一、消渴康对大鼠肝细胞内线粒体活性的影响（论文文献综述）
姜立娟[1]（2021）在《经典名方玉液汤通过PI3K/AKT信号途径改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制研究》文中指出背景:胰岛素抵抗是2型糖尿病的主要病理机制,在2型糖尿病患者,约90%以上伴有胰岛素抵抗,所以改善胰岛素抵抗成为延缓、治疗2型糖尿病的关键。玉液汤是中医经典名方,研究证实,其具有降低血糖、抑制炎症反应、改善胰岛素抵抗等药理作用,临床治疗糖尿病及其并发症疗效确切,但其作用机制尚缺乏深入研究。目的:通过网络药理学和分子对接技术对玉液汤治疗2型糖尿病作用机制以及相关信号通路进行预测。结合体内外实验,观察玉液汤对高脂饮食联合STZ诱导的T2DM大鼠和棕榈酸诱导的IR-HepG2细胞胰岛素抗的改善作用,进而以网络药理学所预测的PI3K/AKT信号通路为切入点,探究玉液汤改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制。方法:1.通过网络药理学和分子对接技术探究玉液汤治疗2型糖尿病的作用机制:依托TCMSP、Swiss target prediction等数据库查询玉液汤的有效化合物成分和相应的靶蛋白;利用Gene Cards数据库筛选2型糖尿病的差异基因,然后对二者的共同靶点进行GO富集分析及KEGG通路分析,应用String平台及Cytoscape3.7.2软件构建蛋白互作网络,利用Cytoscape3.7.2软件构建中药-成分-靶点-疾病网络图,以及靶点-富集通路网络图筛选核心化合物、靶点以及通路,最后通过分子对接技术对核心靶点和化合物进一步模拟验证两者结合性。2.体内实验:通过高脂饮食喂养4周联合STZ（35mg/kg）注射建立SD大鼠T2DM IR模型。将造模成功的60只T2DM大鼠随机分为模型组、二甲双胍组和玉液汤高、中、低剂量组,每组12只,另设正常组10只,各组大鼠给予相应药物干预,定期检测各组大鼠体重、空腹血糖变化;并且分别于7周末和8周末对大鼠行口服葡萄糖耐量及空腹胰岛素耐量测定,对其曲线下面积进行评估。干预8周后进行大鼠取材,腹主动脉采血并分离血清。检测血清糖化血红蛋白、空腹胰岛素水平,评估胰岛素抵抗指数,检测血脂（TC、TG、LDL、HDL）水平、肝功（ALT、AST、ALP、TP）水平;对肝脏进行称重,计算脏器系数,检测肝组织糖原含量及肝脏病理形态学改变。通过观察以上指标明确玉液汤调节T2DM IR大鼠糖脂代谢紊乱,减轻胰岛素抵抗,保护肝脏损伤的作用。为进一步明确玉液汤改善T2DM肝脏胰岛素抵抗的作用机制,采用ELISA检测肝脏组织内TNF-α、IL-6表达水平;Western blot法检测肝脏PI3K/AKT信号通路关键蛋白IRS-1、GSK3β、AKT、PI3K p110a及其磷酸化蛋白表达水平,并且采用qRT-PCR法检测IRS-1、PI3K、AKT、GSK3βmRNA相对表达量。3.体外实验:采用0.25mM棕榈酸诱导HepG2细胞24h建立IR-HepG2细胞模型。通过倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,葡萄糖氧化酶法测定细胞葡萄糖消耗量,最终确定100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml分别作为玉液汤低、中、高浓度组,开展后续实验。葡萄糖氧化酶法和蒽酮法分别检测IR-HepG2葡萄糖消耗量和糖原含量。采用Western blot法检测肝组织PI3K/AKT信号通路相关蛋白IRS-1、p-IRS-1、PI3K p110a、p-PI3K、AKT、p-AKT、GSK3β和p-GSK3β表达水平,并且采用qRT-PCR法检测G6pase、GSK3β、AKT、IRS-1、PI3K mRNA表达水平,通过体内实验对网络药理学和动物实验结果进一步验证。结果:1.网络药理学和分子对接结果:经过网络药理学分析,最终筛选出玉液汤核心化合物108个,药物-疾病共同靶点117个,富集信号通路152条。分子对接结果显示玉液汤中的核心化合物与PI3K/AKT信号通路中的AKT1、GSK3β具有较好的结合性。2.体内实验结果:（1）与模型组比较,玉液汤各组T2DM大鼠体质量明显增加,FBG、Hb A1c、FINS、HOMA-IR明显降低（P<0.05）,ISI水平显着升高（P<0.05）,血清中ALT、TC、TG水平降低（P<0.05）,玉液汤能够调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性;（2）玉液汤改善肝脏组织形态,减轻肝脏系数,增加肝糖原合成含量;（3）ELISA结果显示:玉液汤高剂量组与二甲双胍组T2DM大鼠肝脏TNF-α、IL-6表达水平显着降低（P<0.01）;（4）Western blot结果显示:玉液汤及二甲双胍组都能够上调T2DM大鼠肝脏IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达,下调GSK3β、p-GSK3β蛋白表达（P<0.05或P<0.01）。其中,玉液汤高剂量组显着上调IRS-1、PI3K、p-PI3K蛋白表达（P<0.01）,下调p-GSK3β表达（P<0.01）,玉液汤中剂量组显着上调p-IRS-1表达,增强p-AKT表达（P<0.01）。（5）qRT-PCR结果显示:玉液汤各组及二甲双胍组均可不同程度上调PI3K mRNA表达量,降低IRS-1、GSK3βmRNA表达量（P<0.01）。其中玉液汤高剂量组显着下调IRS-1mRNA、上调PI3K mRNA表达（P<0.01）,玉液汤低剂量组显着下调GSK3βmRNA表达水平（P<0.01）。3.体外实验结果:HepG2细胞经0.25 mM棕榈酸处理24h后,细胞葡萄糖消耗量明显增加,糖原含量明显减少（P<0.05）,提示IR-HepG2细胞模型成功建立。应用不同浓度玉液汤干预IR-HepG2细胞,根据葡萄糖消耗量和糖原含量确定玉液汤400、200、100μg/ml作为高、中、低浓度进行分子机制研究。qRT-PCR结果显示:玉液汤高浓度组下调IR-HepG2细胞G6Pase mRNA、GSK3βmRNA表达（P<0.05）,上调IRS-1mRNA、PI3K mRNA表达水平（P<0.05）。Western blot结果显示:与模型组相比,玉液汤各组能够上调AKT、IRS-1及p-IRS-1蛋白表达（P<0.05）,下调GSK3β、p-GSK3β的表达（P<0.05）,其中,玉液汤高浓度组能够显着抑制GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平（P<0.01）。此外,玉液汤低浓度组能够上调PI3K及其磷酸化蛋白表达（P<0.05）,结果与二甲双胍组相似。结论:1.玉液汤可能通过调控PI3K/AKT信号通路发挥对2型糖尿病的治疗作用,分子对接结果显示玉液汤中的核心化合物与PI3K/AKT信号通路中的AKT1、GSK3β具有较好的结合性。2.玉液汤能够调节T2DM大鼠的糖脂代谢紊乱,提高胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗,保护肝脏损伤。3.玉液汤通过上调IRS-1、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达、下调GSK3β蛋白及mRNA水平,改善肝脏组织胰岛素传递信号的水平,减轻肝脏炎症反应和胰岛素抵抗,改善T2DM。4.玉液汤可以调节IR-HepG2细胞中的关键酶来促进糖原合成和减少糖异生,通过激活PI3K/AKT途径改善PA诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。
魏佳[2]（2021）在《从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础》文中研究说明目的:从方证对应的角度,以二陈汤为干预手段,观察代谢综合征（MS）痰证大鼠临床表现、肝病理结构改变及其能量底物、能量代谢关键酶、AMPK-HIF1-PKM2信号通路等变化情况,以方测证从能量代谢角度揭示MS痰证的生物学基础,为防治MS提供新靶点与新途径。方法:1.文献研究:收集从痰论治MS的相关文献,筛选符合标准的随机对照试验,采用Review Manager5.3软件对纳入研究进行统计分析。2.实验研究:6周龄雄性Wistar大鼠,将大鼠按体重随机分为两组,空白组（n=12）饲喂普通饲料,造模组（n=38）予高糖高盐高脂饲料,共持续12周,12周后根据模型标准筛选成模大鼠,按体重随机分为模型组和二陈汤组,空白组（n=11）和模型组（n=12）给予生理盐水灌胃,二陈汤组（n=12）予二陈汤5.3g/（kd.d）灌胃,持续4周。造模期间每4周动态测量大鼠体重、腹围、血压、乳酸、FBG、HDL、TG等,12周末和16周末补充测量FINS、ALT、AST、TC、LDL,计算Lee’s指数、HOMA-IR。利用HE染色及透射电镜观察肝组织微观结构;采用分光光度法观察血浆及肝乳酸、肝糖原、肝TG等;采用酶联免疫吸附试验测定血清及肝组织ATP、CS、CPT1、HIF-1α及LDH水平,Real-time PCR检测肝组织AMPKα2、PKM2、HIF-1α、CS、CPT1A及LDHA mRNA表达情况,免疫组化法测定肝组织AMPKα2、P-AMPKα、PKM2和P-PKM2蛋白表达。结果:1.文献研究:共纳入15篇文献,纳入1234例研究对象,涉及56味药物;按照用药频次前四依次为半夏、陈皮、茯苓、甘草。Meta分析结果显示:（1）化痰法联合常规西药治疗MS中医临床疗效明显优于常规西药;（2）化痰法联合常规西药在腰围、血糖、血脂等方面疗效明显优于常规西药。2.实验研究:（1）建立MS痰证大鼠模型,予二陈汤干预后,大鼠体重、腹围、血压、血脂及血糖等呈不同程度改善。（2）MS痰证大鼠能量代谢紊乱,与空白组相比,模型组血浆乳酸、血清ATP、LDH、CS、CPT1等含量明显升高（P<0.05）;肝组织ATP、TG、乳酸、LDH、CS、CPT1、HIF-1α等含量升高（P<0.05）;肝组织CPT1A、HIF-1α、PKM2 mRNA表达明显上调（P<0.05）,AMPKα2 mRNA表达明显下调（P<0.05）;肝组织P-PKM2蛋白表达增加,AMPKα2与P-AMPKα蛋白表达减少（P<0.05）。（3）二陈汤可纠正MS痰证能量代谢紊乱,与模型组相比,二陈汤组血浆乳酸、血清ATP、CPT1等含量明显降低（P<0.05）;肝组织ATP、TG、乳酸、LDH、CPT1、HIF-1α等含量降低（P<0.05）;肝组织CPT1A和PKM2 mRNA表达明显下调（P<0.05）,AMPKα2 mRNA表达明显上调（P<0.05）;肝组织P-PKM2蛋白表达减少,PAMPKα蛋白表达增加（P<0.05）。（4）MS痰证模型大鼠肝组织结构与功能明显损伤,血清ALT与AST明显升高,HE染色可见肝细胞核内空洞,细胞质可见大量空泡,汇管区炎细胞浸润;透射电镜结果显示胞质内见大小不等的脂滴,线粒体可见融合、消失,结构不清晰。二陈汤治疗后模型大鼠肝结构功能明显改善。结论:1.二陈汤是从痰论治MS的基础方,从痰论治MS有良好疗效。2.MS痰证早期能量过剩,脂肪酸β氧化增强,葡萄糖利用障碍,无氧糖酵解功能增强。3.肝结构功能损伤是MS痰证的形成的病理机制之一。4.MS痰证大鼠肝AMPKα2的表达和活性上调,HIF-1α表达与PKM2磷酸化水平上调,导致能量代谢关键酶过表达,从而引起MS痰证能量代谢紊乱,提示肝脏AMPK-HIF1-PKM2信号通路可能是MS痰证形成的病理机制之一。5.二陈汤可调节AMPK-HIF1-PKM2途径,可能通过抑制HIF-1与PKM2的蛋白过表达引起的能量代谢紊乱,影响能量代谢关键酶表达,纠正葡萄糖氧化与脂肪酸氧化的动态失衡,促进无氧糖酵解向有氧氧化转变,从而早期防治MS的发生发展,AMPK-HIF1-PKM2途径关键基因与蛋白可能是MS痰证的现代生物学基础。
