一、不同保存液对兔门静脉收缩力的影响（论文文献综述）
高晓栋[1]（2021）在《门静脉放血及双倍灌注液冲洗对改善肝移植PRS发生及术后肝功能恢复的临床研究》文中提出目的:1、探究在经典原位肝移植术（OLT）中采用双倍灌注液灌注及下腔静脉逆行灌注法经门静脉灌注放血是否可减少再灌注综合征（PRS）发生高危因素,降低PRS发生率。2、探究该方法对术后早期肝功能恢复的有无正面影响。方法:选取66例原位肝移植患者,随机分为3组,A组19例肝病患者术中采用单倍灌注液灌注及门静脉灌注放血,B组27例肝病患者术中采用双倍灌注液灌注及门静脉灌注放血,C组20例,为对照组采用普通原位肝移植术,术中采用单倍灌注液灌注,无门静脉放血。三组均采用下腔静脉逆灌注法。监测时间点及获取液体为:移植肝开放门静脉前即刻（T1）、开放门静脉顺行灌注供肝从肝下下腔静脉漏出第一股液体时（T2）,门静脉放血200ml即刻（T3）。T1抽取受体门静脉血、T2抽取供肝下腔流出第一股清亮液体、T3抽取门静脉放血200ml左右时后供肝下腔静脉留取的液体、开放前抽取B组受体侧下腔静脉血。对这些标本进行血气分析,比较不同时点静脉血p H值、K离子、Lac、BEecf,记录并分析不同组间移植患者门静脉、下腔静脉开放后术中患者心率、血压变化情况及术后患者第1、3、5天肝功能及凝血功能恢复情况。结果:实验组PRS发生率0,T1血气理化性质优于T2血气,具有统计学意义（P<0.05）;B组供肝内液体钾离子低于A组,具有统计学意义（P<0.05）,Lac、PH值和BE差异无统计学意义;经门静脉灌注放血后,T3血气理化性质明显优于T2血气,具有统计学意义（P<0.05）;门静脉与下腔静脉血理化性质差异无统计学意义（P>0.05）。A组与C组术后AST、ALT、总胆红素、直接胆红素、PT恢复的差异性无统计学意义（P>0.05）,A组PTA低于C组具有统计学差异（P<0.05）。结论:1、下腔静脉逆行灌注法经门静脉灌注供肝放血,可很大程度上减少供肝内部残存灌注液,并减少供肝缺血再灌注产生的炎性因子、舒血管活性物质等,有效降低原位肝移植术后PRS的发生概率,而对术后肝功能、凝血功能的恢复无影响,仅可改善术后PTA。2、门静脉阻断期间,胃肠道淤血产生的含有酸性物质的血液理化性质与下腔静脉基本一致,对整体循环的作用需进一步确认。3、双倍白蛋白灌注液灌注供肝与单倍灌注液相比,可进一步减少进入受体全身循环的钾离子,而对Lac、剩余碱等无差别。
谢思颖[2]（2020）在《聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏的影响》文中指出背景:失血性休克是一种由多种原因导致的低血容量性休克,大失血导致组织细胞内氧供不足,细胞进行无氧代谢,进而导致细胞功能受损,如不加以控制,会造成全身多器官功能衰竭。治疗失血性休克的关键措施是尽快恢复机体的循环血容量和氧供,目前有效的治疗措施是及时止血并进行液体复苏。传统的复苏液包括晶体液、人工胶体液、血液及血液制品,在救治失血性休克中虽发挥出了积极作用,但远不够理想。本课题组致力研究的聚合人脐带血红蛋白以血红蛋白为氧载体,作为复苏液具有粒径小、使用前无需交叉配血、易于储存并且随时可得的特点。前期研究表明,其用于重度失血性休克大鼠的救治在提高存活率,改善肠道微循环,缓解失血性休克导致的肺损伤,刺激骨髓造血等方面效果较好。肝脏是机体代谢的重要器官,对缺氧十分敏感,而以人脐带血为原料的失血性休克复苏液对肝脏的影响缺乏系统性评价,故本课题针对肝脏这一重要脏器展开研究。目的:采用SD大鼠,建立失血性休克控压模型,探究聚合人脐带血红蛋白联合胶体液制备成的中、低两种不同浓度的复苏液对失血性休克大鼠肝脏的影响。方法:建立大鼠失血性休克控压模型,将32只雄性SD大鼠随机均分为4组:（1）Sham（假手术）组:仅行血管插管,不进行失血复苏操作;（2）HES（羟乙基淀粉）组:大鼠插管后,建立失血性休克控压模型,维持休克状态90min,随后用HES进行液体复苏;（3）2%PolyCHb（聚合人脐带血红蛋白）组:复苏液采用浓度为20g/L聚合人脐带血红蛋白,其余操作与HES组相同;（4）6%PolyCHb组:复苏液采用浓度为60g/L聚合人脐带血红蛋白,其余操作与HES组相同。用激光散斑对比成像技术分别在基础、休克、复苏后0h和复苏后1h记录肝脏组织表面的血液灌注量用以评估肝脏微循环。另取32只雄性SD大鼠按上述分组随机均分,插管后实时监测MAP、HR,并于基础、休克、复苏后0h记录此时MAP和HR值,复苏后6h通过腹主动脉取血处死大鼠,血样用于血气分析、ALT、AST、Hb、Hct以及Neu%检测,大鼠死亡后立即摘取肝脏组织,右叶肝脏研磨成组织匀浆用于检测ROS、GSH、SOD、T-AOC、TNF-α、HSP70、IL-6含量,每组中随机取4只大鼠摘取左叶肝脏组织固定于10%中性甲醛用于肝脏组织的病理学检测,另取4只大鼠摘取左叶肝脏作为病理学检测的Shock（休克损伤）组。结果:大鼠在失血过程中,MAP、HR不断下降,休克状态时血压维持在35±5mmHg,实验组大鼠均已达危重失血性休克,三种复苏液均能对危重失血性休克大鼠进行有效复苏,使复苏后大鼠血压回升至80 mmHg,且复苏液中PolyCHb浓度越高,升压作用越显着;复苏后6h血液中的Hb含量随输入复苏液中PolyCHb浓度的增加而升高,Hct、血气分析、ALT、AST三实验组无统计学差异;HES组和2%PolyCHb组大鼠在复苏后1h内肝脏表面血流灌注量显着升高;输入含PolyCHb复苏液使肝脏组织产生的ROS和GSH相较于Sham组升高,总抗氧化能力HES组和2%PolyCHb组均有所升高;三组实验组相较于Sham组肝组织中Neu%、IL-6均有所升高,2%PolyCHb组肝组织TNF-α和HSP 70含量升高;从病理结果分析2%PolyCHb组大鼠于失血休克状态肝组织的缺血再灌注损伤更轻,肝细胞凋亡率更低。结论:浓度为20g/L和60g/L的PolyCHb复苏液均能有效复苏危重失血性休克大鼠,PolyCHb在复苏过程中具有升血压作用,且PolyCHb复苏液浓度越高,升压作用越显着;20g/LPolyCHb复苏液在恢复肝脏表面血流灌注,改善肝脏微循环和减轻失血性休克造成的肝组织病理损伤方面优于60g/L PolyCHb复苏液。
陈帅帅[3]（2019）在《不同基底硬度下干细胞及肝星状细胞收缩力与相关蛋白活性研究》文中认为为探索细胞因基底硬度不同而产生的力学信号与由细胞因子和蛋白激酶活性作用所产生的化学信号交互关系,阐明细胞收缩力在其中可能扮演的角色,探寻干细胞治疗肝纤维化过程中,力学信号与其他信号分子间的相互作用及其机制,本实验研究结合文献报道在体外构建近似于正常肝组织,肝纤维化初期肝组织及肝硬化阶段肝组织硬度的聚丙烯酰胺水凝胶（polyacrylamide gel,PA）细胞培养系统。观察不同硬度基底上骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）和肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）在其上的生长情况并检测细胞增殖活力,运用免疫荧光染色技术考察基底硬度对细胞骨架及FAs装配的影响,利用牵引力显微镜技术表征不同硬度基底上不同细胞的收缩力大小,及TGF-β1,sFRP-1细胞因子对收缩力的影响,进而通过细胞磷酸化组学研究探索基底硬度对细胞相关信号通路的影响。细胞在不同硬度基底上均表现出良好的生长状态,免疫荧光染色结果显示,基底硬度显着影响细胞骨架及FAs装配,高硬度基底促进骨架成熟装配及FAs形成。牵引力测量结果显示,平均基底微元应力模量（mean modulus of substrate elements stress,MSES）、弹性基底吸收的弹性应变能、细胞预应力三个指标随基底硬度增加其总体趋势均为增加,基底硬度对细胞的影响具有一致性。细胞通过调整骨架及FAs装配调节收缩力大小,以此感知基底硬度的力学信号,进而调整细胞形态及功能。在HSCs组,sFRP-1在三个硬度上对MSES没有显着性影响,对弹性应变能及细胞预应力的影响则不具有一致性,在3.4 kPa降低,8.8 kPa增加,表明在HSCs细胞中Wnt信号通路参与细胞收缩力的调节,其过程与基底硬度的影响之间存在反馈。TGF-β1在三个硬度上则始终促进MSES值,弹性应变能及细胞预应力增加,表明TGF-β1可促进细胞收缩力的产生。在MSCs组,sFRP-1在8.8 kPa使三个力学指标显着降低,在3.4 kPa降低MSES但其他两个指标无显着性差异,17.6 kPa上三个力学指标则均无显着性差异,该结果提示我们在8.8 kPa MSCs细胞Wnt信号通路激活更为明显。TGF-β1在三个硬度上对MSES的影响不具有一致性,在3.4kPa,8.8 kPa上降低,17.6 kPa上显着升高。弹性应变能及细胞预应力则除8.8 kPa外均显着提高,提示TGF-β1在软和硬基底上可引起细胞不同的响应,但其整体上提高了干细胞对基底的能量输出能力及自身收缩能力。在3.4 kPa上或由于基底不能提供足够的对抗力,因此MSES反而下降,同时8.8 kPa的响应存在一定的矛盾之处。结合sFRP-1的结果,可认为此硬度对干细胞有较为特别的意义,或与Wnt信号通路有关。磷酸化定量蛋白质组检测显示,在MSCs组,随硬度增加,可通过黏着斑信号通路、微丝骨架调节通路、平滑肌细胞收缩通路等相关信号通路调节细胞收缩力,并解除干细胞G1期滞留促进增殖。HIF-1信号通路随硬度增加而上调,提示有可能通过促进TIMP-1等在内的相关因子促进肝纤维化。在HSCs组,TGF-β信号通路、细胞周期通路、NF-kappa B信号通路、Wnt信号通路等相关信号通路,随硬度增加而激活,其整体调节结果为起始细胞周期运行,降低细胞凋亡促进HSCs细胞存活与增殖。由于我们所用的HSCs为激活后的星状细胞,硬度增加促进其增殖与存活。因此,我们可以认为硬度增加促进肝纤维化进程并且该进程与上述通路相关。
汪潜云[4]（2018）在《纵隔CO2充气技术在纵隔径路食管手术中应用的安全性分析》文中认为目的近年来,食管微创手术（Minimally Invasive Esophagectomy,MIE）在食管癌手术中的使用率逐步提升,CO2充气技术在微创手术尤其是腹腔镜手术中的应用已经十分成熟,但在经纵隔径路食管癌手术中的应用还处于探索阶段。本研究旨在探讨纵隔CO2充气技术在经纵隔径路食管癌手术中应用的安全性。方法首先在体外模拟纵隔CO2充气环境,利用细胞功能学实验手段,研究不同充气压力对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移能力的影响。接着,应用猪构建纵隔CO2气肿的实验动物模型,通过对相关生理参数的检测,研究不同充气压力对猪循环呼吸功能的影响。最后,在常州市第一人民医院接受治疗的早期食管癌患者中随机选择10例,进行纵隔CO2充气辅助经纵隔径路食管癌切除术,分别于CO2充气前,充气后30、60、90 min及放气后30 min监测HR、MAP、CVP,采集动脉血测PaCO2、血乳酸浓度、PaO2/FiO2、SaO2、pH值,利用食道超声测心输出量（CO）。结果细胞功能学实验结果显示,5-10mm Hg CO2充气压力对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力无明显影响;而15mm Hg CO2充气压力可以促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭,并能抑制食管癌细胞的凋亡。动物实验结果显示,5-10mm Hg CO2充气压力下,猪的循环功能指标（CVP、收缩压、舒张压、脉压差、心率、心输出量）及呼吸功能指标（PaCO2、血乳酸浓度、PaO2、SaO2、Ph值）与充气前无明显差异;而15mm Hg CO2充气压力下,猪的CVP升高,心率加快,血压下降,心输出量减少,PaCO2、血乳酸浓度升高,PaO2、SaO2、pH值下降。此外,10例接受纵隔CO2充气辅助纵隔镜食管癌切除术的患者中,10mm Hg的CO2充气压力除使患者的心率轻度加快,对其他循环及呼吸功能指标并无明显影响。结论5mm Hg及10mm Hg的纵隔CO2充气压力对食管癌的增殖转移及机体循环、呼吸系统功能无明显影响,而15mm Hg的纵隔CO2充气压力可以促进食管癌的增殖转移并损害机体的呼吸循环系统功能。人体可以耐受10mm Hg纵隔CO2压力,但循环系统会受一定影响,手术中应注意维持平均循环充盈压（MCFP）与中心静脉压（CVP）之间的压力梯度。
