一、贲门失弛缓症动物模型的建立及其机制探讨（论文文献综述）
李荣[1]（2021）在《不同隧道开口法经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的效果评价》文中认为目的经口内镜下肌切开术（POEM）作为一种用于治疗贲门失弛缓症（AC）的新兴微创内镜技术,自2008年问世以来,在全世界得到了越来越广泛的应用。随着POEM在临床中的广泛开展,POEM的术式趋于多样化,其中隧道开口的方式不同将直接影响手术效果,但具体开口方式的临床疗效尚不十分明确。本文拟通过比较纵开口法与倒“T”形开口法两种不同隧道开口法POEM治疗AC患者的临床疗效,评价不同隧道开口法的安全性及有效性。方法回顾性分析2016年1月—2019年12月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院行POEM治疗的55例AC患者的临床资料,包括患者的一般情况（性别、年龄、病程、住院时间、手术时间、既往相关治疗史等）、贲门失弛缓症临床症状评分系统（Eckardt评分）、术中术后短时间内的并发症（如气体相关的并发症、黏膜破损和出血等）发生情况等。通过使用统计软件进行具体的数据分析,得出具有可比性的量化数据,分析其代表的统计学意义。结果本研究共纳入在烟台毓璜顶医院行POEM治疗的AC患者55例,其中纵开口法组29例（男16例,女13例）,倒“T”形开口法组26例（男7例,女19例）,年龄18～77岁,病程1周～25年。术前有6例患者接受过AC相关其他治疗且均为电子内镜下球囊扩张术治疗,其中纵开口法组2例,倒“T”形开口法组4例。55（55/55,100%）例患者全部成功实施POEM手术,平均住院时间10.67±2.80天,术后评测Eckardt评分均≤3,Eckardt评分由术前的4（4,5）分降至术后的2（2,2）分,较术前明显改善（P<0.05）,总体症状缓解率98.2%（54/55）。研究中选取的两组患者在年龄、病程、住院时间、手术时间、术前Eckardt评分、术后Eckardt评分等一般临床资料上均无显着统计学差异（P>0.05）。共有17（17/55,30.9%）例患者出现手术并发症,其中纵开口法组13（13/29,44.8%）例,之中气体相关并发症10例（10/29,34.5%）,发热（体温>38.0℃）2例,剧烈胸腹部疼痛2例,术中胃底黏膜裂伤出血并消化道穿孔1例,术后复发1例;倒“T”形开口法组4例（4/26,15.4%）,之中气体相关并发症2例（2/26,7.7%）,发热1例,术后出血1例。有患者存在1种以上并发症,以上并发症经术中及时处理及后续内科保守治疗后均好转。数据显示,纵开口法组总并发症发生率显着高于倒“T”形开口法组（44.8%（13/29）vs 15.4%（4/26）,P<0.05）,尤以气体相关并发症发生率更为明显（34.5%（10/29）vs 7.7%（2/26）,P<0.05）,差异有统计学意义（P<0.05）。虽然两组患者均成功实施手术,但对比术后疗效、短期并发症等情况,倒“T”形开口法POEM的安全性更高。结论倒“T”形开口法POEM不仅可以有效缓解病人的临床症状,还能降低患者术中和术后短期并发症的发生率。意义本研究收集青岛大学附属烟台毓璜顶医院行POEM治疗的AC病例,通过术中、术后并发症等相关可监测指标比较纵开口法与倒“T”形开口法两种不同隧道开口法POEM治疗的AC患者的临床疗效。期望对今后POEM技术有效治疗方案的选择有所帮助,以期改善贲门失弛缓症患者的预后及生存质量。
潘小丽[2]（2020）在《电针对功能性消化不良大鼠Cajal间质细胞的影响及机制研究》文中研究表明目的胃肠动力障碍是功能性消化不良（FD）的主要病理生理学基础。胃肠卡哈尔间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）结构和功能异常与胃肠动力障碍密切相关。本研究以FD大鼠为研究对象,选取足三里穴位,研究电针干预对FD大鼠胃肠ICC的影响,同时选用AMPK抑制剂Compound C,探讨电针通过AMPK/ULK1信号通路调节FD大鼠ICC自噬的可能作用机制。方法SPF级雄性SD大鼠82只,适应性喂养一周后,随机分为正常组（n=12）以及造模组（70只）。造模组大鼠采用郭氏夹尾刺激+隔日喂养+0℃生理盐水灌胃的多因素应激干预法构建FD模型,造模周期为2周。造模结束后,从中选取60只造模成功的大鼠随机分为模型组、电针组、假针刺组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组,每组各12只。电针组选取大鼠双侧后肢足三里穴位,针刺后连通韩氏穴位电针治疗仪,选择连续波,2Hz,1m A,干预疗程为1次/天,总共干预天数7天。假针刺组大鼠采用特制Streitberger装置针灸针,针头设计成套叠样式钝针头,当钝针头针刺向皮肤后,可自动缩回针套里面,接着使用配套的橡胶圈用医用胶布固定于相应部位,不予通电,其余同电针组。AMPK抑制剂组大鼠采用Compound C（20mg/kg）腹腔注射,1次/天,总共注射7天。电针+AMPK抑制剂组大鼠采用腹腔注射Compound C,剂量及干预疗程同AMPK抑制剂组,抑制剂注射完成20min后,给予电针干预,电针干预方法及疗程同电针组。在干预期间,给予正常组、模型组、抑制剂组大鼠进行束缚固定操作,保证各组实验条件一致性。干预前后期间,观察各组大鼠一般情况,测量大鼠体重、进食量。干预结束后,大鼠禁食不禁水24h,各组随机选取4只大鼠进行胃电图测定。各组剩余大鼠依次给予营养性半固体糊（2ml/100 g）、墨汁（1ml/100 g）灌胃,半小时以后给予麻醉药10%水合氯醛（0.35m L/100g）腹腔注射,依次麻醉大鼠后进行取材,测定各组大鼠胃内残留率和小肠推进率。取各组大鼠部分胃窦组织和十二指肠组织,HE染色观察胃窦组织和十二指肠组织病理形态学;Western blot检测各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit、Cx43、LC3、Beclin1、p62、p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、p-LKB1、LKB1、Ca MKK2蛋白表达;PCR检测各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit、Cx43、Beclin1 m RNA水平;免疫荧光双标法检测各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit/LC3、c-kit/Beclin1共定位表达情况;运用透射电镜观察各组大鼠胃窦和十二指肠组织ICC超微结构改变。结果1.电针对FD大鼠一般行为学、胃肠动力的影响各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织形态学（HE）改变:肉眼观察仅模型组、假针刺组大鼠胃黏膜颜色偏白,各组大鼠显微镜下观察,组织各层形态正常,未见溃疡、出血等器质性改变。（1）电针干预改善FD大鼠一般行为学指标造模前后比较:与正常组比较,其余五组大鼠体重增长均明显下调（均P<0.01）,且模型组、电针组、假针刺组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组组间进行比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。干预前后比较:与正常组比较,模型组、假针刺组两组大鼠体重增长均显着下调（均P<0.01）;与模型组比较,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠体重增长均显着上调（均P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组体重增长高于电针组和AMPK抑制剂组（均P<0.01）;电针组与AMPK抑制剂组两组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）)。（2）电针干预改善FD大鼠胃肠动力障碍各组大鼠胃内残留率变化:与正常组比较,模型组、假针刺组两组大鼠胃内残留率均显着升高（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃内残留率均显着降低,差异有统计学意义（均P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组大鼠胃内残留率分别低于电针组、AMPK抑制剂组（P<0.05,P<0.01）;电针组与AMPK抑制剂组两组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）。各组大鼠小肠推进率变化:与正常组比较,模型组、假针刺组两组小肠推进率均显着下降（均P<0.01）;与模型组比较,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组小肠推进率均显着上升,差异具有统计学意义（均P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组小肠推进率分别高于电针组、A MPK抑制剂组（P<0.05,P<0.01）;电针组与AMPK抑制剂组两组组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）各组大鼠胃电节律改变:与正常组比较,模型组、假针刺组两组大鼠胃电慢波主频率、主功率均显着降低（均P<0.01）;与模型组比较,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组胃电慢波主频率明显增加（P<0.01,P<0.05,P<0.01）,主功率也明显增加（均P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组主功率分别高于电针组、AMPK抑制剂组（P<0.01,P<0.05）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组胃电慢波主频率比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。2.电针对FD大鼠ICC的影响（1）Western blot检测c-kit、Cx43蛋白表达各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit蛋白表达水平如下:与正常组比较,模型组、假针刺组两组胃窦组织和十二指肠组织c-kit表达均明显减少（均P<0.01）;与模型组比较,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组胃窦组织和十二指肠组织c-kit表达增加（均P<0.01）;与电针组比较,AMPK抑制剂组胃窦组织和十二指肠组织c-kit表达量明显下调（P<0.01,P<0.05）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组胃窦组织和十二指肠组织c-kit表达明显上调（均P<0.01）;模型组与假针刺组、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间c-kit表达量无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43蛋白表达水平如下:模型组和假针刺组胃窦组织和十二指肠组织Cx43表达低于正常组（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组胃窦组织Cx43表达上调（均P<0.01）,十二指肠组织Cx43表达上调（P<0.01,P<0.05,P<0.01）;与电针组比较,AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织Cx43蛋白表达量明显下调（P<0.05）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织Cx43蛋白表达量明显上调（P<0.05）;模型组与假针刺组、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间Cx4表达比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。