一、低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义（论文文献综述）
湛梦茹[1]（2021）在《激活免疫检查点OX40对HBV复制的影响及相关机制研究》文中认为背景与目的:慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）引起的一种慢性传染性疾病,全球疾病负担重,其中大部分慢性乙肝病毒携带者均在5岁之前被感染。目前没有能够彻底清除HBV的治疗方法。免疫治疗能够实现CHB患者的功能性治愈,是具有前景的乙肝治疗策略之一。慢性HBV感染时免疫系统往往是免疫耐受或衰竭状态。免疫检查点是表达在免疫细胞表面对免疫反应起活化或抑制作用的分子,通过对他们的调节能够打破这种耐受状态。共刺激分子OX40/OX40L、4-1BB是肿瘤坏死因子（受体）超家族（tumor necrosis factor（receptor）superfamily,TNF（R）SF）的成员,在免疫反应的活化尤其是T细胞的活化中起到了重要作用。而程序性死亡受体-1（programmed cell death 1,PD-1）是免疫球蛋白受体CD28亚家族的成员,作为抑制性的信号分子与免疫系统的耐受或衰竭有关。然而目前为止,这些免疫检查点能否作为免疫调节的靶点治疗CHB尚不能明确。相对于婴幼儿,成人对HBV可以产生更强的更有效的免疫反应从而清除病毒,其中发挥年龄依赖性作用的免疫分子尚不清楚。本研究立足于慢性乙型肝炎感染的背景下,通过对OX40/OX40L、PD-1、4-1BB在CHB患者中的表达特点的研究,从而明确其临床意义,及其与年龄的关系。接着我们在rAAV8/1.3HBV小鼠模型中激活免疫检查点OX40,研究其对HBV复制的影响及相关机制,以期为以OX40为靶点治疗CHB的策略提供更多的理论依据。材料与方法:本研究首先收集人的样本用以检测免疫检查点OX40/OX40L、PD-1、4-1BB的表达情况。外周血样本来自我们从2018年9月到2019年6月在吉林大学白求恩第一医院纳入的64名慢性乙肝患者和另外招募的37名健康志愿者。其中慢性乙肝患者包括52名未进行抗病毒治疗的患者和12名应用恩替卡韦（entecavir,ETV）抗病毒治疗的患者,健康志愿者包括24名成人和13名儿童。从外周血中分离出血浆和外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）。肝脏组织病理标本来自18名进行肝脏穿刺的患者和6名进行肝脏血管瘤手术的成人患者。其中18名慢性乙肝患者包括9名慢性乙型肝炎发作的患者和9名慢性乙型病毒感染未发作的患者。在收集的人的样本中我们先后检测了OX40/OX40L、PD-1、4-1BB的表达情况。为了研究OX40/OX40L在人群中的表达特点,我们应用流式细胞术检测PBMCs中膜形式的OX40和OX40L（membrane-bound OX40,m OX40;membrane-bound OX40L,m OX40L）的表达;应用酶联免疫吸附试验检测血浆中可溶性形式的OX40和OX40L（soluble OX40,s OX40;soluble OX40L,s OX40L）水平;应用免疫组化的方法对肝组织中OX40和OX40L的表达量进行检测。之后为了研究PD-1和4-1BB在CHB患者中表达特点,我们应用前期检测OX40/OX40L的人群样本外加从我院病理科另申请到的6名儿童的肝组织样本,对PD-1和4-1BB在CHB患者中的表达情况进行了检测。我们应用磁珠分选的方法将PBMCs中的CD4+和CD8+T细胞分选出来,应用q RT-PCR的方法检测了各个T细胞亚群PD-1和4-1BB mRNA的水平;应用酶联免疫吸附试验法检测血浆中可溶性的PD-1和4-1BB（soluble PD-1,s PD-1;soluble 4-1BB,s4-1BB）的水平;应用免疫组化的方法检测了肝组织中关于PD-1和4-1BB的表达情况。最后我们将以上检测结果与CHB患者的疾病特点及临床指标进行相关性分析从而探究他们在慢性乙肝感染中的临床意义,及与年龄的关系。基于前期临床样本的结果,我们应用尾静脉注射腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）的方法构建了rAAV/1.3HBV小鼠模型,首次将OX40激动性的单抗应用于该模型以观察其产生的作用。