潘永福[5]（2016）在《当归芍药散含药血清对ET-1介导的肝星状细胞收缩的抑制作用及其相关机制的研究》文中研究表明目的:本实验以活化大鼠肝星状细胞（HSC-T6细胞系）为研究目标,观察给药后,当归芍药散（Danggui Shaoyao San,DSS）含药血清对HSC-T6细胞内ET-1基因的影响;进一步探究当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩的影响和对可能引起收缩的信号通路Rhoa/ROCK以及e NOS的调控作用。方法:1.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;2.检测当归芍药散含药血清对HSC-T6细胞内ET-1水平的影响:采用ELISA检测各组细胞培养上清液中ET-1蛋白的表达;q RT-PCR法检测各组HSC-T6细胞中ET-1 m RNA的水平。实验共分组2组:空白血清对照组、DSS含药血清组;检测当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6收缩作用的影响:3.采用FITC-鬼笔环肽细胞骨架染色方法观察HSC-T6细胞形态变化;采用用胶原晶格法观察HSC-T6的收缩。实验共分为6组:空白对照组、模型组、DSS含药血清低剂量组、DSS含药血清中剂量组、DSS含药血清高剂量组、Y-27632抑制剂组;4.采用Western blot法检测不同浓度的当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞中Rho A、ROCKⅡ、p-MLCⅡ、MLCⅡ、e NOS蛋白表达,探讨当归芍药散含药血清影响ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩的信号传导机制。实验共分为6组:空白对照组、模型组、DSS含药血清低剂量组、DSS含药血清中剂量组、DSS含药血清高剂量组、Y-27632抑制剂组。结果:1.MTT法检测结果显示,在5%15%范围内,细胞增殖及活力较强且与血清浓度呈正比例增长。因此,在后期实验中,选用血清浓度为5%、10%、15%作为含药血清浓度。2.ELISA法检测各组HSC-T6细胞培养液中ET-1蛋白的表达结果显示:与空白血清对照组相比,当归芍药散含药血清组（终浓度为5%、10%、15%）细胞内ET-1的蛋白表达明显下降（P<0.05或P<0.01）;q RT-PCR法检测结果显示:较空白血清对照组,当归芍药散含药血清组（终浓度为5%、10%、15%）细胞内ET-1的m RNA表达水平随着DSS含药血清浓度增加逐渐下降,其中终浓度为10%和15%时,显着下降（P<0.01）。3.通过FITC-鬼笔环肽细胞骨架染色方法观察HSC-T6细胞形态变化,倒置荧光显微镜观察可见经FITC-鬼笔环肽染色的模型组细胞骨架中出现大量微丝F-actin,当归芍药散含药血清（终浓度为5%、10%、15%）及Y-27632（100μmol/L）能够不同程度的抑制ET-1（10nmol/L）诱导的HSC-T6细胞骨架中F-actin数量增多;胶原晶格实验结果显示:模型组HSC-T6细胞明显收缩,较空白血清对照组（终浓度为10%）,差异有统计学意义（P<0.01）;当归芍药散含药血清组（终浓度为5%、10%、15%）对ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩呈现不同程度抑制作用,终浓度为10%、15%时,能显着抑制ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）;Y-27632（100μmol/L）亦可显着抑制ET-1（10nmol/L）引起的HSC-T6细胞收缩,较模型组差异有统计学意义（P<0.05）。4.Western blot法检测Rho A、ROCKⅡ、p-MLCⅡ、MLCⅡ蛋白表达水平,结果显示:较空白血清对照组,模型组Rho A、ROCKⅡ、p-MLCⅡ、MLCⅡ蛋白表达均显着升高（P<0.01）;与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组降低了Rho A、ROCKⅡ、p-MLCⅡ、MLCⅡ（P<0.05）蛋白表达,且呈现一定的剂量依赖性,Y-27632抑制剂组较模型组上述蛋白表达均亦显着降低（P<0.05）。同时Western blot法结果显示,较空白血清对照组,模型组细胞内e NOS蛋白表达量明显下降（P<0.01）;与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组细胞内e NOS蛋白表达均增加,且随着当归芍药散含药血清浓度升高,各剂量组细胞内e NOS蛋白表达量有逐渐升高的趋势。结论:1.当归芍药散含药血清可抑制活化的HSC-T6细胞内ET-1 m RNA的表达,并且可抑制HSC-T6细胞自分泌ET-1。2.当归芍药散含药血清能够抑制ET-1诱导的HSC-T6细胞收缩。3.当归芍药散含药血清抑制ET-1诱导HSC-T6细胞收缩可能是通过激活Rh OA/ROCK信号传导通路,并通过激活e NOS,提高细胞内的NO水平实现的。
孙晓宇[6]（2013）在《奥曲肽降门脉压及其空肠促吸收机制研究》文中进行了进一步梳理乙型肝炎是肝硬化主要病因，我国乙肝患者及乙肝病毒感染者众多，每年新发肝硬化者超过百万。门脉高压（portal hypertension, PH）是肝硬化失代偿期患者典型的临床表现，是肝硬化多种并发症发生的根源及主要致死原因。对PH进行积极有效防治是改善患者预后及降低病死率的关键。血红素氧合酶（heme oxygense, HO）/一氧化碳（carbon monoxide, CO）系统在肝硬化中晚期可加重PH程度，促多组织器官的进行性病变，加速肝硬化进程，我们曾通过肝硬化PH大鼠研究模型得到了证实。但目前对HO/CO系统在肝硬化PH时期作用临床研究较少，我们曾发现肝硬化PH患者血中可反映HO/CO系统水平的碳氧血红蛋白指标升高，本研究拟通过临床前瞻性研究进一步揭示该系统对PH患者伴多种并发症及对各脏器作用影响。奥曲肽（Octreotide,OCT）是公认的理想降门脉压药物，但其降压机制尚不清楚。因OCT可收缩内脏血管，降门脉血流达降压作用，而内源性CO维持PH的机理之一为扩张内脏血管，故推测OCT可能通过影响HO/CO系统而起到降压作用。本实验对OCT通过HO/CO系统降门脉压的可能机制进行探讨，并进一步证实HO/CO系统的关键作用。由上述实验并结合既往研究基础证明了HO/CO系统在肝硬化PH发展过程中的重要意义，OCT可通过抑制该系统表达而起到降低门脉压目的。结合OCT众多药物优点，若能实现其口服降压治疗，有利于解决PH防治的难题。但蛋白多肽类物质OCT，虽可抵抗胃肠道中酸或酶降解，但分子量大，脂溶性差，受肠肝首过效应及肠道吸收屏障影响，口服生物利用度极低。目前通过改变OCT的化学结构或加入促吸收剂等方法，实验结果均并不理想，且未研究PH病理情况下OCT吸收机制及促吸收研究。我们考虑直接研究影响OCT吸收的首过效应的因素，可能更有利于发现OCT促吸收策略。因在PH状态下门体静脉分流形成，侧支循环的建立及肝功异常等诸多因素，肝首过效应对OCT口服吸收影响较小，而肠首过效应影响可能更为显着。我们通过对主要的肠上皮转运蛋白P-糖蛋白、多耐药相关蛋白2和代谢酶细胞色素P4503A4进行研究，揭示OCT肠首过效应机制，及探及在肝硬化PH情况下，上述转运蛋白及代谢酶的变化对OCT肠道吸收影响，拟寻求实现OCT口服降压策略。此外对PH状态下寡肽类转运蛋白PepT1对OCT的作用做了初步研究，寻求该病理状态下的OCT直接转运蛋白。本研究旨在通过基础及临床多角度揭示HO/CO系统在肝硬化PH时期重要作用，了解在该系统介导下的OCT降门脉压机制，并明确OCT肠道吸收障碍机理，为提高OCT口服生物利用度提供有效方法及途径，有利于实现其口服降压治疗，同时为OCT临床合理用药提供理论依据。本研究共分三部分第一部分血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制研究第一节血红素氧合酶/一氧化碳系统对门脉高压并发症的影响第二节血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制探讨第二部分肠道转运蛋白及代谢酶对奥曲肽肠吸收的影响第三部分肝硬化门脉高压状态下奥曲肽空肠促吸收及降门脉压研究第一部分血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制研究第一节血红素氧合酶/一氧化碳系统对门脉高压并发症的影响目的：分析乙肝后肝硬化（hepatitis B virus-related cirrhosis, HBC）伴肝性脑病（hepatic encephalopathy, HE）患者碳氧血红蛋白（carboxyhemoglobin, COHb）水平及其在肝硬化常见门脉高压（portal hypertension, PH）并发症时的水平差异，并了解其与HE分期等的关系，揭示血红素氧合酶（heme oxygenase, HO）/一氧化碳（carbon monoxide, CO）系统对PH患者伴多种并发症及对各脏器的作用影响。方法：根据排除及诊断标准，68例入院治疗的HBC伴HE的大连医科大学附属第一医院患者纳入本研究入选标准（H组）；除外了重要器官异常的急诊室患者（血气分析等所有检查数据均在正常范围以内）作为对照组（N组），共22例。收集患者临床资料，进行相关检查，收集COHb、氧分压（partial pressure ofoxygen, PaO2）、氧饱和度（oxygen saturation, SaO2）等检测数据，对患者进行HE分期、食管胃底静脉曲张、肝肾综合征（hepatic renal syndrom, HRS）、自发性腹膜炎（spontaneous bacterial peritonitis, SBP）、低氧血症等诊断分析。比较HE患者COHb水平变化，伴不同PH并发症时COHb水平差异及分析COHb水平与HE分期、PaO2及SaO2关系。结果1. H组患者COHb水平较N组明显升高（（2.102±1.021）%vs.（0.983±0.231）%，p=0.000），COHb水平与HE分期呈正相关（p=0.003，rS=0.358）。2. HE伴HRS患者COHb水平较未发生HRS者明显降低（（1.981±1.020）%vs.（2.502±1.073）%，p=0.029）；COHb水平在患者有无食管胃底静脉曲张或SBP中无差异（p>0.05）。3. HE患者COHb水平与PaO2呈负相关（P=0.006, r=-0.336），与SaO2无关（P=0.576, r=-0.072）。HE患者达到低氧血症标准时，COHb水平升高（（2.72±0.362）%vs.（1.93±0.242）%，p=0.012）。结论血红素氧合酶/一氧化碳系统在肝硬化门脉高压时期病理生理过程中起到重要作用，其表达具有组织特异性，对该时期患者具有重要临床意义。第二节血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制探讨目的：探讨血红素氧合酶（heme oxygense, HO）/一氧化碳（carbon monoxide, CO）系统介导下的奥曲肽（Octreotide, OCT）降门脉压机制，并进一步证实在肝硬化门脉高压（portal hypertension, PH）阶段HO/CO系统的关键作用。方法：将34只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组，即假手术组（Sham组）10只，肝硬化门脉高压组（PH组）12只及奥曲肽组（OCT组）12只。大鼠肝硬化PH模型采用胆总管结扎方法。术后4周，OCT及PH组制模完成，前者予OCT腹腔注射（100μg/kg/d，日2次）3天，PH组及Sham组给予同等剂量的生理盐水。给药结束后，禁食水24h，对三组大鼠进行门静脉压力测定，后处死大鼠，取血、取肝，采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）水平；HE染色对肝脏进行病理形态学观察；通过免疫组织化学、western blot及RT-PCR方法观察大鼠肝脏HO-1蛋白及基因表达情况。结果1.对比ALT和AST值，PH组较Sham组明显升高（P﹤0.01）；OCT组较PH组明显下降（p﹤0.01），但较Sham组升高（p﹤0.05）。2.大鼠肝脏HE染色结果显示PH组肝小叶结构紊乱，大量纤维组织增生，炎性细胞侵润，见多个假小叶，小叶间胆管增生明显。OCT组纤维组织增生程度较PH组明显减轻，炎细胞浸润减少（p﹤0.05），但较Sham组程度重（p<0.05）。3.大鼠门脉压力比较，PH组较Sham组明显升高（（18.52±1.83）mmHg vs.（9.08±0.52）mmHg, p<0.01）；OCT组（13.17±1.12mmHg）较PH组明显下降（p<0.05），但较SH组升高（p<0.05）。4.免疫组织化学方法及western blot方法结果显示HO-1蛋白表达, PH组较Sham组增高（p﹤0.01）；OCT组表达较PH组显着减少，但较Sham组高（p﹤0.05）。应用RT-PCR方法对上述HO-1蛋白表达结果在基因水平进行了验证。结论1.奥曲肽可抑制肝硬化门脉高压时期血红素氧合酶-1在肝脏的表达，其对血红素氧合酶/一氧化碳系统进行调控可能是其降门脉压机制之一。2.血红素氧合酶/一氧化碳系统在门脉高压形成中具有重要作用。第二部分肠道转运蛋白及代谢酶对奥曲肽肠吸收的影响目的：研究肠上皮转运蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）、多药耐药相关蛋白2（multidrug resistance associated protein2, MRP2）及代谢酶细胞色素CYP4503A4（cytochrome P4503A4, CYP3A4）与奥曲肽（Octreotide, OCT）肠吸收关系，并了解在肝硬化门脉高压（portal hypertension, PH）状态下，P-gp、MRP2及CYP3A4变化对OCT肠吸收作用影响。方法1.运用Caco-2细胞转运模型，分别给予OCT（10μM）及加入P-gp抑制剂罗丹明123（1mM）或MRP2抑制剂丙磺舒（1mM）后（n=4），考察OCT在Caco-2细胞肠腔侧（apical side, AP）和基底侧（basolateral side, BL）双向转运的表观渗透系数（apparent permeability coefficient, Papp）及渗透方向率（permeability directionrate, PDR）；考察OCT药物浓度（1μM或50μM）对转运的影响。2.建立胆管结扎肝硬化PH大鼠模型，运用离体翻转肠实验，考察P-gp抑制剂维拉帕米（1mM）及MRP2抑制剂丙磺舒（1mM）对浆膜侧OCT浓度影响。正常大鼠分组（n=4）：单独予OCT（A组）；予维拉帕米+OCT（B组）；予丙磺舒+OCT（C组）；予维拉帕米及丙磺舒+OCT（D组），OCT浓度10μM。PH大鼠分组同上，对应设为A1组，B1组，C1组及D1组（n=4）。3.运用大鼠在体空肠灌流实验，考察抑制剂对血中OCT浓度影响情况。