一、上皮性卵巢癌组织中p21~(WAF1)表达及其与P53和PCNA的相关性（论文文献综述）
陈艳[1]（2021）在《FOXG1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖迁移的作用研究》文中进行了进一步梳理目的:肺癌在全球范围内高发,也是我国发病率最高的恶性肿瘤之一,且男性高发,起源于支气管粘膜或腺体。虽然针对肺癌的早期诊断和早期治疗已有一定成果,但肺癌的侵袭性使得治疗效果不理想。因此,提高肺癌的治疗效果、延长患者的生存时间、寻找新的治疗靶点已成为研究热点,主要以深入探索肺癌发病机制及其分子生物学机制为手段。FOXG1（Forkhead box G1）是一个在进化上高度保守的转录因子,在大脑中高表达,主要参与调节神经细胞的增殖和分化,其异常表达会引起神经系统相关疾病,如雷特综合征、以及其他自闭症谱系障碍疾病。近年来,关于FOXG1在肿瘤中的研究逐渐增多。已有研究表明,FOXG1的异常表达与神经胶质瘤、乳腺癌、卵巢癌,以及肝癌的发生发展密切相关,但是有关FOXG1与肺癌的相关性研究目前很少。本课题首先通过数据库和临床标本分析了FOXG1在肺癌中的表达水平及临床意义,进一步探讨了FOXG1对肺癌细胞增殖、凋亡、以及迁移能力的影响,为阐明肺癌发生的分子机制提供理论依据。方法:1利用TCGA和Oncomine在线数据库下载与FOXG1表达谱相关肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌的临床数据进行统计分析。2收集小细胞肺癌的临床标本,免疫组织化学分析FOXG1的表达。3 Cell Counting Kit-8实验测定过表达FOXG1对A549细胞增殖的影响。4 Transwell和伤口愈合实验研究过表达FOXG1对A549细胞迁移的影响。5流式细胞术检测过表达FOXG1对A549细胞的周期以及细胞凋亡的影响。6 Western blot分析过表达FOXG1对细胞周期负调控蛋白p21WAF1/CIP1、PI3K/AKT信号通路相关蛋白、以及上皮-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白的表达影响。结果:1基于TCGA数据库数据,差异表达分析显示FOXG1在肺腺癌和肺鳞癌中都呈现高表达;总生存期分析显示,在肺腺癌患者中,FOXG1高表达的无复发生存期低于低表达患者;Oncomine数据库分析显示,在小细胞肺癌中FOXG1表达增高。2免疫组织化学显示,FOXG1在小细胞肺癌中的表达高于癌旁组织。3 CCK8实验结果显示,A549-FOXG1细胞的OD值高于A549-NC细胞,提示过表达FOXG1使A549细胞的增殖能力增强。4 Transwell实验结果显示,过表达FOXG1使A549细胞的迁移能力增强。5流式细胞检测结果显示,过表达FOXG1使A549细胞的S期细胞占比减少,并且细胞凋亡率降低。6 Western blot结果,分析提示过表达FOXG1后p21WAF1/CIP1表达显着降低;PI3K/AKT信号通路中PTEN、p53和BAX蛋白表达降低;EMT标志蛋白E-catenin、αE-catenin和Vimentin表达升高,但是β-catenin和N-cadherin表达下调。结论:1数据库分析结果显示FOXG1在不同病理类型的肺癌组织中表达高于正常组织。进一步对临床标本分析表明,FOXG1在小细胞肺癌中的表达高于癌旁组织。2过表达FOXG1能够促进A549细胞的增殖。FOXG1能够下调p21WAF1/CIP1的表达从而加快细胞周期进程;FOXG1可以通过调控PTEN-PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡。3过表达FOXG1对A549细胞的迁移有一定的促进作用,但并不是通过EMT途径来调控的。
刘翔宇[2]（2020）在《miR-195-5p在卵巢癌中的作用与机制研究》文中研究指明背景:卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其发病率低于宫颈癌、子宫内膜癌,但卵巢癌的病死率显着高于另外两种肿瘤。在过去十年中卵巢癌的治疗方法虽有所发展,但由于早期阶段卵巢癌患者没有明显的症状,患者就诊时多已发生肿瘤的局部播散及远处转移,故卵巢癌患者的5年总生存率仍然较低,仅为30%-40%。卵巢癌的发生和发展是一个多阶段的过程,近年来,越来越多的研究表明micro RNA（miRNA）在卵巢癌的进展和转移等过程中发挥重要的调节作用,参与了肿瘤细胞增殖、凋亡、血管生成、迁移、侵袭和转移等过程,其中miR-195-5p被证实与多种肿瘤有关,但在卵巢癌中的作用及机制鲜有报道。目的:本研究旨在探究miR-195-5p能否调控卵巢癌的恶性生物学行为,进而深入分析可能的分子机制,即miR-195-5p通过调节下游靶基因影响卵巢癌的增殖、转移,从而为卵巢癌的治疗提供新策略,为卵巢癌提供新的预后预测指标。方法:1、收集天津医科大学附属肿瘤医院2017年10月至2018年12月之间卵巢癌患者行手术切除的上皮性卵巢癌组织标本共50例,同时收集正常卵巢组织标本50例,并培养正常卵巢细胞系（IOSE80）、卵巢癌细胞系（SKOV3、OVCAR3、A2780、ES-2）,通过实时定量PCR（q RT-PCR）技术观察、分别比较miR-195-5p在卵巢癌组织与正常卵巢组织、卵巢癌细胞系与正常卵巢细胞系中的表达情况。2、在miR-195-5p表达水平相对低的SKOV3细胞系中利用慢病毒构建稳定过表达miR-195-5p的细胞株,在miR-195-5p表达水平相对高的A2780细胞系中转染miR-195-5p inhibitor抑制内源性miR-195-5p表达,采用MTT、克隆形成、Ed U等细胞学实验观察miR-195-5p对卵巢癌细胞系增殖能力的影响;采用Transwell、划痕实验等方法观察miR-195-5p对卵巢癌细胞迁移能力的影响;通过流式细胞学技术,分析卵巢癌细胞系中过表达miR-195-5p后细胞周期的分布特点;通过小鼠体内成瘤实验,观察过表达miR-195-5p后小鼠体内移植瘤的生长情况。3、采用生物信息学方法预测miR-195-5p调控的靶基因,采用双荧光素酶报告系统分析miR-195-5p与其潜在靶基因--细胞分裂周期相关蛋白4（Cell Division Cycle-Associated protein 4,CDCA4）的靶向调控关系。q RT-PCR方法检测miR-195-5p和CDCA4在miR-195-5p过表达卵巢癌细胞系及对照组中的表达,同方法对比miR-195-5p和CDCA4在miR-195-5p低表达卵巢癌细胞系及对照组中的表达。Western Blotting方法检测miR-195-5p过表达/低表达卵巢癌细胞系中CDCA4的表达水平。在SKOV3细胞中采用Western Blotting方法检测miR-195-5p过表达组、miR-195-5p及CDCA4均过表达组、control三组中cyclin D1、p16的表达,细胞功能学实验明确三组细胞增殖能力的差异。4、q RT-PCR技术检测上皮性卵巢癌组织中miR-195-5p的表达水平、免疫组化方法检测卵巢癌组织中CDCA4的表达水平,分析miR-195-5p、CDCA4表达水平与卵巢癌临床病理学特征的关系;采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果:1、miR-195-5p在卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中的表达下调卵巢癌组织中miR-195-5p的表达显着低于在正常卵巢组织中的表达,差异有统计学意义（P<0.001）,与卵巢正常细胞系（IOSE80）相比,miR-195-5p在卵巢癌细胞系中的表达均降低,差异有统计学意义（P<0.01）。2、miR-195-5p抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移体外实验显示,过表达miR-195-5p可抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移;流式细胞学检测结果显示miR-195-5p的过表达可使细胞周期阻滞在G1期,减慢了其细胞周期进程。体内实验表明:过表达miR-195-5p的小鼠种植瘤,其体积及重量较对照组均降低。3、在卵巢中CDCA4是miR-195-5p的靶基因Starbase数据库显示CDCA4是miR-195-5p的潜在靶基因,继而使用双荧光素酶报告系统发现CDCA4 3’-UTR的活性能被miR-195-5p降低,进一步结合使用位点突变技术发现miR-195-5p结合位点突变的CDCA4 3’-UTR活性不能被miR-195-5p降低。卵巢癌细胞系中CDCA4的表达水平与miR-195-5p呈负相关,miR-195-5p通过对CDCA4的调节作用抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移,过表达CDCA4后可逆转miR-195-5p对卵巢癌细胞的抑制增殖作用。4、miR-195-5p、CDCA4表达水平与卵巢癌临床病理学特征的关系miR-195-5p在卵巢癌中的表达水平与有无淋巴结转移、组织学分级、FIGO分期有关,CDCA4在卵巢癌中的表达与病灶大小、组织学分级有关,miR-195-5p高表达的卵巢癌患者预后较好,CDCA4高表达的卵巢癌患者预后更差,miR-195-5p、FIGO分期是上皮性卵巢癌患者的独立预后因素。结论:上述研究表明:miR-195-5p在卵巢癌组织及卵巢癌细胞系中呈下调表达,miR-195-5p能够抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移能力,并且证实miR-195-5p可下调其靶基因CDCA4的表达从而抑制卵巢癌细胞的增殖、使细胞周期阻滞在G1期。在卵巢癌组织中miR-195-5p、CDCA4的表达与卵巢癌的组织学分级、生存状况等呈现显着的相关性。综上所述,miR-195-5p/CDCA4轴提供了一种解释卵巢癌疾病进展的机制,可成为卵巢癌诊断、治疗的潜在靶点,为卵巢癌临床治疗提供理论依据。
