 3.3.5 WP-SP共组装粒子的结构表征 |
| 3.3.6 WP-SP共组装粒子的表面性质 |
| 3.3.7 WP-SP共组装粒子的功能特性 |
| 3.3.8 WP-SP共组装粒子的氨基酸组成 |
| 3.3.9 数据处理 |
| 3.4 结果和讨论 |
| 3.4.1 WP的氮溶解指数 |
| 3.4.2 WP-SP共组装粒子的表观形态 |
| 3.4.3 WP与SP的相互结合 |
| 3.4.4 WP-SP共组装粒子的表面特性 |
| 3.4.5 共组装对蛋白结构折叠的抑制 |
| 3.4.6 WP-SP共组装粒子的功能特性 |
| 3.4.7 WP-SP共组装粒子的氨基酸组成 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 小麦面筋蛋白-大豆蛋白油水双亲行为及界面结构化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 .材料与仪器 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 主要设备及仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 样品制备 |
| 4.3.2 WP-SP纳米粒子的特征 |
| 4.3.3 Pickering乳液粒径测定 |
| 4.3.4 Pickering乳液微观形态观察 |
| 4.3.5 Pickering乳液流变学特性分析 |
| 4.3.6 Pickering乳液的稳定性 |
| 4.3.7 数据处理 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 WP-SP共组装粒子的界面性质 |
| 4.4.2 WP-SP共组装粒子稳定的HIPPE特征 |
| 4.4.3 HIPPE的稳定性 |
| 4.4.4 粒子浓度对HIPPE性质的影响 |
| 4.4.5 油相体积分数对HIPPE性质的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 超分子共组装蛋白诱导丁香酚自乳化机制及纳米抗菌系统的构建研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与仪器 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 主要设备及仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 样品制备 |
| 5.3.2 SEDS的特征 |
| 5.3.3 SEDS的表观形态 |
| 5.3.4 SEDS的自乳化机制 |
| 5.3.5 SEDS的稳定性及丁香酚释放行为 |
| 5.3.6 SEDS的抗菌性能 |
| 5.3.7 SEDS冻干粉的溶解性 |
| 5.3.8 数据处理 |
| 5.4 结果和讨论 |
| 5.4.1 SEDS的特征 |
| 5.4.2 SEDS的表观形态 |
| 5.4.3 pH循环诱导丁香酚自乳化机制 |
| 5.4.4 SEDS的稳定性 |
| 5.4.5 SEDS中丁香酚的释放行为 |
| 5.4.6 SEDS的抑菌活性及应用 |
| 5.4.7 SEDS冻干粉的溶解性 |
| 5.5 本章小结 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录:作者在攻读博士学位期间发表的论文 |
（2）麋鹿血液生理生化指标的性别及年龄差异（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 血液采集 |
| 1.2.2 仪器及检测方法 |
| 1.2.3 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 麋鹿血液生理指标的性别差异 |
| 2.2 麋鹿血液生化指标的性别差异 |
| 2.3 麋鹿血液生理指标的年龄差异 |
| 2.4 麋鹿血液生化指标的年龄差异 |
| 3 讨论 |
| 3.1 性别对麋鹿血液生理生化指标的影响 |
| 3.2 年龄对麋鹿血液生理生化指标的影响 |
（4）过量赖氨酸对断奶仔猪及其肠道上皮细胞的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物、日粮与细胞 |
| 1.2 动物屠宰和样品采集 |
| 1.3 测定指标及方法 |
| 1.3.1 动物试验指标测定 |
| 1.3.1.1 日粮组分： |
| 1.3.1.2 生长性能及腹泻率： |
| 1.3.1.3 器官指数： |
| 1.3.1.4 血液生理生化指标： |
| 1.3.1.5 肠道形态： |
| 1.3.1.6 组织病理学： |
| 1.3.2 细胞处理及指标测定 |
| 1.3.2.1 不同赖氨酸浓度对IPEC-J2细胞增殖的影响： |
| 1.3.2.2 氨基酸平衡对细胞增殖的影响： |
| 1.3.2.3 碱性氨基酸平衡对细胞增殖情况的影响： |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结 果 |
| 2.1 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪生长性能、器官指数和腹泻率的影响 |
| 2.2 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪血液常规、血清生化、免疫指标、无机离子和生长激素的影响 |