正常大鼠分组（n=4）：予OCT（A组）；予P-gp抑制剂维拉帕米+OCT（B组）；予丙磺舒+OCT（C组）；同时予维拉帕米及丙磺舒（D组）。PH大鼠分组同上，对应分组为A1组，B1组，C1组及D1组。给药浓度同翻转肠实验。4.制备正常及PH大鼠肠微粒体，考察CYP3A抑制剂酮康唑对OCT代谢影响。正常大鼠微粒体实验分组（n=6）：予OCT（N+OCT组），予OCT+酮康唑（N+OCT+K组）；PH大鼠微粒体实验分组同正常大鼠，对应地设为PH+OCT组，PH+OCT+K组；对照组：未加微粒体，仅予OCT孵育（OCT组）。OCT浓度100μM，酮康唑浓度10μM。5.人CYP3A4重组酶实验，在2.5mg/mL重组微粒体酶中加入OCL（100mM），考察不同孵育时间对OCT代谢影响，选择最佳孵育时间。孵育10min，考察不同CYP3A4蛋白浓度（1.25,2.5,5,10,20mg/mL）对OCT（100mM）代谢影响，选择最佳重组酶的蛋白浓度。根据最适重组酶的蛋白浓度和最适反应时间，将不同浓度OCT（20,50,100,200,400mM）加入孵育体系中，检测剩余OCT浓度，考察孵育体系中是否有代谢物生成。结果1. OCT在Caco-2细胞转运无浓度依赖性，10μM是考察P-gp、MRP2主动转运最适宜浓度，分别单独予P-gp和MRP2抑制剂，PDR均>1.5。正常组Papp（B-A）较Papp（A-B）明显升高（p<0.05），予P-gp及MRP2抑制剂后，抑制剂组Papp（A-B）均高于Papp（B-A）（p<0.05）；各抑制剂组Papp（A-B）较正常组明显升高，在两种抑制剂联用情况下升高更为显着（p<0.01）；合用两种抑制剂，Papp（A-B）高于单用一种抑制剂组（p<0.05），且Papp（B-A）低于正常组（p<0.01）。2.离体翻转肠实验，对比OCT浓度，D组在三组中最高（p<0.05），B组较C组升高（p<0.05），PH大鼠离体翻转肠实验提示上述相同结果，且PH大鼠各组OCT浓度较相应正常大鼠各组下降（p<0.05）。正常大鼠B，C和D组AUC值分别是A组的176.22%，151.39%和220.63%。PH大鼠B1，C1和D1组AUC值分别是A1组的151.82%，128.23%，和165.33%。A1组的AUC值是A组的21.54%。3.在体空肠灌流实验，对比OCT浓度，D组较其他三组升高（p<0.05），B组较C组升高（p<0.05），PH大鼠实验结果与之相同，且PH大鼠各组OCT浓度较相应正常大鼠各组下降（p<0.05）。B，C和D组AUC值分别是组A的521.08%，418.95%和618.40%。B1，C1和D1组AUC值分别是组A1的384.61%，236.28%和461.78%。A1组的AUC值是A组的96%。4.肠微粒体实验，PH+OCT组OCT浓度低于N+OCT组（p<0.05）；予抑制剂酮康唑后，OCT浓度显着升高（N+OCT组<N+OCT+K组, PH+OCT组<PH+OCT+K组,p<0.01）。OCT组OCT浓度较N+OCT组及PH+OCT组升高（p<0.01），但较N+OCT+K组及PH+OCT+K组均无明显差异（p>0.05）。5.人重组CYP3A4酶实验，最佳孵育时间为10min，最佳重组酶CYP3A4蛋白浓度为2.5mg/mL。随着体系中加入OCT浓度降低，残余OCT量减少，孵育体系中可检测到小分子OCT代谢产物。结论奥曲肽是肠上皮转运蛋白P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白2及代谢酶细胞色素CYP4503A4的底物，三者具有明显抑制奥曲肽肠吸收效应。在肝硬化门脉高压病理状态下，上述转运蛋白及代谢酶表达或活性升高，对OCT肠吸收的抑制作用更为显着。第三部分肝硬化门脉高压状态下奥曲肽空肠促吸收及降门脉压研究目的：考察应用肠上皮转运蛋白P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）、多药耐药相关蛋白2（multidrug resistance associated protein2, MRP2）及代谢酶细胞色素CYP4503A（4cytochrome P4503A4, CYP3A4）抑制剂后对门脉高压（portal hypertension, PH）大鼠奥曲肽（Octreotide, OCT）肠吸收影响及降门脉压效果测定；了解PH状态下，寡肽转运蛋白PepT1变化对OCT肠吸收影响，期待寻求实现OCT口服用药的有效方法。方法1.建立胆管结扎肝硬化PH大鼠模型，进行在体吸收实验，观察加入P-gp，MRP2及CYP3A抑制剂后，大鼠肠吸收效果变化。正常大鼠分2组（n=4）：OCT静脉给药及OCT十二指肠给药组；PH大鼠分组：OCT静脉给药组，OCT十二指肠给药组及OCT联合抑制剂（维拉帕米4.9mg/kg,丙磺舒300mg/kg，酮康唑5.3mg/kg）十二指肠给药组（n=4）。OCT十二指肠给药剂量1mg/kg，静脉给药剂量0.1mg/kg。给药后不同时间点于颈静脉取血，计算药代动力学参数。2.正常大鼠分为2组，未加药物组（N组），予OCT组（N+OCT组）；PH大鼠分3组，无药物组（PH组），予OCT组（PH+OCT组），及OCT+混合抑制剂组（抑制剂剂量同上），OCT给药剂量1mg/kg，日1次，连续给药3天，处死大鼠，取空肠，用western blot、免疫组化及逆转录聚合酶链式反应（reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR）方法观察各组大鼠空肠上皮P-gp，MRP2及CYP3A4蛋白和基因的表达。3.测压实验：正常大鼠不给药（N组），PH大鼠分为无药物组（PH组），OCT组（PH+OCT组）及OCT+混合抑制剂（抑制剂剂量同上）组（PH+OCT+I组）（n=4），OCT给药剂量为1mg/kg，日1次，连续3天灌胃给药后，测定门静脉压力。4.对PH状态下，PepT1对OCT转运效果考察。正常大鼠分不给药组（N组），及OCT给药组（N+OCT组），PH大鼠分组相同，设为PH及PH+OCT组（n=4），OCT给药剂量为1mg/kg，日1次，连续灌胃给药3天，处死大鼠，取空肠，通过westernblot、免疫组化及RT-PCR方法观察各组大鼠PepT1蛋白及基因表达情况。运用Caco-2细胞转运模型，考察PepT1抑制剂甘氨酰肌氨酸（glycylsarcosine，Gly-Sar）（1mM）对OCT（10μM）在肠腔侧（apical side, AP）和基底侧（basolateral side, BL）双向转运的表观渗透系数（apparent permeability coefficient, Papp）及渗透率（permeability direction rate, PDR）。建立离体翻转肠模型（n=4），正常大鼠分为给予OCT（10μM）组（N组）及OCT+Gly-Sar（1mM）组（N+G组），PH大鼠给药及分组相同，设为PH及PH+G组。建立大鼠空肠灌流模型，分组及给药同翻转肠实验。结果1.大鼠在体吸收实验，静脉注射后OCT浓度从血浆中快速清除，t1/2较短，正常大鼠Vd、AUC较PH大鼠升高，表明药物清除缓慢。空肠输注OCT后，PH大鼠较正常大鼠Tmax延长，Cmax和AUC（0-12h）下降。OCT联合P-gp/MRP2/CYP3A混合抑制剂后Tmax减少，同时Cmax, AUC（0-12h）较正常大鼠及未应用抑制剂的PH大鼠明显升高，F及ER约是未应用抑制剂的PH大鼠的4倍。2. western blot、免疫组化结果均发现PH组P-gp，MRP2和CYP3A4蛋白均较N组升高（p<0.05），予OCT后显着升高（N+OCT组> N组, PH+OCT组> PH组, p<0.05），予OCT联合混合抑制剂后蛋白表达最少（p<0.01），N+OCT组和PH组表达无差异（p>0.05）。RT-PCR方法见基因表达与蛋白表达结果一致。3.考察混合抑制剂对大鼠门脉压力影响发现，PH组大鼠平均门脉压力较正常组(（15.56±2.36mmHg） vs.（9.24±0.76mmHg）明显升高（p<0.01），且高于PH+OCT组（12.51±1.50mmHg，p<0.05）。PH+OCT+I组门脉压力（6.95±1.12mmHg）较PH组及PH+OCT组明显下降（p<0.01），在正常范围内。4.考察PepT1与OCT肠吸收关系，免疫组化及western blot检测发现对比PepT1蛋，PH组较N组表达升高（p<0.05），应用OCT组较未应用组无差异（N+OCT组vs. N组, PH+OCT组vs. PH组, p>0.05）， PH+OCT组高于N+OCT组（p<0.01）。RT-PCR基因检测结果与蛋白表达结果一致。Caco-2细胞研究发现，Gly-Sar抑制PepT1后，Papp（A-B）较Papp（B-A）仍明显降低，无升高趋势，且PDR<1.5，故表明PepT1不能介导OCT在Caco-2细胞的主动转运。翻转肠实验见较N组，N+OCT组浆膜腔中OCT浓度无明显差异，在PH大鼠中，亦无明显改变（p>0.05）。PH大鼠各组OCT浓度较相应正常大鼠各组下降（p<0.05），PH组是N组的52.4%。在体空肠灌流模型，OCT浓度在N组和N+G组中无差异，在PH组和PH+G组中亦无差异（p>0.05）。PH大鼠各组OCT浓度较相应正常大鼠各组下降（p<0.05），PH组是N组的62.7%。结论1. P-糖蛋白，多药耐药相关蛋白2及细胞色素CYP4503A4在奥曲肽肠吸收中具有重要作用，对其进行抑制可以明显促肝硬化门脉高压大鼠肠吸收，降压效果理想。2.寡肽转运蛋白PepT1在肝硬化门脉高压时期表达增强，但对奥曲肽无转运作用。
郭成伟[7]（2011）在《磁共振弥散/张量加权及CT灌注成像对兔肝缺血再灌注损伤的诊断价值》文中研究指明研究背景肝缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury, I/R）常发生于肝移植、低血容量性和心源性休克以及肝脏肿块和肿瘤的肝叶手术切除中,是肝功能急性损害的重要原因,直接影响患者的恢复和术后生存率。因而,肝I/R损伤保护研究是肝脏外科领域一项重要的课题。肝I//R病理生理过程机制复杂,涉及能量代谢障碍、钙离子超载、微循环障碍、细胞因子、中性粒细胞、氧自由基作用等相关因素。目前,对肝I/R损伤程度的评价多采用肝酶（AST、ALT）、炎性因子（TNF-a）等生化检查指标。虽然这些生化指标可作为一个非常敏感指标反映肝脏损伤程度,但是还不能反映肝I/R后肝组织的形态学特征、微循环障碍及其在空间分布等方面的信息。同时,肝酶以及炎性因子等指标还存在受肝脏术后应急性反应、创伤以及溶血等多方面因素影响,由此可能产生假象,造成不必要再手术风险。磁共振弥散/张量成像（diffusion weighted/ tensor imaging, DWI/DTI）作为研究功能及微观影像学的重要方法之一,目前已经成为临床评估和生命科学研究重要的工具,在中枢神经系统和相关病变的基础研究已日趋成熟,但应用于腹部脏器还处于探索阶段。肝I/R的病理生理过程包括肝脏微循环的障碍、肝细胞内外水肿以及不断加重的肝细胞坏死等,这些病理过程使细胞内外水分子的运动状态、肝脏微循环的灌注量以及肝组织微观空间结构发生改变,这就使DWI/DTI监测和评估肝I/R的病理机制及发生、发展具有可行性。目前,DWI/DTI对肝I/R的研究尚处于探索阶段,各家结论尚未达成一致。CT灌注成像（computer tomography perfusion imaging., CTP）具有很高的时间和空间分辨率,作为一种有效、非创性的检查方法,能够同时在微血管的水平上直接评估组织的灌注情况和间接反应微血管形态特征。,而肝I/R是多机制、多种因素参与复杂的一个病理过程,其中肝I/R后肝脏微循环状态的差异性分布,即血液动力学的改变及伴随的肝脏灌注失败一直被认为是其病理过程中重要的因素之一,这正是如何准确评估肝I/R后肝组织微循环障碍所面临的瓶颈所在,是对以往采用肝酶等生化方法来评估肝脏损伤程度的一个很好补充。本实验拟采用新西兰大白兔制作部分肝I/R模型,探讨肝I/R后组织病理学、肝功能及TNF-a变化特点,探讨3.0 T DWI/DTI及CTP对兔肝I/R诊断价值,以期为肝I/R的诊断和治疗提供一种新的评价方法。第一部分兔部分肝缺血再灌注损伤模型的建立研究目的采用新西兰大白兔做部分肝I/R模型,拟探讨肝I/R后大体形态、组织病理、肝酶（ALT、AST、ALP）及肿瘤坏死因子a （TNF-a）变化特点,以期为肝I/R后功能影像学研究提供病理学基础。材料与方法1.实验动物健康成年、雄性新西兰大白兔,3～4月,体重2.5～3kg。所用实验兔术前均经腹部CTA检查了解肝动脉和门静脉解剖变异情况。2.肝I/R及sham模型的制作采用部分肝I/R模型,用无损伤性动脉夹夹闭入肝左叶管道结构（肝左动脉、门静脉左支及左肝管）,肝右叶血供未阻断。阻断血供60min后,打开动脉夹恢复血流,肝左叶由暗红色变为鲜红,表示再灌注成功,关闭腹腔。I/R组按照再灌注时间,分为0.5h、2h、6h、12h、24h和48h组。sham组仅解剖肝十二指肠韧带,不阻断血供。3.生化及病理学检查3.1肝酶及TNF-a测定实验兔分别于MRI、CT检查结束后立即经上腔静脉抽取静脉血4ml（肝素管）,离心后,分离血清,测定ALT、AST、ALP （U/L）及TNF-a （pg/ml）含量。3.2病理学检查取血样后,立即处死实验动物,整体摘取肝脏,肉眼观察大体标本表面和断面解剖特点。将解剖标本制成常规HE染色切片。显微镜下观察肝组织病理学改变,根据肝脏病变程度以半定量方法积分,按各种病变程度乘以不同加权数：肝细胞坏死×（0～3）,肝细胞水肿×（0～3）,炎细胞浸润×（0～3）,淤血×（0～3）,计算每只动物肝病变的总积分,然后进行统计学处理。4.