薛云[3]（2020）在《SP1、KLF4和P21在卵巢上皮性癌的表达及意义》文中研究说明目的:分析卵巢上皮性癌组织中SP1、KLF4和P21的异常表达情况及相关性,并分析三者表达与卵巢上皮性癌临床病理的关系,以寻找有效的卵巢上皮性癌的早期诊断及预后评估的指标。方法:收集2011-06～2015-08期间在我院妇科行手术切除治疗的卵巢上皮性癌患者48例的手术标本。另外收集同期在我院行手术治疗的卵巢良性肿瘤、交界性肿瘤各30例（浆液性、黏液性各15例）及因良性病变（如输卵管卵巢脓肿,子宫腺肌病合并严重子宫内膜异位症、严重的盆腔粘连等）行卵巢切除术的正常卵巢组织标本40例作为对照。采用SP免疫组化法检测标本中的SP1、KLF4和P21阳性表达情况,分析三者的关系及其与临床病理类型的关系,并分析三者对卵巢上皮性癌患者预后的影响。结果:（1）卵巢上皮性癌组织的SP1阳性率（72.9%）显着高于正常卵巢组织（7.5%）、卵巢良性肿瘤（6.7%）、卵巢交界性肿瘤（13.3%）（P<0.05）;卵巢上皮性癌组织的KLF4阳性率（29.2%）显着低于正常卵巢组织（87.5%）、卵巢良性肿瘤（86.7%）、卵巢交界性肿瘤（80.0%）（P<0.05）;卵巢上皮性癌组织的P21阳性率（25.0%）显着低于正常卵巢组织（67.5%）、卵巢良性肿瘤（66.7%）、卵巢交界性肿瘤（60.0%）（P<0.05）。（2）经Spearman等级相关分析显示SP1与KLF4、P21表达均呈负相关（r=-0.519,-0.481,P<0.01）;KLF4与P21表达呈正相关（r=0.462,P<0.01）。（3）Ⅲ～Ⅳ分期的SP1阳性表达率显着高于Ⅰ～Ⅱ分期（P<0.05）,Ⅲ～Ⅳ分期的KLF4、P21阳性表达率低于Ⅰ～Ⅱ分期（P<0.05）;随着分化程度的降低,SP1阳性表达率逐渐升高（P<0.05）,KLF4、P21阳性表达率逐渐下降（P<0.05）;有淋巴结转移的SP1阳性表达率显着高于无淋巴结转移者（P<0.05）,有淋巴结转移的KLF4、P21阳性表达率低于无淋巴结转移者（P<0.05）。（4）采用Kaplan-Meier法对患者进行生存分析,结果显示SP1、KLF4、P21阳性表达患者生存时间分别为10～60个月（中位时间40个月）、30～65个月（中位时间59个月）、30～65个月（中位时间60个月）;SP1、KLF4、P21阴性表达患者生存时间分别为25～65个月（中位时间60个月）、10～52个月（中位时间40个月）、10～52个月（中位时间40个月）。SP1阳性表达患者生存时间显着短于阴性表达患者（P<0.05）;KLF4、P21阳性表达患者生存时间显着长于阴性表达患者（P<0.05）。结论:（1）相比于正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤,卵巢上皮性癌中SP1蛋白阳性表达明显升高,KLF4、P21蛋白阳性表达明显降低。（2）卵巢上皮性癌组织中SP1蛋白表达与KLF4、P21蛋白表达呈负相关,KLF4蛋白表达与P21蛋白表达呈正相关。（3）SP1、KLF4、P21蛋白表达与卵巢上皮性癌病理分期、分化程度及淋巴结转移有关。（4）SP1蛋白表达异常升高,KLF4、P21蛋白表达下调均会导致卵巢癌患者生存时间缩短,因此,通过检测其表达水平有利于卵巢上皮性癌早期诊断和预后疗效评估。SP1、KLF4、P21基因也可能成为卵巢癌治疗的新靶点。
李云[4]（2020）在《长链非编码RNA TP73-AS1表观遗传抑制p21促进上皮性卵巢癌发展的研究》文中研究表明研究背景卵巢癌是全球范围内最常见的妇科恶性肿瘤之一,据2015年统计,我国每年约有5.21万名新诊断的患者,其中上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）最为常见。EOC的主要治疗方法是手术切除病灶组织,然后以诸如:化疗、放疗以及维持治疗等辅助后续治疗手段防止复发。尽管临床治疗上有一定发展,但治疗的结果仍然不容乐观。因此,寻找能够揭示EOC发生的深层分子机制成为诊断和治疗EOC的迫切需要。长链非编码RNA（Long noncoding RNAs,lncRNAs）是非编码RNA家族中的重要成员,与microRNA（长度20-22 nt）和环状RNA（共价闭环）共同存在,lncRNA的核苷酸序列长度超过200个核苷酸。研究发现,lncRNA在人类恶性肿瘤的发生发展中发挥着越来越重要的作用。例如,与邻近组织和细胞相比,lncRNA LINC00460在EOC组织和细胞中表达上调,同时,lncRNA LINC00460通过结合miR-338-3p在EOC中发挥致癌作用。LncRNA CASC2在EOC组织和细胞中表达下调,其下调提示着EOC患者的不良预后。这些研究均提示了lncRNA可能成为EOC诊断和治疗的新型分子靶点。有多项研究报道lncRNA TP73-AS1在人类多种癌症组织和细胞中均有表达,如骨肉瘤、膀胱癌和肾透明细胞癌。然而,lncRNATP73-AS1在EOC中的研究仍没有被报道,因此我们想探讨EOC中lncRNATP73-AS1的表达模式、生物效应和作用机制。研究目的我们计划在EOC组织和细胞中,探讨lncRNATP73-AS1的表达模式,并且深入探讨其作用机制,观察lncRNA TP73-AS1对表观遗传学的影响。首先我们对lncRNATP73-AS1与EOC的临床相关性进行研究,分析TP73-AS1在EOC组织和EOC细胞系中的表达模式,并对TCGA数据库中TP73-AS1表达数据的预后相关性进行分析;进一步,我们以EOC细胞系为研究载体,观察TP73-AS1在EOC癌细胞系上的功能,分别通过敲低和过表达TP73-AS1水平,观察TP73-AS1对EOC癌细胞系增殖、凋亡和侵袭的影响,并且在体内水平上观察TP73-AS1敲低对裸鼠EOC肿瘤生长的影响;最后,我们着重对TP73-AS1在EOC中的作用机制进行研究,分析TP73-AS1在EOC癌细胞系中的细胞内表达定位,然后从表观遗传角度分析受lncRNA TP73-AS1影响的下游分子,以及细胞核内组蛋白修饰酶的表达变化,同时通过阻断下游分子表达从而进一步明确下游相关分子在TP73-AS1影响的下游信号通路中的作用。研究方法本研究分为三个部分:1.LncRNATP73-AS1与EOC临床相关数据收集与分析:1.1.收集来自山东大学附属山东省立医院妇科收治的28例卵巢癌患者样品,28例患者均经三位临床病理专家会诊被确诊为EOC。研究中收集的信息和样品均获得所有患者的书面知情同意并同时获取了山东大学附属山东省立医院伦理委员会的批准。1.2.采用荧光定量PCR检测EOC癌组织和癌旁组织中lncRNATP73-AS1的表达水平。规范培养SKOV3、CAOV3、HO8910和OV420多种上皮性卵巢癌细胞系,以及正常人类卵巢上皮细胞系HOSEPiC;收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量PCR检测不同细胞系的lncRNA TP73-AS1表达水平。1.3.在 TCGA 数据库网站（http://cancergenome.nih.gov/）收集 lncRNATP73-AS1表达水平和患者的预后信息,制作生存曲线,比较TP73-AS1高表达组和低表达组的生存率。2.LncRNATP73-AS1的生物效应研究:2.1.设计合成三条lncRNA TP73-AS1的siRNA,并且构建过表达TP73-AS1的pcDNA3.1-TP73-AS1 质粒。2.2.TP73-AS1在EOC中的功能研究:使用RNAi MAX将siRNA转染到SKOV3细胞中实现对 lncRNA TP73-AS1 的敲低;使用 lipofectamine 3000 将 pcDNA3.1-TP73-AS1质粒转染到CAOV3细胞中,进行TP73-AS1在CAOV3中的过表达。之后收集细胞,采用荧光定量PCR检测lncRNATP73-AS1表达水平,选择最优的TP73-AS1的敲低序列。将最有效的TP73-AS1的siRNA转染到SKOV3细胞中,将pcDNA-TP73-AS1质粒转染到CAOV3细胞中,分别用Transwell法检测细胞侵袭能力,用碘化丙啶（propidium iodide,PI）染色和流式细胞仪检测细胞凋亡比率,同时用CCK-8法检测细胞增殖能力。进一步构建含最优siRNA序列的TP73-AS1的慢病毒表达载体,感染细胞获得病毒后,将病毒感染到SKOV3细胞中,再经药物筛选获得稳定敲低TP73-AS1的SKOV3稳定细胞系;收集特定数量活细胞,将其注射到裸鼠皮下,每3日检测肿瘤大小,并于21日时处死小鼠,剥离肿瘤,对肿瘤进行称重并比较TP73-AS1敲低组和对照组肿瘤的重量和大小。3.TP73-AS1在EOC中的机制研究:3.1.用荧光定量PCR检测SKOV3细胞核和细胞质中lncRNA TP73-AS1的水平差异,用荧光原位杂交方法检测lncRNATP73-AS1在细胞中的亚细胞定位。3.2.在SKOV3细胞中敲低TP73-AS1,采用荧光定量PCR检测CKIs（细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白）家族和CDKs（周期蛋白依赖性激酶）家族各成员的mRNA表达,并用免疫印迹法验证相关因子是否随同TP73-AS1敲低而变化;为了进一步探讨TP73-AS1对细胞周期相关因子的调节机制,我们之后采用RNA结合蛋白免疫沉淀法（RIP）检测与TP73-AS1结合的组蛋白修饰酶;采用染色质免疫共沉淀法（ChIP）检测EZH2和H3K27me3在p21基因启动子区的结合情况;随后,我们将TP73-AS1和p21的siRNA共同转染到SKOV3细胞中,收集细胞后,分别用Transwell法检测细胞侵袭,用碘化丙啶染色和流式细胞仪检测细胞凋亡比率,用CCK-8法检测细胞增殖情况。最后,我们通过收集和分析TCGA数据库中TP73-AS1、p21和EZH2表达水平和患者预后数据,制作p21和EZH2生存曲线,比较TP73-AS1和EZH2表达的相关性。研究结果1.与EOC癌旁组织相比,TP73-AS1在EOC癌组织标本中表达明显上调;与之一致的是,在 SKOV3、CAOV3、HO8910、OV420 几种 EOC 细胞系中 TP73-AS1表达水平也明显高于正常人卵巢上皮细胞系HOSEPiC的TP73-AS1水平;另外,TCGA数据库的Kaplan-Meier生存曲线分析结果提示:EOC患者TP73-AS1 mRNA表达水平越高,预后越差。2.为了探讨TP73-AS1对EOC细胞生物学功能的影响,我们发现TP73-AS1 siRNA下调SKOV3细胞的TP73-AS1水平,TP73-AS1过表达质粒上调CAOV3细胞的TP73-AS1水平。