| 2.3 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪血清氨基酸的影响 |
| 2.4 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪肠道形态的影响 |
| 2.5 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪组织病理学的影响 |
| 2.6 不同浓度的赖氨酸对IPEC-J2细胞增殖的影响 |
| 3 讨 论 |
| 3.1 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪生长性能的影响 |
| 3.2 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪器官指数、腹泻率、组织病理学的影响 |
| 3.3 日粮添加不同水平赖氨酸对断奶仔猪血液指标的影响 |
| 3.4 日粮添加不同水平的赖氨酸对断奶仔猪肠道形态的影响 |
| 3.5 过量赖氨酸对猪肠道上皮细胞增殖的影响 |
| 4 结 论 |
（6）γ-[Glu](n（1-5）-Gln的酶法合成及其应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 谷氨酰胺酶的概述 |
| 1.2 γ-谷氨酰肽的概述 |
| 1.2.1 天然存在的γ-谷氨酰肽 |
| 1.2.2 γ-谷氨酰肽的制备方法 |
| 1.2.3 γ-谷氨酰肽的分析检测 |
| 1.2.4 γ-谷氨酰肽的功能特性 |
| 1.3 肽螯合钙的研究现状 |
| 1.3.1 肽螯合钙的由来 |
| 1.3.2 肽螯合钙的制备方法 |
| 1.3.3 肽螯合钙的表征方法 |
| 1.3.4 肽螯合钙的功能性质 |
| 1.4 抗冻多肽的研究现状 |
| 1.4.1 抗冻蛋白和抗冻多肽的由来 |
| 1.4.2 抗冻蛋白和抗冻多肽在食品中的应用 |
| 1.4.3 抗冻多肽的应用前景 |
| 1.5 本课题的立题依据和研究内容 |
| 1.5.1 本课题的立题依据 |
| 1.5.2 本课题的研究内容 |
| 第二章 两种谷氨酰胺酶的酶学特性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料与仪器 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 数据处理 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 两种谷氨酰胺酶的酶活测定 |
| 2.3.2 pH值对谷氨酰胺酶水解和转肽酶活的影响 |
| 2.3.3 温度对谷氨酰胺酶水解和转肽酶活的影响 |
| 2.3.4 氯化钠和氯化铵对谷氨酰胺酶水解和转肽酶活的影响 |
| 2.3.5 金属离子对谷氨酰胺酶水解和转肽酶活的影响 |
| 2.3.6 谷氨酰胺酶催化γ-谷氨酰转肽反应的底物选择性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 底物浓度和初始p H值对酶促合成γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料与仪器 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 数据处理 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 底物浓度对酶促合成γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln的影响 |
| 3.3.2 初始p H值对酶促合成γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln的钙离子螯合能力研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 数据处理 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 螯合反应单因素实验结果 |
| 4.3.2 螯合反应正交实验结果 |
| 4.3.3 Gln、CPP、γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln螯合钙离子的比较 |
| 4.3.4 紫外吸收测试 |
| 4.3.5 红外光谱分析 |
| 4.3.6 LO2细胞毒性实验 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln的抗冻性研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料与仪器 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.2.3 数据处理 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 降温曲线实验结果 |
| 5.3.2 DSC实验结果 |
| 5.3.3 γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln对酵母的低温保护作用 |