统计学处理采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析：（1）I/R与sham组间肝酶、炎性因子及形态学积分均进行单因素方差分析（one-way ANOVA）;（2）组织形态学积分与肝酶、TNF-a间关系采用Pearson相关；P<0.05作为差异有显着意义的检验标准。结果1.兔肝I/R模型构建成功造模并纳入实验78只,其中sham、0.5-24 h组,每组各12只；48h组6只。2.病理表现及生化检查2.1大体解剖在复血、氧后早期（0.5h、2h组）,肝左叶表现为显着的充血肿胀、体积略增大,在其解剖断面上显示明显充血肿胀、肝窦内充满淤积红细胞；随着I/R后时间的延长,肝脏表面颜色逐渐变淡,变成苍白色,在I/R后48 h肝表面出现不规则墨绿色样变,肝段性坏死显着。而未阻断血供的肝右叶表现为显着充血肿胀。2.2镜下表现在I/R早期弥漫性肝细胞肿胀,肝细胞内明显水肿,肝窦间隙变窄,中央静脉、小动脉内红细胞大量淤积、微血栓形成（0.5h）,随后汇管区出现成簇中性粒细胞,肝窦稍有萎缩,肝细胞水肿略有减轻,肝窦间及汇管区红细胞淤积,并出现少量炎性细胞,部分肝细胞核肿胀、细胞形态改变（2h）；在I/R后6～12h,肝窦及肝实质聚集大量中性粒细胞,出现肝窦阻塞的现象,部分肝组织出现核固缩红染的凋亡细胞；在后期阶段（24～48h）,未发生梗死的肝组织显示肝窦萎缩塌陷、解离,梗死区域细胞结构消失,出现溶解坏死的特征。2.3组织评分结果各I/R组镜下形态学评分值除0.5h组一过性性的升高外,总体趋势呈逐渐上升,在48h达到最峰值。各I/R组与sham组间存在显着性差异（F=172.702；P<0.001）。2.4 AST、ALT、ALP及TNF-a各I/R组血清ALT（F=325.531,P<0.001）、AST（F=1009.602, P<0.001）、ALP（F=1430.899,P<0.001）与sham （?）司均存在显着性差异。ALT峰值在再灌注后6h组,I/R后12～48h逐渐下降。AST在2h显着升高后,缓慢上升,在48h达到最高值；ALP在6h迅速升高,在I/R后24～48h维持峰值。I/R组血清TNF-a在再灌注后2h迅速升高,并在I/R后12～24h维持峰值,在48h组开始回落。而sham组,TNF- a保持在一个稳定的低水平。经统计学分析,各I/R组与sham间均存在显着性差异（F=172.702,P<0.001）。3.相关性分析组织形态学积分与TNF-a（r=0.788, P<0.001）、ALP（r=0.841）、AST （r=0.848, P<0.001）之间存在显着相关性。结论1.兔肝I/R模型制作简单、成功率高,并在复血、氧后48h多个时间点观察了其病理发生、发展过程,适合功能影像评价肝I/R实验研究的需求。2.肝I/R早期以肝细胞水肿、肝窦淤血等病理过程为主（0～2h）；晚期阶段是以肝细胞凋亡、坏死为主（6～48h）。对损伤反应的差异性是其病理病理特点这一。3.肝细胞水肿、淤血、中性粒细胞浸润、TNF-a等因素是诱导肝I/R发生、发展的重要因素；组织形态学积分与肝酶、TNF-a具有显着相关性。4.肝I/R后中性粒细胞聚集、内皮细胞损伤、微循环障碍、肝窦萎缩、塌陷以及局灶性坏死等的病理变化特点为其功能成像学研究提供了病理学基础。第二部分兔部分肝缺血再灌注损伤3.0T弥散加权/张量成像研究目的旨在结合肝酶、肿瘤坏死因子（TNF-a）和病理学检查,探讨3.0 T DWI/DTI对兔肝I/R可行性及诊断价值。材料与方法1.动物模型的制作及分组实验兔分为sham与I/R组。肝I/R模型及sham组制作同第一部分。I/R组按照再灌注时间,分为0.5h、2h、6h、12h、24h与48h组。I/R与sham,每组各6只。2.检查方法及参数采用GE 3.0T Signa Excite扫描仪,8通道头正交线圈,轴位扫描。扫描参数：T2WI TR/TE 3200/85ms,矩阵288×224,层厚4 mm, NEX3,FOV 20cm×15 cm；T1WI TR/TE 8.5/4 ms,矩阵288×192,层厚4 mm, NEX,3,FOV 22cm×22 cm：EPI-DWI, TR/TE 2000/49.3 ms,矩阵128×128,层厚4 mm, NEX,4,FOV20cm×10cm；弥散方向：ALL模式（X、Y、Z三个方向）。弥散梯度因子b=50、100、200、300、500、600s/mm2；EPI-DTI序列,TR/TE 2000/49.3 ms, NEX,4,FOV20cm×10 cm,层厚4mm,矩阵128×128。b=100、300、600s/mm2。弥散方向：取6个方向同时进行；增强扫描采用T1WI增强,0.2 mmol/kg顺磁性对比剂Gd-DTPA及8ml生理盐水快速手动注入。3.MR图像分析采用GE AW4.3 FuncTool Performance工作站进行后处理,先对原始图像采用Correction程序对图像进行校正,以减少伪影和图像变形。重建出表观扩散系数（ADC）、平均扩散系数（DCavg）及各项异性系数（FA）图。感兴趣区（ROI）：15～8mm2,分别测量ADC、DCavg及FA值,连续测量三个层面,取其平均值。4.组织学和生化检查同第一部分。5.统计学分析使用SPSS13.0软件进行统计学分析,P<0.05为差异有统计意义。多组均数差异的比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）。以不同b值时MR-DWI/DTI参数作为因变量,肝酶、TNF-a及组织形态学积分作为自变量行多元线性回归分析,用复相关系数R来说明MR-DWI/DTI参数与肝酶、TNF-a及组织形态学积分的相关关系。结果1.影像学表现在0.5h组肝左叶T2WI信号弥漫性轻度增高,T1WI强化减低。而在2h组肝组织信号出现暂时性回复正常。再灌注后6～12h,肝脏的边缘出现T2WI上不均匀性点片状稍高信号以及相对应的强化减低区域。24h及48h组,出现明显的片状、楔形或整个肝段高信号（T2WI、DWI）及无强化的梗死区域,与未发生坏死的区域分界较为明显。随着损伤加重,梗死范围（强化减低区域）逐渐扩大。2.ADC值变化规律ADC的总体变化趋势是先显着下降（0.5h）,再一过性升高（2h）,经过6～12h缓慢上升后,24h再出现一个明显减低后,在48h明显升高。当b≤300s/mm2时,0.5h（均P<0.001）和24h组ADC显着低于sham组（b=50s/mm2,P=0.037；b=100s/mm2,P=0.020；b=200 s/mm2,P=0.016；b=300s/mm2,P=0.001）。值得注意是,ADC于2 h组明显升高（b≤300s/mm2较为显着）,虽与sham组之间无明显差异。在6h组ADC显着升高,但仍低于sham组（b=50s/mm2,P=0.029；b=200s/mm2,P=0.013；b=300s/mm2,P=0.021）。12h组与sham间均无统计学差异。与sham对比,48h组ADC显着升高（b≥300s/mm2,均P<0.001）。3. DCavg值变化规律各I/R组DCavg与ADC变化特点基本类似：在0.5h组显着下降,且在b=100（P<0.001）、300s/mm2（P=0.008）,与sham组间差异存在统计学意义；在I/R后2h显着升高,并在b=100s/mm2时,与sham组间存在统计学意义（P=0.021）；b=100s/mm2（P=0.021）、300s/mm2（P=0.002）时,6h组较sham组显着升高；DCavg值于24 h组也出现一过性下降现象,并在b=100s/mm2（P=0.008）、300s/mm2（P=0.042）时,低于sham组；在I/R后48h显着升高,且随着b值增大,其与sham组间差异性越显着（b=300s/mm2,P=0.012；b=600s/mm2,P=0.002）。4.FA值变化特点在I/R早期（0.5h）FA显着升高（b=100s/mm2,P=0.032；b=300s/mm2,P<0.001）、2h显着减低（b=100 s/mm2,P<0.001；b=300s/mm2,P=0.004）,并与sham组间差异均存在统计学意义。FA在6～2h组缓慢下降,与sham间无统计学差异。随着肝I/R损伤加重,FA在I/R后24～48h呈下降趋势,并在24 h（b=300s/mm2,P=0.018；b=600s/mm2,P=0.006）、48h（b=100s/mm2,P=0.044；b=300s/mm2,P<0.001；b=600s/mm2,P<0.001）与sham组间存在显着性差异。5.I/R与sham组血清肝酶及TNF-aI/R组血清ALT （F=121.404, P<0.001）、AST （F=489.615, P<0.001）、ALP（F=835.325,P<0.001）与sham对比显着升高,组间存在显着性差异。I/R组血清TNF-a水平明显升高,与sham组间存在显着性差异（F=171.803,P<0.001）。6.I/R及sham组组织形态学积分各I/R组镜下形态学积分总体趋势呈逐渐上升,与sham组间存在显着性差异（F=119.350,P<0.001）。7.多元线性回归分析ADC （b=100 s/mm2, R=0.756; b=500/mm2, R=0.782）, FA （b=300 s/mm2,R=0.781）与肝酶等生化、病理指标间存在较好的相关性。结论1.肝I/R功能成像参数ADC. DCavg/FA具有复杂性和多变性特点,其成像参数在I/R后2h出现一过性回复的现象,与组织形态学积分等病理指标具有类似变化特点,是其病理机制的体现。2.在肝I/R组早期功能成像参数变化较为剧烈（b<300s/mm2）,这可间接反映肝微循环障碍等病理信息；采用较大b值（b=500、600s/mm2）,在I/R后期阶段功能成像参数与sham间具有较大差异,这对于准确反映I/R后肝组织损伤、坏死等病理过程具有重要意义。3.在肝I/R早期阶段,FA与DCavg变化呈相反的趋势（0.5～12 h）；而在晚期阶段呈现逐渐下降特点（24～48h）,这与肝I/R后肝组织不断溶解坏死,维持其正常微观空间结构消失相一致。4.肝酶等生化指标与ADC. DCavg/FA参数间存在较好的相关性,证实了DTI/DWI对肝I/R诊断可行性和临床应用价值。5. DTI/DWI可以作为一种非创性的功能成像反映肝I/R肝细胞的生理状态、微观形态学等方面信息,若结合其他功能成像方法,例如,灌注成像可促进对I/R模型探索研究,为临床的断和治疗提供了一种可行性评价方法。第三部分兔部分肝缺血/再灌注损伤CT灌注成像研究目的观察兔部分肝I/R后CT灌注（CTP）参数演变规律,分析CTP评估肝I/R血流动力学病理基础,并探讨对其最敏感、有效的灌注参数。材料与方法1.动物模型的制作及分组实验兔分为sham与I/R组。肝I/R模型及sham制作同第一部分。I/R组按照再灌注时间,分为0.5h、2h、6h、12h与24h组。I/R与sham,每组各6只。2.CT灌注检查方法采用Philips Brilliance iCT（探测器组合0.625mm×256）扫描仪,定位扫描后,确定灌注扫描范围,然后采用全肝灌注模式（JOG）对全肝及脾动态扫描。非离子型对比剂（5ml优维显,370mgI/ml）和生理盐水10ml。注射速率均为1.5ml/s,对比剂注入后延迟2s开始扫描,扫描时间1.5s,共扫描11次,扫描间隔3s。扫描参数：探测器128×0.625mm,层厚1mm,间距-0.5 mm, Pitch0.915,80Kv,100mAs,360°/0.4 s。3.图像后处理采用EBW4.0I Philips工作站,自动生成肝动脉灌注量（HAP）、门静脉灌注量（HPP）、总灌注量（TLP）、灌注指数（HPI）等灌注图。肝组织ROI的选取：0.5～3cm2。在I/R后2h内,ROI随机分布的肝左叶,每个层面测量3个ROI,连续测量三个层面；I/R后6-24 h在梗死区域（低灌注区,即强化减低肝组织）与未梗死区（相对正常的强化未减低肝组织）分别测量3个ROI,连续测量三个层面,计算出梗死与未梗死肝组织的平均值以及相应平均值。4.组织学和生化检查同第一部分。5.统计学分析采用SPSS13.0软件进行统计分析。多组均数差异的比较采用单因素方差分析（One Way ANOVA）。采用配对t检验比较以下CT灌注参数间有无统计学意义：（1）在6h、12h、24h组梗死与未梗死肝组织灌注参数比较；（2） sham与6h、12h、24h组肝左叶梗死肝组织灌注参数比较;（3）sham与6h、12h、24h组未梗死肝组织灌注参数比较。以梗死与未梗死肝组织中CT灌注参数为因变量,肝酶、TNF-α及组织形态学积分为自变量进行多元线性回归分析。用复相关系数（R）来说明CT灌注参数与肝酶、TNF-α及组织形态学积分的相关关系。P<0.05为差异有统计意义。结果1.各I/R与sham组间CT灌注变化特点与sham组相比,0.5h组表现为整个肝左叶的显着强化减低,2h组表现为明显均匀强化,在I/R后6h兔肝左叶呈现差异性灌注（低灌注区出现,即强化减低区）,且随着再灌注时间的延长（12～24h）,梗死的范围逐渐扩大,强化程度也呈减低趋势。2.CT灌注参数变化特点2.1总的变化趋势CT灌注参数在I/R早期（0.5h组）除HPI外,均表现为显着减低；HAP于2h显着升高后,在I/R后6～24 h均表现为逐渐下降；HPP一直低于sham,尤其是在I/R后0.5-2 h；TLP变化特点与HAP基本类似。HPI作为相对性指数,各I/R组均高于sham组。2.2梗死及未梗死肝组织CT灌注参数的变化特点HAP于6h组梗死肝组织显着上升后,在12h、24h组呈现逐渐下降的趋势,而在未梗死的肝组织中HAP是呈现逐渐下降的趋势（6～24h）；HPP不论在梗死或未梗死的肝组织均呈现显着下降的趋势,但在梗死的肝组织内下降的幅度更大；TLP在梗死以及未梗死肝组织中变化特点与HPP基本类似；在梗死的肝组织内HPI显着升高,这也说明了肝动脉缓冲效应机制作用。3.相关性分析在肝I/R后梗死组织CT灌注参数与肝生化指标及组织形态学等多个自变量间的具有较好的线性相关,以梗死组织中HPP相关性最好（R=0.855）。结论1.在肝I/R后2h,CT强化模式以及CT灌注参数出现暂时性回复,是其“假正常化”病理机制的体现。2.在肝I/R后6h出现了灌注性差异,且随着时间的延长,其强化程度逐渐减低,梗死的范围逐渐扩大（12～24h）,在I/R后24h出现局灶性坏死。3.肝I/R后,CT灌注参数出现了显着的差异性,在强化减低肝组织中I/R早期（2 h） HAP显着升高,而HPP明显降低,TLP保持相对稳定；HAP在梗死的肝组织（12～24h）明显高于未梗死的肝组织—肝脏动脉缓冲效应基础机制的存在。4.HAP在梗死的肝组织中虽明显升高（12～24h）,但HPP与TLP显着降低,其根本原因是肝内门体分流（末端小动静脉开放）,致使肝动脉缓冲效应作用降低,最终导致门静脉的灌注量减低（24 h）。肝血流量实际上减低,进一步加剧肝实质的损害。5.肝酶、TNF-α、形态学积分与梗死肝组织CT灌注参数间具有相关性。因此,CT灌注参数可以作为敏感、有效的指标监测肝I/R后血流动力学、肝组织的损伤及坏死程度敏感指标。