Transwell侵袭实验表明,TP73-AS1的敲低导致TP73-AS1侵袭细胞的数量减少,而过表达TP73-AS1则引起侵袭细胞数量明显增加;凋亡实验结果表明,TP73-AS1的敲低能促进EOC细胞凋亡,而过表达TP73-AS1会抑制EOC细胞凋亡;另外,CCK-8实验表明,TP73-AS1的敲低抑制EOC细胞增殖,而过表达TP73-AS1则促进细胞增殖。体内裸鼠成瘤实验发现,与SKOV3阴性对照组相比,TP73-AS1敲低组肿瘤的生长受到明显抑制。3.通过探索TP73-AS1在细胞内的亚定位,我们发现,TP73-AS1主要表达于细胞核中,提示TP73-AS1在EOC细胞中的机制可能是影响基因的转录调控;进一步证实,TP73-AS1敲低显着升高p21的mRNA和蛋白水平,不影响其它CKIs和CDKs的mRNA水平。使用RIP实验,证实TP73-AS1与EZH2蛋白和H3K27me3有较强的结合作用,ChIP实验也表明,EZH2蛋白和H3K27me3能结合到p21基因的启动子区上,而敲低TP73-AS1后,EZH2蛋白和H3K27me3同p21基因启动子的结合能力明显降低。TCGA数据库的Kaplan-Meier生存曲线分析,EZH2高表达的EOC患者预后较差,p21高表达的EOC患者预后较好,且EZH2表达水平同TP73-AS1水平呈现正相关的关系。以上结果均提示:TP73-AS1可能通过与EZH2结合,影响EZH2和H3K27me3在p21启动子区的结合情况从而抑制p21基因的转录。4.当在SKOV3细胞中敲低TP73-AS1时,造成细胞增殖和侵袭能力减弱及凋亡细胞增加;当在敲低TP73-AS1的同时再敲低p21时,随着p21mRNA和蛋白的减少,上述进程发生回补,造成细胞增殖和侵袭能力回补,细胞凋亡下调。以上结果提示:TP73-AS1能通过靶向p21调控EOC细胞的恶性进程。研究结论1.本研究发现TP73-AS1在EOC癌组织和细胞中表达均显着上调,高表达水平的TP73-AS1是导致EOC患者临床不良预后的原因之一,这提示TP73-AS1是EOC的致癌基因之一。2.机制研究结果显示,在EOC细胞中,TP73-AS1通过影响EZH2和H3K27me3与p21启动子区的结合,在表观遗传水平上抑制p21的转录水平。3.TP73-AS1通过表观遗传沉默p21表达,促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、侵袭能力和抑制细胞的凋亡,影响EOC的进程。
邓堂刚[5]（2019）在《去泛素化酶USP11通过p21调控细胞周期介导非小细胞肺癌增殖的分子机制研究》文中指出USP11是去泛素化酶中泛素特异性蛋白酶家族（ubiquitin-specific proteases,UPS）成员之一。全长包含920个氨基酸,N端含有DUSP结构域（domain present in ubiquitin specific proteases,DUSP）和UBL结构域（ubiquitin-like domain,UBL）,C末端为催化结构域,其中包括第二个UBL结构域。在细胞内,USP11通过去泛素化作用稳定多种底物蛋白,如BRCA2、ALK5、IκBα、PML、γH2AX、RanBPM等,参与细胞信号转导调控,DNA损伤修复,并影响细胞的增殖和侵袭转移。但是,目前研究表明,USP11在不同类型的肿瘤细胞中,发挥的功能不同。在神经胶质瘤中,USP11通过去泛素化并稳定PML,抑制神经胶质瘤的增殖、迁移和侵袭。在乳腺癌中,USP11通过稳定XIAP而促进乳腺癌细胞的增殖。然而,至今USP11与非小细胞肺癌（NSCLC）的关系仍然未阐明。p21是第一个被鉴定的细胞周期素依赖性激酶抑制因子（CKI）,属于CIP/KIP家族成员,介导细胞周期停滞、DNA复制与修复、增殖与分化、衰老与凋亡等重要细胞生命活动的调控。p21由CDKN1A基因编码,蛋白全长164个氨基酸。p21通过对CDKs活性的精确调节在确保细胞周期有序运行中发挥重要的作用,它的表达受转录和转录后机制的严密调控。在转录水平,p21通常以p53依赖和p53非依赖的方式被调控。在分裂细胞中,p21是一种非常不稳定的蛋白,半衰期仅有20-60分钟,主要通过泛素-蛋白酶体通路降解。目前研究表明有三种E3泛素连接酶复合物包括SCFSKP2、CRL4CDT2和APC/CCDC20参与细胞周期不同时相对p21的降解。在G1/S期,SCFSKP2促进Ser130位点被CDK2磷酸化的p21的泛素化降解。在S期,CRL4CDT2特异性靶向与PCNA结合的p21,导致p21的泛素化降解。在G2/M期,APC/CCDC20识别与CDK1-cyclin A和CDK1-cyclin B结合的p21并负责p21泛素化降解。E3泛素连接酶复合物中的SKP2、CDT2和CDC20蛋白在功能上是作为底物识别亚单位,充当p21与E3泛素连接酶复合物其它部分的连接桥梁。另一方面,研究也发现细胞内多个蛋白能通过不同的机制稳定p21,如p38和JNK通过磷酸化p21促进p21稳定;WISp39、hSSB1和TRIM39经蛋白相互作用稳定p21;Ras通过促进p21-cyclin D1复合物的形成稳定p21;Cabels1通过干扰PSMA3与p21的结合而促进p21稳定。但是这些蛋白都不具有任何去泛素化酶的活性和功能,在细胞内是否存在去泛素化酶,能够直接逆转p21泛素化过程至今仍然不清楚。本文通过质谱数据和数据库分析,发现USP11和p21可能存在相互作用。为了进一步验证两者的相互关系,我们采用间接免疫荧光染色技术发现USP11与p21存在共定位,免疫共沉淀及体外蛋白直接孵育等实验发现USP11免疫沉淀物中均可检测到p21,这些实验证明USP11与p21存在直接相互作用。p21是非常不稳定的蛋白,能被不同的E3泛素连接酶泛素化,进而通过蛋白酶体降解。考虑到USP11作为去泛素化酶的特征以及USP11与p21的相互作用关系,我们检测USP11对p21蛋白水平和mRNA水平的影响。通过在A549、HCT116和HCT116p53-/-中过表达USP11,发现内源性p21显着增加,而抑制USP11的表达能下调p21,且USP11对p21的调控呈剂量依赖性并依赖于USP11的去泛素化酶活性。然而,改变USP11表达对p21的mRNA水平没有影响,表明USP11对p21的调控发生在翻译后修饰水平。细胞内80%的蛋白主要通过蛋白酶体途径降解,为了证明USP11是否调控p21的泛素蛋白酶体途径降解,通过蛋白酶体特异性抑制剂阻断p21泛素化降解,明确USP11是通过蛋白酶体途径影响p21的泛素化降解。通过放线菌酮CHX抑制新生蛋白的合成进一步发现敲低内源USP11的表达能明显缩短p21的半衰期,而过表达野生型USP11使p21的半衰期延长,说明USP11能增强p21的蛋白稳定性。体内和体外泛素化实验进一步证明USP11能直接对p21进行去泛素化,主要移除K48连接的多聚泛素链。由于p21在细胞周期不同阶段分别由不同的E3泛素连接酶介导其泛素化降解,为了明确USP11在细胞中主要抵抗哪种E3泛素连接酶的作用,我们通过泛素化分析和细胞周期同步化实验,发现USP11能抵抗SCFSKP2、CRL4CDT2和APC/CCDC20三种E3连接酶复合体对p21的泛素化降解,表明USP11对p21的稳定性调控是不依赖于细胞周期的。p21作为细胞周期素依赖性激酶抑制子,介导细胞周期G1/S和G2/M期的调控。鉴于USP11能去泛素化稳定p21,为了证明USP11是否通过p21调控细胞周期的演进,我们通过细胞周期分析和细胞周期同步化实验,发现在p21正常表达的细胞中,干扰USP11表达能诱导细胞周期S期显着增加,而p21缺失的细胞中,USP11表达的改变对细胞周期无明显影响。在遭受DNA损伤时,USP11通过p21调控细胞周期G2/M期转换。以上实验说明USP11可通过p21调控细胞周期运转。细胞核中p21的主要功能是作为细胞周期负性调控因子,抑制细胞周期运转和肿瘤增殖。考虑到USP11与p21在NSCLC细胞系A549的细胞核存在共定位,我们检测USP11对NSCLC增殖是否存在影响。通过细胞实验和动物实验,发现USP11通过去泛素化稳定p21抑制非小细胞肺癌的增殖。免疫组化实验进一步证明USP11与p21表达水平在非小细胞肺癌临床样本中呈明显的正相关。综上所述,本论文首次明确p21是去泛素化酶USP11的重要底物蛋白,USP11能够直接结合p21,并去泛素化稳定p21。明确了USP11通过p21参与细胞周期G1/S和G2/M期的调控,从而介导NSCLC细胞增殖的分子机制。进一步拓宽我们对细胞周期调控理论的认识,将为NSCLC的靶向治疗、优化抗肿瘤治疗措施提供科学基础。
芮小慧[6]（2019）在《长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究》文中研究说明背景宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,已成为重要的公共健康问题。宫颈癌发病率占女性恶性肿瘤的第二位,其死亡率占女性生殖系统恶性肿瘤首位。目前,手术、化疗和放疗是宫颈癌最常用的治疗手段,但由于多数宫颈癌细胞对化疗药物具有耐药性,导致化疗药物对宫颈癌的治疗效果较差。而对于预后较差的晚期及复发性宫颈癌,目前也同样缺乏有效的治疗方法。因此,探索创新型治疗方法可能是宫颈癌治疗突破的关键。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,Lnc RNA）是一类超过200个核苷酸,并具有与m RNA结构特征相似的非编码RNA,大多数是由RNA聚合酶II转录产生的。Lnc RNA可形成复杂的二级结构,可提供与多个核酸或蛋白质结合的空间。Lnc RNA虽然不编码蛋白质,但其可通过转录和转录后水平调控影响多种基因的表达水平。有研究发现,Lnc RNA的表达与多种肿瘤密切相关,如结肠癌、乳腺癌、肝癌等,但在宫颈癌中的机制仍尚未明确。方法:本研究采用TCGA数据库对3对宫颈癌组织和相应的癌旁组织进行差异Lnc RNA的筛选,对筛选出的5个上调和5个下调最明显的lnc RNA进行quantitative real-time reverse transcription PCR（q RT-PCR）验证,最终选取lnc RNA C5orf66-AS1作为研究对象进行研究。通过在体内体外改变lnc RNA C5orf66-AS1的表达,观察其对宫颈癌生物学行为的影响,探讨lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌增殖中的关键基因,为有效防治宫颈癌提供新的理论依据。