（2）q PCR检测c-kit、Cx43 m RNA表达水平各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit m RNA表达水平如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit m RNA表达明显下调（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit m RNA表达高于模型组（均P<0.01）;AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit m RNA表达低于电针组（均P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit m RNA表达量明显上调（均P<0.01）;模型组与假针刺组、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间c-kit m RNA无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43 m RNA表达水平如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43 m RNA表达明显下调（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43 m RNA表达高于模型组（均P<0.01）;与电针组比较,AMPK抑制剂组胃窦组织和十二指肠组织Cx43m RNA表达下调（均P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43 m RNA表达明显上调（均P<0.01）;模型组与假针刺组、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间Cx43 m RNA表达比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。3.电针对FD大鼠ICC自噬的影响（1）透射电镜观察ICC超微结构变化正常组ICC细胞呈长梭型或星型,核大,核周边缘呈异染色致密带,胞质和突起内有丰富的线粒体和大量中间丝,粗面和滑面内质网丰富,高尔基体发育成熟,胞质边缘可见大量细胞膜穴样内陷结构,基板多不连续,自噬体少见,向不同方向发出2条以上长突起,相邻ICC突起之间、ICC与胃肠SMC之间可见缝隙连接,还可见ICC分布与胃肠神经纤维束相邻,并形成突触样前后膜连接;模型组、假针刺组显示ICC超微结构破坏,核形态异常,胞质部分溶解,内有空泡,线粒体肿胀,内嵴消失,粗面内质网减少,可见明显的自噬体,突起断裂,与SMC缝隙连接减少;电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组ICC线粒体肿胀不明显,自噬体结构不明显,突起正常,可见缝隙连接和突触样连接。（2）Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组胃窦组织和十二指肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均低于模型组（均P<0.01）;AMPK抑制剂组大鼠十二指肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值高于电针组（P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值低于AMPK抑制剂组（P<0.05,P<0.01）;模型组与假针刺组之间、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1蛋白表达水平如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1表达上调（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1表达低于模型组（均P<0.01）;电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1表达低于AMPK抑制剂组（P<0.01,P<0.05）;模型组与假针刺组之间、电针组与AMPK抑制剂组和电针+AMPK抑制剂组之间,自噬相关基因Beclin1表达水平无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p62蛋白表达水平如下:模型组、假针刺组两组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p62表达低于正常组（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p62表达高于模型组（均P<0.01）;与电针组、AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p62表达上调（P<0.05,P<0.01）;模型组与假针刺组之间、电针组与AMPK抑制剂组之间p62表达无明显差异（均P>0.05）。（3）q PCR检测Beclin 1 m RNA表达水平各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Beclin 1 m RNA表达水平如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1 m RNA表达水平明显上升（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1 m RNA表达低于模型组（均P<0.01）;AMPK抑制剂组大鼠十二指肠组织自噬相关基因Beclin1 m RNA表达水平高于电针组（P<0.05）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织自噬相关基因Beclin1 m RNA表达水平明显下降（均P<0.05）;模型组与假针刺组之间、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间自噬相关基因Beclin1 m RNA表达水平比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。（4）电针对FD大鼠c-kit/LC3相对表达量影响免疫荧光染色可见,c-kit染色阳性为红色荧光,LC3染色阳性为绿色荧光。结果显示,与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit阳性细胞数明显减少（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit阳性细胞数显着增加（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组之间c-kit阳性细胞数比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织LC3阳性细胞数明显增加（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织LC3阳性细胞数明显减少（均P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织LC3阳性细胞数明显下调（P<0.05）;电针组、AMPK抑制剂组两组之间LC3阳性细胞数差异无统计学意义（均P>0.05）。（5）电针对FD大鼠c-kit/Beclin1相对表达量影响免疫荧光染色可见,c-kit染色阳性为红色荧光,Beclin1染色阳性为绿色荧光。结果显示,与正常组比较,模型组、假针刺组两组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit阳性细胞数明显减少（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit阳性细胞数增加（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组之间c-kit阳性细胞数差异无统计学意义（均P>0.05）。与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Beclin1阳性细胞数显着增加（均P<0.01）;与模型组相比,电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Beclin1阳性细胞数明显减少（均P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠十二指肠组织Beclin1阳性细胞数减少（P<0.05）;电针组、AMPK抑制剂组之间Beclin1阳性细胞数无明显差别（均P>0.05）。4.电针对FD大鼠AMPK/ULK1信号通路的影响。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织中,p-AMPK/AMPK比值比较:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-AMPK/AMPK比值升高（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组三组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-AMPK/AMPK比值均低于模型组（均P<0.01）;与电针组比较,AMPK抑制剂组大鼠十二指肠组织p-AMPK/AMPK比值明显上升（P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-AMPK/AMPK比值明显下降（P<0.05,P<0.01）;模型组与假针刺组之间、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间p-AMPK/AMPK比值无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-ULK1/ULK1比值比较:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-ULK1/ULK1比值上调（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-ULK1/ULK1比值均低于模型组（均P<0.01）;与AMPK抑制剂组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-ULK1/ULK1比值下调（P<0.05,P<0.01）;模型组与假针刺组之间、电针组与电针+AMPK抑制剂组之间p-ULK1/ULK1比值无明显差异（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-LKB1/LKB1比值比较:p-LKB1/LKB1在六组间表达差异无统计学意义（均P>0.05）。