| 5.3.4 γ-[Glu]_(n(1-5)-Gln对冷冻面团巯基含量的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（7）肺结核患者骨代谢和营养状况的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料(资料、内容)与方法 |
| 1.资料来源 |
| 2.研究对象 |
| 3.治疗方案 |
| 4.检查方法 |
| 5.统计方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（8）白蛋白对中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 血浆中具有抑制NETs作用的成分筛选及确认 |
| 第一节 人中性粒细胞的分离与NETs的检测 |
| 第二节 血浆抑制NETs生成作用的再确认与成分筛选 |
| 第三节 抑制NETs关键蛋白酶后白蛋白对NETs的作用研究 |
| 第四节 白蛋白抑制NETs作用的研究 |
| 小结 |
| 第二部分 白蛋白抑制NETs生成的作用机制研究 |
| 第一节 Ca~(2+)浓度与Ca~(2+)通道阻断剂对白蛋白抑制NETs作用的影响 |
| 第二节 白蛋白对中性粒细胞胞内总活性氧和线粒体活性氧的水平的影响 |
| 第三节 自噬干扰剂对白蛋白抑制NETs作用的影响 |
| 小结 |
| 全文小结 |
| 全文讨论 |
| 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（9）血液离子钙检测结果的影响因素（论文提纲范文）
| 1 pH的影响 |
| 2 抗凝剂和促凝剂的影响 |
| 3 蛋白质 |
（10）多组分共存及乳酸菌发酵对豆浆中钙存在形式及体外吸收的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 豆浆研究现状 |
| 1.1.1 豆浆的成分研究 |
| 1.2 钙的营养 |
| 1.2.1 钙的生理学功能 |
| 1.2.2 钙营养缺乏症状 |
| 1.2.3 补钙来源 |
| 1.2.4 钙的吸收机理 |
| 1.2.5 食物中水溶性钙的产生机制 |
| 1.3 钙的消化及吸收模型研究现状 |
| 1.3.1 胃肠消化屏障 |
| 1.3.2 胃肠消化模型 |
| 1.3.3 吸收模型 |
| 1.4 食物成分对钙吸收的影响 |
| 1.5 豆浆的研究 |
| 1.5.1 豆浆的应用 |
| 1.5.2 豆浆的种类 |
| 1.6 发酵豆浆发酵特性研究进展 |
| 1.6.1 发酵菌株的研究 |
| 1.6.2 豆浆发酵过程中生物化学变化 |
| 1.6.3 发酵豆浆功能性研究 |
| 1.7 源于大豆的钙吸收率研究进展 |
| 1.8 研究意义 |
| 1.9 研究内容及技术路线 |
| 第二章 豆浆中钙的存在形式及其吸收率的探究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料及试剂 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 |
| 2.2.3 豆浆的制作 |
| 2.2.4 钙的分离与测定 |
| 2.2.5 模拟胃肠消化 |
| 2.2.6 钙的吸收转运 |
| 2.2.7 发酵液分子量分布的测定 |
| 2.2.8 钙化学形态的测定 |
| 2.2.9 促成骨细胞分化研究 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 豆浆中钙含量及不同形态钙的质量分数比较 |
| 2.3.2 豆浆中钙的吸收 |
| 2.3.3 豆浆中分子量的分布 |
| 2.3.4 豆浆对成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 酚酸与大豆蛋白相互作用及对钙吸收影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料及试剂 |
| 3.2.2 主要仪器与设备 |
| 3.2.3 不同亚基蛋白(11S、7S)的制备 |
| 3.2.4 荧光光谱扫描 |
| 3.2.5 圆二色谱测定 |
| 3.2.6 动态光散射 |
| 3.2.7 体外模拟消化 |
| 3.2.8 Caco-2细胞吸收 |
| 3.2.9 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 不同亚基蛋白电泳鉴定 |
| 3.3.2 不同结构酚酸与不同亚基蛋白相互作用的鉴定 |
| 3.3.3 酚酸与不同亚基蛋白相互作用对蛋白结构的影响 |
| 3.3.4 酚酸对不同亚基蛋白相互作用对其模拟消化的影响 |
| 3.3.5 酰酸对不同亚基蛋白相互作用对其钙吸收的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 不同种类稳定剂对钙离子的络合研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料及试剂 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 |
| 4.2.3 稳定剂、钙—稳定剂复合物的制备 |
| 4.2.4 不同贮藏温度(37℃,4℃)对钙-稳定剂的影响 |
| 4.2.5 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 不同浓度稳定剂在37°贮藏12h对钙离子络合能力的影响研究 |