结果:1.Lnc RNA C5orf66-AS1在宫颈癌组织和细胞中显着高表达。2.在Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1表达后,细胞增殖能力显着下降,而当Si Ha和C-4 I中上调C5orf66-AS1表达后,增殖能力显着上升。此外,在细胞周期实验发现下调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显增加,而G2/S期细胞减少;而上调C5orf66-AS1的细胞中G1/G0期细胞明显减少,而G2/S期细胞明显增多。在宫颈癌细胞株Si Ha和C-4 I中下调C5orf66-AS1的表达,可显着促进宫颈癌细胞的凋亡。3.下调C5orf66-AS1的表达水平可显着促进mi R-637的表达;反之,上调C5orf66-AS1的表达水平可显着下调宫颈癌mi R-637的表达。随后我们构建了C5orf66-AS1-WT和与mi R-637结合位点突变掉的C5orf66-AS1-MUT的荧光报告素酶质粒。与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染C5orf66-AS1-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染C5orf66-AS1-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明C5orf66-AS1可与mi R-637直接结合。我们通过RIP实验检测C5orf66-AS1和mi R-637是否可以在细胞中结合。结果显示,相对于对照Ig G组,C5orf66-AS1和mi R-637优先富集在抗Ago2组中。随后我们通过q RT-PCR检测了20例宫颈癌和癌旁组织中mi R-637的表达,发现mi R-637在宫颈癌中低表达。mi R-637在宫颈癌细胞株中的表达比正常宫颈上皮细胞株表达低。4.在Si Ha和C-4 I中上调或下调mi R-637的表达,发现RING1的m RNA和蛋白表达发生改变。随后我们构建了RING1 3’UTR-WT和与mi R-637结合位点突变掉的RING1 3’UTR-MUT的荧光报告素酶质粒。随后免疫荧光素酶报告实验的结果发现,与对照组相比,上调mi R-637的表达水平可显着降低Si Ha细胞中共转染RING1 3’UTR-WT质粒的荧光素酶活性,而上调mi R-637的表达水平对共转染RING1 3’UTR-MUT质粒的荧光素酶活性无影响,说明RING1可与mi R-637直接结合。5.在Si Ha和C-4 I细胞系中上调或下调C5orf66-AS 1的表达,RING1的m RNA和蛋白表达水平分别显着增加或降。6.单独过表达mi R-637可明显抑制Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达C5orf66-AS1的细胞中同时上调mi R-637时,mi R-637能部分逆转C5orf66-AS1引起的细胞增殖功能改变。7.单独过表达RING1可明显增强Si Ha或C-4 I细胞的增殖能力,且在过表达RING1的细胞中同时上调mi R-637时,RING1能完全逆转mi R-637引起的细胞增殖功能改变。8.在实验动物中下调lnc RNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长。结论:Lnc RNA C5orf66-AS1作为ce RNA通过吸附mi R-637调控RING1对宫颈癌增殖、凋亡和细胞周期作用的影响,为探索宫颈癌的发病机制和寻找有效的治疗靶点提供新的理论和实验依据。
李博[7]（2017）在《神经生长因子对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及相关机制研究》文中指出卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤,发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌,严重危害女性的生命健康。卵巢癌是高度异质性肿瘤,组织学亚型较多,不同类型的卵巢癌在形态特征、临床表现、遗传改变、肿瘤行为等方面均表现出一定的差异,且难以在早期发现,易发生转移、化疗耐药、复发,使卵巢癌的诊断和治疗都面临着极大的挑战。卵巢癌的致病机理十分复杂,至今仍未完全阐明。一般的观点认为卵巢癌的发生既与卵巢特殊的解剖结构、机械刺激等有关,也与卵巢微环境中生长因子、黏附因子、免疫炎性反应因子等的功能失调而导致细胞内信号分子发生异位、突变、丢失、结构重排等使细胞的正常生长、增殖、分化、凋亡失控而引起细胞恶性转化相连。神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）是一种多效性的肽类激素,通过与靶细胞表面的高亲和力受体TrkA和低亲和力受体P75结合来调控细胞的存活、生长、分化、凋亡等生理活动,对机体正常生理状态和病理发展有重要的影响。近年来的大量研究发现:NGF及受体（Nerve growth factor receptors,NGFRs）在乳腺癌、前列腺癌、成神经细胞瘤等恶性肿瘤中广泛表达,异常表达的NGF/NGFRs影响肿瘤的发生、生长、增殖、分化、侵袭、转移、预后等过程。NGF/NGFRs在正常卵巢组织中低表达,能调节垂体分泌卵泡刺激素（Follicle-Stimulating Hormone,FSH）及卵巢上皮表面FSH受体水平、卵泡发育、排卵等卵巢正常生理功能,异常表达的NGF/NGFRs会引起卵泡刺激素分泌紊乱,导致上皮性卵巢癌的启动和发生。但NGF/NGFRs参与卵巢癌的启动、发生、发展及作用机理等方面的知识了解甚少,作用机制尚未完全阐明。因此,深入了解NGF/NGFRs对卵巢癌细胞生物学行为的影响及相关分子机制,对卵巢癌的预防、诊断、治疗、预后等有重要意义。本文的主要研究内容包括:（1）考察NGF/NGFRs在卵巢癌细胞系中的表达。采用定量RT-PCR和Western blot法检测常规培养（含10%胎牛血清的完全培养基）条件下NGF/NGFRs在卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、OVCAR3、CAOV3中的表达情况。结果显示:NGF/NGFRs均同时在这几种卵巢癌细胞中表达,内源性的NGF在OVCAR3、CAOV3细胞中表达水平较高,为后续实验奠定了细胞学基础。（2）考察NGF/NGFRs对卵巢癌细胞存活、生长、增殖、细胞周期、生长节律、凋亡的影响。采用细胞行为学观察实验、定量RT-PCR、Western blot等方法检测NGF/NGFRs对卵巢癌细胞存活、生长、增殖、细胞周期、生长节律、凋亡相关基因和蛋白表达的影响。通过特异性的NGF/NGFRs抑制剂阻断NGF/NGFRs的作用,考察NGF/NGFRs在卵巢癌细胞存活、生长、增殖、细胞周期、生长节律、凋亡中的作用。结果显示:NGF下调CAOV3和OVCAR3细胞中SIRT1（Sirtuin1）、Survivin的表达水平,减弱卵巢癌细胞的存活能力;NGF上调CAOV3和OVCAR3细胞中Ki67、PPARδ,下调PCNA的表达水平,抑制卵巢癌细胞的增殖能力;NGF上调CAOV3和OVCAR3细胞中Cyclin E1、P21,下调Cyclin D1的表达水平,影响卵巢癌的周期调控,促进卵巢癌细胞的凋亡;NGF下调CAOV3和OVCAR3细胞中Clock、FBXL3的表达水平,影响卵巢癌细胞的生长节律,但具体的生物学效应还需要进一步深入研究;NGF上调CAOV3和OVCAR3细胞中P53、BCL2、Caspase9,下调Caspase3、Caspase7的表达水平,上调CAOV3细胞中CYCS的表达而下调OVCAR3细胞中的CYCS,下调CAOV3细胞中BAX的表达而上调OVCAR3细胞中的BAX,影响卵巢癌细胞的凋亡过程。（3）考察NGF/NGFRs对卵巢癌细胞粘附能力的影响。采用细胞粘附实验、定量RT-PCR、Western blot等方法检测NGF/NGFRs对卵巢癌细胞粘附能力、紧密连接相关基因m RNA和蛋白表达的影响。结果显示:NGF上调CAOV3和OVCAR3细胞中紧密连接蛋白CLDN3、CLDN4的表达水平,下调CAOV3细胞中紧密连接蛋白CLDN1的表达而上调OVCAR3细胞中的表达水平,影响卵巢癌细胞间的连接状态,NGF/NGFRs的抑制剂能阻断这种作用。结果表明:NGF/NGFRs能通过调节卵巢癌细胞间的紧密连接状态而参与卵巢癌细胞成团、运动能力的调节。（4）考察NGF/NGFRs对卵巢癌细胞迁移能力的影响及分子机制。利用Transwell小室及本实验室自行构建的微流控芯片考察NGF对卵巢癌细胞迁移行为的影响;通过定量RT-PCR、Western blot法检测NGF对WNT/β-catenin信号通路中的关键因子β-catenin及下游靶基因CD44、C-myc、MMP2、MMP7、TIMP2等表达的影响,考察NGF影响卵巢癌细胞迁移能力变化的分子机制。结果显示:不管是在二维培养还是三维培养条件下,NGF均能影响CAOV3和OVCAR3的迁移能力;NGF对经典WNT/β-catenin信号中的关键分子及下游靶基因的表达有影响,NGF可通过激活或调控WNT/β-catenin信号通路影响卵巢癌细胞的迁移。NGF对不同卵巢癌细胞迁移变化的影响有一定的差异性,说明NGF对卵巢癌细胞的生物学效应有细胞特异性。综上所述,我们得出以下结论:NGF/NGFRs在选择的这几种上皮性卵巢癌细胞系中均表达;NGF能调节卵巢癌细胞的存活、生长、凋亡相关基因的表达水平,影响卵巢细胞的周期和生长节律;NGF能调节卵巢癌细胞中紧密连接蛋白CLDN1、CLDN3、CLDN4的表达,影响卵巢癌细胞之间的连接状态,参与卵巢癌细胞的转移过程;NGF可通过经典的WNT/β-catenin信号通路介导卵巢癌细胞的迁移行为。以上实验结果表明:NGF/NGFRs对卵巢癌的生物学行为有重要的调节作用,深入研究NGF/NGFRs对卵巢癌细胞的影响有助于阐明生长因子、细胞因子在卵巢癌发生和发展中的作用机制,提高卵巢癌的诊断、治疗水平和预后效果。