为了明确激活免疫检查点OX40对HBV复制的作用,我们应用全自动电化学发光分析仪检测血清内乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBs Ag）和乙肝e抗原（hepatitis B e antigen,HBe Ag）的水平,用q RT-PCR法检测HBV DNA定量,用免疫组化法检测小鼠肝组织内HBs Ag和乙肝核心抗原（hepatitis B core antigen,HBc Ag）的表达水平。为了明确激活OX40靶点对HBV复制的作用的同时产生的肝脏炎症变化,我们应用微孔板法检测小鼠血清中ALT、AST的水平,应用HE染色的方法观察小鼠肝脏炎症病理变化。为了观察这个过程中伴随的免疫变化,我们分离了小鼠肝脏内浸润的淋巴细胞,应用流式细胞术对其中T细胞亚群的比例进行了检测,同时我们应用流式微球检测法（cytometric bead array,CBA）对该过程中小鼠血清中Th1、Th2、Th17相关的细胞因子进行了评估。期间我们还对小鼠脾脏的长度和重量进行了评估与检测。为了探究上述过程的机制,我们在rAAV8/1.3HBV小鼠模型的基础上将CD4+和CD8+T细胞进行分别剔除,构建了CD4+和CD8+T细胞缺陷的rAAV8/1.3HBV小鼠模型,连同安慰剂组小鼠同时给予OX40激动剂。应用上述检测方法分别对模型中病毒学变化和血清转氨酶变化进行了检测。同时为了进一步从mRNA水平研究激活OX40靶点对HBV复制的作用过程中基因表达的变化,我们分离了小鼠肝内的淋巴细胞对其进行mRNA转录组测序（mRNA sequencing,mRNA-seq）。测序所得的差异表达的mRNAs（differentially expressed mRNAs,DEmRNAs）分别纳入火山图和聚类热图,并分别应用Go功能富集及KEGG、Reactome通路富集的方法对这些DEmRNAs所富集的功能和通路进行初步探索。研究结果:关于OX40/OX40L在人的样本中的表达结果显示在外周血PBMCs中表达OX40+T细胞的百分比在CHB患者中是减少的,其中在高病毒载量组和肝炎发作组中这种减少的趋势尤其明显,且OX40+T细胞的百分比与血清病毒学指标呈负相关。而OX40L+B细胞和单核细胞的百分比在CHB患者的PBMCs中是增多的,同样的这种增多的趋势在高病毒载量组和肝炎发作的组中也比较明显,且他们主要与肝脏炎症指标呈正相关。同时我们还发现慢性乙肝患者外周血中s OX40/OX40L表达明显升高,同样的这种增多的趋势在高病毒载量组和肝炎发作组比较明显,且s OX40/OX40L的水平与病毒复制及肝脏炎症指标均呈正相关。另外ETV治疗前后血浆中s OX40水平没有明显变化。同时我们发现肝组织中OX40/OX40L的表达趋势与血浆中s OX40/OX40L表达趋势相似,即在CHB患者中是表达升高的,且在肝炎发作的患者中升高的趋势更明显。最后我们发现在健康人外周血中总T细胞中OX40+细胞的百分比,CD4+T细胞中的OX40+细胞的百分比,CD14+单核细胞中OX40L+细胞的百分比及血浆中s OX40的水平与年龄呈正相关,具有年龄依赖性。其次关于PD-1和4-1BB在人群中表达的相关研究结果显示在CHB患者中无论是PBMCs中CD4+T细胞还是CD8+T细胞中PD-1 mRNA的水平与健康组相比均是升高的,这与CHB患者肝脏组织中PD-1的表达趋势是一致的。在CHB患者血浆中s PD-1也是升高的,且这种升高的趋势在高病毒载量组和肝炎发作组也比较明显,ETV治疗前后s PD-1水平没有明显变化。另外血浆中s PD-1的水平不仅与HBV的病毒学指标呈正相关还与肝脏炎症指标呈正相关。4-1BB在CHB患者中的表达特点大致与PD-1相似,简单来讲血浆中的s4-1BB的水平在CHB患者中也是异常升高的,且在高病毒载量组和肝炎发作组升高趋势比较明显,ETV治疗前后s4-1BB水平没有明显变化。血浆中s4-1BB水平主要与血清病毒学指标呈正相关。肝组织中4-1BB的表达趋势与血浆中s4-1BB的趋势相似,即与健康对照组相比,CHB患者的肝脏组织中4-1BB的表达水平更高。而在总PBMCs、CD4+T细胞以及CD8+T细胞中4-1BB mRNA的水平在CHB患者中均有升高的趋势但无统计学差异。最后我们观察到在健康人群中无论是PD-1还是4-1BB的表达在不同年龄组均无明显差异。