申正日[3]（2021）在《糖肾方基于FXR通路调节脂代谢“肝肾同治”的作用机制研究》文中研究表明糖尿病已成为严重威胁全球人类健康的慢性疾病,糖尿病在我国的患病率逐年升高,目前已达到10.9%,其中20-40%的糖尿病患者进展为糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）。而2型糖尿病患者中非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的患病率高达75%。DKD和NAFLD已成为2型糖尿病患者的主要疾病负担。目前尽管对糖尿病患者采取了包括严格的血糖及血压控制,但我国仍有20%以上2型糖尿病患者进展为DKD。而非酒精性脂肪肝的分子机制尚不完全清楚,还没有药物被推荐用于非酒精性脂肪性肝病的治疗。因此,迫切需要开展DKD和NAFLD药物治疗研究,以延缓糖尿病患者的NAFLD以及肾衰竭的进程。文献报道,脂质代谢异常可加速DKD的进展。肾脏中脂质异常积累称为“脂质肾毒性”,会通过脂质过度氧化和线粒体产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）导致氧化应激,进而损害肾功能。而肝组织脂质过度沉积是NAFLD的一个典型病理学改变,也正是由于这一重要的特征使得肝组织可能发展为更为严重的纤维化或者肝硬化。研究表明核受体在调节脂质和碳水化合物的代谢,纤维化和炎症中起重要作用。法尼基衍生物X受体（famesoid X receptor,FXR）是核受体家族中的一员。FXR在调节胆汁酸、脂类和碳水化合物代谢中起着关键作用,且在肝脏及肾脏中表达。中医药在改善糖脂代谢紊乱,减轻肝肾损伤上具有明显的优势,探索中医药延缓肝肾损伤机制是目前亟待解决的现实问题。糖肾方是李平教授在继承前人治疗DKD经验基础上,在“肝肾同治”理论指导下研发出的有效防治DKD的中药复方。其成果2016年获国家科技进步二等奖。课题组前期开展了糖肾方（tangshen formula,TSF）治疗DKD的多中心临床试验,证实糖肾方可以改善肾小球滤过率,降低尿蛋白排泄率。且最近研究中发现,糖肾方可以通过缓解肝肾的脂质沉积,改善肝脏脂肪变性以及肾损害。但是糖肾方对于DKD肾脏及肝脏脂质代谢紊乱的影响机制尚不清楚,该问题需要进一步研究才能得以阐述。本研究利用自发性2型糖尿病db/db小鼠伴有DKD和NAFLD模型,灌胃给予糖肾方,评价糖肾方对db/db小鼠肝脏及肾脏损伤的药效学作用;同时,观察糖肾方对db/db小鼠肾脏皮质以及肝脏脂代谢的影响,探索糖肾方改善肝肾脂代谢的分子途径;结合体外棕榈酸钠（sodium palmitate,PA）刺激原代小鼠肾小管上皮细胞（mouse tubular epthelial cells,mTECs）以及小鼠源正常肝细胞（AML12）培养,从细胞水平探讨糖肾方“肝肾同治”作用机制。目的评价糖肾方对db/db小鼠肝肾损伤的药效学作用,并以改善核受体FXR通路调节的脂质沉积为切入点揭示糖肾方改善糖尿病肝肾损伤的作用机制。方法:第一部分:糖肾方（TSF）通过核受体FXR通路调节肾脏脂代谢机制研究。（1）实验一:糖肾方对自发性2型糖尿病db/db小鼠肾损害的药效学观察。给予8周龄,雄性db/db小鼠以及同遗传背景db/m小鼠适应性喂养2周后,随机分为正常对照组db/m、模型对照组db/db、糖肾方治疗组:db/db+TSF（2.4g/kg/d）、阳性药厄贝沙坦治疗组:db/db+Apro（22.5mg/kg/d）。10周龄开始灌胃给药,每周记录动物体重1次,每三周尾尖采血测空腹血糖,给药前和给药12周后将动物放置代谢笼内收集24小时尿液测定尿蛋白。给药12周后,在麻醉下心脏穿刺法取血,测定肾功能,血脂及血糖水平。同时,处死动物取肾组织,做生化、分子生物学及组织病理检测,评估药物对肾损伤的改善作用。（2）实验二:糖肾方对db/db小鼠核受体FXR通路介导肾脏脂质沉积的调控机制研究。在实验一的基础上,取正常对照组db/m、模型对照组db/db、糖肾方治疗组的小鼠肾脏皮质。利用酶标比色法测定肾组织胆固醇以及甘油三酯水平。利用Filipin染色及油红O染色,观察糖肾方对db/db小鼠肾脏脂质沉积的影响。利用Western Blotting,real-time PCR,免疫荧光等方法观察糖肾方对小鼠肾脏皮质FXR,FXR下游靶基因载脂蛋白E（apolipoprotein e,ApoE）,以及FXR上游过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α）蛋白以及mRNA表达水平的影响。（3）实验三:糖肾方对肾小管上皮细胞核受体FXR通路介导脂质沉积的调控研究。利用棕榈酸钠刺激体外培养的肾小管上皮细胞（mTECs）模型,CCK8法检测不同浓度糖肾方对mTECs细胞生长抑制率,筛选糖肾方有效浓度。使用Fillibin染色、油红O染色以及酶标比色法测定糖肾方干预后mTECs细胞内的胆固醇及甘油三酯含量变化,从而评估糖肾方对mTECs细胞脂质沉积的影响。利用Western Blotting,real-time PCR等检测糖肾方对PA刺激mTECs细胞内ApoE,FXR,PGC-1α蛋白以及mRNA表达水平影响。糖肾方干预FXR-SiRNA转染的mTECs细胞,探讨糖肾方通过核受体FXR调节mTECs细胞脂代谢的分子机制。第二部分:糖肾方通过核受体FXR通路调节肝脏脂代谢机制研究。（1）实验一:糖肾方对自发性2型糖尿病db/db小鼠肝损害的药效学观察。给予8周龄,雄性db/db小鼠以及同遗传背景db/m小鼠适应性喂养2周后,随机分为正常对照组db/m,模型对照组db/db,糖肾方治疗组:db/db+TSF（2.4 g/kg/d）,阳性药非诺贝特治疗组:db/db+Fen（30mg/kg/d）。10周龄开始灌胃给药,每周记录动物体重1次,每三周尾尖采血测空腹血糖。给药12周后在麻醉下心脏穿刺法取血,测定肝功能,血脂及血糖水平。同时,处死动物取肝组织,做生化、分子生物学及组织病理检测,评估药物对肝损伤的改善作用。（2）实验二:糖肾方对db/db小鼠核受体FXR通路介导肝脏脂质沉积的调控机制研究。在上一实验的基础上,取正常对照组db/m、模型对照组db/db、糖肾方治疗组的小鼠肝组织,进行Filipin染色及油红O染色,观察糖肾方对db/db小鼠肝脏胆固醇及甘油三酯代谢影响。利用Western Blotting,real-time PCR等检测糖肾方对各组小鼠肝脏FXR,FXR下游靶基因ApoE,以及FXR上游转录共激活因子PGC-1α蛋白以及mRNA表达水平影响。（3）实验三:糖肾方对小鼠肝细胞核受体FXR通路介导脂质沉积的调控研究。给予棕榈酸钠刺激体外培养的小鼠源正常肝细胞（AML12）模型Fillibin染色和油红O染色,测定糖肾方干预后AML12细胞内的胆固醇及甘油三酯含量变化,从而评估糖肾方对AML12细胞脂质沉积的影响。利用Western Blotting,real-time PCR等检测糖肾方对PA刺激AML12细胞内ApoE,FXR,PGC-1α蛋白以及mRNA表达水平影响。探讨糖肾方通过核受体FXR调节AML12细胞脂质沉积的分子机制。结果第一部分:（1）证明糖肾方可改善db/db小鼠肾脏损伤。糖肾方可降低db/db小鼠血清肌酐（serum creatinine,Scr）和尿蛋白水平。db/db小鼠肾脏Masson及PAS染色显示,肾小球胶原增多,肾小球面积变大,系膜区糖原增多,系膜基质增生明显。经糖肾方干预,db/db小鼠肾组织PAS及Masson染色病理表现改善。此外糖肾方减缓db/db小鼠体重增速,且降低血脂及血糖。（2）糖肾方明显改善db/db小鼠肾脏皮质Filipin染色及油红O染色脂质沉积表现,降低肾脏胆固醇及甘油三酯水平。糖肾方提高db/db小鼠肾脏皮质ApoE、FXR、PGC-1α蛋白及mRNA表达。（3）CCK8法确定500μg/mL糖肾方干预mTECs细胞的药物浓度。Fillibin染色、油红O染色以及酶标比色法发现糖肾方降低mTECs细胞内胆固醇及甘油三酯水平。糖肾方可上调mTECs细胞ApoE、FXR、PGC-1α蛋白及mRNA表达。FXR-SiRNA转染mTECs细胞后,显着减弱糖肾方上调FXR及ApoE蛋白及mRNA表达的作用。提示糖肾方可能通过PGC-1α/FXR/ApoE信号通路改善肾脏脂质沉积。第二部分:（1）证明糖肾方可改善db/db小鼠肝脏损伤。糖肾方可降低db/db小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）以及丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）水平。db/db小鼠肝组织HE染色显示肝细胞形态不规则呈弥漫性脂肪变性,胞浆空泡较多,有的融合成大脂滴,肝索排列紊乱。经糖肾方干预,db/db小鼠肝组织HE染色病理表现改善。（2）糖肾方减轻db/db小鼠肝脏Filipin染色及油红O染色脂质沉积表现。糖肾方提高db/db小鼠肝脏ApoE、FXR、PGC-1α蛋白及mRNA表达。（3）Fillibin染色、油红O染色发现,糖肾方降低AML12细胞内胆固醇及甘油三酯水平。糖肾方可上调AML12细胞ApoE、FXR、PGC-1α蛋白及mRNA表达。提示糖肾方可能通过调控PGC-1α/FXR/ApoE信号通路改善肝脏脂质沉积。结论体内外实验研究发现:糖肾方可改善db/db小鼠的肝脏和肾脏损伤并调节脂代谢紊乱,其作用机制与其调节PGC-1α/FXR/ApoE通路有关,且核受体FXR在糖肾方调节肝肾脂代谢过程中起到关键作用。
王泽[4]（2020）在《基于miR-34a调控SIRT1/NF-κB信号通路探讨清润方改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制》文中指出研究背景糖尿病是临床最常见的内分泌代谢疾病之一,其中90%以上为2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）。2019年国际糖尿病联盟发布的最新调查数据显示,全球20-79岁的成人中约有4.63亿患有糖尿病,患病率为9.3%,预计到 2030 年将达到 5.78 亿（10.2%）。胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）是 T2DM发病的始动因素,并贯穿T2DM发展的全过程。积极改善IR成为治疗T2DM的关键策略。临床常用于改善IR的药物如双胍类、噻唑烷二酮类,往往存在一定的副作用,长期服用还可能出现失效现象。中医学在治疗T2DM方面具有鲜明的优势。中医理论认为,阴虚热盛是消渴病的基本病机。导师林兰教授在多年的临床实践中针对阴虚热盛型T2DM-IR确立了滋阴清热的基本治法,以其经验方—清润方（知母、黄柏、地骨皮等）为核心处方加减治疗,取得了良好疗效。课题组前期研究发现,清润方可减轻T2DM大鼠炎症反应和氧化应激,改善IR状态,但其深层次的分子机制尚待进一步探索。大量研究证实,T2DM在一定程度上是机体的低度炎症状态。炎症因子的释放可干扰胰岛素信号转导通路,导致IR的发生。SIRT1/NF-κB信号通路在介导肝脏炎症反应中发挥关键作用。微小核糖核酸（Micro ribonucleic acid,microRNA）是非编码RNA中一类重要的基因调节家族,可通过与靶基因3’端完全或不完全互补结合在转录或转录后水平影响靶基因的表达。研究显示,多种microRNA在T2DM-IR中呈现异常表达,其中miR-34a与肝脏糖脂代谢失调密切相关。而miR-34a可作为SIRT1的上游,直接靶向负性调控SIRT1的表达。因此,本研究在国家自然科学基金项目“基于miRNA调控SIRT1/NF-κB信号通路探讨滋阴清热法治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的分子机制”（No.81573792）的资助下,以前期工作为基础,集中探讨miR-34a调控SIRT1/NF-κB信号通路在T2DM肝脏IR发病中的作用及清润方的干预机制,以期进一步发掘有效的治疗靶点,为中医药防治T2DM提供有力的理论和实验依据。研究目的（1）通过体内实验和体外实验结合,研究清润方改善T2DM大鼠和IR-HepG2细胞IR的作用;（2）以miR-34a调控SIRT1/NF-κB信号通路为切入点探讨清润方改善T2DM-IR的分子机制。研究方法（1）体内实验以SD大鼠为研究对象,采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型,分为正常组、模型组、清润方高剂量组、清润方中剂量组、清润方低剂量组和二甲双胍组,每组10只,各组分别给予相应的药物灌胃干预8周。观察大鼠的一般状态,分别于药物干预前和干预后的第2、4、6、8周末记录大鼠体重并检测大鼠空腹血糖（FBG）,于药物干预后的第7周末进行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）,并计算血糖曲线下面积（GAUC）。干预结束后腹主动脉取血和肝组织,放射免疫法检测空腹血清胰岛素（FINS）水平,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,氧化酶法和直接法检测血脂（TC、TG、HDL-C、LDL-C）水平,蒽酮法检测肝糖原含量,HE染色观察肝组织的病理改变,透射电镜观察肝脏超微结构。ELISA法检测肝组织肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的水平,Western blot法检测肝组织沉默信息调节因子1（SIRT1）、核转录因子κB（NF-κB）、胰岛素受体底物1（IRS1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的蛋白表达水平,RT-PCR法检测肝组织miR-34a、SIRT1mRNA、NF-κBmRNA、IRS1mRNA、GLUT4mRNA的基因表达水平。（2）体外实验以人肝癌细胞株HepG2细胞为研究对象,以不同浓度的清润方干预HepG2细胞24h后,CCK8法检测清润方对HepG2细胞增值活性的影响,筛选清润方的干预浓度。