秦瑞[8]（2011）在《卵巢上皮性癌中MDM2和P21的表达及临床意义》文中指出卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统常见肿瘤之一,早期临床症状隐匿,不易发现,并且逐渐成为威胁女性生命的重要原因之一。而相当一部分患者在手术和化疗后疾病继续进展、甚至复发,这也是卵巢恶性肿瘤5年生存率很低的原因之一,所以,卵巢恶性肿瘤已经成为妇科恶性肿瘤中病死率最高的肿瘤。癌基因及抑癌基因在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,因此使癌基因及抑癌基因研究成为了热点。MDM2是一种新原癌基因,高表达时呈现癌基因功能,使之成为研究的热点。P21基因一种抑癌基因,隶属于细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子,通过其编码蛋白的表达水平来调节细胞周期,从而抑制肿瘤的发生和发展,近些年来已成为肿瘤因子研究中的热点。本研究采用免疫组织化学方法检测MDM2和P21在正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤和卵巢上皮性癌中的表达情况,探讨MDM2和P21在卵巢上皮性癌的发病机制中的作用。结果发现:MDM2蛋白于正常卵巢组织以及卵巢良性上皮性肿瘤和卵巢上皮性癌中的表达呈现递增的趋势,在卵巢上皮癌组织中MDM2的阳性表达率明显高于另外两组组织中的阳性表达率,且随着临床手术病理分期的升高而增强,与组织病理学分级和组织学类型无明显相关性。P21蛋白于正常卵巢组织以及卵巢良性上皮性肿瘤和卵巢上皮性癌中的表达呈现递减的趋势,在卵巢上皮癌组织中P21的阳性表达率明显低于另外两组组织中的阳性表达率,且表达随着临床手术病理分期和组织病理学分级升高而降低,与组织学类型无明显相关性。卵巢上皮性癌的诱因是多方面的,MDM2和P21是其发病机制之一,通过对于二者的研究和检测,对于攻克卵巢恶性肿瘤的早期诊断有一定意义,并对于卵巢上皮性癌的诊断、鉴别诊断、治疗、恶性程度的判断及预后问题提供新的理论参考依据。
夏玲[9]（2011）在《凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌中的表达及意义》文中指出目的检测凋亡抑制基因Survivin及P53、PCNA、Caspase-9蛋白在上皮性卵巢肿瘤中的表达,分析它们在良、恶性卵巢肿瘤间的表达差异,与上皮性卵巢癌临床病理特征的关系,Survivin基因与P53、PCNA、Caspase-9蛋白表达的相关性,探讨Survivin基因与上皮性卵巢癌发生、发展及预后的关系。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法（S-P）检测Survivin、PCNA、P53、Caspase-9在不同卵巢组织中的表达;利用分子原位杂交技术检测Survivin mRNA的表达情况。分析两种不同方法检测的Survivin蛋白与Survivin mRNA表达的一致性,及Survivin蛋白与P53蛋白表达的相关性,分析Survivin mRNA和Survivin、PCNA、P53、Caspase-9蛋白表达率的比较及与卵巢癌临床病理特征之间的关系。结果1.Survivin mRNA在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中的阳性表达率分别为11.11%（1/9）、18.18%（2/11）和71.05%（27/38）。后者与前两者比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而前两者间比较差异无统计学意义（P>0.05）。Survivin mRNA阳性表达率与卵巢癌病理类型无相关性（P>0.05） ,与临床期别、分化程度、有无淋巴结转移及有无腹水相关（P<0.05）。2.Survivin蛋白在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中的阳性表达率分别为11.11%（1/9）、27.27%（3/11）和84.21%（32/38）。后者与前两者比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而前两者间比较差异无统计学意义（P>0.05）。Survivin mRNA阳性表达率与卵巢癌病理类型无相关性（P>0.05） ,与临床期别、分化程度、有无淋巴结转移及有无腹水相关（P<0.05）。3.P53蛋白在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中的阳性表达率分别为22.22%（2?9）、27.27%（3?11）、78.95%（30?38）。后者与前两者比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而前两者间比较差异无统计学意义（P>0.05）。P53蛋白阳性表达率与卵巢癌病理类型、临床期别、有无淋巴结转移无相关性（P>0.05）,而与腹水,分化程度有相关性（P<0.05）。4.PCNA蛋白在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中的阳性表达率分别为11.11%（1?9）、18.18%（3?11）、39.47%（15?38）。后者与前两者比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而前两者间比较差异无统计学意义（P>0.05）。PCNA蛋白阳性表达率与卵巢癌病理类型及有无腹水无相关性（P>0.05）,而与临床期别、有无淋巴结转移及分化程度有相关性（P<0.05）。5.Caspase-9蛋白在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌组织中的阳性表达率分别为88.89%（8?9）、81.82%（9?11）、39.47%（15?38）。后者与前两者比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而前两者间比较差异无统计学意义（P>0.05）。Caspase-9蛋白阳性表达率与卵巢癌病理类型、分化程度、临床期别及有无腹水无相关性（P>0.05）,而与有无淋巴结转移有相关性（P<0.05）。6.Survivin蛋白、P53蛋白在上皮性卵巢癌组的表达呈正相关（rs﹦0.350,P<0.05）。7.Survivin蛋白、PCNA蛋白在上皮性卵巢癌组的表达呈正相关（rs=0.521,P<0.05）,Survivin蛋白、Caspase-9蛋白在上皮性卵巢癌组的表达呈负相关（rs=-0.323,P<0.05）;P53蛋白、PCNA蛋白在上皮性卵巢癌组的表达呈正相关（rs=0.504,P<0.05）,P53蛋白、Caspase-9蛋白在上皮性卵巢癌组的表达呈负相关（rs=-0.431,P<0.05）。8.Survivin蛋白与Survivin mRNA表达的一致性,经Kappa分析,良性肿瘤中（k=0.500,P=0.025）,卵巢癌中（k=0.333,P=0.032）,P<0.05可以认为两种检测方法具有一致性,程度为中度一致。结论1.Survivin mRNA及Survivin蛋白在卵巢癌中的表达明显升高,并存在一致性。2.Survivin、P53、PCNA蛋白在卵巢癌中的表达显着升高,而Caspase-9在卵巢癌中的表达显着降低,说明它们在卵巢癌的发生、发展、浸润和转移过程中起重要作用;四种蛋白的表达与一些临床病理特征具有相关性,它们的表达程度可以作为检测卵巢癌恶性程度的有用指标;3.Survivin与P53、PCNA的表达呈正相关,而与Caspase-9的表达呈负相关;P53与PCNA的表达呈正相关,而与Caspase-9的表达呈负相关;Survivin与P53在卵巢癌的发病机制过程中具有协同作用。4.联合检测这四种基因对于评估卵巢癌的生物学行为具有重要价值,有助于估计患者的预后,为临床治疗提供依据,可能成为卵巢癌新的分子靶向治疗点。
赵宇航[10]（2010）在《Bcl-2、Bax和p21WAF1在子宫腺肌病患者子宫内膜中的表达及其相关性研究》文中研究表明目的:探讨Bcl-2和Bax与p21WAF1因子在子宫腺肌病患者子宫内膜中的表达及其相关性,从而进一步研究子宫腺肌病发生、发展的原因。方法:应用免疫组化SP法检测60例子宫腺肌病患者（实验组）的腺肌病病灶（包括异位内膜和在位内膜）中Bcl-2、Bax和p21WAF1的表达,其中增殖期30例,分泌期30例。并选择因子宫肌瘤行子宫次全切患者（对照组）的子宫内膜,病理证实为正常子宫内膜30例,其中增殖期15例,分泌期15例进行对照。结果:1.Bcl-2、Bax主要在实验组和对照组的腺上皮细胞的胞浆中有阳性表达,阳性细胞呈弥漫性分布。p21WAF1在实验组和对照组的腺上皮细胞的胞核中有阳性表达。2.Bcl-2在对照组的子宫内膜中有周期性表达,增生期高于分泌期,两者相比有显着性差异（P<0.05）;在实验组的在位内膜组中有周期性表达,增生期高于分泌期,两者相比有显着性差异（P<0.05）;在实验组的异位内膜组中失去周期性表达,两者相比无统计学意义（P>0.05）;在同期对照组、实验组的在位内膜组中的表达进行比较,结果均有显着性差异（P<0.05）;在同期对照组、实验组的异位内膜组中的表达进行比较,结果均有显着性差异（P<0.05）;在同期实验组的在位内膜组和异位内膜组中的表达进行比较,结果均无统计学意义（P>0.05）。3.Bax在对照组子宫内膜的增生期和分泌期均有表达,分泌期强于增生期,两者相比有显着性差异（P<0.05）;在实验组的在位内膜组中,增生期和分泌期均有表达,分泌期强于增生期,两者相比有显着性差异（P<0.05）;在实验组的异位内膜组中失去周期性表达,两者相比无统计学意义（P>0.05）;在对照组和实验组的在位内膜组表达相比较,增生期（P>0.05）无统计学意义,分泌期（P<0.05）结果有显着性差异;在对照组和实验组的异位内膜组中的表达相比较,增生期（P>0.05）无统计学意义,分泌期（P<0.05）结果有显着性差异;在同期实验组的在位内膜和异位内膜中的表达相比较,无统计学意义。4.p21WAF1在对照组和实验组的在位内膜中的表达相比有显着性差异（P<0.05）;在对照组和实验组的异位内膜组中的表达相比有显着性差异（P<0.05）;在实验组的在位内膜组和异位内膜组中的表达无统计学意义。5.在实验组的在位内膜组中,Bcl-2和p21WAF1之间呈正相关P<0.05 r=0.386, Bax和p21WAF1之间呈负相关P<0.05 r=-0.301;在实验组的异位内膜组中,Bcl-2和p21WAF1之间呈负相关P<0.05 r=-0.320, Bax和p21WAF1之间亦呈正相关P<0.05 r=0.290。结论:1.在正常的月经增殖周期中,Bcl-2强表达,Bax弱表达,抑制子宫内膜凋亡,促进增殖;分泌期Bax强表达,Bcl-2弱表达,促进子宫内膜周期性脱落。两者协同作用于正常内膜,共同调控其形态功能变化。2.Bcl-2在对照组、实验组的在位内膜和异位内膜三组中同期两两比较均有显着性差异,说明Bcl-2的过度表达与子宫腺肌病的发生、发展有关;同样,Bax和p21WAF1的低度表达对子宫腺肌病的发生、发展也起一定作用。3.Bcl-2和Bax在正常子宫内膜中都有周期性表达,在子宫腺肌病的在位内膜组中仍可看出周期性表达,但明显高于在正常子宫内膜中的表达,而在异位内膜组中周期性表达消失。4.Bcl-2、Bax和p21WAF1在子宫腺肌病的的发生、发展中起相互促进作用。