通过对上述免疫检查点的表达特点及临床意义的分析,我们选择将OX40靶点激动剂应用于已经构建成功的rAAV8/1.3HBV小鼠模型中。我们发现小鼠血清中HBs Ag和肝内HBV DNA水平均有所下降,且血清中HBs Ag的水平在第8天达到最低值。同时我们观察到小鼠肝组织内HBs Ag和HBc Ag表达与安慰剂组相比也有减少的趋势。但激活OX40靶点似乎对血清HBV DNA及HBe Ag水平没有影响。在HBV小鼠模型中激活OX40靶点HBV被抑制的同时还伴随着肝脏炎症的产生,表现为血清中ALT和AST不同程度的升高,肝脏组织内炎症细胞的浸润。除此之外,小鼠肝脏内T细胞亚群比例及血清中免疫细胞因子也发生了变化,表现为CD8+T细胞比例的升高及Th1、Th2及Th17相关的细胞因子升高,且相关细胞因子的水平均表现为先升高再下降的趋势,与病毒清除的过程一致。另外我们发现使用OX40激动剂能够引起小鼠脾脏的增大。同时我们还发现在该模型中应用OX40激动剂的效应呈剂量依赖性,主要表现在血清HBs Ag、肝内HBV DNA的下降水平,CD8+T细胞比例升高的水平以及脾脏增大的程度上。在应用OX40激动剂抑制HBV过程相关机制的探索中,我们发现CD4+/CD8+T细胞缺陷和免疫正常的rAAV8/1.3HBV小鼠同时给予OX40激动剂后,在给药第8天和第12天CD4+T和CD8+T细胞缺陷的小鼠血清中HBs Ag水平与免疫正常组HBV小鼠相比均是升高的,其中以CD8+T细胞缺陷的小鼠升高趋势更明显。与免疫正常组的小鼠相比,CD4+T细胞缺陷小鼠肝内HBV DNA水平没有明显变化,而CD8+T细胞缺陷小鼠则有轻度升高趋势。对于小鼠血清ALT水平,免疫正常的和CD4+T细胞缺陷的HBV小鼠给予OX40激动剂后转氨酶均有所升高,而CD8+T细胞缺陷的HBV小鼠则没有明显升高。关于应用OX40激动剂和安慰剂的HBV小鼠肝内淋巴细胞基于mRNA水平的转录组学测序结果显示,经过OX40激动剂处理后小鼠肝内淋巴细胞表达上调的mRNAs有3008个,下调的有2269个,并可聚类成簇。经Go功能富集分析后,我们发现在生物进程方面这些DEmRNAs主要富集到了白细胞的分化,染色质及组蛋白的修饰调节等过程;在细胞成分方面他们主要富集到了核内的染色质、异染色质及中心体等细胞组成成分上;而在分子功能方面他们主要富集在转录、翻译及小分子GTP酶的结合、Ras GPT酶结合等功能上。经KEGG通路富集分析我们发现这些GEmRNAs主要富集在HBV、人类嗜T淋巴细胞白血病病毒（human T-cell leukemia virus,HTLV）、EB病毒感染相关通路、丝裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、趋化因子及NF-kapa B等信号通路。而经Reactome分析这些GEmRNAs主要富集在中性粒细胞脱颗粒,细胞因子,白细胞介素,转录调控等相关信号通路。研究结论:免疫检查点OX40/OX40L、PD-1及4-1BB在人的样本中的表达特点向我们提示这几个免疫检查点可能均与慢性HBV感染相关。但其中只有OX40的表达与HBV病毒学指标呈负相关,考虑其与病毒清除密切相关,且只有OX40/OX40L表达呈年龄依赖性。因此我们将OX40激动剂首次应用于rAAV8/1.3HBV小鼠模型,发现激活OX40靶点对HBV复制具有抑制作用,是一个具有前景的治疗CHB的免疫检查点,但激活OX40靶点不能完全清除HBV因此未来可能还需要联合其它治疗方式。对于激活OX40靶点抑制HBV复制的机制显示该过程相对依赖CD4+T细胞似乎更依赖于CD8+T细胞,CD4+T细胞的重要性不可否认,但未来对于HBV的免疫治疗我们也许应该将更多的关注点放在CD8+T细胞上。
曾伊凡[2]（2021）在《经NAs治疗的慢性乙型肝炎患者血清HBV pgRNA的表达及其临床意义》文中进行了进一步梳理背景:慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B,CHB）是临床常见的慢性传染病之一,是由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）持续感染导致的慢性肝脏炎症性疾病,如果不及时进行规范化的抗病毒治疗,可进展为肝硬化（Liver Cirrhos is,LC）和肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）[1,2]。