采用1 ×10-6mol/L的胰岛素诱导36h建立IR-HepG2细胞模型,分为正常组、模型组、清润方组和二甲双胍组,各组分别给予相应的药物干预。葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,蒽酮法检测糖原含量,ELISA法检测TNF-α、IL-6 的水平,Western blot 法检测 SIRT1、NF-κB、IRS 1、GLUT4 蛋白表达水平,RT-PCR 法检测 miR-34a、SIRT1mRNA、NF-κBmRNA、IRS1mRNA、GLUT4mRNA的基因表达水平。采用脂质体转染法向HepG2细胞转染miR-34a inhibitor,Western blot法和RT-PCR法检测相应的蛋白及RNA的表达水平。研究结果1.体内实验（1）与正常组比较,模型组大鼠FBG、TC、TG、LDL-C、FINS、HOMA-IR、GAUC水平均明显升高（p<0.05）,肝糖原含量明显降低（p<0.05）。与模型组比较,清润方中剂量组大鼠第8周体重明显升高（p<0.05）;清润方高剂量组第8周FBG水平明显降低（p<0.05）;清润方低剂量组和清润方高剂量组FINS、HOMA-IR水平明显降低（p<0.05）;清润方各剂量组GAUC水平有所下降,但差异不明显（p>0.05）;清润方各剂量组TC、TG、LDL-C水平均明显降低（p<0.05）;清润方高剂量组肝糖原含量明显升高（p<0.01）;肝组织HE染色观察显示,模型组大鼠肝组织出现明显的脂肪变性和空泡变性,透射电镜观察其超微结构显示,模型组大鼠肝细胞出现线粒体、内质网等细胞器的损伤及散在脂滴,清润方各剂量组其病理变化较模型组均有不同程度的改善。（2）ELISA结果显示,与正常组比较,模型组TNF-α、IL-6水平明显升高（p<0.01）。与模型组比较,清润方高剂量组TNF-α水平明显降低（p<0.05）,清润方中剂量组和清润方高剂量组IL-6水平明显降低（p<0.05）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组SIRT1、GLUT4蛋白表达水平明显下调（p<0.05）,IRS1蛋白表达水平下调,但差异不明显（p>0.05）,NF-κB蛋白表达水平明显上调（p<0.01）;与模型组比较,清润方各剂量组NF-κB蛋白表达水平明显下调（p<0.05）,清润方高剂量组GLUT4蛋白表达水平明显上调（p<0.05）,清润方各剂量组SIRT1、IRS1蛋白表达水平有所上调,但差异不明显（p>0.05）。RT-PCR结果显示,与正常组比较,模型组肝组织miR-34a、NF-κBmRNA表达水平明显上调（p<0.01）,SIRT1mRNA、IRS1mRNA、GLUT4mRNA 表达水平明显下调（p<0.05）;与模型组比较,清润方高剂量组SIRT1mRNA、IRS1mRNA表达水平明显上调（p<0.05）,NF-κBmRNA表达水平明显下调（p<0.05）,清润方低剂量组和清润方高剂量组miR-34a表达水平下调,GLUT4mRNA表达水平上调,但差异不明显（p>0.05）。2.体外实验（1）清润方干预HepG2细胞后对其增殖有一定的抑制作用,当清润方干预浓度为5mg/mL时,细胞增殖活性仍为（94.15±6.23）%,选择此浓度作为清润方的工作浓度。1×10-6mol/L的胰岛素诱导HepG2细胞36h后,HepG2细胞葡萄糖消耗量明显减少（p<0.01）,糖原含量明显降低（p<0.01）,提示IR-HepG2细胞模型诱导成功。清润方干预后能提高IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量,但与模型组比较差异不明显（p>0.05）,并能显着提高IR-HepG2细胞糖原含量（p<0.05）。（2）ELISA结果显示,与正常组比较,模型组TNF-α IL-6水平明显升高（p<0.01）;与模型组比较,清润方组TNF-α、IL-6水平明显降低（p<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组SIRT1、IRS1、GLUT4蛋白表达水平明显下调（p<0.01）,NF-κB蛋白表达水平明显上调（p<0.01）;与模型组比较,清润方组SIRT1、GLUT4蛋白表达水平明显上调（p<0.05）,IRS1蛋白表达水平上调,NF-κB蛋白表达水平下调,但差异不明显（p>0.05）。RT-PCR结果显示,与正常组比较,模型组miR-34a、NF-κBmRNA表达水平明显上调（p<0.01）,SIRT1 mRNA、IRS1mRNA、GLUT4mRNA表达水平明显下调（p<0.01）;与模型组比较,清润方组NF-κBmRNA表达水平明显下调（p<0.05）,miR-34a表达水平下调,但差异不明显（p>0.05）,SIRT1mRNA表达水平明显上调（p<0.01）,IRS1mRNA、GLUT4mRNA表达水平上调,但差异不明显（p>0.05）。miR-34a inhibitor转染HepG2细胞后,Western b1ot结果显示,与inhibitor-NC组比较,inhibitor组SIRT1、IRS1、GLUT4表达水平上调,NF-κB表达水平下调,但差异不明显（p>0.05）。RT-PCR结果显示,与 inhibitor-NC 组比较,inhibitor 组 miR-34a表达水平明显下调（p<0.01）,SIRT1mRNA表达水平明显上调（p<0.05）,IRS 1 mRNA、GLUT4mRNA表达水平上调,NF-κBmRNA表达水平上调,但差异不明显（p>0.05）。研究结论（1）清润方可减轻T2DM大鼠糖脂代谢紊乱,改善IR状态,缓解肝脏病理损伤;提高IR-HepG2细胞的葡萄糖摄取和糖原合成能力,改善IR状态。（2）清润方改善T2DM肝脏IR的作用可能是通过抑制miR-34a的表达,激活SIRT1/NF-κB信号通路,减轻肝脏炎症反应对胰岛素信号转导通路的损伤,提高胰岛素敏感性实现的。
刘琴[5]（2020）在《基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制》文中提出研究目的本研究从体外实验探讨糖络宁对高糖培养的大鼠背根神经元细胞miR-200a及氧化应激的影响,以部分阐明中药糖络宁用于临床治疗糖尿病周围神经病变的可能作用机制。研究方法SPF级SD大鼠灌胃10天制备糖络宁含药血清及大鼠正常血清。提取并鉴定大鼠背根神经元神经节（DRGn）细胞。采用不同葡萄糖浓度（50 mmol/L、75 mmol/L、100 mmol/L）、不同浓度糖络宁含药血清（2.5%、5%、10%、20%、30%）培养DRGn细胞,通过CCK-8法检测细胞活性,确定最佳高糖浓度及最佳糖络宁含药血清浓度;运用荧光探针技术检测DRGn细胞中的ROS水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,硫代巴比妥法检测MDA含量;采用实时荧光定量PCR技术检测DRGn细胞中miR-200a、PI3K的基因表达水平;通过Western Blot技术检测DRGn细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的蛋白表达水平。研究结果1.不同浓度葡萄糖及糖络宁含药血清对DRGn细胞活性的影响随着葡萄糖浓度的增加,DRGn细胞活性显着下降,有统计学差异（P<0.01）;50 mmol/L葡萄糖浓度组与75 mmol/L葡萄糖浓度组、75 mmol/L葡萄糖浓度组与100 mmol/L葡萄糖浓度组相比细胞活性均显着下降,有统计学差异（P<0.01）。与24 h相比,各葡萄糖浓度组DRGn在48 h细胞活性均明显下降,有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。随着糖络宁含药血清浓度的增加,DRGn细胞活性呈现先升高后下降的趋势,在糖络宁含药血清浓度为10%时细胞活力最大。其中2.5%浓度组与5%浓度组相比细胞活力无统计学差异（P>0.05）,5%浓度组与10%浓度组相比、10%浓度组与20%浓度组相比、20%浓度组与30%浓度组相比细胞活力均有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。与24 h相比,同一浓度糖络宁含药血清干预下的DRGn在48h的细胞活性均有所下降,10%糖络宁含药血清干预下细胞活性下降有统计学差异（P<0.05）,其余糖络宁含药血清干预下细胞活性下降无统计学差异（P>0.05）。2.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞氧化应激水平的影响与正常组相比,高糖组DRGn细胞中ROS、MDA含量显着增高（P<0.01）,SOD活力显着下降（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组DRGn细胞中ROS、MDA含量显着下降（P<0.01）,SOD活力显着增高（P<0.01）。3.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中miR-200a mRNA、PI3K mRNA表达水平的影响与正常组相比,高糖组DRGn细胞中miR-200amRNA值显着增高（P<0.01）、PI3K mRNA值显着降低（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组DRGn细胞中miR-200a mRNA值显着降低（P<0.01）、PI3K mRNA值显着增高（P<0.01）。4.糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平的影响与正常组相比,高糖组 PI3K、p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT 蛋白表达水平均显着降低（P<0.01）;与高糖组相比,糖络宁组各组PI3K、p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT蛋白表达水平均显着增高（P<0.01）。结论1.糖络宁可以改善高糖环境下DRGn细胞的氧化应激水平;2.糖络宁改善高糖培养下的DRGn细胞中氧化应激水平可能是通过调控miR-200a及PI3K/AKT信号通路实现的。
杨育农[6]（2020）在《基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路“调脏通络”电针改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗水平的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:通过研究“调脏通络”电针对db/db小鼠的体重、血糖、肝脏组织病理形态、肝脏胰岛素抵抗水平的影响,以期探讨“调脏通络”电针对db/db小鼠的干预作用及对肝脏胰岛素抵抗的影响,阐释“调脏通络”电针疗法改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗水平的可能机制。方法:以22只db/db小鼠为研究对象,随机分为针刺组11只,模型组11只,空白组选取同期相同条件下饲养的9只db/m小鼠,共3组。针刺组予以“调脏通络”电针干预,1次/d,30min/次,6次为1疗程,疗程间休息1d,连续干预2个疗程。模型组和空白组实验过程中,不予任何特殊处置,仅作为对照观察。分别于电针治疗前、电针治疗1周后、电针干预2周后,各组小鼠尾尖采血测量血糖,称量各组小鼠体重。治疗结束后取材,取小鼠肝脏进行检测。应用HE染色法检测肝脏组织病理形态改变;蒽酮法检测肝糖原含量;免疫组化法和Western Blot检测肝脏胰岛素信号通路相关蛋白表达含量,包括:磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（Phosphorylation-Protein kinase B,p-Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（Phosphorylation-Glycogen Synthase Kinase,p-GSK-3β）。结果:1、实验动物一般情况及相关指标（1）实验动物的一般指标情况:空白对照组:小鼠皮毛有光泽、状态良好、活动灵敏、摄食量与饮水量均正常;模型组:小鼠皮毛暗淡枯槁无光泽、状态萎靡、反应迟钝、摄食量与饮水量均明显增多;针刺组:小鼠皮毛欠光泽、状态一般、反应略迟钝、摄食量与饮水量较正常对照组小鼠增多。饮水量:干预1周、2周后,针刺组与模型组饮水量,与同期空白组比较均饮水量均显着增加(***P<0.001);属于糖尿病小鼠模型的一个典型的重要症状,模型组小鼠的饮水量增加更为显着;针刺组与同期模型组比较,其饮水量的增加明显低于模型组(△△△P<0.001)。