二、上皮性卵巢癌组织中p21~(WAF1)表达及其与P53和PCNA的相关性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、上皮性卵巢癌组织中p21~(WAF1)表达及其与P53和PCNA的相关性（论文提纲范文）
（1）FOXG1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖迁移的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 肺癌概述 |
| 1.1 非小细胞肺癌 |
| 1.2 小细胞肺癌 |
| 2 FOXG1与肿瘤 |
| 2.1 FOXG1与神经胶质瘤 |
| 2.2 FOXG1与其他肿瘤 |
| 3 数据库的介绍 |
| 4 立项依据 |
| 实验材料 |
| 1 菌株、质粒、细胞株 |
| 1.1 实验菌株和质粒 |
| 1.2 实验细胞 |
| 2 主要实验仪器 |
| 3 主要实验试剂 |
| 4 其它一次性材料 |
| 5 主要试剂的配制 |
| 实验方法 |
| 1 TCGA数据库表达数据下载 |
| 1.1 从TCGA数据库提取数据 |
| 1.2 TCGA临床数据下载 |
| 1.3 数据预处理 |
| 2 从Oncomine数据库提取数据 |
| 3 免疫组织化学染色 |
| 4 细胞培养 |
| 5 质粒制备 |
| 5.1 重组质粒转化 |
| 5.2 质粒的少量制备 |
| 5.3 质粒的大量制备 |
| 5.4 质粒纯化 |
| 5.5 菌株保存 |
| 6 慢病毒侵染建立稳定细胞株 |
| 6.1 慢病毒包装 |
| 6.2 慢病毒侵染细胞 |
| 6.3 嘌呤霉素筛选建立稳定细胞株 |
| 7 DAPI染核 |
| 8 细胞计数 |
| 9 Real-time PCR |
| 9.1 mRNA的提取 |
| 9.2 mRNA的纯度验证及测定 |
| 9.3 逆转录 |
| 9.4 Real-time PCR检测样本中FOXG1的表达量 |
| 10 蛋白质免疫印迹 |
| 10.1 细胞总蛋白的提取 |
| 10.2 BCA法测蛋白浓度 |
| 10.3 蛋白变性 |
| 10.4 Western blot检测FOXG1蛋白表达 |
| 11 CCK8方法检测细胞的增殖 |
| 12 流式细胞术 |
| 12.1 流式细胞数检测细胞凋亡 |
| 12.2 PI单染发流式细胞术检测细胞周期 |
| 12.3 流式细胞仪操作 |
| 13 细胞迁移实验 |
| 13.1 Transwell |
| 13.2 伤口愈合实验 |
| 14 统计学分析 |
| 实验结果 |
| 1 FOXG1在肺癌中表达增高 |
| 1.1 TCGA数据库中显示FOXG1在肺腺癌和肺鳞癌中高表达 |
| 1.2 Oncomine数据库显示FOXG1在SCLC中高表达 |
| 1.3 免疫组织化学染色结果显示FOXG1在SCLC中高表达 |
| 2 FOXG1在不同肺癌细胞中均有表达 |
| 3 过表达FOXG1 A549细胞系的建立和检测 |
| 4 过表达FOXG1促进A549细胞的增殖 |
| 5 过表达FOXG1能够促进A549细胞的周期进程 |
| 6 过表达FOXG1能够抑制A549细胞的凋亡 |
| 7 过表达FOXG1对A549细胞迁移能力的影响 |
| 讨论 |
| 1 FOXG1在肺癌中的高表达 |
| 2 FOXG1对肺癌细胞A549细胞周期的影响 |
| 3 FOXG1对肺癌细胞A549细胞凋亡的影响 |
| 4 FOXG1对肺癌细胞A549细胞迁移能力的影响 |
| 5 FOXG1对肺癌细胞A549细胞迁移能力的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 转录因子FOXG1与肿瘤的相关性研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（2）miR-195-5p在卵巢癌中的作用与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、miR-195-5p在上皮性卵巢癌组织、细胞系中的表达 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.1.4 常用实验试剂的配制 |
| 1.1.5 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 miR-195-5p在卵巢癌组织中表达下调 |
| 1.2.2 miR-195-5p在卵巢癌细胞、正常卵巢细胞中的表达情况 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、miR-195-5p对卵巢癌细胞生物学行为的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 常用实验试剂的配制 |
| 2.1.5 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 体外细胞学验证miR-195-5p对卵巢癌细胞增殖及迁移能力的影响 |
| 2.2.2 体内动物学实验验证miR-195-5p对卵巢癌增殖的影响 |
| 2.2.3 miR-195-5p对卵巢癌细胞周期的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、miR-195-5p与 CDCA4 作用关系研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 研究物品 |
| 3.1.3 研究方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 CDCA4是miR-195-5p下游调控靶基因 |
| 3.2.2 miR-195-5p通过对CDCA4 的调节作用来抑制卵巢癌细胞的增殖能力 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、miR-195-5p、CDCA4 与卵巢癌临床病理特征、预后的关系 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 研究对象 |
| 4.1.2 临床资料 |
| 4.1.3 随访 |
| 4.1.4 研究物品 |
| 4.1.5 研究方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 miR-195-5p、CDCA4 在上皮性卵巢癌组织中的表达与卵巢癌患者临床病理因素的关系 |
| 4.2.2 miR-195-5p、CDCA4 表达水平与上皮性卵巢癌患者预后的关系 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞周期调控与上皮性卵巢癌 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）SP1、KLF4和P21在卵巢上皮性癌的表达及意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 研究对象 |
| 2 主要试剂和仪器 |
| 3 PBS缓冲液配置 |
| 4 HE染色 |
| 5 免疫组化方法 |
| 6 结果判定 |
| 7 统计学分析 |
| 结果 |
| 1.SP1、KLF4、P21 蛋白在卵巢上皮性癌组织、卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中的表达情况 |
| 2.卵巢上皮性癌组织中SP1、KLF4、P21 蛋白表达间的相关性 |
| 3.卵巢上皮性癌组织中SP1、KLF4、P21 蛋白表达与临床病理因素的关系分析 |
| 4.SP1、KLF4、P21 表达对卵巢上皮性癌患者预后的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（4）长链非编码RNA TP73-AS1表观遗传抑制p21促进上皮性卵巢癌发展的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 第一章 LncRNA TP73-AS1在人上皮性卵巢癌组织和细胞系中的表达分析 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二章 人上皮性卵巢癌细胞中LncRNA TP73-AS1的生物效应研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第三章 人上皮性卵巢癌细胞中LncRNA TP73-AS1的机制研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 非编码RNA在卵巢发育及卵巢癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 公开发表的外文论文一 |
| 公开发表的外文论文二 |
（5）去泛素化酶USP11通过p21调控细胞周期介导非小细胞肺癌增殖的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写对照 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 蛋白酶体途径 |