核苷（酸）类似物（N ucleos（t）ide analogues,NAs）的问世使CHB患者抗病毒治疗发生了革命性的变化,其有效的控制了 HBV的复制和肝脏的炎症,减少了慢性乙型肝炎向肝硬化、肝细胞癌的方向发展。但NAs仅仅只能通过抑制HBV多聚酶逆转录活性来降低乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（Hepatitis B virus deoxyribonucleic acid,HBV DNA）的水平,而无法完全清除HBV复制的原始模板,即肝细胞中的共价闭合环状DNA（co valently closed circular DNA,cccDNA）,因此该类药物通常需要长期服用[3,4]。目前主要通过检测HBV DNA、乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B surface antigen,HBs Ag）、乙型肝炎e抗原（Hepatitis B e antigen,HBeAg）等方法来评估患者抗病毒治疗效果及是否具有停药指征,但它们并不能准确的反映cccDNA的转录活性,因此需要更有效的指标来判断cccDNA是否得到完全清除或有效控制。近年来,有研究发现外周血HBV前基因组RNA（pre-genomic,pgRNA）水平与cccDNA水平呈正相关[5-8],因此,研究CHB患者经NAs抗病毒治疗后外周血HBV pgRNA的水平及与其他HBV标志物的相关性,对于寻找判断抗病毒疗效的新型标志物具有重要意义。目的:（1）探讨HBV pgRNA在评估NAs抗HBV疗效上的价值;（2）比较经恩替卡韦（Entecavir,ETV）和替诺福韦（Tenofovir,TDF）单药治疗后,患者血清H BV pgRNA的表达差异及临床意义。方法:本研究纳入2019年5月至2020年9月就诊于湖北医药学院附属十堰市太和医院感染科门诊和病房应用ETV或TDF抗病毒治疗48周、144周、240周且HBV DNA<20 IU/mL（高灵敏度检测）的CHB患者,留取血清标本并收集相关临床资料,分别采用化学发光微粒子免疫检测法检测血清HBsAg和HBeAg水平,qPCR法检测血清HBV pgRNA水平。率的组间比较采用χ2检验,计量资料的组间比较采用方差分析、独立样本t检验和非参数秩和检验;相关分析用Spearman相关分析。结果:1.本研究共纳入185例CHB患者,其中104例患者血清中可检出HBV pgRNA,血清HBV pgRNA检出率为56.22%;2.经NAs治疗的患者中,48周组、144周组、240周组患者血清HBV pgRNA的检出率分别为73.58%、54.10%、45.07%,三组间血清HBV pgRNA检出率有显着差异（p<0.05）,且随抗病毒治疗年限增长HBV pgRNA检出率呈下降趋势。三组间血清HBV pgRNA水平有显着差异（p<0.05）,进一步两两组间比较发现,144周组和240周组HBV pgRNA水平低于48周组,差异有统计学意义（144周vs.48周:2.46 vs.3.54 log10 copies/mL,p<0.05;240周 vs.48周:1.70 vs.3.54 log10 cop ies/mL,p<0.05）;240周组HBV pgRNA水平低于144周组,差异有统计学意义（1.70 vs.2.46 log10 copies/mL,p<0.05）。三组间HBsAg水平不完全相同,进一步两两组间比较发现,240周组HBsAg水平低于48周组,差异有统计学意义（2.26 vs.2.94 log10 IU/mL,p<0.05）;3.CHB患者血清HBV pgRNA水平与HBsAg水平呈正相关（r=0.425,p<0.001）。根据HBeAg表达状态的不同,观察到HBeAg阳性患者的HBV pgRNA水平与H BsAg呈正相关（r=0.404,p<0.01）,而在HBeAg阴性患者中HBV pgRNA水平与HB sAg无相关性（r=0.266,p>0.05）;4.HBeAg阳性CHB患者血清HBV pgRNA检出率显着高于HBeAg阴性CHB患者（86.79%vs.43.94%,p<0.05）;HBeAg阳性患者血清HBV pgRNA水平高于HB eAg阴性患者,差异有统计学意义（3.74 vs.1.70 log10 copies/mL,p<0.05）;HBe Ag阳性患者HBsAg水平高于HBeAg阴性患者,差异有统计学意义（3.02 vs.2.44 1 og10 IU/mL,p<0.05）;5.ETV组和TDF组CHB患者在抗病毒治疗144周时,两组HBV pgRNA检出率无显着差异（53.13%vs.55.17%,p>0.05）;两组血清HBV pgRNA水平和HBsAg水平均无显着差异（p>0.05）。