摄食量:干预1周、2周后,针刺组及模型组摄食量,与同期空白组比较均显着增加(***P<0.001);这也是属于糖尿病小鼠模型的一个显着表征,而模型组小鼠的摄食量增加更为明显;针刺组与同期模型组比较,针刺组摄食量增加显着低于模型组(△△△P<0.001)。（2）各组小鼠体重变化:干预前,与同期空白组小鼠比较,针刺组与模型组小鼠体重有明显差异(***P<0.001),针刺组与模型组干预前相比无显着差异（P>0.05）;干预1周,针刺组体重变化情况较模型组略低,但两组比较无差异（P>0.05）;干预2周,针刺组与模型组体重变化情况相比,针刺组小鼠体重增长缓慢,两组小鼠体重变化有较显着的差异(△△△P<0.001)。2、各组小鼠血糖变化结果:干预前,空白组小鼠与针刺组、模型组血糖比较有显着性差异（**P<0.01）,针刺组与模型组小鼠血糖比较无差异（P>0.05）;干预1周后,针刺组与模型组小鼠血糖比较无差异（P>0.05）,但可以看出针刺组小鼠血糖上升较模型组缓慢;干预2周后,与模型组比较,针刺组小鼠血糖变化有显着改善（△P<0.05）。各组小鼠肝糖原含量检测结果:与空白组小鼠比较,针刺组小鼠的肝糖原含量减少,但两组肝糖原变化差异无统计学意义（P>0.05）,模型组小鼠与空白组小鼠比较,肝糖原含量明显减少,变化结果差异有统计学意义（P<0.05）。3、各组小鼠肝脏形态学变化结果:空白组小鼠肝组织结构正常,细胞排列规则,胞质均匀,肝小叶结构正常,肝细胞向四周呈条索状分布,无炎性细胞浸润。模型组表现肝细胞索排列紊乱,多数肝细胞出现严重的脂肪变性,肝细胞肿胀,胞浆内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡,有的细胞出现水肿。针刺组小鼠肝细胞排列较为均匀有序,结构较完整,细胞水肿、脂肪变性、空泡化现象较模型组有明显改善,但整体状况不如空白组。4、各组小鼠肝脏组织PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平结果:与空白组比较,模型组大鼠肝脏组织中PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的蛋白表达量显着降低（△P<0.05）;与模型组比较,“调脏通络”针刺组大鼠肝脏组织中PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的蛋白表达量显着上调（#P<0.05）。结论:1、“调脏通络”电针可改善db/db小鼠的一般症状、体重,对2型糖尿病有治疗作用;2、“调脏通络”电针可降低血糖水平,改善db/db小鼠的糖代谢水平;3、“调脏通络”电针对db/db小鼠的肝脏组织有一定的改善和修复作用;4、“调脏通络”电针可能是通过提高肝脏PI3K、p-Akt、p-GSK-3β的表达水平,从而改善肝脏胰岛素抵抗水平,起到对2型糖尿病的治疗作用。
杨旭[7]（2020）在《半夏泻心汤对2型糖尿病代谢性损伤的临床及实验研究》文中研究表明【目的】探讨半夏泻心汤改善2型糖尿病代谢性损伤的临床及实验研究以期增加半夏泻心汤的应用范围;同时,运用网络药理学技术分析半夏泻心汤治疗2型糖尿病的作用靶点和相关信号通路,进一步分析其防治2型糖尿病的理论基础和作用机制。通过临床试验和基础试验,验证中药复方对调节能量代谢通路、恢复糖脂代谢平衡,改善胰岛素抵抗的有效性。【方法】运用中药系统药理学分析平台（bioinformatics analysis tool for molecular mechanism of TCM,BATMAN-TCM）数据库获取半夏泻心汤的作用靶标基因,预测其可能的分子作用靶点。从OMIM、TDD疾病数据库收集2型糖尿病的靶标基因,将两者取交集后得运用STRING构建蛋白质间相互作用网络,并将结果用Cytospace进行网络可视化展示,通过R软件对交集基因进行G O富集分析和KEGG分子信号通路富集分析并将结果进行可视化展示。临床研究:釆用随机对照研究方法,收集成都中医药大学附属医院住院部及门诊2018年10月至2019年10月之间就诊的脾虚胃热型2型糖尿病病例,并按照随机分组（查随机数字表）的原则分别纳入对照组和治疗组。对照组按照原有既定的降糖西药治疗,治疗组在西药基础上联合半夏泻心汤治疗,疗程均为12周。基础研究:采用前期成熟的2型糖尿病造模方法,建立2型糖尿病动物模型。按体重将80只SD雄性大鼠随机分为正常组10只,模型组70只,造模成功的50只大鼠随机分为模型组（DM）、二甲双胍组（MET,0.16g·kg-1）、半夏泻心汤剂量组（BXD,6.98g·kg-1）,NG和DM组则分别灌服同等体积的生理盐水,连续四周。选取生化法检测血清中空腹血糖、TC、TG含量;ELISA法检测血清中胰岛素、FFA、ADPN、TNF-α和IL-6含量及肝脏组织中SOD、GSH-Px、ATP、ATP/AMP含量。实时荧光定量（PCR）检测肝脏组织中AMPKαm RNA、SIRT1m RNA、PGC-1αm RNA、PPARαm RNA含量;免疫印迹法（Western blot,WB）观察肝脏组织中AMPKα、PGC-1α、PPARα、SIRT1表达情况;【结果】网络药理学半夏泻心汤的245个靶点基因中有11个靶点与2型糖尿病疾病相互关联,交集基因分别是PPARD、INS、TNF、SOD2、MTNR1B、KCNB1、SIRT1、GPBAR1、ADORA1、GHRL、AVPR2;临床试验共纳入病例56例,其中脱落3例,剔除3例;实际完成50例,其中治疗组组26例,对照组24例。两组患者年龄、性别等基线资料一致,具有可比性（P>0.05）。（1）治疗后,与对照组相比,FPG、2HPG的P值均小于0.05（P<0.05）,Hb A1c、FINS、HOMA-IR的P值小于0.05（P<0.05）,中医症状、体征积分P值小于0.01（P<0.01）,差异有统计学意义;（2）治疗后,与对照组相比,TC与TG的P值均小于0.05（P<0.05）,差异有统计学意义;（3）与对照组比较,治疗组中FFA、ADPN浓度明显降低,P值均小于0.05（P<0.05）,差异有统计学意义。（4）与对照组比较,治疗组中IL-6、TNF-α含量明显下降,P值均小于0.05（P<0.05）,差异有统计学意义。（5）治疗后,与对照组相比,治疗组中ATP浓度降低（P<0.05）,差异有统计学意义,AMP/ATP的比值有降低趋势（P>0.05）,差异无统计学意义。（6）治疗后,与对照组相比,治疗组中SIRT1、AMPKα、PGC-1α浓度降低（P<0.05）,差异有统计学意义;基础试验1 T2DM大鼠模型的建立及对血糖影响（1）通过一般情况观察,与NG组相比,模型组大鼠活动不灵敏,体重降低,皮毛暗淡,饮食等摄入减少;（2）客观指标检测,模型组大鼠空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数水平明显升高（P<0.05）;（3）经半夏泻心汤干预治疗后,模型组大鼠体重、精神状态,空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数均有所好转。2型糖尿病大鼠造模成功。2半夏泻心汤对DM大鼠血脂代谢的影响造模后,与NG组相比,DM组大鼠血清中TC、TG、FFA含量显着升高,而ADPN含量显着降低,差异均有统计学差异（P<0.01）;与DM比较,药物干预组TC、TG、FFA含量均明显降低,ADPN含量有升高趋势,具有统计学差异（P<0.01或P<0.05）。其中BXD组变化较为显着,3半夏泻心汤对DM大鼠炎症因子、氧化应激的影响与NG相比,DM大鼠血清IL-6、TNF-α显着升高,显着升高有统计学差异（P<0.01）;与DM比较,药物干预组大鼠血清IL-6、TNF-α下降趋势明显,具有统计学差异（P<0.01）;与NG相比,DM组大鼠肝脏组织中GSH-Px、SOD有下降趋势,无统计学差异（P>0.05）;与DM比较,药物干预组大鼠肝脏组织中GSH-Px、SOD有上升趋势,其中BXD组有统计学差异（P<0.05）;4半夏泻心汤对DM大鼠AMPK信号通路中相关调节因子影响与NG相比,DM组大鼠肝脏组织中ATP、AMP/ATP含量明显降低,有统计学差异（P<0.01）;与DM组比较,经药物干预后ATP、AMP/ATP有上升趋势（P>0.05）。与NG相比,DM组大鼠肝脏组织中SIRT1m RNA含量有下降趋势,无明显统计学差异（P>0.05）,AMPKαm RNA、PPARαm RNA含量明显降低（P<0.01）,PGC-1αm RNA含量升高,具有统计学意义（P<0.05）;与DM组相比,药物干预组大鼠肝脏组织中SIRT1m RNA、AMPKαm RNA、PPARαm RNA含量均有上升趋势,有统计学差异（P<0.05）。PGC-1αm RNA含量有下将趋势,其中MET组有统计学差异（P<0.05）;与NG相比,DM组大鼠肝脏组织中AMPKα、PPARα蛋白表达无明显差异,不具备统计学意义（P>0.05）,PGC-1α蛋白表达升高,具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;SIRT1蛋白表达明显降低,具有显着的统计学意义（P<0.05）;与DM组相比,药物干预组大鼠肝脏组织中PGC-1α蛋白表达明显降低,具有显着的统计学意义（P<0.05或P<0.01）。SIRT1、PPARα蛋白表达有上升趋势无明显差异,不具备统计学意义（P>0.05）。【结论】（1）网络药理学方法科学分析半夏泻心汤的基因表达,调节炎症因子、氧化应激、糖脂代谢、能量代谢,影响胰岛素与其受体结合,诱导SIRT1（沉默信息调节因子2相关酶1）表达,从而激活AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路,调节能量代谢的开放,促进糖脂代谢和线粒体的生物合成来增强胰岛素敏感性。阐释中医药多靶点、多通路防治2型糖尿病的治疗优势,为后续的实验研究提供研究方向和理论参考。（2）2型糖尿病患者和大鼠可导致糖脂代谢紊乱、炎症及氧化应激损伤,引发能量代谢失衡,其中DM组大鼠胰腺组织、肝脏组织可见较多炎性细胞浸润及脂肪变性且肝脏组织的脂滴比率显着升高;（3）半夏泻心汤能降低2型糖尿病患者和大鼠血糖,降低胰岛素抵抗指数,改善胰岛素抵抗,下调IL-6、TNF-α的含量,调控促炎因子的水平,增强机体对胰岛素的敏感性,降低ADPN含量,激活AMPK系统,增加了机体对FFA消耗,降低了TC、TG的水平,减轻胰岛素抵抗,从而发挥降脂作用;同时半夏泻心汤可以上调2型糖尿病患者和大鼠AMP/ATP比值,激活AMPK/SIRT1/PGC-1α系统,使ATP含量增加,从而促进机体糖异生、脂肪酸氧化和线粒体的生物合成来增强抗炎、抗氧化和调节能量代谢能力。（4）半夏泻心汤通过激活DM大鼠PGC-1α下游分子PPARα抑制脂肪酸氧化,降低脂肪酸含量,抑制促炎因子,降低SOD和GSH活性,达到减轻大鼠肝细胞氧化应激损伤及脂质蓄积,发挥改善IR作用,从而恢复糖脂代谢水平。（5）结合本实验的研究,我们认为“脾不散精”的关键在于“脾主运化”功能失司,而其中“脾主化”可能起着主要作用。
王明慧[8]（2020）在《糖耐康对db/db小鼠肠道菌群及TLR4/NF-κBp65信号通路的影响》文中进行了进一步梳理目的:探讨糖耐康对2型糖尿病模型db/db小鼠的肠道菌群及TLR4/NF-κBp65通路的影响,为临床治疗2型糖尿病提供基础研究依据与指导。方法:16只雄性db/db小鼠连续两日尾静脉测随机血糖≥11.1mmol/L选入实验组,按血糖及体重随机将其分为模型组（C组）和糖耐康组（TNK组）,另设同周龄8只db/m+小鼠为正常组（N组）。TNK组按3.24g/（kg.d）给药,N组和C组给予等体积的双蒸水,连续给药8周,观察一般情况并每4周测空腹血糖和体重。给药干预8周后,取材后测血清中生化指标TG、TC、HDL-C、LDL-C、FFA、ALT、AST;ELISA法检测血清中空腹胰岛素、LPS水平及肝组织匀浆中炎性因子TNF-a、IL-6和IL-lβ的表达水平;取肝脏和结肠组织石蜡包埋切片,行HE染色并观察肝脏组织的病理改变;采用16S rRNA测序,分析肠道菌群的变化;Western blot法检测肝脏组织中TLR4、NF-κBp65的蛋白表达量;免疫组化法检测结肠组织中ZO-1、Occludin蛋白表达量。结果:（1）在改善IR和糖脂代谢方面:与N组比较,db/db小鼠的体重在各个时间点明显高于N组（P<0.01）,且肝重和肝脏指数显着性高于N组（P<0.01）,db/db小鼠的空腹血糖、血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数明显升高（P<0.01）,其TG、TC、FFA、AST和ALT水平显着性增高（P<0.01）;与C组比较,TNK组小鼠体重有下降趋势,但无统计学意义（P>0.05）,肝重和肝脏指数明显下降且具有统计学意义（P<0.01）,给药第4、8周空腹血糖水平降低（P<0.05）,取材后测血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数下调（p<0.05）,TG、TC、FFA、AST和ALT水平明显降低,差异显着且有统计学意义（p<0.01）。