| 1.1.1 泛素化 |
| 1.1.2 去泛素化 |
| 1.1.3 去泛素化酶的分类与功能 |
| 1.1.4 去泛素化酶活性的调控 |
| 1.1.5 去泛素化酶与肿瘤的关系 |
| 1.2 USP11 蛋白的概述 |
| 1.2.1 USP11 蛋白的结构 |
| 1.2.2 USP11 蛋白的功能 |
| 1.2.3 USP11 与疾病的关系 |
| 1.3 p21 蛋白的概述 |
| 1.3.1 p21 蛋白的结构 |
| 1.3.2 p21 的功能 |
| 1.3.3 p21 亚细胞定位的调控机制 |
| 1.3.4 p21 与肿瘤的关系 |
| 1.3.5 p21 蛋白的调控 |
| 1.4 本课题的研究目的、内容和意义 |
| 第2章 去泛素化酶USP11 调控p21 的蛋白稳定性 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与实验仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 相关实验试剂的配制 |
| 2.3.2 细胞培养 |
| 2.3.3 细胞转染实验 |
| 2.3.4 蛋白质的检测 |
| 2.3.5 免疫共沉淀实验 |
| 2.3.6 免疫荧光实验 |
| 2.3.7 荧光定量PCR实验 |
| 2.3.8 蛋白半衰期的检测 |
| 2.3.9 蛋白质的原核表达与纯化 |
| 2.3.10 泛素化实验 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 USP11与p21 在细胞中相互作用 |
| 2.4.2 USP11 调控p21 的蛋白水平 |
| 2.4.3 USP11 影响p21 半衰期和泛素化 |
| 2.4.4 USP11 敲低废除DNA损伤引起的p21 增加 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 第3章 USP11 通过p21 影响细胞周期的演进 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与实验仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 相关实验试剂的配制 |
| 3.3.2 PI染色检测细胞周期实验 |
| 3.3.3 BrdU染色检测S期细胞含量 |
| 3.3.4 pH3 染色检测G2/M转换 |
| 3.3.5 细胞周期同步化实验 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 USP11 通过p21 调控细胞周期G1/S期转变 |
| 3.4.2 USP11 通过p21 调控DNA损伤诱导G2/M期转变 |
| 3.4.3 USP11 通过p21 调控DNA损伤诱导的细胞凋亡 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 第4章 USP11 通过p21 抑制NSCLC细胞增殖 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与实验仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 相关实验试剂的配制 |
| 4.3.2 USP11和p21 过表达慢病毒制备 |
| 4.3.3 裸鼠肺癌模型的建立 |
| 4.3.4 免疫组化实验 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 USP11 过表达通过稳定p21 抑制肺癌移植瘤生长 |
| 4.4.2 USP11 干扰促进肺癌移植瘤生长依赖于p21 |
| 4.4.3 USP11和p21在NSCLC组织中具有相关性 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读学位期间发表学术论文目录 |
| 致谢 |
（6）长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第一部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的异常表达的筛选和验证 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .组织标本 |
| 2.2 细胞复苏、传代和培养 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 主要仪器 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 In situ hybridization(ISH) |
| 2.7 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 C5orf66-AS1 在宫颈癌组织中高表达 |
| 3.2 C5orf66-AS1 在宫颈癌细胞中高表达 |
| 3.3 C5orf66-AS1 与宫颈癌患者的预后相关性 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 在宫颈癌中的生物学功能 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 qRT-PCR |
| 2.5 质粒的构建和提取 |
| 2.6 Cell counting kit-8(CCK-8) |
| 2.7 克隆形成实验 |
| 2.8 细胞周期 |
| 2.9 细胞凋亡 |
| 2.10 划痕实验 |
| 2.11 Transwell实验 |
| 2.12 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 构建上调或下调C5orf66-AS1 表达的宫颈癌细胞株 |
| 3.2 C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞株的增殖能力 |
| 3.3 C5orf66-AS1 能调控宫颈癌的细胞周期 |
| 3.4 下调C5orf66-AS1 能促进宫颈癌细胞的凋亡 |
| 3.5 C5orf66-AS1 对宫颈癌细胞的侵袭转移无影响 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 长链非编码RNA C5orf66-AS1 调控宫颈癌细胞增殖能力的分子机制 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 .细胞培养 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 试剂的配置 |
| 2.5 qRT-PCR |
| 2.6 蛋白质免疫印迹(western blot) |
| 2.7 RNA免疫共沉淀(RIP) |
| 2.8 荧光素酶报告实验 |
| 2.9 免疫组化(IHC) |
| 2.10 核质分离 |
| 2.11 CCK-8 |
| 2.12 动物实验 |
| 2.13 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 LncRNA C5orf66-AS1在宫颈癌细胞核和细胞质中的分布 |
| 3.2 C5orf66-AS1 调控miRNA的筛选 |
| 3.3 C5orf66-AS1 调控miR-637的验证 |
| 3.4 MiR-637在宫颈癌中的表达 |
| 3.5 MiR-637的靶基因筛选 |
| 3.6 MiR-637的靶基因验证 |
| 3.7 C5orf66-AS1 可调控RING1 的表达 |
| 3.8 C5orf66-AS1 通过竞争性结合miR-637调控RING1的表达,最终影响宫颈癌细胞的增殖能力 |
| 3.9 在实验动物中下调lncRNA C5orf66-AS1可抑制肿瘤的生长 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 全文总结 |
| 4.1 主要创新点 |
| 4.2 主要结论 |
| 4.3 研究展望 |
| 第五部分 长链非编码RNA(lncRNA)在宫颈癌中的研究现状 |
| 非编码RNA的生物发生和功能 |
| 宫颈癌中循环lncRNAs下调 |
| LncRNA-HOTAIR |
| LncRNA-H19 |
| LncRNA-XIST |
| LncRNA-CCHE1 |
| LncRNA-EBIC |
| LncRNA-MALAT1 |
| LncRNA-ANRIL |
| LncRNA-LET |
| LncRNA-NEAT1 |
| LncRNA-BLACAT1 |
| LncRNA-UFC1 |
| LncRNA-SNHG16 |
| LncRNA-SNHG20 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 综述一 长链非编码RNA在妇科肿瘤中的调控表达 |
| 参考文献 |
| 综述二 妇科肿瘤中的 miRNA:具有重大影响的小分子 |
| 参考文献 |
| 综述三 趋化因子受体对卵巢癌患者免疫功能的影响 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 攻读博士期间参与的课题研究 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
（7）神经生长因子对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出与研究意义 |
| 1.1.1 问题的提出 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 NGF/NGFRs的结构和功能概述 |
| 1.2.2 NGF对肿瘤细胞存活、生长、凋亡的影响 |
| 1.2.3 NGF对肿瘤细胞增殖、分化的影响 |
| 1.2.4 NGF对肿瘤转移的影响 |
| 1.3 研究目的、研究内容及创新性 |
| 1.3.1 课题研究目的 |
| 1.3.2 课题研究内容 |