各组大鼠胃窦组织和十二指肠组Ca MKK2蛋白水平表达如下:与正常组比较,模型组、假针刺组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Ca MKK2表达增加（均P<0.01）;电针组、AMPK抑制剂组、电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Ca MKK2表达均低于模型组（均P<0.01）;与电针组比较,电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Ca MKK2表达明显下降（均P<0.05）;电针+AMPK抑制剂组大鼠胃窦组织和十二指肠组织Ca MKK2表达低于AMPK抑制剂组（均P<0.01）;模型组与假针刺组之间、电针组与AMPK抑制剂组之间Ca MKK2表达比较无显着差异（均P>0.05）。结论1.FD大鼠胃排空延迟,胃电慢波减少,胃肠ICC数量及超微结构受损。2.电针干预可以改善FD大鼠胃电节律和胃肠动力障碍,并且改善FD大鼠一般行为。3.电针干预可以促进胃肠道ICC数量和网络结构的恢复,抑制ICC过度自噬,AMPK抑制剂Compound C与电针联合运用具有协同作用。4.电针干预通过AMPK/ULK1自噬信号通路调节FD大鼠胃肠道ICC,恢复FD大鼠胃肠ICC结构及功能,改善FD胃肠动力障碍,是电针治疗FD大鼠的可能作用机制。
王彬[3]（2020）在《嗜酸性粒细胞诱导食管平滑肌重塑影响贲门失弛缓症发病及预后的机制研究》文中提出目的贲门失弛缓症（AC）患者食管壁可观察到肌层增厚及胶原蛋白沉积等重塑现象,但其在AC发病过程中的作用未知。本研究首先在AC患者及模型动物食管肌层评估嗜酸性粒细胞（EOS）的浸润程度和重塑因子的表达水平,并探讨两者相关关系,然后通过体外实验研究EOS对食管平滑肌细胞重塑的诱导作用及机制,最后探讨抗EOS药物在食管组织重塑及AC治疗方面的作用,以期从平滑肌重塑角度深入认识本病发病机制并找到新的治疗靶点。方法（1）组织病理学研究:连续纳入就诊于我院,经食管测压、食管排空及胃镜等检查确诊为AC,并接受POEM治疗的40例患者为实验组,选取同期行外科食管切除术的10例食管癌患者为对照组。两组分别于术中获取LES固有肌层标本（对照组选择病变边缘>5cm的正常组织）。所有标本均行HE染色,评估食管肌层EOS浸润情况;行Masson染色,评估食管肌层纤维化程度;行免疫荧光染色,观察食管平滑肌细胞束的骨架形态;利用透射电镜初步观察食管平滑肌细胞的微观结构;通过免疫组化及Western Blot实验,从定性和定量的角度分析重塑因子:转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的表达水平;在POEM术前和术后3个月、6个月、1年和2年分别利用Eckardt评分及多项临床检查,评估患者症状和食管动力,并分析AC患者食管肌层EOS计数和重塑因子的表达水平与临床参数的相关关系。食管平滑肌厚度研究:纳入确诊为AC,并接受POEM治疗的10例患者为实验组,选取同期因胃窦隆起行超声内镜检查的10例患者为对照组。两组患者均接受食管排空和超声内镜检查,分别测量实验组术前、术后2年及对照组患者检查过程中食管最大宽度、检查1,3,5分钟钡剂高度以及食管LES、LES以上5cm、10cm和15cm处固有肌层厚度,分别比较实验组患者治疗前后,以及实验组与对照组患者上述指标的差异。（2）取8周龄Balb/c小鼠80只,分为模型组（机械梗阻组、单纯EOS浸润组、机械梗阻联合EOS浸润组）和对照组。造模成功后,通过动力学检查（食管测压和食管排空）和病理学检测（HE染色观察小鼠食管肌层EOS浸润情况;Masson染色评估小鼠食管肌层纤维化程度）,进一步行免疫组化染色和WesternBlot评估各模型组和对照组小鼠食管平滑肌组织中TGF-β1、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的表达水平;以最符合EOS浸润AC患者临床及病理改变的机械梗阻联合EOS浸润的模型组进行进一步研究,分离机械梗阻联合EOS浸润组和对照组小鼠离体食管肌条,置入装有Kreb’s液的恒温肌槽中,利用生物机能实验系统记录电刺激下离体肌条的收缩幅度及变化情况,并进行两组间比较。（3）取2月龄SD大鼠5只,分离食管平滑肌细胞及EOS进行体外培养,设置以下分组:细胞对照组（平滑肌专用培养基+食管平滑肌细胞）;EOS联合处理组A:平滑肌专用培养基+食管平滑肌细胞+非活化的EOS共培养;EOS联合处理组B:平滑肌专用培养基+食管平滑肌细胞+活化的EOS共培养;EOS联合处理组C:平滑肌专用培养基+食管平滑肌细胞+TGF-β1抑制剂+活化的EOS共培养。MTT法观察共培养不同时间节点平滑肌细胞增殖情况,通过Western blot实验检测共培养48h后各组TGF-β1、α-SMA,胶原蛋白Ⅰ,胶原蛋白Ⅲ以及TGF-β/Smad依赖性信号转导通路的信号分子Smad2/3蛋白和磷酸化Smad2/3蛋白的含量。（4）取Blab/c小鼠30只,随机分为3组,AC模型组,抗Siglec-F抗体干预组和对照组。干预后通过食管测压和食管排空检查比较各组小鼠食管运动功能差异;通过HE染色、Masson染色和免疫学染色比较各组小鼠食管EOS浸润程度、食管肌层纤维化程度以及食管组织中TGF-β1、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的表达情况。结果（1）组织病理学研究:实验组中,17/40（42.5%）例患者LES肌层EOS计数及分布均较对照组明显增多（P<0.05）;32/40（80%）例患者LES肌层可见不同程度的纤维化条索穿插于肌细胞间,较对照组严重（P<0.05）;实验组患者的组织标本可见平滑肌细胞束形态较对照组明显增厚且排列紊乱;透射电镜下观察到实验组患者组织标本中胶原纤维细胞成束状分布且明显增多,胞质中观察到肌成纤维细胞;实验组患者LES肌层重塑因子（TGF-β1、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ）的表达均较对照组有不同程度的增加（P值均<0.05）,且浸润的活性EOS与TGF-β1存在共表达;随访POEM治疗2年后,发现所有入组的AC患者食管蠕动功能均未恢复;并且,EOS浸润程度和重塑因子的表达水平与术后Eckard评分呈正相关关系。食管平滑肌厚度研究:实验组患者术前食管最大宽度和1,3,5分钟钡剂高度均显着高于对照组（P值均<0.05）,术后食管最大宽度与术前相比无明显差异（P>0.05）,1,3,5分钟钡剂高度明显降低,与对照组相比无差异（P值均>0.05）;POEM术前LES、LES以上5cm,LES以上10cm和LES以上15cm的环形肌层均较对照组显着增厚（P值均<0.05）,且以LES处增厚程度最大,而各部位纵形肌厚度与对照组相比差异无显着性;POEM治疗后2年复查,可见实验组患者环形肌层仍呈增厚状态,与术前相比,无明显改变（P值均>0.05）。（2）造模后,各模型组小鼠体重增长均少于对照组（P值均<0.05）,LES压力均显着高于对照组（P值均<0.05）,食管体部和贲门部排空时间均较对照组延长（P值均<0.05）。组间比较发现:单纯EOS浸润组和机械梗阻联合EOS浸润组LES肌层均有EOS浸润,明显多于对照组及机械梗阻模型组（P值均<0.05）,且机械梗阻联合EOS浸润组能观察到更明显且较粗的纤维化条索穿插于肌细胞之间并伴有平滑肌细胞萎缩,此外,机械梗阻联合EOS浸润组中重塑因子的表达水平高于其他各模型组（P值均<0.05）,以上均提示机械梗阻联合EOS浸润组动物更为符合EOS浸润的AC患者临床及组织特征,EOS浸润AC动物模型建立成功。进一步发现,EOS浸润AC小鼠模型食管平滑肌组织中TGF-β1、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ的表达水平均明显高于对照组（P值均<0.05）;在一定参数的电刺激下,模型组小鼠食管离体肌条收缩幅度明显低于对照组小鼠（P<0.05）。（3）联合处理组B（有活性EOS且无TGF-β1抑制剂）的食管平滑肌细胞存活率在不同时间节点均较其他组更高（P值均<0.05）;共培养48h后检测发现EOS联合处理组B的各项重塑因子蛋白表达量显着高于其余各组（P值均<0.05）;同时共培养48h后,EOS联合处理组B中TGF-β/Smad依赖性信号转导通路的信号分子磷酸化Smad2/3蛋白表达量显着高于其余各组（P值均<0.05）。（4）抗Sigec-F抗体组小鼠食管动力学检测结果较模型组小鼠好转,病理学指标虽尚未完全改善,但是EOS浸润情况和部分重塑因子的表达水平较模型组明显降低（P值均<0.05）,且与对照组无显着性差异（P>0.05）。结论AC患者存在EOS浸润食管肌层和食管平滑肌重塑现象,并与预后相关;通过机械梗阻联合EOS浸润动物模型可以模拟EOS浸润的AC患者临床和病理学特征;EOS可能通过TGF-β/Smad依赖性信号转导通路引起食管组织重塑,并进一步导致食管运动障碍,促进AC发生;抗EOS药物可能有助于治疗伴随EOS浸润和组织重塑的AC。
陈秋宇[4]（2020）在《基于隧道技术食管电起搏器植入及电刺激参数研究》文中研究指明背景:食管动力障碍性疾病发病率逐年增加。以贲门失弛缓症为例,该病发病率及患病率均有增长。食管动力障碍性疾病的治疗一直缺乏有效手段,近些年通过内镜治疗及外科手术已初步可以解决患者食管下括约肌收缩功能失调问题,然而并没有有效针对食管蠕动功能障碍的方法,因此,其所致的吞咽困难及反流等症状仍困扰着食管动力障碍性疾病患者。为了对此类患者食管运动障碍进行治疗,我们通过一项基于隧道技术食管电起搏器植入的技术,采用顺序电刺激恢复其食管的蠕动功能。为了验证此项技术的安全性及有效性,我们在经口内镜下肌切开术（POEM）下完成了食管起搏器样机及配套电极的植入并完成了部分参数的电刺激研究。方法:（1）本研究应用健康家猪进行实验,经POEM方法,自距胃食管连接处上方5cm处食管12点处至胃体前壁近小弯侧建立食管黏膜下隧道;随后,采用经自然腔道内镜手术（NOTES）手术流程,在贲门下方7-8cm处胃体前壁近小弯侧切开固有肌层及浆膜层;同时助手在实验猪对应腹壁处开口,将成对的顺序电起搏电极送入腹腔,并通过胃镜将电起搏电极端送入隧道中并固定至恰当位置;最后夹闭食管隧道开口,将起搏器固定于腹部皮下,并缝合腹壁切口。操作完成后,通过内镜直接观测及食管高分辨率测压（HRM）双重方法记录实验猪食管在电刺激实验中的运动和压力变化。进行电刺激后继续监测实验动物状态数小时,处死并解剖实验动物,观察上述操作对其产生的影响。（2）另取相同条件健康家猪,通过前述实验操作方法完成食管电起搏器植入。操作完成后,对家猪进行不同模式的电刺激（以8ms、80Hz为基准,采用不同电流强度刺激实验猪食管;以10m A、80Hz为基准,采用不同脉宽刺激;以10m A、5ms为基准,采用不同电流频率进行刺激）。记录各种电起搏参数下食管压力的改变。实验完成后,处死实验猪并进行尸体解剖检查以明确其操作部位各处出血情况。结果:（1）基于隧道技术食管电起搏器植入过程顺利进行,完成了实验猪食管下黏膜下隧道建立,实验结束复苏后实验猪生命体征平稳,短期存活。处死解剖后,实验猪腹壁开口处及其胸腔、腹腔内等实验操作涉及器官未见明显出血及主要脏器损伤。实验用电极安置牢固无移位,未造成周围解剖结构伤害,食管外观完整,电极尾端及起搏器连接处紧密,密封良好。可以观测到实验猪在电刺激下食管有即刻局部收缩,HRM测压可见食管压力变化。（2）静息状态下家猪食管下端基线压力稳定为18.18±1.97mm Hg,在电刺激发生后,实验动物食管下端压力即刻变化,且仅在3-12m A电流范围、1-7ms脉宽范围及40-70Hz刺激频率下食管压力变化较为显着。短期电刺激发放并未对家猪实验范围内的器官及周围组织造成影响。结论:基于隧道技术,联合POEM及NOTES,在实验猪食管黏膜下层隧道内植入电起搏器及成对电极的方法经短期观察,安全可靠,具有可行性。对食管平滑肌层的短时电刺激可引起对应部位肌肉瞬时收缩导致食管腔内压力即刻升高。