（2）形态学检测:与N组比较,病理观察db/db小鼠的肝脏受损;与C组比较,TNK组小鼠肝脏病理表现以轻度至中度脂肪变性为主,肝细胞形态大致正常,肝细胞内脂肪空泡减少,炎性细胞浸润减少。（3）16S rRNA生物信息学分析:与N组比,C组小鼠的肠道群落丰富度和多样性降低。在门水平分析:与N组比,C组小鼠的厚壁菌门的相对丰度增加,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度减少;在属水平分析:与N组比,C组unclassified＿f＿＿Lachnospiraceae、Rikenellaceae＿RC9＿gut＿group和Roseburia丰度增加,norank＿f＿＿Bacteroidales＿S24＿7＿group和Lachnospiraceae＿UCG＿006的丰度减少,差异有统计学意义（p<0.05）;与C组相比,TNK组小鼠的肠道群落丰富度和多样性增加。在门水平分析:TNK组小鼠的厚壁菌门的相对丰度减少,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度增加。在属水平分析:与C组相比,TNK组小鼠的Helicobacter和Prevotellaceae＿UCG＿001的丰度减少,差异有统计学意义（p<0.05）。（4）TLR4/NF-κBp65信号通路的影响:与N组比较,C组小鼠血清中LPS、肝脏组织中TNF-a、IL-6、IL-lβ、TLR4和NF-κBp65表达水平升高,结肠组织中ZO-1和Occludin水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与C组比较,TNK组小鼠血清中LPS、肝脏组织中TNF-a、IL-6、IL-lβ、TLR4和NF-κBp65表达水平降低,结肠组织中ZO-1和Occludin蛋白表达水平升高,具有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）糖耐康可有效地改善db/db小鼠的糖脂代谢和胰岛素抵抗。（2）糖耐康可增加db/db小鼠肠道菌群的丰富度和多样性,调节肠道菌群的结构并减少了产生LPS的幽门螺杆菌（Helicobacter）。（3）糖耐康对db/db小鼠肠道粘膜损伤有修复作用,上调紧密连接蛋白Occludin及ZO-1的表达,降低血循环LPS水平,通过调节TLR4/NF-κBp65信号通路,减轻炎症反应,改善胰岛素抵抗。
刘鑫[9]（2020）在《益糖康调控PEDF激活PI3K/Akt及AMPK信号通路改善T2DM大鼠IR的机制研究》文中研究指明目的:通过动物实验,观察益糖康对2型糖尿病大鼠血糖、胰岛素、血脂等糖脂代谢相关指标、肝脏组织病理变化、色素上皮衍生因子及PI3K/Akt和AMPK信号通路关键蛋白表达的影响;通过细胞实验,观察益糖康含药血清对胰岛素抵抗Hep G2细胞和3T3-L1细胞形态、活力、葡萄糖消耗量及细胞中PI3K/Akt和AMPK信号通路关键蛋白的影响,研究益糖康对糖尿病大鼠糖脂代谢的调节作用,对胰岛素抵抗的改善作用,并初步探讨其作用机制,旨在为中医药治疗糖尿病提供实验依据,努力探寻新的治疗靶点。材料与方法:论文一:SPF雄性SD大鼠60只,根据随机数字表法将大鼠分为正常对照组15只、高脂饮食组45只。正常对照组大鼠予普通饲料、高脂饮食组大鼠予高脂高糖饮食喂养。8周后,禁食12小时,腹腔注射链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型。成模后根据大鼠血糖随机分为模型对照组15只,益糖康组15只,二甲双胍组15只。根据大鼠与人等效剂量换算公式,计算出大鼠的灌胃用量。造模成功后第2天开始,正常对照组和模型对照组予0.9%生理盐水10ml/kg/d灌胃,益糖康组予9.45ml/kg/d益糖康煎剂灌胃、二甲双胍组予9ml/kg/d二甲双胍溶液灌胃,每日1次,连续8周。每2周测量体重和血糖。干预结束后,ELISA法检测红细胞裂解液中Hb A1c含量和血浆中FINS含量,比色法检测血浆中TC、TG、LDL-C、HDL-C含量,HE染色法观察大鼠肝脏组织形态变化,高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验检测胰岛素抵抗情况。论文二:实验动物、实验药品及动物的饲养、分组、给药方法同论文一。采用ELISA法检测各组大鼠血清、肝脏和脂肪中组织的PEDF含量、western-blot法检测各组大鼠肝脏组织中PI3K、Akt、GSK-3β蛋白及其磷酸化的表达水平、肝脏和脂肪组织中AMPK、ATGL蛋白及其磷酸化的表达水平、免疫荧光法检测肝脏组织中PI3K、Akt、GSK-3β、AMPK、ATGL磷酸化的表达水平。论文三:SPF雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法将大鼠分为正常组10只、益糖康组10只、二甲双胍组10只。分别予生理盐水10ml/kg、益糖康煎剂18.9ml/kg、二甲双胍片溶液18ml/kg灌胃,每天1次,连续7天,制备空白血清及含药血清。建立胰岛素抵抗Hep G2细胞及3T3-L1细胞模型,并分别分成正常组、模型组、益糖康组、二甲双胍组、PEDF组,予不同浓度的药物进行干预。应用倒置显微镜观察细胞形态变化、CCK-8法检测细胞活力、葡萄糖酶法检测细胞葡萄糖消耗量,western-blot法检测细胞中PI3K、Akt、GSK-3β、AMPK、ATGL蛋白及其磷酸化的表达水平。结果:论文一:1.益糖康对T2DM大鼠的进食量、饮水量、小便量等方面具有调节作用。2.干预前,与正常对照组相比,各组大鼠体重均显着增加（P<0.01）。干预第2周和第4周后,益糖康组和二甲双胍组大鼠体重下降较模型对照组更为明显（P<0.01）。干预6周和8周后,模型对照组大鼠体重下降较益糖康组和二甲双胍大鼠更为明显（P<0.01、P<0.05）。随着干预时间的增加,益糖康组、二甲双胍组大鼠体重下降逐渐趋于平稳,两组间没有统计学差异（P>0.05）。3.干预前,与正常对照组相比,模型对照组组大鼠FBG均显着升高（P<0.01）。干预2、4、6、8周后,与益糖康组和二甲双胍组大鼠FBG均显着降低（P<0.01）。干预第6周和第8周后,益糖康组大鼠FBG高于二甲双胍组,差异有统计学意义（P<0.05）。4.与正常对照组相比,模型对照组大鼠Hb A1c、FINS水平显着增加（P<0.01）;与模型对照组相比,益糖康组、二甲双胍组大鼠Hb A1c、FINS均显着下降（P<0.01）,两组间没有统计学差异（P>0.05）。5.与正常对照组相比,模型对照组大鼠TC、TG、LDL-C显着增加,HDL-C显着下降（P<0.01）;与模型对照组相比,益糖康组、二甲双胍组大鼠TC、TG、LDL-C显着下降,HDL-C明显增加（P<0.01）。与益糖康组相比,二甲双胍组大鼠TC较高（P<0.01）,两组间TG、LDL-C、HDL-C差异没有统计学意义（P>0.05）。6.高胰岛素-正葡萄糖实验示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠稳态BG显着升高、GIR显着下降（P<0.01）。与模型对照组相比,两个给药组大鼠BG明显下降、GIR明显升高（P<0.01）,但两组间差异无统计学意义（P>0.05）。7.HE染色显示,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝细胞排列较为规整、细胞体积、类脂空泡等病理改变明显减轻,受损的肌纤维,细胞核紊乱、移位等均有不同程度的改善。论文二:1.与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清PEDF含量显着增加,肝脏、脂肪组织中PEDF表达水平显着降低（P<0.01）;与模型对照组比较,益糖康和二甲双胍组血清PEDF含量下降,肝脏和脂肪组织中PEDF表达水平显着升高（P<0.01）,两治疗组间无明显差异（P>0.05）。2.Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,各组大鼠肝脏中的PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无显着性差异（P>0.05）,p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β表达下降（P<0.01）。与模型对照组相比,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝脏中的p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β表达水平显着增加（P<0.01）,两治疗组间没有统计学差异（P>0.05）。3.Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,各组大鼠肝脏、脂肪中的AMPK、ATGL表达水平无显着性差异（P>0.05）,p-AMPK、p-ATGL表达下降（P<0.01）。与模型对照组相比,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝脏、脂肪中的p-AMPK、p-ATGL表达水平显着增加（P<0.01）,两治疗组间没有统计学差异（P>0.05）。论文三:1.与正常组相比,模型组Hep G2细胞和3T3-L1细胞的活力和葡萄糖消耗量明显下降（P<0.01）。与模型组相比,各组Hep G2细胞和3T3-L1细胞的细胞活力和葡萄糖消耗量均有不同程度的增加（P<0.01）,但三干预组间无统计学差异（P>0.05）。2.Hep G2细胞:Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组PEDF水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组中PEDF水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中PEDF组显着高于益糖康组和二甲双胍组（P<0.01）,益糖康组和二甲双胍组间无统计学差异（P>0.05）。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组PEDF水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组中PEDF水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中益糖康组和PEDF组高于二甲双胍组（P<0.05、P<0.01）、益糖康组和PEDF组无统计学差异（P>0.05）。3.Hep G2细胞:与正常组相比,模型组中PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无明显区别（P>0.05）,p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组中p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中,益糖康组和PEDF组p-PI3K水平高于二甲双胍组（P<0.01）;PEDF组p-Akt水平高于二甲双胍组（P<0.01）,益糖康组与二甲双胍组和PEDF组相比无统计学差异（P>0.05）;三组间p-GSK-3β水平差异无统计学意义（P>0.05）。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无明显区别（P>0.05）,p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组中p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中,益糖康组和PEDF组p-PI3K水平显着高于二甲双胍组（P<0.05、P<0.01）;PEDF组p-Akt、p-GSK-3β水平明显高于二甲双胍组（P<0.05）、益糖康组和二甲双胍组及PEDF组间无统计学差异（P>0.05）。4.Hep G2细胞:与正常组相比,模型组中AMPK、ATGL表达水平无明显区别（P>0.05）,p-AMPK、p-ATGL水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组p-AMPK、p-ATGL水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中PEDF组p-AMPK水平明显高于益糖康组和二甲双胍组（P<0.01）,益糖康组和二甲双胍组间无统计学差异（P>0.05）;PEDF组p-ATGL水平高于二甲双胍组（P<0.05）,益糖康组与二甲双胍组和PEDF组间无统计学差异（P>0.05）。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组中AMPK、ATGL表达水平无明显区别（P>0.05）,p-AMPK、p-ATGL水平显着降低（P<0.01）。与模型组相比,各干预组p-AMPK、p-ATGL水平均有不同程度的增加（P<0.01）,其中PEDF组p-AMPK水平明显高于益糖康组和二甲双胍组（P<0.01）,益糖康组和二甲双胍组间无统计学意义（P>0.05）;各干预组p-ATGL水平之间无统计学意义差异（P>0.05）。结论:1.益糖康能降低T2DM大鼠血糖水平、调节糖代谢、改善胰岛素抵抗;2.益糖康能调节T2DM大鼠血脂水平、改善脂代谢紊乱;3.益糖康可能通过上调肝脏和脂肪组织中的PEDF表达,激活PI3K/Akt和AMPK信号通路改善T2DM大鼠胰岛素抵抗。