刘静[8]（2010）在《大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究》文中认为目的:探讨改良后的大鼠减体积肝移植模型的效果;为进一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏再生及免疫的研究提供重要的技术平台和前提条件。方法:1.实验大鼠均为健康的SD大鼠,体重260-280 g,供体为雌性,受体为雄性,供、受体体重相差10 g左右,一般为供体体重比受体体重轻。2.供体采用单人裸眼操作,在取肝的过程中即进行减体积操作;修肝时将套管柄置于门静脉和肝下下腔静脉的正前方,将幽门静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的左侧,即肝脏的左侧;将右肾上腺静脉结扎点外翻于套管外并置于套管柄的右侧,即肝脏的右侧;供肝套管完成后用灌注液对门静脉和肝下下腔静脉进行冲洗;然后以左膈静脉为标识点进行7-0无损伤血管缝线吊线。3.受体切肝前采用单人裸眼操作,从新肝移植开始采用双人裸眼配合操作;供体完成胆道支撑架安置以后,受体即开始手术;肝上下腔静脉吻合时,左右固定位点采用“8”字形外翻缝合,后壁和前壁分别采用连续吻合,门静脉和肝下下腔静脉采用改良的双袖套法,胆道支撑管法建立大鼠减体积的稳定模型。4.改良的的大鼠减体积肝移植采用文献报道的方法进行,供肝在修肝盆中进行相应的肝叶切除。5.改良前和改良后两组术中和术后均观察大鼠的症状和体征、各种并发症的发生情况、术后生存情况、肝功能的变化等等。结果:1.改良后的减体积肝移植模型供体手术时间为32±2 min,修肝时间为6±2 min,受体手术时间为40±3 min,无肝期时间为14±3 min,供肝的冷保存时间为51±3min;手术的成功率为92%,术后3 d的存活率为85%,术后2周存活率为83%;术后并发症较改良前明显减少,差异有显着性（P<0.05）。2.术后1 d、3 d和7 d的肝功能ALT变化为改良后较改良前低,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异有显着性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清ALT与同期的改良前组比较差异无显着性（P>0.05）。3.术后1 d、3 d和7 d的肝功能TBIL变化为改良后较改良前低,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异有显着性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清TBIL与同期的改良前组比较差异无显着性（P>0.05）。4.术后1 d、3 d和7 d的胆碱酯酶变化为改良后较改良前升高,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异有显着性（P<0.05）;术后第14 d和21 d,改良后血清胆碱酯酶与同期的改良前组比较差异无显着性（P>0.05）。5.术后1 d和3 d的血氨变化为改良后较改良前降低,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异有显着性（P<0.05）;术后第7 d、14 d和21 d,改良后血清血氨与同期的改良前组比较差异无显着性（P>0.05）。结论:1.改良大鼠减体积模型采用供体灌注完成后,在切取供肝的过程中进行相应肝叶的切除;可获得高质量、满意的减体积供肝;供受体手术配合,尽量的缩短供肝的冷保存时间;改进的血管吻合技术缩短无肝期、减少术后出血;对诸多细节操作的改进等;这些可以尽量的减少大鼠减体积肝移植术中和术后的并发症,提高大鼠减体积肝移植模型的成功率和长期生存率。是一种值得推广的大鼠减体积肝移植模型。2.成功的改良大鼠减体积肝移植模型为我们下一步进行大鼠减体积肝移植术后肝脏的再生和免疫的研究提供了研究的基础和前提。目的:探讨在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上;利用蛋白质组学的技术研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的蛋白质组学的变化,找到与肝脏再生有关的差异蛋白质。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右;受体为均为健康的Wistar雄性大鼠,体重220-250 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,供肝与受体肝之比大约50%左右。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、3 d和7 d获取移植后的肝脏组织标本,供体和受体的正常肝脏组织标本在进行移植手术时获取,将标本放置在-70℃冰箱保存。3.将获取的标本进行大鼠减体积肝移植术后的蛋白质组学的检测分析。对移植后的肝脏组织与供体和受体正常肝脏组织进行比较蛋白质组学的研究,即在双向电泳的基础上进行MS-MS串联质谱分析,从而鉴定表达差异在10倍以上的蛋白质点,分析差异表达的蛋白质的功能,以及与大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的相关性等。结果:1.得到了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱,以差异10倍以上为标准,共找到了72个差异蛋白质点。2.对72个差异表达的蛋白质点进行MS-MS串联质谱鉴定和肽谱指纹图分析,72个点全部鉴定出,共鉴定到40种蛋白。3.这些蛋白主要参与细胞信号转导、应激反应、氧化还原、碳水化合物代谢、能量代谢、氨基酸代谢和细胞骨架等生理过程。有些蛋白直接或者间接参与肝移植术后肝脏再生的过程。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.采用比较蛋白质组学的方法成功鉴定了72个差异蛋白质点40种蛋白。3.找到与大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞再生有关的差异蛋白,这些蛋白质对大鼠减体积肝移植术后肝脏组织细胞的再生作用可能主要通过两个方面完成:一是直接促进肝脏组织细胞的再生:一是间接的促进肝脏组织细胞的再生。4.为下一步深入研究大鼠减体积肝移植术后肝脏再生的机理等相关问题提供了一定的基础研究成果。目的:在成功建立大鼠减体积肝移植模型的基础上,研究减体积肝移植术后肝脏再生的一般情况,受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞;在肝脏再生基本完全后（大约在减体积肝移植术后第9 d）,撤除抗免疫排斥药物以后观察各组排斥反应发生的情况,最终得出:减体积肝移植术后,肝脏再生诱导免疫低反应并探讨可能的机理。方法:1.实验大鼠供体均为健康的Lewis雌性大鼠,体重200-230 g左右,受体均为健康的Wistar雄性大鼠,体重240-380 g左右。2.采用改良法建立Lewis-Wistar的大鼠减体积肝移植模型,详细见第一部分模型的建立。3.实验分组（1）实验一组（A组）:全肝移植组。供体和受体体重相差在10 g以内。（2）实验二组（B组）:50%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为50%。（3）实验三组（C组）:30%肝移植组。供体与受体肝脏质量比大约为30%。4.实验分为两个小部分（1）第一小部分:观察不同体积的大鼠肝移植术后肝脏的再生情况。术后使用FK506抗免疫排斥药物,按照0.1 mg/kg·d服用。在肝移植术后1 d、2 d和7 d获取血和移植后的肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。（2）第二小部分:观察肝脏再生诱导免疫低反应。不同减体积肝移植术后,待肝脏再生基本完全后,同时撤除FK506,观察其三组的排斥反应的发生情况。在撤除FK506后的0 d、3 d、7 d和11 d取血和肝脏组织标本,留待作相关指标的检测。5.移植大鼠生存状态观察和移植排斥反应的判断:大鼠术后3 d内死亡,则弃之不用,并给与补充。观察每组的生存时间,根据国际公认的Banff评分系统判断排斥反应程度。6.血清生化检测ALT、AST、TBIL;血清细胞因子检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1的水平。7.肝脏组织的ELISA检测:观察肝脏再生的IL-6和TNF-α水平;观察排斥反应TGF-β1水平。8.肝脏组织免疫组化检测:观察肝脏再生的IL-6、TNF-α、PCNA和Ki-67。观察肝脏排斥反应的ICAM-1、NFκB/p65和TGF-β1。9.应用原位杂交技术检测肝脏组织的Y染色体,以证实受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。10.肝脏组织的HE染色、电镜和凋亡检测。观察肝脏织形态结构和排斥反应。结果:1.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生先增快（在减体积肝移植术后第2 d最明显）,后减慢,在术后第7 d,肝脏基本达到移植前受体的肝脏体积和质量。2.肝脏再生的过程中,C组中Y染色体的阳性率最高,B组次之,而A组的Y染色体的阳性率最低。3.大鼠减体积肝移植肝脏再生过程中,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平表现为先升高,后减低,即在术后第2 d,肝脏组织中的IL-6和TNF-α水平最高,而后降低。4.观察排斥反应时,血清中的IL-2和IFN-γ水平,A组最高,B组次之,C组最低;相反,IL-4和IL-10的水平,C组最高,B组次之,而A组最低。5.血清中的TGF-β1表现为先升高,后降低。升高时,A组升高最快、最高,B组次之,C组升高得最慢、最低;降低时,A组降低的速度最快、降低最明显,B组次之,而A组下降最慢、减低的程度最小。肝脏组织中的TGF-β1则表现为持续升高,以A组最为明显,B组次之,C组最低。6.肝脏组织的免疫组化ICAM-1、NFκB/p65、TGF-β1,肝细胞凋亡以及HE染色等进一步证实了A组的组织局部的炎症反应最重,B组次之,而C组最轻。结论:1.成功建立Lewis-Wistar大鼠减体积肝移植模型。2.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生过程中,有骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞。3.在大鼠减体积肝移植肝脏再生基本完全的基础上,撤除FK506后,C组发生的排斥反应程度最低,B组次之,而A组的排斥反应程度最重。4.大鼠减体积肝移植术后肝脏再生诱导免疫低反应的原理可能与受体骨髓干细胞跨细胞分化成肝细胞以及机体的多因素共同参与了肝脏的再生过程有关系。