王婷婷[5]（2019）在《丁香降气方对混合反流性食管炎模型大鼠食管-胃动力的作用机制研究》文中研究表明目的:通过观察丁香降气方对大鼠血清脑肠肽、食管下段组织中Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICCs）、干细胞因子（stem cell factor,SCF）及酪氨酸激酶受体（c-kit）的影响,探讨其对混合反流性食管炎模型大鼠食管和胃动力的调控机制。方法:将32只SD大鼠按体重分层后,随机分为两组:假手术组（8只）和模型组（24只）。通过贲门肌撕开联合十二指肠部分结扎术复制混合反流性食管炎模型。模型建立一周后将模型组剩余存活大鼠再按体重分层随机分为3组:模型加生理盐水组,模型加西药组,模型加中药组。中药组予丁香降气方颗粒剂混悬液干预治疗,西药组予枸橼酸莫沙必利分散片联合奥美拉唑胶囊混悬液灌胃,其余各组给予等量生理盐水,疗程均为14天。干预周期结束后,禁食24h不禁水,予各组大鼠2%葡聚糖蓝0.5ml/只,30min后处死大鼠,腹主动脉取血,取胃内容物及食管下段组织。光镜下观察食管组织病理炎症改变情况;ELISA法检测大鼠血清GAS、MTL、NO、VIP的浓度;通过酶标仪测定胃内残留色素的吸光度对各组大鼠的胃排空率进行评价;电镜观察大鼠食管组织中ICCs细胞的超微结构;western blot法观察大鼠食管组织中c-kit、SCF蛋白表达情况;real-time PCR法观察SCF m RNA、c-kit m RNA的表达情况;应用IBM SPSS Statistics 22.0软件,选择one-way ANOVA对实验结果进行统计分析。若P<0.05则认为差异具有统计学意义。结果:1、一般状态:造模前,各组大鼠体重比较无明显差异。模型建立一周后,与假手术组相比,模型组、西药组和中药组大鼠体重均显着下降。与模型组比较,灌胃第七天和第十四天西药组和中药组大鼠体重均显着增加（P<0.05,P<0.01）,中药组与西药组比较差异不明显。2、大鼠食管黏膜病理形态学变化:假手术组大鼠食管黏膜正常,除了上皮细胞层内存在少量炎性细胞外,未见其他病理改变。模型组可见明显鳞状上皮增生,黏膜固有层乳头延伸,黏膜下层可见大量散在的血管,上皮层内见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润,少数可见黏膜糜烂和溃疡。与模型组比较,中药组和西药组大鼠食管黏膜内炎性细胞浸润明显减少,鳞状上皮增生和固有层乳头层延伸呈轻度表现,少量散在的血管扩张及充血,未发现糜烂和溃疡。3、大鼠的胃排空情况:与假手术组比较,模型组大鼠胃内色素残留浓度增加,胃排空率下降,差异具有统计学意义（P<0.001）;与模型组比较,西药组和中药组大鼠的胃内色素残留浓度明显减少,胃排空率则明显增加（P<0.01,P<0.05）;中药组与西药组比较差异不明显。4、大鼠血清脑肠肽的浓度变化:与假手术组比较,模型组大鼠GAS、MTL的血清浓度显着降低,NO、VIP显着增加;与模型组比较,西药组和中药组的大鼠血清GAS、MTL浓度明显升高,而NO、VIP显着减少;中药组与西药组比较差异不明显。5、大鼠食管ICCs的超微结构:透射电镜观察结果显示假手术组大鼠ICCs主要分布于黏膜下层、肌间神经丛,细胞核呈椭圆形、星形或不规则形态,细胞核大、核周胞质少,胞质内可见丰富的内质网（ER）、线粒体（Mi）、高尔基体（G）、囊泡等细胞器,细胞膜具有典型的穴样内陷特征（箭头）,与周围平滑肌、神经纤维末梢连接紧密。模型组大鼠ICCs超微结构模糊,存在核固缩,核周间隙扩大,胞质溶解,细胞器变性,线粒体肿胀、甚至呈空泡化,内质网扩张、严重者脱颗粒,ICCs与周围细胞之间的缝隙连接松散等异常改变。西药对照组和中药治疗组上述表现则不如模型组明显。6、大鼠食管SCF、c-kit蛋白的表达:与假手术组比较,模型组大鼠食管下括约肌的SCF和c-kit蛋白的表达水平均明显降低（P<0.0001）,差异具有统计学意义;与模型组比较,西药对照组的SCF和c-kit蛋白在食管下括约肌的表达水平均显着上调（P<0.05）,中药治疗组的SCF、c-kit蛋白呈高水平表达,差异具有统计学意义（P<0.001,P<0.01）;中药组与西药组比较,差异不明显。7、大鼠食管SCF、c-kit基因m RNA的表达:与假手术组比较,模型组大鼠食管下括约肌SCF和c-kit m RNA呈低水平表达,差异具有统计学意义（P<0.001,P<0.0001）;与模型组比较,西药组和中药组SCF和c-kit m RNA的表达水平显着上调（P<0.05,P<0.01）;中药组与西药组比较差异不明显。结论:1、丁香降气方通过增加血清中GAS、MTL浓度,减少NO、VIP的含量,纠正神经内分泌失衡状态,从而促进胃排空,增强食管下括约肌的抗反流屏障作用。2、丁香降气方可能通过上调食管组织内SCF、c-kit m RNA及蛋白的转录和表达水平,促进ICCs细胞超微结构的修复,从而起到增强食管下括约肌压力的作用。
张馨[6]（2019）在《关于贲门失弛缓症发病及治疗过程中硫化氢作用的探讨》文中进行了进一步梳理目的通过研究贲门失弛缓症患者的食管组织中硫化氢合成酶的表达情况、外源性硫化氢治疗贲门失弛缓症动物模型的相关机制初步探讨及治疗效果以及应用硫化氢供体（富露施）对贲门失弛缓症患者的治疗作用三个实验,探索贲门失弛缓症的发病过程中硫化氢可能扮演的角色以及硫化氢对于本病治疗作用的可行性。方法（1）随机选取贲门失弛缓症患者18例与鳞状细胞食管癌患者8例分别作为实验组与对照组进行实验。实验组患者于POEM术中通过内镜直视下获取食管组织标本,对照组则于食管切除术过程中获取标本;实验组取材部位从上至下依次为LES上4cm,2cm,LES及贲门四处,对照组则依照实验组取材大小取食管中段与LES部位。将实验组与对照组所获标本进行硫化氢合成酶胱硫醚-β-合酶（cystathionine-β-synthase,CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）组化染色、Western Blot（WB）实验以及上述两种酶分别与神经特异性抗体sox-10的免疫荧光双染实验来观察CBS与CSE的表达情况;（2）取30只Balb/c小鼠随机分为造模组和对照组,记录初始体重。造模组给予水合氯醛麻醉下开腹并将苄基-二甲基十四烷氯化铵（BAC）注射于其食管下括约肌（LES）处,对照组则于开腹后LES注射生理盐水。观察记录术后动物每周的基本情况与体重变化,于第21天时再次测量小鼠LES压力及食管造影检查评估模型建立成功与否并取小鼠食管标本对肌动蛋白和弹力蛋白（重塑标志蛋白）进行免疫组化染色。另取Balb/c小鼠30只并随机分为模型组、治疗组与对照组三个组别。模型组给予上述BAC法处理,术后给予腹腔注射21天PBS溶液;治疗组给予同样BAC法处理LES,术后给予腹腔注射硫氢化钠溶液（14μmol/kg）21天;对照组则于开腹后LES注射生理盐水,术后给予腹腔注射21天PBS溶液。上述方法记录体重变化及LES压力值,并于第21天处理后同样进行标志蛋白的组化染色,观察实验前后小鼠上述指标的变化情况;（3）随机选取天津医科大学总医院消化内科门诊贲门失弛缓症的患者,经相应入选标准（年龄、性别、既往史、知情同意等）与排除标准（基础状态、并发症、过敏史等）筛选后入组20例患者,给予富露施（乙酰半胱氨酸商品名）口服药物治疗3个月,用法用量为饭前半小时吞服,每次200mg,每日3次,随访过程中嘱患者每月随访一次。记录患者初始入组时及随访过程中的LES压力值及Eckardt症状评分,并于初始及随访结束后对患者进行食管吞钡造影检查,评估入组患者上述指标的变化情况。结果（1）组化染色与WB实验结果表明,实验组贲门失弛缓症患者食管LES处的CBS与CSE表达明显少于对照组患者（P<0.05）,且CBS与CSE在实验组患者食管LES处表达明显低于食管其他部位（P值均小于0.05）;荧光双染结果显示CBS与CSE两种酶与神经特异性抗体sox-10完全共表达,且实验组患者LES处荧光计数要明显少于其食管中段（P<0.05）;（2）贲门失弛缓症动物模型的体重增长速度相比空白对照组变缓,且LES压力增高明显（P<0.05）,造影可见“鸟嘴征”,模型成功建立;取模型的食管组织进行弹力蛋白和肌动蛋白组化染色,结果显示造模组蛋白表达增多;经过腹腔硫氢化钠治疗后,体重增长速度变快,LES压力有所降低,食管组织弹力蛋白和肌动蛋白表达降低,但上述指标仍高于对照组,三组之间数据差异均具有统计学意义（P<0.05）;（3）富露施药物治疗作用前瞻性实验最终有效入组17例患者,三个月治疗后成功率70.59%,症状缓解率82.35%;入组患者初始LES压力（50.06±7.03）mmHg,初始Eckardt症状评分（8.12±2.17）分;治疗后,患者LES压力（32.12±6.96）mmHg,Eckardt症状评分（3.76±2.24）分（P<0.05）;压力与症状评分缓解明显;食管造影钡柱高度相比初始时有所降低,食管贲门狭窄处有所缓解。结论贲门失弛缓症患者的食管组织中有CBS和CSE的表达,且与神经特异性抗体sox-10完全共表达;贲门失弛缓症患者食管组织LES处CBS与CSE表达明显低于正常对照组,且LES处上述两种酶表达明显低于食管中段;贲门失弛缓症动物模型和患者经过硫化氢治疗后均有所缓解,该治疗作用可能与改善食管重塑有关。硫化氢在贲门失弛缓症发病过程中有所减少,可能与神经损伤相关,同时硫化氢可以作为贲门失弛缓症的治疗新方法,为本病治疗提供了新的方向。