吴娜媛（Nuttida Siriyothin）[10]（2019）在《半夏泻心汤调控氧化应激及NF-κB/iNOS信号通路改善T2DM-IR的分子机制研究》文中研究指明目的:观察半夏泻心汤对2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）大鼠氧化应激反应及核转录因子-κB（Nuclear transcription factor-κB,NF-κB）、诱生型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,iNOS）、磷脂酰肌醇-3激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）表达的影响,探讨半夏泻心汤改善T2DM-IR胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）的可能分子机制。方法:选取120只雄性清洁级（specific pathogen free,SPF）斯泼累格·多雷（Sprague Dawley,SD）大鼠,普通标准饲料适应性喂养1周后,随机分为正常对照组10只和2型糖尿病T2DM预造模组110只,前者予普通饲料,后者予以高脂高糖饲料喂养15天后,禁食12h,腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）35 mg/kg,5天后重复上述操作。操作次数为2次,构造模完成72小时后,尾部取穴血检测空腹血糖,在空腹条件下采用剪尾法选择空腹以血糖值在16.7-30.0 mmol/L范围,且伴明显多饮、多食、多尿为T2DM成模标准,并将成模的2型糖尿病大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组、半夏泻心汤高剂量组、半夏泻心汤中剂量组、半夏泻心汤低剂量组,每组10只。实验期间模型组及干预组持续以喂高脂高糖饲料喂养;二甲双胍及半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠的给药剂量分别为0.16g/kg、13.96 g/kg、6.98 g/kg、3.49g/kg,正常对照组及模型组大鼠灌服同等体积的生理盐水,连续灌胃干预12周;实验期间观察各组大鼠的一般状态,每周定时记录饮食、饮水量,并检测体重及血糖变化;取材后观察各组大鼠胰腺和肝脏组织的病理改变,测定血脂,肝功能,空腹血清胰岛素,氧化应激指标:超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）,以及NF-κB、iNOS和PI3K的表达。结果:1)大鼠基本情况:灌胃前三周,半夏泻心汤高、中、低剂量组和二甲双胍组大鼠摄食、饮水量偏多,形体消瘦。在实验过程中,有些大鼠毛色逐渐出现枯黄无泽,摄食、饮水量偏多,烦躁易惊,体重下降,但灌药第3周后,半夏泻心汤各组和二甲双胍组大鼠整体情况则有明显改善,精神状态较好,及皮毛光泽度较好好转,摄食、饮水量均较模型组减少,但体重呈增加趋势。2)空腹血糖检测结果:半夏泻心汤高剂量组,大鼠在第3周空腹血糖（fasting plasma glucose,FPG）注意全称水平开始降低,在第6-12周FPG水平在各周均稳定在16-20 mmol/L;半夏泻心汤中剂量组,大鼠在第5周FPG水平显着降低,在第5-12周FPG水平在各周均稳定在14-18 mmol/L,半夏泻心汤低剂量组,大鼠在第4周FPG水平开始降低,在第9-12周FPG水平在各周均稳定在18-20 mmol/L。实验过程中发现,平均FPG水平（第1周至12周）与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠FPG水平有显着降低,差异具有显着性（p<0.05）。3)胰岛素检测结果:与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组,和二甲双胍组大鼠血清胰岛素水平均有稍降低,差异具有显着性（p<0.05）。与正常对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠有胰岛素水平有增高,但差异无统计学意义。4)胰岛素抵抗水平检测结果:计算胰岛素抵抗指数后发现,与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠胰岛素抵抗指数（Insulin resistance index,HOMAIR）表达水平均有降低,差异具有显着性（p<0.01）。与正常对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠IRI表达水平稍有增高,差异具有显着性（p<0.01）。5)肝功能检测结果:半夏泻心汤可以降低天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、谷氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的活力水平。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠均有AST活力水平降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤高剂量组大鼠有ALT活力水平降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤中、低剂量组大鼠ALT活力水平有降低,但差异无统计学意义;半夏泻心汤低剂量组大鼠ALP活力水平均降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤高、中剂量组大鼠ALP活力水平均稍降低,但差异无统计学意义。6)血脂检测结果:半夏泻心汤能降低血清总胆固醇（total cholesterol,TC）和甘油三酯（triglycerides,TG）的水平,与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠均有TC水平降低,但半夏泻心汤中剂量组大鼠血清TC水平有显着降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠血清TG水平均有显着降低,差异具有显着性（p<0.05）。半夏泻心汤能降低血清低密度脂蛋白胆固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C）、增加高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）的水平,与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组HDL-c水平稍高,但差异无统计学意义;半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠均有血清LDL-c水平降低,但差异无统计学意义。7)胰腺组织氧化应激指标检测结果:半夏泻心汤可以降低MDA含量,增加CAT、GSH-Px、SOD活力水平。与模型对照组相比,半夏泻心汤高剂量组MDA含量水平有降低,但差异无统计学意义;半夏泻心汤中剂量组大鼠有CAT活力表达水平稍高,差异无统计学意义;半夏泻心汤中剂量组大鼠有GSH-Px活力表达水平升高,差异具有显着性（p<0.01）;半夏泻心汤中剂量组大鼠有GSH-Px活力表达水平升高,差异无统计学意义;半夏泻心汤高、中剂量组大鼠有SOD活力表达水平显着升高,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤低剂量组大鼠有SOD活力表达水平也有升高,但无统计学意义。8)肝组织氧化应激指标检测结果:半夏泻心汤可以降低MDA含量,增加GSHPx、SOD活力水平。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组MDA含量水平均有降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤中、低剂量组大鼠有GSH-Px活力表达水平增高,但差异无统计学意义;半夏泻心汤高剂量组大鼠有SOD活力表达水平显着升高,差异具有显着性（p<0.01）;半夏泻心汤中剂量组有SOD活力表达水平也升高,但差异无统计学意义。9)肝脏PI3K蛋白检测结果:与模型对照组相比,半夏泻心汤高、低剂量组大鼠PI3K蛋白表达显着升高,半夏泻心汤中剂量组PI3K蛋白表达降低。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中剂量组虽有PI3K浓度表达水平增加,但差异无统计学意义。10)肝脏NF-κB蛋白检测结果:半夏泻心汤可以降低NF-κB表达水平。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中剂量组NF-κB蛋白表达显着降低,半夏泻心汤低剂量组NF-κB蛋白表达不同程度降低。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中剂量组大鼠NF-κB浓度表达水平显着降低,差异具有显着性（p<0.05）;半夏泻心汤低剂量组大鼠NF-κB浓度表达水平降低,但差异无统计学意义。11)肝脏iNOS蛋白检测结果:半夏泻心汤可以降低iNOS表达水平。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组iNOS蛋白表达降低。与模型对照组相比,半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠iNOS浓度表达水平均有显着降低,差异具有显着性（p<0.05）。12)病理学检测结果:大鼠胰腺、肝脏组织病理学比较发现,模型对照组的胰腺组织中胰岛内少量胰岛细胞坏死,少量胰岛细胞胞质疏松、空泡状;肝组织中可见炎性细胞灶性浸润,有少量肝细胞脂肪变性、轻度水肿变性、细胞肿胀,胰腺和肝脏组织组织未见其它明显异常。二甲双胍组、半夏泻心汤高、中、低剂量组大鼠胰腺和肝脏组织病理结构均好转,组织未见其它明显异常。结论:1)半夏泻心汤在一定程度上可以纠正T2DM大鼠糖脂代谢紊乱,改善IR。2)半夏泻心汤可增加T2DM大鼠胰腺和肝组织中抗氧化标志物SOD、GSH-Px,而降低脂质过氧化标志物MDA的表达水平,表明其改善T2DM-IR可能与调控氧化应激反应相关。3)半夏泻心汤可调控T2DM大鼠肝脏NF-κB、iNOS、PI-3K蛋白的表达,而胰岛素信号转导相关蛋白PI-3K表达水平的上调可能与半夏泻心汤改善T2DM-IR有关。
二、消渴康对大鼠肝细胞内线粒体活性的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、消渴康对大鼠肝细胞内线粒体活性的影响（论文提纲范文）
（1）经典名方玉液汤通过PI3K/AKT信号途径改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 2型糖尿病胰岛素抵抗的中医药研究进展 |
| 综述二 玉液汤现代药理及临床应用研究进展 |
| 综述三 中医药通过PI3K/AKT信号通路改善2型糖尿病胰岛素抵抗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一章 基于网络药理学和分子对接技术探讨玉液汤治疗2型糖尿病的作用机制 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 玉液汤对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的影响及肝脏保护作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 玉液汤通过PI3K/AKT信号通路改善2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 玉液汤改善PA诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点及不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 结局指标 |