| 4.3.2 不同浓度稳定剂在4℃藏12h对钙离子络合能力的影响研究 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 豆浆中良好生长乳酸菌的分离筛选、鉴定及益生功能研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料及试剂 |
| 5.2.2 主要仪器与设备 |
| 5.2.3 豆浆、发酵豆乳的制备 |
| 5.2.4 酸菜中乳酸菌的分离 |
| 5.2.5 全豆浆中良好生长乳酸菌的复筛 |
| 5.2.6 菌株的鉴定 |
| 5.2.7 菌株耐酸、耐胆盐实验 |
| 5.2.8 数据统计与分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 菌种初筛实验结果 |
| 5.3.2 发酵豆乳筛选结果 |
| 5.3.3 16S rRNA的PCR扩增电泳结果 |
| 5.3.4 植物乳杆菌(B2)在豆乳中的驯化 |
| 5.3.5 植物乳杆菌(B2)耐酸、耐胆盐性试验结果 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 发酵条件及发酵菌株对豆浆中钙转化的比较研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 实验材料及试剂 |
| 6.2.2 主要仪器与设备 |
| 6.2.3 豆浆及发酵豆乳的制作 |
| 6.2.4 发酵豆乳中钙的测定 |
| 6.2.5 发酵过程中微生物分析 |
| 6.2.6 pH 测定 |
| 6.2.7 体外模拟消化 |
| 6.2.8 钙的吸收转运 |
| 6.2.9 发酵液促成骨细胞分化研究 |
| 6.2.10 发酵液分子量的分布 |
| 6.2.11 发酵液中钙化学形态的测定 |
| 6.2.12 蛋白质分子结构在发酵过程中的变化 |
| 6.2.12.1 凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白质的一级机构 |
| 6.2.12.2 圆二色谱分析蛋白质的二级结构 |
| 6.2.12.3 傅里叶红外光谱（FT-IR)分析蛋白质的二级结构 |
| 6.2.12.4 荧光分光光度法分析蛋白质的构象变化 |
| 6.2.13 氨基酸分析 |
| 6.2.14 有机酸在发酵过程中的变化 |
| 6.2.15 脂肪酸在发酵过程中的变化 |
| 6.2.16 水溶性糖在发酵过程中的变化 |
| 6.2.17 数据统计与分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 不同发酵条件对不同菌株发酵豆乳中水溶性钙含量的影响 |
| 6.3.2 不同菌株在发酵过程中钙吸收率的变化 |
| 6.3.3 不同菌株发酵产物对成骨细胞增殖的影响 |
| 6.3.4 发酵过程中成分的变化 |
| 6.3.5 植物乳杆菌发酵过程中分子量分布变化 |
| 6.3.6 植物乳杆菌发酵过程中钙的形态变化 |
| 6.3.7 植物乳杆菌发酵过程中磷的形态变化 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 耐消化钙结合肽的纯化与鉴定 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 材料与方法 |
| 7.2.1 实验材料及试剂 |
| 7.2.2 主要仪器与设备 |
| 7.2.3 不同分子量发酵液的制备 |
| 7.2.4 模拟肠道消化 |
| 7.2.5 大豆肽结合钙含量的测定 |
| 7.2.6 金属离子鳌合亲和层析步骤 |
| 7.2.7 LC-MS/MS鉴定大豆肽结构 |
| 7.2.8 数据统计与分析 |
| 7.3 结果与分析 |
| 7.3.1 1-3KDa分子量发酵上清液的钙结合量 |
| 7.3.2 金属离子鳌合亲和层析分离的大豆组分 |
| 7.3.3 LC-MS/MS鉴定耐消化大豆肽结构 |
| 7.4 本章小结 |
| 第八章 全文总结与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
四、蛋白质浓度对血液中离子钙测定的影响（论文参考文献）
- [1]基于超分子结构共组装的小麦面筋蛋白增溶机制及递送性能研究[D]. 何健. 江南大学, 2021
- [2]麋鹿血液生理生化指标的性别及年龄差异[J]. 袁红平,王立波,郜志鹏,俞晓鹏,解生彬. 野生动物学报, 2021(04)
- [3]黄鳍金枪鱼幼鱼体长与血液指标关系研究[J]. 周胜杰,杨蕊,于刚,马振华. 南方水产科学, 2021(05)
- [4]过量赖氨酸对断奶仔猪及其肠道上皮细胞的影响[J]. 贾红敏,马永航,贺平丽,谯仕彦. 畜牧兽医学报, 2021(07)
- [5]围产前期不同能量日粮对奶牛产后生产和疾病的影响[D]. 高二强. 东北农业大学, 2021
- [6]γ-[Glu](n（1-5）-Gln的酶法合成及其应用研究[D]. 唐润梅. 华南理工大学, 2020(02)
- [7]肺结核患者骨代谢和营养状况的临床研究[D]. 倪明月. 皖南医学院, 2019(01)
- [8]白蛋白对中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的调控作用及机制研究[D]. 郑玥. 重庆医科大学, 2019(01)
- [9]血液离子钙检测结果的影响因素[J]. 卢虹,叶丽颖. 临床医药文献电子杂志, 2018(84)
- [10]多组分共存及乳酸菌发酵对豆浆中钙存在形式及体外吸收的影响研究[D]. 甘晶. 中国农业大学, 2017(05)