王峥[9]（2010）在《缺血型胆道损伤对大鼠肝移植胆道超微结构及微循环的影响及生长激素的保护作用》文中研究表明缺血型胆道损伤的防护对于改善移植肝胆道血供,提高肝移植后的成功率具有重要意义。缺血型胆道损伤是一个由多因素参与的复杂的病理过程,移植肝胆道的血供主要来自肝动脉,最终肝动脉的狭窄或闭塞发挥着重要作用。重组人生长激素对组织缺血性损伤具有保护作用,有增加机体蛋白合成能力、改善机体免疫功能、降低应激反应,及刺激胰岛素样生长因子Ⅰ生成增加等诸多功能。本课题利用简便实用的大鼠自体原位肝移植模型,并造成缺血型胆道损伤,应用重组人生长激素进行术后干预,术后观察肝内胆道超微结构及微循环的变化和胆管上皮细胞凋亡、增生及相关调控因子的表达情况,研究探讨重组人生长激素对肝移植缺血型胆道损伤的防护作用及相关机制,为生长激素应用于肝移植后的胆道保护提供理论研究和实验基础。国内国外,此方面的工作尚无文献报道及有关记载。第一部分缺血型胆道损伤对肝移植胆道超微结构的影响及生长激素的保护作用目的：应用重组人生长激素,对大鼠自体原位肝移植术后缺血型胆道损伤进行术后干预,观察胆道超微结构改变,探讨生长激素对肝移植缺血型胆道损伤的保护作用与机制。材料与方法：1.动物分组与模型制备选用wistar系雄性大鼠18只,体重200±20g,随机分为3组：对照组（CON组）、缺血型胆道损伤组（ITBL组）和rhGH处理组（rhGH组）,每组6只。CON组仅进行自体原位肝移植；rhGH组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射rhGH 0.3IU/kg/天共一周；ITBL组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射等量生理盐水一周。2.标本的采集与处理术后7天再次开腹,快速获取左肝外叶胆道组织,部分置于10%多聚甲醛溶液以备光镜检查,部分置于2.5%戊二醛固定液中以备透射电镜分析。3.检测指标（1）胆道组织病理检测取上述10%多聚甲醛所固定组织,稍加修整,制成组织蜡块、切片,常规HE染色。高倍镜视野下,观察胆管上皮水肿、炎细胞浸润、上皮坏死脱落等情况。（2）胆道透射电镜观察及图像分析取上述2.5%戊二醛所固定组织,制成电镜标本,电镜观察各组胆管上皮微观结构改变,并用图像分析系统对其损伤程度进行定量分析。4.统计分析：全部数据均由SPSS13.0软件进行统计学处理。多组间比较用方差分析（ANOVA）,随后用合适的方法作多重比较。数据结果采用均数±标准差表示,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.胆管组织学变化HE染色显示,CON组以胆管上皮水肿、炎细胞浸润等可逆性损伤为主；ITBL组以上皮大部分坏死脱落等不可逆损伤为主；而rhGH组,胆道上皮坏死脱落明显减少,以胆管上皮水肿、炎细胞浸润为主。2.透射电镜观察术后1周CON组可见胆管的粘膜皱褶饱满,起伏自然,无上皮层破损,胆管上皮细胞呈圆形或椭圆形,形态规则,大小均一,排列整齐,表面微绒毛较丰富；ITBL组可见胆管上皮细胞呈蜂窝状坏死,基层胶原纤维裸露,残余上皮细胞欠规则,间距较大,表面微绒毛稀疏；rhGH组可见细胞数量增多,形态基本正常,细胞间距基本正常,表面微绒毛丰富但形态欠均匀。3.胆管上皮透射电镜图像分析ITBL组的胆管上皮细胞面积密度、数密度和微绒毛面积密度等平面计量学参数均显着小于CON组和rhGH组（P<0.05）；rhGH组的胆管上皮细胞平面计量学参数较ITBL组有明显改善（P<0.05）,但仍较CON组低（P<0.05）。第二部分缺血型胆道损伤对肝移植胆道微循环的影响及生长激素的保护作用目的：应用重组人生长激素,对大鼠自体原位肝移植术后缺血型胆道损伤进行术后干预,观察肝内胆道微循环变化,探讨生长激素对肝移植缺血型胆道损伤的保护作用与机制。材料与方法：1.动物分组与模型制备选用wistar系雄性大鼠18只,体重200±20g,随机分为3组：对照组（CON组）、缺血型胆道损伤组（ITBL组）和rhGH处理组（rhGH组）,每组6只。CON组仅进行自体原位肝移植；rhGH组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射rhGH 0.3IU/kg/天共一周；ITBL组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射等量生理盐水一周。2.标本的采集与处理术后7天再次开腹,快速获取左肝外叶胆道组织,置于10%多聚甲醛溶液以备石蜡切片。3.检测指标（1）病理学检查：石蜡标本2.5μm切片,常规HE染色。观察汇管区炎症细胞浸润及胆管结构破坏程度。（2）石蜡标本2.5μm连续切片,用兔抗CD34多克隆抗体标记血管。计数汇管区胆管数、血管数、伴有血管的胆管数、不伴有血管的胆管数及孤立的血管数。4.统计分析：全部数据均由SPSS13.0软件进行统计学处理。多组间比较用方差分析（ANOVA）,随后用合适的方法作多重比较。数据结果采用均数±标准差表示,P<0.05为差异有统计学意义。结果1.胆管病理形态观察ITBL组胆管上皮细胞排列明显缺失,管壁无增厚,汇管区也无明显炎症细胞浸润。CON组、rhGH组胆管上皮细胞呈慢性增生性炎症改变,管壁明显增厚,汇管区炎性细胞增多,胆管上皮细胞增生2.汇管区胆管及血管的变化胆道缺血性损伤后,汇管区胆管受损,ITBL组较CON组汇管区胆管数明显减少（P<0.05）; rhGH处理后,汇管区胆管增生,rhGH组较ITBL组汇管区胆管数明显增加（P<0.05）。缺血型胆道损伤后,伴有血管的胆管数量较CON组明显减少,而不伴有血管的胆管数却明显增加（P<0.05）; rhGH处理后,伴有血管的胆管数量较ITBL组明显增多,而不伴有血管的胆管数却明显减少（P<0.05）。第三部分生长激素对肝移植缺血型胆道损伤的保护作用及其机制目的：探讨外源性生长激素对大鼠肝移植缺血型胆道损伤的保护作用及其机制。材料与方法1.动物分组与模型制备选用wistar系雄性大鼠18只,体重200±20g,随机分为3组：对照组（CON组）、缺血型胆道损伤组（ITBL组）和rhGH处理组（rhGH组）,每组6只。CON组仅进行自体原位肝移植；rhGH组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射rhGH 0.3IU/kg/天共一周；ITBL组于术后3h结扎肝动脉,并且皮下注射等量生理盐水一周。2.标本的采集与处理术后7天再次开腹,快速采取下腔静脉血液离心取上清液,取左外叶肝组织置于10%多聚甲醛溶液保存。3.检测指标（1）血清ALT和ALP检测。（2）免疫组化法检测胆管上皮细胞VEGF、VEGFR2、VEGFR3、IGF-1R和GHR表达。封片后用Olympus U-25ND6 T2显微镜观察显微结构,用IAS图像分析系统（Delta Sistemi）分析图像,估算免疫组化染色的强度和分布。（3）胆管上皮细胞的PCNA标记用半定量法测定。在20个随机的高倍视野（-400）计数500个胆管细胞,计算PCNA阳性细胞百分数,由此估算PCNA标记指数。只有表达核免疫染色强阳性的细胞才‘被列入阳性计数。（4）采用TUNEL法按细胞凋亡检测试剂盒操作说明进行检测,光镜下观察各组大鼠肝内胆管上皮细胞凋亡情况。在高倍视野（×400）下盲法检测每个组织样本中凋亡细胞数。用凋亡指数进行定量,即30个随机显微高倍视野的阳性细胞数来算出TUNEL阳性胆管上皮细胞百分数。4.统计分析：全部数据均由SPSS13.0软件进行统计学处理。多组间比较用方差分析（ANOVA）,随后用合适的方法作多重比较。数据结果采用均数±标准差表示,P<0.05为差异有统计学意义。结果1. ITBL组的ALT和ALP显着高于对照组（P<0.05）; rhGH组ALT和ALP较ITBL组明显降低（P<0.05）,然而仍高于CON组（P<0.05）。2.免疫组化检测显示,ITBL组肝脏表达VEGF、VEGFR2、VEGFR3、GHR和IGF-1R阳性胆管上皮细胞数较CON组减少（P<0.05）; rhGH组阳性表达较ITBL组明显提高（P<0.05）,但仍较CON组低（P<0.05）。3. TUNEL分析显示,CON组大鼠表达少量凋亡细胞,ITBL组大鼠胆管上皮细胞凋亡较CON组增加（P<0.05）, rhGH处理抑制ITBL所致的胆管上皮细胞凋亡（P<0.05）。4. ITBL组PCNA阳性胆管上皮细胞数较对照组减少（P<0.05）, rhGH处理解除ITBL对PCNA阳性胆管上皮细胞数的抑制（P<0.05）。结论：1.缺血型胆道损伤直接损害胆管上皮细胞,使胆道超微结构破坏,外源性生长激素处理明显减轻肝移植缺血型胆道损伤,对胆道具有保护作用。2.缺血型胆道损伤使肝内胆道微循环受损,而外源性生长激素促进肝内胆道微循环的恢复从而对胆道有保护作用。3. rhGH处理明显减轻肝移植肝内缺血型胆道损伤,这可能与rhGH通过提高肝内胆管上皮细胞VEGF、VEGFR-2、VEGFR-3、GHR和IGF1-R表达,从而抑制凋亡、促进增生有关。
李晓延[10]（2008）在《自制KYL器官保存液对恒河猴肝脏保存的实验研究》文中提出实验一自制KYL液的配制目的;通过调整渗透压重新配制肝脏保存液（KYL液）,为下一步实验做好准备。方法:按照配方将成份浓度换算成重量比,经电子天平精确称量,以对应体积蒸馏水完全溶解,无菌过滤纸过滤残渣,经真空过滤泵过滤,反复测量PH值、渗透压,装袋低温保存。所有操作在无菌配液室进行。结果:经多次试验,配制成PH值7.4±0.05,渗透压340±5mmol/L的淡棕色,半透明,无浑浊,无沉淀及絮状物保存液。结论:掌握了配制KYL液的实验方法,成功配制成价格低廉,性能稳定的自制器官保存液,为下一步实验奠定了基础。实验二:恒河猴同种异体原位肝移植模型的建立目的:建立恒河猴肝移植模型,为进一步的实验奠定基础。方法:健康恒河猴16只,体重5-7kg,雌雄不限,供体体重略小于受体,用非静脉转流的方法建立恒河猴原位肝移植模型。整个实验主要步骤大致分为;1供体组手术,主要包括供体血采集、经门静脉及腹主动脉插管行非离体肝脏灌注及供肝的切取;2供肝修整:3受体肝脏的切除及新肝的植入。结果:8次肝移植实验中,手术成功率100%。5例因肝动脉直径不到1mm均行腹主动脉肝动脉搭桥,3例行肝动脉端端吻合。存活时间均超过6小时,最长达9小时。结论:恒河猴肝移植模型难度大,影响因素多,熟练的外科技术,完善的围手术期处理及耐心细致的操作是决定手术成功与否的关键。本实验小组成员有丰富的大鼠肝移植及临床肝移植经验,已经充分掌握了肝移植技术,是手术成功（100%）的主要原因。但是由于实验条件较差,麻醉深浅难以控制,是肝移植术后恒河猴不能长期存活的主要原因。实验三肝移植实验部分目的:通过对比分析探讨自制KYL液对恒河猴肝脏缺血再灌注后的保存效果。方法:本实验以上一实验步骤为基础,分为KYL液灌注并保存组4例（实验组）,Uw液灌注并保存组4例（对照组）。供肝体外冷保存4小时后,行同种异体原位肝移植术,分别于肝脏复流后30分钟、6小时时段,记录胆汁分泌量,经股动脉采血检测AST、ALT、NO、ET—1、TNF—α浓度。切取肝组织行光镜、电镜组织形态学观察,并行免疫组化检测凋亡相关因子Bcl—2,Bax,Fas表达情况。结果:两组术后均有胆汁分泌,随时间延长胆汁分泌量增加:血清AST、ALT浓度,KYL液组在两个时间段均较UW液组稍低;血清NO浓度两组各时间段相当;血清ET—1浓度两组各时间段相近;血清TNF—α浓度两组各时间段相近;光镜、电镜肝组织形态学观察各时间段变化基本一致;免疫组化染色两组均呈现Bcl—2微弱表达,Bax,Fas则明显表达。结论:1从胆汁生成量分析,KYL液对肝脏的保存效果与UW液相当。2从肝功酶学分析,KYL液对肝脏的保存效果优于UW液。3从肝脏缺血再灌注损伤相关因子NO、ET—1、及TNF—α分析,KYL液对肝脏的保存效果与UW液相当。4从组织形态变化及凋亡相关因子分析,KYL液对肝脏的保存效果与UW液相当。实验四非循环离体灌注肝脏冷保存实验目的:通过对比分析探讨自制KYL液对恒河猴肝脏的冷保存效果。方法:将上一实验过程中受体切下的8例肝脏,随机分为KYL液组4例（实验组）,UW液组4例（对照组）。在肝脏切下后经门静脉快速灌注保存液至肝脏颜色变成浅黄色,同时行肝动脉及胆道冲洗,灌洗完毕保持并减慢静脉灌注速度（30滴/分）,肝脏进入冷保存阶段,保存温度0—4℃。分别于冷保存2、4、8、16、24小时时段记录胆汁分泌量,取灌注流出液检测AST、ALT、NO、ET—1、TNF—α浓度。切取肝组织行光镜、电镜组织形态学变化观察,并行免疫组化染色,检测凋亡相关因子Bcl—2、Fas、Bax的表达情况。结果:两组冷保存肝脏在冷保存过程中均有胆汁分泌,但随着保存时间的延长,胆汁分泌量逐渐减少。灌注流出液中AST、ALT浓度随保存时间延长而逐渐升高,在2、4、8、16时间段,两组保存液中测得的浓度相近,24小时段UW液组AST、ALT明显升高;NO浓度随保存时间延长呈下降趋势,但KYL液组各时间段所测得的NO浓度较UW液稍高:ET—1浓度随保存时间延长逐渐升高,但KYL液组各时间段所测得的ET—1浓度较UW液组稍低:TNF—α浓度随冷保存时间延长而有所上升,两组所得浓度值相近。肝脏组织形态学变化基本一致。免疫组化显示Bcl—2表达呈下降趋势,但UW液组下降较明显,Bax、Fas两组均明显表达。结论:1从胆汁生成量分析,KYL液对肝脏的冷保存效果与UW液相当。2从肝功酶学分析,KYL液对肝脏的冷保存效果在2、4、8、16小时时间段与UW液基本相当,在24小时段明显优于UW液。3从肝脏缺血再灌注损伤相关因子分析,KYL液对肝脏的冷保存效果,即对肝脏微循环,肝窦内皮细胞的保护效果优于UW液。4从组织形态变化及凋亡相关因子分析,KYL液对肝脏的冷保存效果与UW液相当。
二、不同保存液对兔门静脉收缩力的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、不同保存液对兔门静脉收缩力的影响（论文提纲范文）
（1）门静脉放血及双倍灌注液冲洗对改善肝移植PRS发生及术后肝功能恢复的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词对照 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 文献综述 肝移植术中再灌注综合征的研究进展 |
| 概述 |
| 2.1 PRS定义 |
| 2.2 PRS发生病理生理学改变 |
| 2.3 PRS发生机制 |
| 2.4 PRS危险因素 |
| 2.5 PRS发生时血流动力学变化特征 |
| 2.6 PRS的预防 |
| 2.7 小结 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 实验步骤 |
| 3.3 指标测定 |
| 3.4 数据分析 |
| 3.5 结果 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 研究背景 |
| 1.2.1 失血性休克 |
| 1.2.2 液体复苏 |
| 1.2.2.1 晶体液 |
| 1.2.2.2 人工合成胶体液 |
| 1.2.2.3 血液及血液制品 |
| 1.2.3 血红蛋白类氧载体 |
| 1.2.4 失血性休克与肝损伤 |
| 1.2.5 液体复苏与肝损伤 |
| 1.3 研究目的与内容 |