| 1.5 研究方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 检索结果及基本特征分析 |
| 2.2 文献质量评价 |
| 2.3 核心药物分析 |
| 2.4 临床疗效分析 |
| 2.5 不良反应 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲料配方 |
| 1.3 实验药物 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 药物配制 |
| 2.2 实验动物模型制备及分组 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 造模前两组大鼠比较结果 |
| 3.2 造模期两组大鼠变化情况 |
| 3.3 药物干预后各组大鼠变化情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 代谢综合征痰证大鼠模型建立与评价 |
| 4.2 代谢综合征痰证能量代谢的变化 |
| 4.3 代谢综合征痰证能量失衡的病理机制 |
| 结论 |
| 研究创新性成果 |
| 研究不足与工作展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 代谢综合征中医药研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）糖肾方基于FXR通路调节脂代谢“肝肾同治”的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一: 中药复方干预糖尿病肾病脂代谢紊乱研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二: FXR核受体在糖尿病肾病作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 糖肾方通过核受体FXR通路调节肾脏脂代谢研究 |
| 前言 |
| 第一节 糖肾方对自发性2型糖尿病db/db小鼠肾损害的药效学观察 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二节 糖肾方调节FXR通路改善db/db小鼠肾脏脂质沉积作用的机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第三节 糖肾方调节FXR通路改善棕榈酸钠刺激的肾小管上皮细胞脂质沉积的作用机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖肾方通过核受体FXR通路调节肝脏脂代谢研究 |
| 前言 |
| 第一节 糖肾方对自发性2型糖尿病db/db小鼠肝损害的药效学观察 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二节 糖肾方调节FXR通路改善db/db小鼠肝脏脂质沉积作用的机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第三节 糖肾方调节FXR通路改善棕榈酸钠刺激的AML12细胞脂质沉积的作用机制研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）基于miR-34a调控SIRT1/NF-κB信号通路探讨清润方改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一: microRNA在2型糖尿病胰岛素抵抗中的研究进展 |
| 1 microRNA概述 |
| 2 microRNA与胰岛素信号转导系统 |
| 3 microRNA与糖脂代谢紊乱 |
| 4 microRNA与炎症反应 |
| 5 小结与展望 |
| 综述二: 中医学对2型糖尿病胰岛素抵抗的认识及治疗概况 |
| 1 中医学对2型糖尿病胰岛素抵抗的理论认识 |
| 2 中医药治疗2型糖尿病胰岛素抵抗的研究概况 |
| 3 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一部分 清润方改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的体内实验研究 |
| 实验一 清润方对T2DM大鼠胰岛素抵抗作用的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 清润方改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗作用的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 清润方改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的体外实验研究 |
| 实验三 清润方对IR-HepG2细胞胰岛素抵抗作用的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 清润方改善IR-HepG2细胞胰岛素抵抗作用的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件 |
（5）基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述1 糖尿病周围神经病变的中医认识 |
| 1. 病名认识 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述2 microRNA在糖尿病慢性并发症中的研究进展 |
| 1. miRNA |
| 2. miRNA与糖尿病慢性并发症 |
| 3. 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验用药 |
| 3. 主要仪器设备 |
| 4. 主要试剂 |
| 方法 |
| 1. 糖络宁含药血清及正常大鼠血清的制备 |
| 2. 大鼠DRGn细胞的分离培养 |
| 3. DRGn细胞的NSE免疫荧光鉴定 |
| 4. CCK-8法测定DRGn细胞活性 |
| 5. 分组及培养基的配置 |
| 6. 氧化应激水平的测定 |
| 7. 实时荧光定量PCR技术检测miR-200a mRNA、PI3K mRNA的表达水平 |
| 8. Western blot技术检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的表达水平 |
| 9. 统计学方法 |
| 结果 |
| 1. DRGn细胞生长情况 |
| 2. DRGn细胞NSE免疫荧光鉴定 |
| 3. 不同浓度葡萄糖及糖络宁含药血清对DRGn细胞活性的影响 |
| 4. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞氧化应激水平的影响 |
| 5. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中miR-200a mRNA、PI3K mRNA表达水平的影响 |
| 6. 糖络宁对高糖培养下DRGn细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响 |
| 讨论 |
| 1. 氧化应激机制在DPN中的作用 |
| 2. 糖络宁对氧化应激的影响 |
| 3. miR-200家族在DPN中的作用 |
| 4. 糖络宁对PI3K/AKT信号通路的调控 |
| 5. 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路“调脏通络”电针改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗水平的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 “调脏通络”电针干预对db/db小鼠疗效观察的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 “调脏通络”电针干预对db/db小鼠糖代谢影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 “调脏通络”电针干预对db/db小鼠肝脏组织形态学影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 各组小鼠肝脏形态学变化结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 “调脏通络”电针干预对db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt、p-GSK-3β含量影响的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（7）半夏泻心汤对2型糖尿病代谢性损伤的临床及实验研究（论文提纲范文）
| 摘要(中文) |
| ABSTRACT(英文) |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 理论探讨及相关研究进展 |
| 1 网络药理学研究 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 网络药理学研究方法 |
| 1.3 药物、疾病网络及其相关数据库 |
| 1.4 分子相互作用组网络及其相关数据库 |
| 1.5 中医药与网络药理学 |
| 2 T2DM发病机制研究进展 |
| 2.1 T2DM的发病原因 |
| 2.1.1 遗传因素 |
| 2.1.2 环境因素 |
| 2.2 T2DM发病机制 |
| 2.2.1 胰岛素抵抗与β细胞功能紊乱 |
| 2.2.2 糖脂毒性 |
| 2.2.3 炎症与自噬 |
| 2.2.4 线粒体功能障碍 |
| 2.2.5 内质网应激 |
| 2.2.6 氧化应激 |
| 3 AMPK信号通路与T2DM的关系 |
| 3.1 调节糖脂代谢 |
| 3.2 诱导自噬抑制炎症 |
| 3.3 缓解氧化应激 |
| 3.4 调节线粒体功能 |
| 4 “助脾散精”法及代表方 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 半夏泻心汤治疗糖尿病的网络药理学研究 |
| 引言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 半夏泻心汤作用靶标预测 |
| 1.2 糖尿病靶标预测数据库 |
| 1.3 药物—疾病相互作用网络构建 |
| 1.4 KEGG通路富集分析 |
| 1.5 GO通路富集分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 药物靶标预测 |
| 2.2 疾病靶标预测 |
| 2.3 药物——疾病交集基因韦恩分布 |
| 2.4 交集基因编码蛋白网络互作图构建 |
| 2.5 药物——疾病交集基因KEGG通路富集分析 |
| 2.6 疾病交集基因GO通路富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 临床研究 |
| 引言 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 西医诊断标准 |
| 1.2.2 中医诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排出标准 |
| 1.5 脱落标准 |
| 1.6 中止/终止试验标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究设计 |
| 2.2 干预方案 |
| 2.2.1 基础治疗 |
| 2.2.2 药物干预法 |
| 2.3 观测指标 |
| 2.3.1 一般情况 |
| 2.3.2 疗效性指标 |
| 2.3.3 相关指标测定 |
| 2.4 试验评价 |
| 2.4.1 疗效评价 |
| 2.4.2 安全性评价 |
| 2.5 样本量计算 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 纳入病例 |
| 3.2 受试者基线资料 |
| 3.3 半夏泻心汤对T2DM患者给药前后FPG、2HPG和HbAlc的影响 |
| 3.4 半夏泻心汤对T2DM患者给药前后FINS、HOMA-IR变化的影响 |
| 3.5 半夏泻心汤对T2DM患者中医症状、体征积分治疗前后变化比较 |
| 3.6 半夏泻心汤对T2DM患者给药前后TC与TG变化的影响 |