晋弘[7]（2018）在《嗜酸性粒细胞诱导食管壁内神经元损伤在贲门失弛缓症发病机制中的探讨》文中研究指明目的食管壁内神经元减少是导致贲门失弛缓症患者食管动力障碍的主要机制,但其原因不明。我们通过分析嗜酸性粒细胞在贲门失弛缓症患者食管肌层的分布以及与食管壁内神经元表达的相关性,研究嗜酸性粒细胞在动物实验及体外实验中对食管壁内神经元的损伤作用及机制,探讨抗嗜酸性粒细胞药物对贲门失弛缓症的治疗作用。方法（1）纳入于我院就诊并经胃镜、钡餐及食管测压等确诊为贲门失弛缓症并接受POEM治疗的28名患者作为贲门失弛缓症组,同时选取行外科食管切除术的食管癌患者9例作为对照组。实验组标本取自POEM术中粘膜下隧道建立后,分别活检食管LES部位、LES上方5cm及LES上方10cm部位（远段、中段及近段食管）的环形肌组织。对照组标本取自正常食管组织肌条,同样于术中选取与贲门失弛缓症患者取材部位相对应的食管体部近段、中段及远段的肌层组织。所有标本均行HE染色观察食管肌层组织的嗜酸性粒细胞计数及分布,并比较不同部位之间计数及分布的差异。行免疫组化观察嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）、嗜酸性粒细胞来源神经毒素（EDN）、嗜酸性粒细胞趋化因子以及食管壁内神经元的分布。分析贲门失弛缓症患者食管肌层嗜酸性粒细胞计数与临床数据的关系。（2）取Balb/c小鼠20只,分为模型制作组及正常对照组。通过OVA致敏的方式制作嗜酸性粒细胞浸润食管肌层的动物模型,行高分辨率食管测压及食管排空检查观察模型组小鼠与对照组小鼠食管运动功能的差异,行HE观察两组小鼠食管肌层嗜酸性粒细胞浸润程度,行免疫组化观察两组小鼠食管ECP、EDN、嗜酸性粒细胞趋化因子以及食管壁内神经元的表达。另取60只Balb/c小鼠,随机分为OVA处理实验组和对照组,分别于实验前、实验第20天、28天、35天、50天及75天通过高分辨率食管测压及食管排空检查检测食管运动功能的变化,通过HE染色观察食管不同部位嗜酸性粒细胞聚集的情况,通过免疫组化观察食管ECP、EDN、嗜酸性粒细胞趋化因子以及食管壁内神经元的表达。（3）取健康小鼠5只,分离嗜酸性粒细胞及食管肠神经元细胞进行体外培养,嗜酸性粒细胞与肠神经元共培养组为实验组,在肠神经元细胞中加入提纯的ECP为干预组,单纯培养的肠神经元细胞作为对照组,通过MTT法观察共培养不同时间嗜酸性粒细胞及ECP对肠神经元细胞活力的影响,通过流式细胞检测嗜酸性粒细胞及ECP处理的肠神经元细胞死亡的百分比。进一步分离嗜酸性粒细胞浸润食管肌层的动物离体食管平滑肌条,取健康小鼠离体食管平滑肌条作为对照组,置入装有Krebs液的恒温平滑肌槽中,部分对照组Krebs液中加入嗜酸性粒细胞培养上清液,生物机能实验系统记录电刺激下肌条收缩的幅度及变化。（4）取Blab/c小鼠40只,随机分为4组,OVA模型组,Siglect抗体药物干预组,CCR3单抗药物干预组以及健康对照组。通过高分辨率食管测压及食管排空检查观察不同组小鼠实验前后食管运动功能的改变及差异,通过HE染色观察实验前后不同组小鼠食管嗜酸性粒细胞计数的变化及差异,通过免疫组化染色观察实验前后不同组小鼠食管ECP、EDN以及食管壁内神经元的分布及变化。结果（1）与对照组相比,贲门失弛缓症患者食管肌层不同部位嗜酸性粒细胞计数及分布均明显增多（P<0.05）,不同部位食管肌层嗜酸性粒细胞浸润无明显差异（P>0.05）。贲门失弛缓症患者食管肌层ECP、EDN及嗜酸性粒细胞趋化因子可见不同程度的分布,食管壁内神经明显减少或消失,对照组食管组织中未见明显ECP、EDN及嗜酸性粒细胞趋化因子的表达,食管壁内神经元未见明显病理改变。贲门失弛缓症食管肌层嗜酸性粒细胞数量与POEM术后1年的Eckardt评分有相关性。（2）通过高分辨率食管测压结果显示,与对照组相比,模型组小鼠食管LES部位压力明显增高（P<0.05）。通过食管排空检查结果显示,与对照组相比,模型组小鼠食管体部排空时间及食管排空通过贲门的时间均明显延长（P<0.05）。HE染色及免疫组化结果显示,模型组小鼠食管肌层有大量嗜酸性粒细胞浸润,ECP、EDN呈阳性表达,食管壁内神经元明显减少或消失。且不同时段的食管测压及食管排空检查显示,食管LES部位压力及食管排空时间随着造模时间的延长,均逐步增加。HE及免疫组化结果表明,随着食管肌层嗜酸性粒细胞浸润数量的增加,食管壁内神经元的表达逐渐减少或消失。（3）正常培养的肠神经元细胞3天后的死亡率为8.41%,与嗜酸性粒细胞共培养的肠神经元细胞死亡率为51.2%,在正常培养的肠神经元细胞中添加ECP蛋白后,神经元的死亡率增加至62.2%,三组数据之间差异有明显统计学差异（P<0.05）。与正常培养的肠神经元相比,与嗜酸性粒细胞共培养以及加入重组ECP蛋白组的肠神经元活性在24h及48h均有明显下降（P<0.05）。在一定参数电刺激下,模型组小鼠食管平滑肌条收缩幅度与健康对照小鼠对比,幅度明显降低（P<0.05）。干预组与健康对照组未见显着差异（P>0.05）。（4）通过抗嗜酸性粒细胞药物干预后,通过高分辨率食管测压以及食管排空检查观察模型组小鼠LES部位压力及食管排空时间与Siglect抗体药物干预组、CCR3单抗药物干预组以及健康对照组小鼠相比,均明显增加。HE染色及免疫组化结果显示,模型组小鼠食管肌层有大量嗜酸性粒细胞浸润,ECP、EDN呈阳性表达,食管壁内神经元明显减少或消失。而其他三组小鼠食管肌层未见明显炎性物质的表达,食管壁内神经元未见明显变化。结论贲门失弛缓症患者食管肌层有不同程度嗜酸性粒细胞的浸润,且与POEM术后疗效相关;通过OVA可以制作嗜酸性粒细胞浸润食管肌层的动物模型,且嗜酸性粒细胞的浸润与食管壁内神经元的减少有关并影响食管运动功能;体外培养的嗜酸性粒细胞可以损伤肠神经元细胞,且改变离体食管平滑肌的收缩功能;抗嗜酸性粒细胞药物可以改善贲门失弛缓症动物模型的食管运动功能,减少食管壁内神经元的损伤。
王娟[8]（2018）在《环形肌切开和全层肌切开治疗贲门失弛缓症长期随访研究》文中研究指明研究背景贲门失弛缓症（achalasia,AC）是一种很少发生的原发性食管动力障碍性疾病,通常表现为食管下括约肌松弛障碍,食物滞留于食管,进而出现吞咽困难、反流、胸骨后疼痛、体重减轻等症状。传统治疗方法有口服药物,内镜治疗（肉毒杆菌毒素注射、球囊扩张、支架植入）和外科Heller切开术,但均不能使人满意。近年来随着自然腔道手术（Natural Orifice Transluminal Endoscopic Surgery,NOTES）概念的深入,2010年由Inoue等第一次报道了经口内镜下肌切开术（peroral endoscopic myotomy,POEM）成为治疗贲门失弛缓症的新方式。因POEM具有创伤小、安全、有效等优点,现已在全世界广泛开展。为了保证POEM术有更好的疗效和降低不良反应的发生率,很多学者在传统POEM的基础上开展更深入的研究,对于手术细节等方面提出更多的选择,从而改良创新出多种术式。传统POEM在食管黏膜层与固有肌层之间建立一条黏膜下隧道,然后在隧道内完成食管环形肌切开;而改良的内镜下全层肌切开术则是在隧道内进行食管环层肌和纵行肌切开。为了减少并发症的风险,部分学者推荐单纯环形肌切开术;为了获得更好的临床疗效,也有部分学者推荐全层肌切开术;尚有部分临床试验表明环形肌切开与全层肌切开的短期疗效及并发症无明显差异。但全层肌切开是否更有利于贲门失弛缓患者获得长期症状的缓解,是否增加远期胃食管反流病的发生率仍未报道。本研究通过对比两种术式治疗贲门失弛缓症的长期临床疗效和远期并发症,为POEM治疗贲门失弛缓症提供更有利的手术方式。目的对比内镜下环形肌切开与全层肌切开治疗贲门失弛缓症的长期临床疗效及远期并发症。材料与方法回顾性分析2012年6月至2014年12月于郑州大学第一附属医院消化内科行经口内镜下肌切开术治疗并定期随访的53例贲门失弛缓症患者资料,其中21例患者行环形肌切开设定为环形肌切开（CM）组,32例行全层肌切开设定为全层肌切开（FTM）组,随访截止到2017年2月28日,比较两种术式术后长期症状改善、食管动力学改善及远期并发症情况。结果1.截止到2017年2月28日,CM组和FTM组中位随访时间分别为44.0月和35.5月。CM组和FTM组治疗有效率分别为90.5%（19/21）和100%（32/32）。CM组和FTM组的术后Eckard评分、食管下括约肌压力、4秒完整松弛压均显着低于术前值（P<0.05）。2.对比CM组和FTM组术后Eckard评分[0（0-1.5）分和0（0-2.0）分]、食管下括约肌压力[（12.50±5.10）mmHg和（13.40±3.44）mmHg]、4秒完整松弛压[（12.50±5.10）mmHg和（13.18±3.38）mmHg],差异均无统计学意义（P>0.05）。3.本研究中检出20例（37.7%）有食管异常酸暴露,12例（22.6%）有胃食管反流症状,14例（26.4%）有食管炎,16例（30.2%）有临床相关胃食管反流病。全层肌切开组临床相关胃食管反流发生率高于环形肌切开组（40.6%比14.3%,χ2=4.174,P<0.05）。结论经口内镜下环形肌切开术与全层肌切开术治疗贲门失弛缓症均有效,两种术式长期疗效相当。但全层肌切开术后临床相关胃食管反流发生率更高。
高杨[9]（2018）在《人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究》文中进行了进一步梳理第一部分食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及鉴定目的:探索最简单、有效的原代食管胃结合部平滑肌细胞培养方法并鉴定平滑肌细胞特有表型。方法:选取2015年1月至2017年10月在河北医科大学第四医院因中高位食管癌行食管大部切除术患者食管胃结合部平滑肌组织共24例,分别以酶消化法（enzymatic digestion with tissue blocks,ED）和组织块法（explant culture with tissue blocks,EC-T）进行平滑肌细胞原代培养。ED组中,消化酶选择胶原酶Ⅱ（collagenaseⅡ）和胰酶/EDTA消化液（Trypsin/EDTA）,并以不同消化酶浓度结合不同消化温度和消化时间探索最佳获取原代细胞方法,记录每200倍镜视野可见贴壁细胞个数（Cells/200×）和原代细胞生长至第一次传代所需时间（first passage day,FPD）;EC-T组中,对比传统组织块贴壁法（explant culture with tissue blocks,T）与胰酶消化辅助法（explant culture with trypsin digested-tissue,TD-T）和直接利用酶消化法中组织块内注射胶原酶Ⅱ提取细胞后的剩余组织块（explant culture with enzyme injected-tissue,EI-T）三种方法,记录初次见到细胞由组织块爬出时间（visibility of cells migration,VCM）、FPD、初次分瓶时已爬出细胞的组织块所占比例（Positive blocks（%））,选择效率最高的原代细胞培养方法;以CCK-8测定体外培养的细胞在平滑肌细胞培养基（smooth muscle cell medium,SMCM）和含10%新生牛血清的DMEM/F-12（10%-F12）培养基中的增殖的情况,并采用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）、realtime RT-PCR、免疫荧光（immunofluore-scence,IF）、incellwestern方法检测平滑肌组织和所获得细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、平滑肌22α（smooth muscle 22α,SM22α）、波形蛋白（vimentin）、肌间线蛋白（desmin）、分化抗原簇90（cluster of differentiation 90,CD90）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达情况,以对细胞进行鉴定。结果:ED和EC-T两种方法均可获得原代细胞。ED组以Cells/200×比较无统计学差异（P=0.864）,但以FPD进行比较,可见以低浓度（0.5mg/ml）胶原酶Ⅱ注射入组织块内并低温（4℃）、长时间（1424h）消化所得细胞的时间最短（中位时间8.00d,P<0.05）;EC-T组中,以EI-T法获得的原代细胞在VCM（中位时间6.00d,P<0.05）、FPD（中位时间15.50d,P<0.05）、Positive blocks（%）（中位比例86.00%,P<0.05）方面均优于其他两种方法;ED组和EC-T组总FDP比较显示ED组明显短于EC-T组（P=0.000）。所培养原代细胞以梭型和长梭形为主,大小不均,可自行沿一定方向生长,表现为峰谷样图案;在SMCM中增殖良好,但在10%-F12中增殖效果不佳。这些细胞在SMCM中可传代至第68代,但在10%-F12中仅可传至第34代;细胞会随着传代次数增加体积逐渐增大并丧失梭形结构。原代培养的细胞同相应平滑肌组织一样,均可检测到α-SMA、SM22α、Vimentin、Desmin、CD90和PCNA的mRNA和蛋白,但不同体外培养条件下其平滑肌标志物表达水平不同,以10%-F12培养的细胞平滑肌标志物表达水平均高于SMCM组。