| 1.3.3 课题研究的技术路线 |
| 1.3.4 课题的特色及创新点 |
| 2 内源性的NGF及NGFRs在上皮性卵巢癌细胞中的表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 人卵巢癌细胞系 |
| 2.2.2 主要实验仪器及耗材 |
| 2.2.3 主要实验试剂 |
| 2.2.4 主要试剂的准备和配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Quantitative Real-Time PCR法检测常规培养条件下4种上皮性卵巢癌细胞系中NGF/NGFRs mRNA的表达情况 |
| 2.3.2 Western blot法检测卵巢癌细胞中NGF，TrkA和P75蛋白的表达 |
| 2.3.3 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 卵巢癌细胞系中NGF、TrkA受体和P75受体mRNA的表达 |
| 2.4.2 卵巢癌细胞系中NGF、TrkA和P75蛋白的表达 |
| 2.5 分析与讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 NGF对卵巢癌细胞存活、生长、生长节律、增殖、凋亡的影响及分子机制 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 人卵巢癌细胞系 |
| 3.2.2 主要实验仪器及耗材 |
| 3.2.3 主要实验试剂 |
| 3.2.4 试剂配制和准备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 NGF对卵巢癌细胞生长、存活、凋亡的影响 |
| 3.3.2 NGF对卵巢癌细胞增殖的影响 |
| 3.3.3 Quantitative Real-Time PCR检测NGF对卵巢癌细胞生长、存活、增殖、生长节律、凋亡相关基因表达的影响 |
| 3.3.4 Western blot检测NGF对卵巢癌细胞存活、增殖、生长节律、凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 NGF对卵巢癌细胞生长、存活、凋亡的影响 |
| 3.4.2 NGF及NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞增殖能力的影响 |
| 3.4.3 NGF对卵巢癌细胞中存活相关基因表达的影响 |
| 3.4.4 NGF对卵巢癌细胞中增殖相关基因表达的影响 |
| 3.4.5 NGF对卵巢癌细胞周期、生长节律相关基因mRNA和蛋白表达的影响 |
| 3.4.6 NGF对卵巢癌细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达的影响 |
| 3.5 讨论与分析 |
| 3.5.1 NGF对卵巢癌细胞存活、生长的影响 |
| 3.5.2 NGF对卵巢癌细胞周期、生长节律的影响 |
| 3.5.3 NGF对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 NGF对卵巢癌细胞粘附能力的影响及分子机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 人卵巢癌细胞系 |
| 4.2.2 主要实验仪器及耗材 |
| 4.2.3 主要实验试剂 |
| 4.2.4 试剂配制和准备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 NGF及NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞粘附能力的影响 |
| 4.3.2 Real-Time PCR法检测NGF及NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞紧密连接蛋白mRNA的表达的影响 |
| 4.3.3 Western blot法检测NGF及NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞紧密连接相关蛋白表达的影响 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 NGF、NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞粘附能力的影响 |
| 4.4.2 NGF、NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞紧密连接蛋白表达的影响 |
| 4.5 讨论与分析 |
| 4.6 本章小结 |
| 5 NGF对卵巢癌细胞迁移能力的影响及作用机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 人卵巢癌细胞系 |
| 5.2.2 主要实验仪器及耗材 |
| 5.2.3 主要实验试剂 |
| 5.2.4 试剂配制和准备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 Real-Time PCR法检测NGF对卵巢癌细胞WNT/β-catenin信号通路靶基因mRNA的表达的影响 |
| 5.3.2 Western blot法检测NGF对卵巢癌细胞WNT/β-catenin信号通路靶基因蛋白表达的影响 |
| 5.3.3 Transwell法检测NGF及NGF/NGFRs相关抑制剂对卵巢癌细胞迁移能力的影响 |
| 5.3.4 用微流控芯片模型对细胞进行三维培养，考察NGF对卵巢癌细胞迁移能力的影响 |
| 5.3.5 数据统计分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 NGF通过WNT/β-catenin信号通路调节卵巢癌细胞的迁移 |
| 5.4.2 二维（two dimensional condition, 2D）条件下NGF对卵巢癌细胞迁移能力的影响 |
| 5.4.3 三维（three dimensional condition, 3D）条件下NGF对卵巢癌细胞迁移能力的影响 |
| 5.5 分析与讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读博士期间发表的论文 |
| B 作者在攻读博士期间参加科研项目情况 |
| C 作者在攻读博士期间取得的科研成果 |
（8）卵巢上皮性癌中MDM2和P21的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写对照表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 资料与方法 |
| 2.1 标本采集 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.3 主要实验器材 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 结果判定 |
| 2.6 统计学处理方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织中MDM2 蛋白的表达 |
| 3.2 正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织中P21 的表达 |
| 3.3 MDM2 蛋白的阳性表达与卵巢上皮癌临床病理特征的关系 |
| 3.4 P21 蛋白的阳性表达与卵巢上皮癌临床病理特征的关系 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 MDM2 在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义 |
| 4.2 P21 在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义 |
| 4.3 卵巢上皮性癌中MDM2 和P21 表达的相关性探讨 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌中的表达及意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（10）Bcl-2、Bax和p21WAF1在子宫腺肌病患者子宫内膜中的表达及其相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 附图 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
四、上皮性卵巢癌组织中p21~(WAF1)表达及其与P53和PCNA的相关性（论文参考文献）
- [1]FOXG1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖迁移的作用研究[D]. 陈艳. 大理大学, 2021(09)
- [2]miR-195-5p在卵巢癌中的作用与机制研究[D]. 刘翔宇. 天津医科大学, 2020(06)
- [3]SP1、KLF4和P21在卵巢上皮性癌的表达及意义[D]. 薛云. 青岛大学, 2020(01)
- [4]长链非编码RNA TP73-AS1表观遗传抑制p21促进上皮性卵巢癌发展的研究[D]. 李云. 山东大学, 2020(09)
- [5]去泛素化酶USP11通过p21调控细胞周期介导非小细胞肺癌增殖的分子机制研究[D]. 邓堂刚. 湖南大学, 2019(01)
- [6]长链非编码RNA C5orf66-AS1在宫颈癌发生中的作用及其机制研究[D]. 芮小慧. 苏州大学, 2019(06)
- [7]神经生长因子对上皮性卵巢癌细胞生物学行为的影响及相关机制研究[D]. 李博. 重庆大学, 2017(06)
- [8]卵巢上皮性癌中MDM2和P21的表达及临床意义[D]. 秦瑞. 吉林大学, 2011(09)
- [9]凋亡抑制基因Survivin在上皮性卵巢癌中的表达及意义[D]. 夏玲. 泰山医学院, 2011(05)
- [10]Bcl-2、Bax和p21WAF1在子宫腺肌病患者子宫内膜中的表达及其相关性研究[D]. 赵宇航. 佳木斯大学, 2010(04)