| 第二章 聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠基本生理指标和肝功的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂与耗材 |
| 2.2.3 主要仪器设备 |
| 2.2.4 失血性休克复苏模型的建立 |
| 2.2.5 复苏液的制备 |
| 2.2.6 实验分组 |
| 2.2.7 大鼠生理指标、血气和肝功的测定 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 失血性休克大鼠失血量及其所占大鼠血容量百分比 |
| 2.4.2 失血性休克复苏后6h血液中血红蛋白含量及红细胞压积 |
| 2.4.3 失血性休克大鼠复苏前后平均动脉压、心率变化 |
| 2.4.4 失血性休克大鼠复苏后6h血气分析 |
| 2.4.5 失血性休克大鼠复苏后6h血液中ALT和AST活性 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏微循环变化的影响. |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂与耗材 |
| 3.2.3 主要仪器设备 |
| 3.2.4 失血性休克复苏模型的建立 |
| 3.2.5 复苏液的制备 |
| 3.2.6 实验分组 |
| 3.2.7 实时监测大鼠血压、心率 |
| 3.2.8 激光散斑对比成像技术监测记录大鼠肝脏微循环的变化 |
| 3.3 统计学分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 失血性休克液体复苏监测肝脏表面微循环过程中大鼠血压、心率变化 |
| 3.4.2 失血性休克液体复苏监测大鼠肝脏表面微循环血流灌注图像 |
| 3.4.3 失血性休克液体复苏监测大鼠肝脏表面微循环血流灌注量 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏氧化应激和炎症产生的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂与耗材 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.2.4 失血性休克复苏模型的建立 |
| 4.2.5 复苏液的准备 |
| 4.2.6 实验分组 |
| 4.2.7 大鼠肝脏组织取样 |
| 4.2.8 10 %肝组织匀浆的制备 |
| 4.2.9 指标测定 |
| 4.2.9.1 大鼠肝脏组织中蛋白浓度的测定 |
| 4.2.9.2 大鼠肝脏组织中SOD活性的测定 |
| 4.2.9.3 大鼠肝脏组织中还原型GSH含量的测定 |
| 4.2.9.4 大鼠肝脏组织T-AOC的测定 |
| 4.2.9.5 大鼠肝脏组织ROS、TNF-α、IL-6和HSP 70的测定 |
| 4.3 统计学分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 失血性休克复苏后6h大鼠肝脏组织中氧化应激及抗氧化应激物质的变化 |
| 4.4.2 失血性休克复苏后6h大鼠肝脏组织中炎症物质及抗炎症物质的变化 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏病理结构变化的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂与耗材 |
| 5.2.3 主要仪器设备 |
| 5.2.4 失血性休克复苏模型的建立 |
| 5.2.5 复苏液的准备 |
| 5.2.6 实验分组 |
| 5.2.7 大鼠肝脏组织取样 |
| 5.2.8 大鼠肝脏组织病理检测 |
| 5.2.8.1 大鼠肝脏组织HE染色 |
| 5.2.8.2 大鼠肝脏组织Tunel染色 |
| 5.3 图像采集及结果分析 |
| 5.3.1 图像采集 |
| 5.3.2 数据分析 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 肝脏组织HE染色结果 |
| 5.4.1.1 肝脏组织损伤判断标准 |
| 5.4.1.2 肝脏组织损伤评分结果 |
| 5.4.1.3 病理描述 |
| 5.4.2 肝脏组织Tunel染色结果 |
| 5.4.2.1 肝细胞凋亡百分率 |
| 5.4.2.2 肝脏组织细胞凋亡统计结果 |
| 5.4.2.3 肝脏组织Tunel染色图示 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 本章小结 |
| 第六章 结论及后续工作建议 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 后续工作建议 |
| 参考文献 |
| 综述 血红蛋白类氧载体在肝脏缺血再灌注损伤防治中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一 英语缩略词 |
| 二 硕士在学期间发表的论文及会议摘要 |
| 三 硕士在学期间参与科研项目与学术会议 |
| 致谢 |
（3）不同基底硬度下干细胞及肝星状细胞收缩力与相关蛋白活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要缩略词 |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出与研究意义 |
| 1.1.1 问题的提出 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 肝纤维化及干细胞治疗与胞外基质力学特性的关系 |
| 1.2.2 胞外力学微环境与细胞牵引力 |
| 1.2.3 力信号转导与相关信号蛋白激活 |
| 1.3 研究目的和研究内容 |
| 1.3.1 研究目的 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.4 技术路线 |
| 1.5 创新点 |
| 2 聚丙烯酰胺水凝胶基底硬度设计、表征及细胞生物相容性检测 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试剂与材料 |
| 2.2.1 实验细胞 |
| 2.2.2 实验仪器及耗材 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.2.4 实验试剂配制 |
| 2.3 实验方法和步骤 |
| 2.3.1 PA水凝胶力学性能表征基底膜制备 |
| 2.3.2 PA水凝胶力学性能表征 |
| 2.3.3 PA水凝胶基质表面功能化处理及FN蛋白表征 |
| 2.3.4 不同硬度PA水凝胶细胞增殖活力检测 |
| 2.3.5 数据分析处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 PA水凝胶力学性能表征结果 |
| 2.4.2 不同硬度PA水凝胶MSCs与 HSCs生长状态及形态显微观察 |
| 2.4.3 不同硬度PA水凝胶MSCs与 HSCs增殖活力检测 |
| 2.5 分析与讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 不同基底硬度及细胞因子作用下MSCs与 HSCs的细胞收缩力变化与骨架形貌、FAs装配 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试剂与材料 |
| 3.2.1 实验细胞 |
| 3.2.2 实验仪器及耗材 |
| 3.2.3 实验试剂 |
| 3.2.4 实验试剂配制 |
| 3.3 实验方法和步骤 |
| 3.3.1 牵引力显微镜基底制备 |
| 3.3.2 MSCs与 HSCs细胞培养 |
| 3.3.3 MSCs与 HSCs细胞骨架免疫荧光染色 |
| 3.3.4 MSCs与 HSCs细胞vinculin免疫荧光染色 |
| 3.3.5 牵引力显微镜样品的准备及图像采集 |
| 3.3.6 细胞因子TGF-b1、sFRP-1对MSCs与HSCs细胞CTFs的影响 |
| 3.3.7 细胞牵引力实验数据处理及力学原理 |
| 3.3.8 数据分析处理 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 不同硬度基底MSCs、HSCs细胞骨架免疫荧光染色 |
| 3.4.2 不同硬度基底MSCs与 HSCs细胞vinculin免疫荧光染色 |
| 3.4.3 基底硬度及TGF-β1、sFRP-1 细胞因子对MSCs、HSCs细胞CTFs的影响 |
| 3.5 分析与讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 基底硬度与胞内相关蛋白活性的双向关系 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试剂与材料 |
| 4.2.1 实验细胞、质粒 |
| 4.2.2 实验仪器及耗材 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.2.4 实验试剂配制 |
| 4.3 实验方法和步骤 |
| 4.3.1 Rho蛋白活性观察及细胞磷酸化蛋白提取不同硬度基底制备 |
| 4.3.2 人胚肾293A细胞培养 |
| 4.3.3 用于细胞磷酸化蛋白提取MSCs与 HSCs细胞培养及样品收取 |
| 4.3.4 腺病毒包装及细胞感染 |
| 4.3.5 Rho蛋白活性观察 |
| 4.3.6 不同硬度基底MSCs、HSCs细胞磷酸化定量蛋白质组检测分析 |
| 4.3.7 数据分析处理 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 不同基底硬度下细胞蛋白表达差异分析及差异蛋白表达水平聚类分析 |
| 4.4.2 差异蛋白的GO富集、KEGG富集分析 |
| 4.4.3 不同基底硬度对胞内蛋白活性的影响 |
| 4.5 分析与讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 5 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 后续工作展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读学位期间发表的论文目录 |
| B 作者在攻读学位期间发表的会议论文目录 |
| C 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目情况 |
| D 学位论文数据集 |
| 致谢 |
（4）纵隔CO2充气技术在纵隔径路食管手术中应用的安全性分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 :体外模拟纵隔CO_2充气技术对食管癌细胞生物学行为的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :纵隔CO_2充气技术对猪循环和呼吸功能的影响 |
| 一、材料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 :纵隔CO_2充气技术对经纵隔径路食管癌手术患者循环及呼吸功能的影响 |
| 一、资料和方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 综述一:食管癌的微创手术治疗 |
| 参考文献 |
| 综述二:充气技术在微创手术中的安全性分析 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读博士学位期间公开发表的论文、论着 |
| 致谢 |
（5）当归芍药散含药血清对ET-1介导的肝星状细胞收缩的抑制作用及其相关机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词（Abbreviation） |
| 前言 |
| 第一部分 当归芍药散含药血清对HSC-T6细胞分泌ET-1 水平的影响 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 1.1 药材 |
| 1.2 细胞株及动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 细胞培养和传代 |
| 2.3 细胞冻存 |
| 2.4 细胞计数 |
| 2.5 样品制备 |
| 2.5.1 当归芍药散提取液的制备 |
| 2.5.2 当归芍药散含药血清的制备 |
| 2.6 不同浓度空白大鼠血清对HSC-T6细胞毒性实验（MTT法） |
| 2.7 指标检测 |
| 2.7.1 ELISA法检测各组HSC-T6细胞上清液ET-1 蛋白表达 |
| 2.7.1.1 实验分组 |
| 2.7.1.2 收集细胞上清液 |
| 2.7.1.3 检测ET-1 含量 |
| 2.7.2 qRT-PCR法检测各组HSC-T6细胞ET-1 m RNA表达 |
| 2.7.2.1 实验分组 |
| 2.7.2.2 提取细胞总RNA |
| 2.7.2.3 RNA纯度和浓度检测 |
| 2.8 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 不同浓度的空白大鼠血清对HSC-T6细胞毒性实验 |
| 3.2 当归芍药散含药血清对HSC-T6细胞上清液中ET-1 含量的影响 |
| 3.3 当归芍药散含药血清对HSC-T6细胞ET-1m RNA表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 采用血清药理学研究方法的依据 |