| 3.7 半夏泻心汤对T2DM患者血浆中IL-6和TNF-α含量影响 |
| 3.8 半夏泻心汤对T2DM患者血浆中ADPN、FFA浓度变化影响 |
| 3.9 半夏泻心汤对T2DM患者血浆中ATP浓度、AMP/ATP比值变化的影响 |
| 3.10 半夏泻心汤对T2DM患者血浆中SIRT1、AMPKα、PGC-1 α浓度变化的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 选择“脾虚胃热型”T2DM患者的依据 |
| 4.2 半夏泻心汤对脾虚胃热型T2DM患者糖脂代谢的影响 |
| 4.3 半夏泻心汤对脾虚胃热型T2DM患者AMPK信号通路关键因子的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 基础研究 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验药物 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.1.1 造模及分组 |
| 2.1.2 取材及样本制备 |
| 2.2 指标检测及方法 |
| 2.2.1 一般情况 |
| 2.2.2 体重变化的情况 |
| 2.2.3 空腹血糖(FPG)监测 |
| 2.2.4 胰岛素(Insulin)水平检测 |
| 2.2.5 HOMA-IR, HOMA- β指数 |
| 2.2.6 TC、TG、FFA、ADPN水平检测 |
| 2.2.7 TNF-α和IL-6水平的测定 |
| 2.2.8 SOD、GSH-Px水平检测 |
| 2.2.9 ATP、ATP/AMP水平检测 |
| 2.2.10 实时荧光定量(PCR)检测AMPK α、PGC-1 α、PPAR α、SIRT1 |
| 2.2.11 免疫印迹法(Western blot,WB)检测AMPK α、SIRT1、PGC-α、PPAR α |
| 2.2.12 HE染色与油红0染色 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠一般情况 |
| 3.2 半夏泻心汤对DM大鼠血糖的影响 |
| 3.3 半夏泻心汤对DM大鼠胰岛素水平的影响 |
| 3.4 半夏泻心汤对DM大鼠HOMA-β、HOMA-IR的影响 |
| 3.5 半夏泻心汤对DM大鼠血清中TC、TG、ADPN、FFA指标影响 |
| 3.6 半夏泻心汤对DM大鼠血清中IL-6,TNF-α含量的影响 |
| 3.7 半夏泻心汤对DM大鼠肝脏组织中GSH-Px、SOD活性的影响 |
| 3.8 半夏泻心汤对DM大鼠肝脏组织中ATP、AMP/ATP的影响 |
| 3.9 半夏泻心汤对DM大鼠肝脏组织中AMPK α mRNA、SIRT1mRNA、PGC-1α mRNA、PPAR α mRNA含量的影响 |
| 3.10 半夏泻心汤对DM大鼠肝脏组织中AMPKα、SIRT1、PGC-1 α、PPARα蛋白表达的影响 |
| 3.11 各组模型大鼠胰腺组织病理学比较 |
| 3.12 油红O染色法观察大鼠肝脏组织光镜下脂滴 |
| 3.13 各组模型大鼠肝脏组织病理学比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 相关理论性探讨 |
| 4.2 实验探讨 |
| 4.2.1 T2DM大鼠模型建立及评价 |
| 4.2.2 半夏泻心汤对T2DM大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、HOMA-β的影响 |
| 4.2.3 半夏泻心汤对T2DM大鼠TC、TG、ADPN、FFA、肝脏油红0染色的影响 |
| 4.2.4 半夏泻心汤对T2DM大鼠炎症因子和氧化应激的影响 |
| 4.2.5 半夏泻心汤对T2DM大鼠胰腺、肝脏组织形态学的影响 |
| 4.2.6 半夏泻心汤对T2DM大鼠AMPK信号通路关键分子的影响 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 不足与展望 |
| 文献综述 AMP活化蛋白激酶研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表的学术论文及科研成果 |
（8）糖耐康对db/db小鼠肠道菌群及TLR4/NF-κBp65信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 理论探讨 |
| 1 综述一中医药防治2型糖尿病的研究进展 |
| 1.1 中医对2型糖尿病病因病机的认识 |
| 1.2 中医药对2型糖尿病的治疗 |
| 1.3 中医药防治2型糖尿病的作用机制研究 |
| 1.4 展望 |
| 2 综述二肠道菌群与2型糖尿病的研究进展 |
| 2.1 肠道菌群失调诱发2型糖尿病的机制研究 |
| 2.2 调控肠道菌群防治2型糖尿病 |
| 2.3 展望 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 实验一 糖耐康对db/db小鼠糖脂代谢的影响 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 小结 |
| 2 实验二 糖耐康对db/db小鼠肠道菌群的调节作用 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 小结 |
| 3 实验三 糖耐康对db/db小鼠TLR4/NF-κBp65信号通路的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 小结 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）益糖康调控PEDF激活PI3K/Akt及AMPK信号通路改善T2DM大鼠IR的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 益糖康对T2DM大鼠糖脂代谢及IR的影响 |
| (前言) |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 益糖康对T2DM大鼠PEDF及其下游信号通路调控作用的机制研究 |
| (前言) |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 益糖康含药血清对IR-HepG2细胞和IR-3T3-L1 细胞PEDF表达及其下游信号通路活化作用的研究 |
| (前言) |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 色素上皮衍生因子与糖尿病相关疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药复方益糖康调节糖脂代谢改善IR的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）半夏泻心汤调控氧化应激及NF-κB/iNOS信号通路改善T2DM-IR的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物组成与制备 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 动物模型的建立 |
| 2.3 动物给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 检测指标及方法 |
| 2.6 统计学处理 |
| 2.7 技术路线图 |
| 3.实验结果分析 |
| 3.1 一般状态观察 |
| 3.1.1 各组大鼠一般状态观察 |
| 3.1.2 糖尿病大鼠模型观察 |
| 3.1.3 各组大鼠空腹血糖变化情况 |
| 3.1.4 各组大鼠血脂变化情况 |
| 3.1.5 各组大鼠肝功能水平比较 |
| 3.2 胰腺的保护作用 |
| 3.2.1 各组模型大鼠胰腺组织病理学比较 |
| 3.2.2 胰岛素水平情况 |
| 3.2.3 HOMA-B 情况 |
| 3.2.4 各组大鼠胰腺组织中抗氧化标志物的情况 |
| 3.3 肝脏胰岛素抵抗及机制 |
| 3.3.1 各组模型大鼠肝脏组织病理学比较 |
| 3.3.2 HOMA-IR 情况 |
| 3.3.3 各组大鼠肝脏组织中抗氧化标志物的情况 |
| 3.3.4 各组大鼠肝组织 PI3K 表达情况 |
| 3.3.5 各组大鼠肝组织NF-κB表达情况 |
| 3.3.6 各组大鼠肝组织i-NOS表达情况 |
| 4.讨论与分析 |
| 4.1 现代医学对糖尿病的认识 |
| 4.1.1 对2型糖尿病的认识 |
| 4.1.2 2型糖尿病的发病机制 |
| 4.2 对氧化应激的认识 |
| 4.3 糖尿病与氧化应激 |
| 4.4 氧化应激对胰岛β细胞的影响 |
| 4.4.1 氧化应激直接引起胰岛β细胞损伤 |
| 4.4.2 氧化应激通过氧化还原敏感性信号途径引起胰岛β细胞损伤 |
| 4.5 氧化应激对2型糖尿病肝脏功能的影响 |
| 4.6 胰岛素抵抗与胰岛素信号通路讨论 |
| 4.6.1 胰岛素抵抗的概念 |
| 4.6.2 胰岛素信号通路与胰岛素抵抗 |
| 4.7 对糖尿病与抗氧化应激的认识 |
| 4.8 消渴病的认识 |
| 4.8.1 消渴的病名及含义 |
| 4.8.2 消渴的病因 |
| 4.8.3 消渴的病机 |
| 4.8.4 脾脏与胰腺的关系 |
| 4.8.5 消渴与脾 |
| 4.8.6 消渴与肝 |
| 4.9 半夏泻心汤的认识 |
| 4.9.1 半夏泻心汤与脾胃 |
| 4.9.2 半夏泻心汤与肝 |
| 4.10 泰国传统医学与糖尿病 |
| 4.10.1 四塔的含义及基本内容 |
| 4.10.2 糖尿病在泰国传统医学的认识 |
| 4.10.3 泰国传统医学的药味 |
| 4.10.4 泰国传统医学对糖尿病(Baowan)的治疗方法 |
| 4.10.5 从泰国传统医学理论分析半夏泻心汤 |
| 4.11 半夏泻心汤与抗氧化标志物 |
| 4.12 半夏泻心汤与氧化应激和PI-3K表达的关系 |
| 4.13 半夏泻心汤与NF-KB,iNOS的关系 |
| 4.14 现代医学、中医学和泰国传统医学对糖尿病认识的一致性 |
| 5.结论 |
| 6.问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一:综述 半夏泻心汤之抗氧化、降血糖、保护肝脏的药理研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二:在校期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、消渴康对大鼠肝细胞内线粒体活性的影响（论文参考文献）
- [1]经典名方玉液汤通过PI3K/AKT信号途径改善2型糖尿病胰岛素抵抗的作用及机制研究[D]. 姜立娟. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]从AMPK-HIF1-PKM2信号通路探讨代谢综合征痰证大鼠的生物学基础[D]. 魏佳. 福建中医药大学, 2021(01)
- [3]糖肾方基于FXR通路调节脂代谢“肝肾同治”的作用机制研究[D]. 申正日. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]基于miR-34a调控SIRT1/NF-κB信号通路探讨清润方改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的作用机制[D]. 王泽. 中国中医科学院, 2020(01)
- [5]基于miRNA-200a探讨糖络宁改善高糖下大鼠背根神经元氧化应激机制[D]. 刘琴. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路“调脏通络”电针改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗水平的机制研究[D]. 杨育农. 长春中医药大学, 2020(08)
- [7]半夏泻心汤对2型糖尿病代谢性损伤的临床及实验研究[D]. 杨旭. 成都中医药大学, 2020(02)
- [8]糖耐康对db/db小鼠肠道菌群及TLR4/NF-κBp65信号通路的影响[D]. 王明慧. 陕西中医药大学, 2020(01)
- [9]益糖康调控PEDF激活PI3K/Akt及AMPK信号通路改善T2DM大鼠IR的机制研究[D]. 刘鑫. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [10]半夏泻心汤调控氧化应激及NF-κB/iNOS信号通路改善T2DM-IR的分子机制研究[D]. 吴娜媛（Nuttida Siriyothin）. 成都中医药大学, 2019