结论:以平滑肌标志物鉴定ED法和EC-T法所获得的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的;ED法获得的细胞培养周期短;以SMCM培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以10%-F12培养的细胞具有更好的平滑肌细胞表型。第二部分乙酰胆碱对体外培养人食管胃结合部平滑肌细胞内钙离子浓度的影响目的:使用乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）对体外培养的人食管胃结合部（esophagogastric junction,EGJ）平滑肌细胞内钙荧光变化的影响,明确各种平滑肌细胞内钙荧光变化特点,确定最佳体外人源性EGJ平滑肌细胞培养方式。方法:选取2016年11月至2017年10月因中高位食管癌行食管大部切除术患者共9例,以酶消化法和组织块法获取套索纤维、钩状纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃小弯侧环行肌和胃大弯侧环行肌6种人EGJ原代平滑肌细胞并分别以平滑肌培养基（smooth muscle cell medium,SMCM）和含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基（10%-F12）进行培养。以5μmol/L Fluo-3/am溶液负载体外培养的SMCM第3代和10%-F12第2代EGJ平滑肌细胞,在共聚焦显微镜下观察10-66 mM Ach对有钙缓冲液和无钙缓冲液中平滑肌细胞内钙荧光的影响,记录荧光活动的起始值、峰值和结束值并记录相应时间长度,对比同种组织来源细胞钙荧光在有钙缓冲液和无钙缓冲液以及钙活动前后的差异。结果:不同培养基培养的EGJ平滑肌细胞存在不同的基础钙荧光。各组细胞加入Ach约2 s后即可见细胞内钙荧光变化。食管纵行肌细胞、胃大弯侧环形肌细胞和胃小弯侧环形肌细胞钙荧光活动相对于套索纤维细胞、钩状纤维细胞和食管环行肌细胞温和。在含钙缓冲液中,各种细胞的基础钙荧光强于无钙缓冲液,且钙活动总时间长,但荧光峰值不高。在无钙缓冲液中,酶消化法获得的细胞钙荧光更多见典型的细胞内存储钙离子释放,且仍可见较长时间钙活动。钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌以细胞内存储钙离子释放为主要特点,而食管纵行肌、胃大湾环形肌以细胞外钙离子内流为主要特点;以酶消化法获取并以10%-F12培养的钩状纤维细胞、套索纤维细胞、食管环行肌细胞和食管纵行肌细胞在有钙缓冲液和无钙缓冲液中的钙离子活动峰值荧光差均有统计学差异。组织块法获取的细胞中,仅胃大弯侧环行肌和以10%-F12培养的套索纤维细胞峰值荧光差存在统计学差异,且各组细胞钙活动特点不如酶消化法组细胞典型。结论:在Ach诱发体外培养的EGJ平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌、食管纵行肌、胃大弯侧环形肌和胃小弯侧环形肌均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动。以酶消化法获取细胞并以10%-F12进行培养是最佳体外人EGJ平滑肌细胞培养方式。第三部分钙离子相关蛋白及一氧化氮合酶在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌中表达的初步研究目的:明确参与细胞内Ca2+变化的相关钙离子蛋白和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）在贲门失弛缓症（achalasia of the cardia,AC）患者腹段食管段环行肌的表达。方法:收集河北医科大学第四医院胸外科AC患者共10例为实验组,选取因中高位食管癌行食管大部切除术患者共17例为对照组。手术中收集两组贲门水平以上25cm以内腹段食管环行肌组织。以L-型钙离子通道（L-type calcium channel,LTCC）、三磷酸肌醇受体（inositol 1,4,5-triphosphate recptors,IP3Rs）、雷诺定受体（ryanodine receptors,RyRs）三种大分子蛋白和NOS为研究对象,分别采用realtime RT-PCR和免疫组织化学（SP法）技术检测LTCC、RyRs、IP3Rs和NOS各亚型在实验组与对照组表达的差异,同时以RT-PCR扩增各cDNA并进行碱基测序以明确判断相应mRNA是否表达。检验实验组各受体mRNA相对表达量与食管综合松驰压（integrated relaxation pressure,IRP）是否存在线性关系。结果:通过对实验组和对照组腹段食管环行肌（esophageal circular smooth muscle of control,EC）组织cDNA扩增显示,各蛋白亚型mRNA中i NOS、n NOS、Cav1.2、Cav1.3、RyR2、IP3R1、IP3R2和IP3R3在两组中均为阳性表达,但eNOS、Cav1.1、RyR1、RyR3不表达;经统计分析,iNOS、n NOS、Cav1.3、IP3R1和IP3R2的mRNA在AC表达均增高;iNOS和Cav1.3相对mRNA表达量与IRP之间存在正相关关系。通过免疫组织化学技术检测,在实验组和对照组平滑肌组织中n NOS、Cav1.2、Cav1.3、IP3R1、IP3R2、IP3R3和RyR2 7种蛋白均表达,其中n NOS局限分布于AC平滑肌组织中的神经纤维并呈强阳性染色,但平滑肌细胞质染色较对照组明显浅淡。经统计分析仅IP3R2在AC表达升高且与mRNA表达情况一致,两组中其余蛋白表达无统计学差异。结论:在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,NOSs依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但iNOS mRNA异常增高且n NOS在平滑肌细胞的表达明显减少;钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色。结论:1.以平滑肌标志物鉴定酶消化法和组织块法所获得的食管胃结合部平滑肌组织来源的细胞为平滑肌细胞,提取食管胃结合部平滑肌细胞进行体外培养是可行的。在酶消化法中,以低浓度（0.5mg/ml）胶原酶Ⅱ注射于组织块并在低温（4℃）、长时间（1424h）条件下消化的方法获取平滑肌细胞效率最佳且细胞培养周期短;以此残余组织块直接用于组织块培养法,其获取平滑肌细胞的效率最佳。体外培养的平滑肌细胞以合成型为主,形态学表现多为梭型和长梭形;在不同培养条件下其平滑肌特异性标志物的表达水平不同;以专业培养基培养平滑肌细胞可有效扩大细胞种群,但以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基培养的平滑肌细胞拥有更好的平滑肌细胞表型。2.在Ach诱发体外培养的食管胃结合部平滑肌细胞内钙荧光变化过程中,体外培养的钩状纤维、套锁纤维、食管环行肌和胃小弯侧环形肌细胞以细胞内存储钙离子释放为主要特点;食管纵行肌、胃大弯侧环形肌细胞以细胞外钙离子内流为主要特点。但以上细胞均不单纯依赖于某种钙离子活动,而是将细胞内存储钙离子释放与细胞外钙离子内流相结合以有效维持较长时间的钙活动,尤以酶消化法获取并以含10%新生牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养的平滑肌细胞在乙酰胆碱介导的细胞内钙离子浓度变化中表现最佳,可作为最佳人EGJ平滑肌细胞体外培养方式。3.在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌病理变化中,一氧化氮合酶依然参与食管平滑肌病理状态的调节,但诱生型一氧化氮合酶mRNA异常增高且神经元型一氧化氮合酶在平滑肌细胞的表达明显减少。钙离子相关蛋白表达异常的肌源性因素也许在贲门失弛缓症病理生理机制中扮演着重要角色,其与一氧化氮合酶的相应变化在贲门失弛缓症病理生理过程中的作用应受到关注。
窦丽红[10]（2018）在《POEM治疗贲门失弛缓症44例疗效分析》文中认为目的分析POEM治疗贲门失弛缓症的临床疗效及安全性。方法回顾性分析2012年1月至2017年12月近6年就诊宁夏医科大学总医院明确诊断贲门失弛缓症并且经POEM治疗或开胸Heller手术治疗的患者临床病例资料。包括:1.一般资料:性别、年龄、病程、既往特殊治疗史等;2.手术相关资料:手术日期、手术用时、隧道长度、肌肉切开长度、术中并发症、术后并发症等;3.住院情况:术后住院天数、术后抗生素使用时间、术后禁食时间、住院总费用等;4.随访情况。5.与开胸Heller手术对比研究:选2012.01至2015.12既往无特殊治疗史的患者共26例,分组为POEM手术组（n=14）以及开胸Heller手术组（n=12）,统计两组手术的围手术期资料以及随访结果等进行对比分析。结果1.一般资料本研究共44例患者,男性21例,女性23例,男女之比为1︰1.095;年龄为15-73岁,平均年龄40±15岁,年龄集中在20-50岁。病程为1月-40年,中位病程为48个月。芝加哥分型:Ⅰ型2例（8.7%）,Ⅱ型21例（91.3%）,Ⅲ型0例;既往有特殊治疗史共5例,其中行扩张术3例,支架植入术2例。2.手术资料本研究组44例患者均顺利完成手术,手术用时为66.9±11.5 min,黏膜下隧道长度11.32±1.57 cm,肌切开长度7.61±2.40 cm。术中皮下气肿2例（4.5%）、穿孔3例（6.8%）、气胸3例（6.8%）、气腹3例（6.8%）;术后皮下气肿5例（11.4%）、纵隔积气1例（2.3%）、气胸1例（2.3%）、气腹2例（4.5%）、发热（9.0%）。3.疗效分析随访时间1-39月。术后1月、术后3月、术后6月临床缓解率分别95.5%、95.2%、94.9%。术后1月Eckardt评分由术前的（5.86±1.50）分下降至（2.05±1.40）分,差异性极显着（P<0.0001）;术后3月Eckardt评分由术前的（5.83±1.50）分分别降至（1.64±1.50）分,差异性极显着（P<0.0001）;术后6月Eckardt评分由术前的（5.92±1.51）分分别降至（1.72±1.54）分,差异性极显着（P<0.0001）。4.POEM与开胸Heller手术疗效对比（1）围手术期数据比较:手术用时开胸Heller手术组85.83±7.04 min,POEM组63.21±5.70 min,两组间比较差异性显着（P=0.019）,POEM治疗组短于外科治疗组。术中出血量相比较差异性极显着（P<0.0001）,POEM治疗组明显少于开胸Heller手术治疗组。术后禁食时间比较差异性极显着（P<0.0001）,POEM治疗组明显短于开胸Heller手术组。术后抗生素使用时间对比差异性显着（P=0.016）,POEM治疗组短于开胸Heller手术组。术后住院时间差异无统计学意义（P=0.470）。住院费用两组间对比差异无统计学意义（P=0.849）。（2）治疗效果和安全性比较:POEM治疗组与开胸Heller手术治疗组在短期内有效率相比较差异无统计学意义（P=1.000）。并发症发生率差异无统计学意义（P=0.692）。结论POEM可以迅速解除贲门失弛缓症患者临床症状,短期疗效肯定,安全性好。与开胸Heller手术相比,POEM不仅具有同样的有效性和安全性,而且创伤小、术后恢复快。
二、贲门失弛缓症动物模型的建立及其机制探讨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、贲门失弛缓症动物模型的建立及其机制探讨（论文提纲范文）