| 4.2 当归芍药散含药血清对肝星状细胞自分泌ET-1 的抑制作用 |
| 第二部分 当归芍药散含药血清对ET-1 诱导的HSC-T6细胞收缩的影响 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 1.1 细胞株及动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要耗材 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 HSC-T6形态变化 |
| 2.4 HSC-T6细胞收缩 |
| 2.4.1 I型鼠尾胶原法观察HSC-T6细胞的收缩 |
| 2.4.1.1 原理 |
| 2.4.1.2 胶原制备方法 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HSC-T6细胞形态变化 |
| 3.2 HSC-T6细胞收缩 |
| 4 讨论 |
| 4.1 当归芍药散含药血清对ET-1 诱导的HSC-T6细胞形态影响 |
| 4.2 当归芍药散含药血清对ET-1 诱导的HSC-T6细胞收缩的影响 |
| 第三部分 当归芍药散含药血清影响ET-1 诱导的HSC-T6细胞收缩的信号途径 |
| 1 实验材料及仪器 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试剂的配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 Western blot法检测各组HSC-T6细胞中Rho A、ROCKⅡ、p-MLCⅡ、MLCⅡ蛋白表达 |
| 2.3.1 蛋白样品制备 |
| 2.3.2 蛋白定量 |
| 2.3.3 SDS-PAGE凝胶电泳 |
| 2.3.4 转膜 |
| 2.3.5 一抗、二抗孵育 |
| 2.3.6 化学发光、显影、定影 |
| 2.3.7 结果分析 |
| 2.4 统计方法与处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞内RhOA、ROCKⅡ蛋白的影响 |
| 3.2 当归芍药散含药血清对ET-1 诱导的HSC-T6细胞内p-MLCⅡ、MLCⅡ蛋白的影响 |
| 3.3 当归芍药散含药血清对ET-1 诱导的HSC-T6细胞内eNOS蛋白的影响 |
| 4.讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 肝星状细胞对门静脉高压作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 硕士期间发表的科研论文 |
| 致谢 |
（6）奥曲肽降门脉压及其空肠促吸收机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制研究 |
| 第一节 血红素氧合酶/一氧化碳系统对门脉高压并发症的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 研究对象和病例选择 |
| 1.2 HBC 及 HE 诊断标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2. 方法 |
| 2.1 HE 患者与正常人 COHb 水平差异比较 |
| 2.2 HE 患者 COHb 水平与 HE 分期程度关系 |
| 2.3 比较 HE 患者伴食道胃底静脉曲张情况下COHb 水平差异 |
| 2.4 比较 HE 患者合并 HRS 时 COHb 水平 |
| 2.5 比较 HE 患者合并 SBP 时 COHb 水平 |
| 2.6 分析 HE 患者 COHb 水平与 PaO2 及 SaO2 的关系 |
| 2.7 数据统计和分析 |
| 结果 |
| 1. HE 患者 COHb 水平差异 |
| 2. HE 患者 COHb 水平与 HE 分期程度关系 |
| 3. 比较 HE 患者伴食道胃底静脉曲张情况下 COHb 水平差 |
| 4. 比较 HE 患者合并 HRS 时 COHb 水平 |
| 5. 比较 HE 患者合并 SBP 时 COHb 水平 |
| 6. 分析 HE 患者 COHb 水平与 PaO2及 SaO2的关系 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 第二节 血红素氧合酶/一氧化碳系统介导的奥曲肽降门脉压机制探讨 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物模型制备 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 门静脉压力测定 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 检测指标及方法 |
| 2.6 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. OCT 作用对肝细胞保护作用 |
| 1.1 血清肝功能学检测 |
| 1.2 肝组织病理学观察 |
| 2. OCT作用对门脉压力的影响 |
| 3. OCT对PH大鼠肝脏HO-1表达的抑制作用 |
| 3.1 免疫组织化学方法测定大鼠肝脏HO-1蛋白表达 |
| 3.2 western blot方法检测大鼠肝脏 HO-1 蛋白表达 |
| 3.3 RT- PCR 方法检测大鼠肝脏 HO-1 基因表达 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 第二部分 肠道转运蛋白及代谢酶对奥曲肽肠吸收的影响 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 实验动物及细胞 |
| 2.2 主要试剂的配制 |
| 2.3 主要实验方法及操作 |
| 2.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. OCT 在 Caco-2 细胞中的跨膜转运 |
| 1.1 Caco-2细胞转运模型验证 |
| 1.2 P-gp 及 MRP2 与 OCT 转运关系及 OCT 浓度选择 |
| 2. P-gp/MRP2抑制剂对OCT在正常及PH大鼠离体翻转肠模型中的吸收影响 |
| 3. P-gp/MRP2抑制剂对OCT在正常及PH大鼠空肠灌流模型中的吸收影响 |
| 4. OCT在大鼠肠微粒体中的代谢研究 |
| 5. OCT在人CYP3A4重组酶中的代谢研究 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 第三部分 肝硬化门脉高压状态下奥曲肽空肠促吸收及降门脉压研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 1. 材料 |
| 1.1 主要药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 实验动物及模型 |
| 2.2 抑制 P-gp、MRP2 及 CYP3A4 促吸收考察研究 |
| 2.3 考察在 PH 病理状态下 PepT1 表达及对 OCT 转运研究 |
| 2.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. P-gp/MRP2/CYP3A 混合抑制剂对OCT 在正常及 PH 大鼠体内吸收影响 |
| 2. OCT及P-gp/MRP2/CYP3A4混合抑制剂对大鼠空肠上皮P-gp/MRP2/CYP3A4表达变化影响 |
| 3. OCT联合P-gp/MRP2/CYP3A混合抑制剂降门脉压效果观察 |
| 4. PH状态下PetT1表达及转运OCT机制研究 |
| 4.1 PH 病理状态及 OCT 对 PepT1 表达影响 |
| 4.2 Caco-2 细胞实验观察 PepT1 对 OCT 转运影响 |
| 4.3 正常及 PH 大鼠翻转肠模型实验考察PepT1 对 OCT 转运影响 |
| 4.4 正常及 PH 大鼠空肠灌流模型实验考察PepT1 对 OCT 转运影响 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成绩 |
| 致谢 |
（7）磁共振弥散/张量加权及CT灌注成像对兔肝缺血再灌注损伤的诊断价值（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究方案及技术路线图 |
| 第一部分 兔部分肝缺血再灌注损伤模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 下一步实验 |
| 第二部分 肝缺血再灌注损伤3.0T弥散加权/张量成像 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 兔部分肝缺血/再灌注损伤CT灌注成像 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 灌注参数 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 缩略语中英文对照表 |
| 在读博士期间发表论文 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（8）大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略语对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 大鼠减体积肝移植改良模型的建立 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 大鼠减体积肝移植术后肝脏再生及再生诱导免疫低反应性的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 肝移植术后肝脏再生及诱导免疫耐受方法的研究进展 |
| 攻读学位期间发表文章,获得奖励情况 |
| 致谢 |
（9）缺血型胆道损伤对大鼠肝移植胆道超微结构及微循环的影响及生长激素的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 缺血型胆道损伤对肝移植胆道超微结构的影响及生长激素的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 缺血型胆道损伤对肝移植胆道微循环的影响及生长激素的保护作用 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 生长激素对肝移植缺血型胆道损伤的保护作用及其机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 肝移植后缺血性胆道损伤 |
| 综述二 |
| 生长激素的应用进展 |
| 缩略语 |
| 在读期间撰写的学术论文 |
| 致谢 |
| 统计学合格证明 |
（10）自制KYL器官保存液对恒河猴肝脏保存的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略语对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 实验一 自制KYL液的配制 |
| 前言 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 恒河猴原位肝移植模型的建立 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肝移植实验部分 |
| 前言 |
| 1 材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验四 非循环离体灌注肝脏冷保存实验 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 实验三、实验四讨论 |
| 5 实验三结论 |
| 6 实验四结论 |
| 7 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 发表论文情况 |
| 致谢 |
四、不同保存液对兔门静脉收缩力的影响（论文参考文献）
- [1]门静脉放血及双倍灌注液冲洗对改善肝移植PRS发生及术后肝功能恢复的临床研究[D]. 高晓栋. 吉林大学, 2021(01)
- [2]聚合人脐带血红蛋白复苏液对失血性休克大鼠肝脏的影响[D]. 谢思颖. 北京协和医学院, 2020(05)
- [3]不同基底硬度下干细胞及肝星状细胞收缩力与相关蛋白活性研究[D]. 陈帅帅. 重庆大学, 2019(01)
- [4]纵隔CO2充气技术在纵隔径路食管手术中应用的安全性分析[D]. 汪潜云. 苏州大学, 2018(06)
- [5]当归芍药散含药血清对ET-1介导的肝星状细胞收缩的抑制作用及其相关机制的研究[D]. 潘永福. 安徽中医药大学, 2016(03)
- [6]奥曲肽降门脉压及其空肠促吸收机制研究[D]. 孙晓宇. 大连医科大学, 2013(05)
- [7]磁共振弥散/张量加权及CT灌注成像对兔肝缺血再灌注损伤的诊断价值[D]. 郭成伟. 南方医科大学, 2011(04)
- [8]大鼠减体积肝移植术后肝脏再生差异蛋白及再生诱导免疫低反应性的实验研究[D]. 刘静. 昆明医学院, 2010(08)
- [9]缺血型胆道损伤对大鼠肝移植胆道超微结构及微循环的影响及生长激素的保护作用[D]. 王峥. 南方医科大学, 2010(09)
- [10]自制KYL器官保存液对恒河猴肝脏保存的实验研究[D]. 李晓延. 昆明医学院, 2008(10)