（1）不同隧道开口法经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的效果评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 研究对象与方法 |
| 1 研究对象及分组 |
| 2 手术程序 |
| 2.1 术前准备 |
| 2.2 手术方法 |
| 2.3 术后处理 |
| 2.4 出院与随访 |
| 2.5 观察指标 |
| 2.6 疗效与评估 |
| 3 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 一般基础资料 |
| 2 POEM 术后治疗效果分析(参阅表 3) |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的概况 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表(附录) |
| 致谢 |
（2）电针对功能性消化不良大鼠Cajal间质细胞的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 电针对FD大鼠一般行为学、胃肠动力的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD模型大鼠的建立 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况观察 |
| 3.2 各组大鼠体重变化 |
| 3.3 各组大鼠胃内残留率变化 |
| 3.4 各组大鼠小肠推进率变化 |
| 3.5 各组大鼠胃电节律变化 |
| 3.6 各组大鼠胃窦组织和十二指肠组织形态学变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 FD大鼠模型的选择与制备 |
| 4.2 电针对FD大鼠胃肠动力的影响 |
| 实验二 电针对FD大鼠ICC的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD模型大鼠的建立 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 电针促进FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit蛋白表达水平 |
| 3.2 电针促进FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43 蛋白表达水平 |
| 3.3 电针促进FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit mRNA表达水平 |
| 3.4 电针促进FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织Cx43m RNA表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ICC功能 |
| 4.2 ICC受损与FD胃肠动力障碍 |
| 4.3 电针对FD大鼠ICC的影响 |
| 实验三 电针对FD大鼠ICC自噬的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD模型大鼠的建立 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织ICC超微结构的影响 |
| 3.2 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平的影响 |
| 3.3 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织Beclin1m RNA表达水平影响 |
| 3.4 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit/LC3 相对表达量影响 |
| 3.5 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织c-kit/Beclin1 相对表达量影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞自噬 |
| 4.2 ICC自噬与FD |
| 4.3 电针对FD大鼠ICC自噬的影响 |
| 实验四 电针对FD大鼠AMPK/ULK1 信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及处理 |
| 2.2 FD模型大鼠的建立 |
| 2.3 干预方法 |
| 2.4 标本采集方法 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 电针对FD大鼠胃窦组织和十二指肠组织p-AMPK、AMPK蛋白表达水平的影响 |
| 3.2 电针对FD大鼠胃窦和十二指肠组织p-ULK1、ULK1 蛋白表达的影响 |
| 3.3 电针对FD大鼠胃窦和十二指肠组织p-LKB1、LKB1 蛋白表达的影响 |
| 3.4 电针对FD大鼠胃窦和十二指肠组织CaMKK2 蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AMPK/ULK1 自噬信号通路与胃肠疾病 |
| 4.2 电针对FD大鼠AMPK/ULK1 信号通路的影响 |
| 全文讨论 |
| 1 中医学对功能性消化不良(FD)的认识 |
| 1.1 病名 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 辨证分型 |
| 2 现代医学对FD的认识 |
| 2.1 FD的概念和诊断标准 |
| 2.2 FD的流行病学 |
| 2.3 现代医学对FD发病机制的认识 |
| 2.4 FD的治疗现状 |
| 3 穴位的选择 |
| 4 胃肠道ICC与 FD |
| 5 胃肠道ICC及 AMPK/ULK1 信号通路与FD |
| 6 电针干预FD大鼠作用机制的探讨 |
| 6.1 改善胃肠动力障碍 |
| 6.2 促进胃肠ICC结构和功能的恢复 |
| 6.3 对自噬相关基因的调控作用 |
| 6.4 AMPK/ULK1 信号通路可能是电针干预FD的起效机制 |
| 7 本研究的创新点 |
| 8 问题与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 博士期间发表论文及参与课题 |
| 致谢 |
（3）嗜酸性粒细胞诱导食管平滑肌重塑影响贲门失弛缓症发病及预后的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、EOS和重塑因子在AC患者LES组织标本中的表达 |
| 1.1 对象和方法(组织病理学研究) |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 组织标本取材 |
| 1.1.3 主要设备及试剂 |
| 1.1.4 实验步骤 |
| 1.1.5 镜下阅片 |
| 1.1.6 POEM手术预后随访 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 对象和方法(食管平滑肌厚度研究) |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 主要设备 |
| 1.2.3 实验步骤 |
| 1.2.4 统计学分析 |
| 1.3 结果(组织病理学研究) |
| 1.3.1 临床病例数据分析 |
| 1.3.2 EOS在LES组织标本中的分布 |
| 1.3.3 LES组织标本纤维化程度 |
| 1.3.4 LES组织平滑肌细胞的细胞骨架形态及超微结构 |
| 1.3.5 LES组织神经元的分布 |
| 1.3.6 重塑因子在LES组织标本中的表达 |
| 1.3.7 EOS与TGF-β1表达部位比较 |
| 1.3.8 AC患者EOS计数与临床数据的关系 |
| 1.3.9 AC患者重塑因子与临床数据的关系 |
| 1.3.10 AC患者EOS浸润程度与重塑因子表达水平的关系 |
| 1.4 结果(食管平滑肌厚度研究) |
| 1.4.1 临床病例数据分析 |
| 1.4.2 接受POEM治疗的AC患者术后长期随访食管最大宽度及钡剂排空速度变化 |
| 1.4.3 接受POEM治疗的AC患者术后长期随访食管下段多部位固有肌层厚度变化 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 二、AC动物模型的食管重塑相关研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要设备和试剂 |
| 2.1.3 实验步骤 |
| 2.1.4 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 多种方法小鼠AC模型的建立 |
| 2.2.2 HE、免疫组织化学染色、Western blot实验及Masson纤维化染色结果 |
| 2.2.3 EOS和组织重塑对食管平滑肌条收缩活动的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、EOS诱导食管平滑肌组织重塑的机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要设备和试剂 |
| 3.1.3 实验步骤 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 EOS和TGF-β1对食管平滑肌细胞活性的影响 |
| 3.2.2 EOS促食管平滑肌细胞重塑的机制 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、抗EOS药物对AC模型动物食管重塑的治疗作用 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要设备和试剂 |
| 4.1.3 实验步骤 |
| 4.1.4 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 动物进食、体重的变化 |
| 4.2.2 抗EOS药物对食管运动功能的影响 |
| 4.2.3 HE染色、Masson染色及免疫组化染色结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 嗜酸性粒细胞性食管炎组织重塑的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于隧道技术食管电起搏器植入及电刺激参数研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、基于隧道技术食管电起搏器植入 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物选取 |
| 1.1.2 实验器材 |
| 1.1.3 基于隧道技术食管顺序电起搏器及电极植入 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 基于隧道技术食管电起搏器及电极成功植入 |
| 1.2.2 基于隧道技术食管电起搏器及电极植入后食管起搏 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、基于隧道技术食管电起搏器的电刺激参数摸索 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物及实验材料 |
| 2.1.2 实验过程及电刺激方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 结论 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 电刺激的研究基础和研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）丁香降气方对混合反流性食管炎模型大鼠食管-胃动力的作用机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 造模方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 葡聚糖蓝-2000灌胃及标本采集 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.5.1 一般状态观察 |
| 2.5.2 HE染色法观察食管病理形态学改变 |
| 2.5.3 酶标仪检测胃内残留色素吸光度 |
| 2.5.4 ELISA法检测血清脑肠肽的浓度 |
| 2.5.5 透射电镜法观察食管ICCs超微结构 |
| 2.5.6 western blot法观察食管SCF、c-kit蛋白的表达 |
| 2.5.7 Real-time PCR法检测食管SCF、c-kit基因mRNA的表达 |
| 2.6 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠的一般情况 |
| 3.2 大鼠食管黏膜病理形态学变化 |
| 3.3 大鼠的胃排空情况 |
| 3.4 大鼠血清脑肠肽浓度的变化 |
| 3.5 大鼠食管ICCs的超微结构 |
| 3.6 大鼠食管SCF、c-kit蛋白的表达 |
| 3.7 大鼠食管SCF、c-kit基因mRNA的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 混合反流性食管炎概述 |
| 4.2 导师对混合反流性食管炎的认识 |
| 4.3 丁香降气方的组方特点及方药分析 |
| 4.4 研究结果分析 |
| 4.4.1 丁香降气方对混合反流性食管炎大鼠食管黏膜的修复作用 |
| 4.4.2 丁香降气方对混合反流性食管炎大鼠胃排空的影响 |
| 4.4.3 丁香降气方对混合反流性食管炎大鼠血清脑肠肽的影响 |
| 4.4.4 丁香降气方对混合反流性食管炎大鼠食管下段组织中ICCs/SCF/c-kit通路的影响 |
| 4.5 丁香降气方治疗混合反流性食管炎的可能机制 |
| 5 结论 |
| 6 不足和展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 :综述 |
| 参考文献 |
| 附录二 :在校期间发表论文 |
（6）关于贲门失弛缓症发病及治疗过程中硫化氢作用的探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、硫化氢在贲门失弛缓症病因中作用的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象选取 |
| 1.1.2 实验取材 |
| 1.1.3 硫化氢合成酶在贲门失弛缓症患者中表达情况的免疫组化实验 |
| 1.1.4 硫化氢合成酶在贲门失弛缓症患者中表达情况的蛋白质印迹实验 |
| 1.1.5 硫化氢合成酶与sox-10在贲门失弛缓症患者中免疫荧光双染实验 |
| 1.1.6 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 病例数据分析 |
| 1.2.2 硫化氢合成酶在贲门失弛缓症患者中表达减少 |
| 1.2.3 硫化氢合成酶主要存在于贲门失弛缓症患者食管肌间神经丛中 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、硫化氢在贲门失弛缓症动物模型中治疗可行性的探索 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 实验动物模型的建立 |
| 2.1.5 硫化氢治疗对肌动蛋白与弹力蛋白表达影响的实验 |
| 2.1.6 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 模型建立评估 |
| 2.2.2 肌动蛋白和弹力蛋白在贲门失弛缓症模型中表达增多 |
| 2.2.3 硫化氢治疗降低模型中重塑标志蛋白表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、硫化氢对贲门失弛缓症患者治疗作用的观察 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 病例来源 |
| 3.1.2 实验仪器及主要实验试剂 |
| 3.1.3 富露施疗效的前瞻性自身前后对照研究 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 入组情况 |
| 3.2.2 富露施治疗后患者随访情况 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 贲门失弛缓症的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）嗜酸性粒细胞诱导食管壁内神经元损伤在贲门失弛缓症发病机制中的探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、贲门失弛缓症患者食管肌层活化嗜酸性粒细胞的分布 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 实验标本取材 |
| 1.1.3 主要仪器及试剂 |
| 1.1.4 实验步骤 |
| 1.1.5 镜下阅片 |
| 1.1.6 POEM手术结果判定 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 病例特点 |
| 1.2.2 活化的嗜酸性粒细胞在食管不同部位的分布 |
| 1.2.3 活化的嗜酸性粒细胞与食管壁内神经在食管肌层不同部位的分布 |
| 1.2.4 嗜酸性粒细胞趋化因子在贲门失弛缓症食管肌层的表达 |
| 1.2.5 贲门失弛缓症患者嗜酸性粒细胞与临床数据的关系 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、嗜酸性粒细胞浸润的贲门失弛缓症动物模型研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备和试剂 |
| 2.1.3 实验步骤 |
| 2.1.4 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 小鼠嗜酸性粒细胞浸润贲门失弛缓症模型的建立 |
| 2.2.2 小鼠嗜酸性粒细胞浸润贲门失弛缓症模型验证嗜酸性粒细胞的作用 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、嗜酸性粒细胞对肠神经元及食管运动功能的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器设备和试剂 |
| 3.1.3 实验步骤 |
| 3.1.4 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 嗜酸性粒细胞培养液中ECP的浓度 |
| 3.2.2 流式细胞结果 |
| 3.2.3 嗜酸性粒细胞对肠神经元细胞活性的影响 |
| 3.2.4 嗜酸性粒细胞对食管平滑肌条收缩活动的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、抗嗜酸性粒细胞药物对贲门失弛缓症的作用 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要仪器设备和试剂 |
| 4.1.3 实验步骤 |
| 4.1.4 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 动物进食、体重的变化 |
| 4.2.2 抗嗜酸性粒细胞药物对食管运动的作用 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 嗜酸性粒细胞与功能性胃肠病 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）环形肌切开和全层肌切开治疗贲门失弛缓症长期随访研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录图表 |
| 个人简历及在校期间发表文章 |
| 致谢 |
（9）人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 乙酰胆碱对体外培养人食管胃结合部平滑肌细胞内钙离子浓度的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 钙离子相关蛋白及一氧化氮合酶在贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌中表达的初步研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 综述 食管平滑肌细胞体外培养的可行性及影响食管运动的因素 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）POEM治疗贲门失弛缓症44例疗效分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 1 研究对象 |
| 2 研究内容 |
| 3 与开胸 Heller 手术对比研究 |
| 4 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
四、贲门失弛缓症动物模型的建立及其机制探讨（论文参考文献）
- [1]不同隧道开口法经口内镜下肌切开术治疗贲门失弛缓症的效果评价[D]. 李荣. 青岛大学, 2021(02)
- [2]电针对功能性消化不良大鼠Cajal间质细胞的影响及机制研究[D]. 潘小丽. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [3]嗜酸性粒细胞诱导食管平滑肌重塑影响贲门失弛缓症发病及预后的机制研究[D]. 王彬. 天津医科大学, 2020(06)
- [4]基于隧道技术食管电起搏器植入及电刺激参数研究[D]. 陈秋宇. 天津医科大学, 2020(06)
- [5]丁香降气方对混合反流性食管炎模型大鼠食管-胃动力的作用机制研究[D]. 王婷婷. 上海中医药大学, 2019(03)
- [6]关于贲门失弛缓症发病及治疗过程中硫化氢作用的探讨[D]. 张馨. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]嗜酸性粒细胞诱导食管壁内神经元损伤在贲门失弛缓症发病机制中的探讨[D]. 晋弘. 天津医科大学, 2018(01)
- [8]环形肌切开和全层肌切开治疗贲门失弛缓症长期随访研究[D]. 王娟. 郑州大学, 2018(01)
- [9]人食管胃结合部平滑肌细胞原代培养及贲门失弛缓症患者腹段食管环行肌舒缩信号分子表达的初步研究[D]. 高杨. 河北医科大学, 2018(12)
- [10]POEM治疗贲门失弛缓症44例疗效分析[D]. 窦丽红. 宁夏医科大学, 2018(09)