结论:1.血清HBV pgRNA检测简便无创,在HBV DNA阴转后,作为一种持续监测NAs抗病毒治疗效果的新型标志物具有广阔的临床应用前景;2.ETV和TDF抗病毒治疗3年时患者的血清HBV pgRNA检出率和水平无显着差异,进一步证实两种药物抗病毒疗效类似。
刘嘉清[3]（2020）在《ELISA检测乙肝两对半少见模式和弱阳性结果分析及报告单注释策略》文中认为目的:对酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测的乙肝表面抗原（HBs Ag）弱阳性、HBs Ag与乙肝表面抗体（HBs Ab）同时阳性、乙肝e抗体（HBe Ab）与乙肝核心抗体（HBc Ab）同时阳性或其中一项阳性、HBs Ab阳性且HBe Ab与HBc Ab同时阳性或其中一项阳性的标本进行定量复检,并比较分析其HBs Ag阳性率,从而为解释性注释提供依据。方法:筛选出56例HBs Ag弱阳性、58例HBs Ag与HBs Ab同时阳性、80例HBe Ab与HBc Ab同时阳性或其中一项阳性、93例HBs Ab阳性且HBe Ab与HBc Ab同时阳性或其中一项阳性4种模式的ELISA标本,利用化学发光免疫分析法（CLIA）进行定量复查,并比较不同模式下HBs Ag的阳性率。结果:1±2-3-4-5-（1、2、3、4、5分别代表HBs Ag、HBs Ab、HBe Ag、HBe Ab、HBc Ab。阳性结果以“+”表示,阴性结果以“-”表示,特指弱阳性结果以“±”表示。）与1±2-3-4+5+模式HBs Ag复查后阳性率分别为15.4%与100%（P<0.01）;1+2+3-4-5-与1+2+3-4+5+模式HBs Ag复查后阳性率分别为5.0%与93.8%（P<0.001）,HBs Ab复查后阳性率分别为100.0%与43.8%（P<0.001）,HBs Ag与HBs Ab复查后皆为阳性的概率分别为5.0%与37.5%（P<0.01）;1-2-3-4-5+与1-2-3-4+5+模式HBs Ag复查后阳性率分别为10.8%与35.7%（P<0.0167）。以上2组间比较差异皆有统计学意义。HBs Ab阳性、HBe Ab与HBc Ab同时阳性或其中一项阳性下的各模式HBs Ag复查后皆为阴性。结论:HBs Ab、HBe Ab与HBc Ab结果与乙肝两对半的模式对判断HBs Ag结果有重要的指导意义,HBe Ab与HBc Ab同时阴性在HBs Ag弱阳性、HBs Ag与HBs Ab同时阳性的ELISA模式中提示HBs Ag存在假阳性可能;HBe Ab与HBc Ab同时阳性或HBc Ab单独阳性的ELISA模式提示HBs Ag存在漏检可能;HBs Ab阳性且HBe Ab与HBc Ab同时阳性或其中一项阳性的ELISA模式中HBs Ag漏检可能性较小,应据此给予复查建议。
范晶华[4]（2019）在《慢性乙肝病毒感染者核苷（酸）类似物长期抗病毒治疗疗效与乙肝病毒准种异质性及进化机制研究》文中研究表明[目 的]前期研究聚焦早期准种变化对短期（一般3年或以下）抗病毒治疗疗效的影响。本研究前瞻性观察慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者（慢性乙型肝炎及乙肝病毒相关肝硬化患者）核苷（酸）类似物（NAs）长期（近10年）抗病毒治疗过程中的疗效及对临床结局的影响,研究抗病毒治疗关键时间节点的乙型肝炎病毒准种异质性及其进化机制,进一步明确抗病毒治疗效果差异的病毒学机制。[方法]本研究的第一部分纳入107例接受核苷（酸）类似物治疗的慢性HBV感染者开展为期111.83月的前瞻性、开放性、观察性的真实世界研究。入组患者随机分为恩替卡韦组（治疗药物为恩替卡韦）和非恩替卡韦组（治疗药物为拉米夫定、阿德福韦酯或替比夫定）。每24～48周进行一次随访,收集患者临床资料,分析长期抗病毒治疗后病毒学、生化及血清学应答情况及对临床结局的影响。本研究第二部分采用第一部分的24例慢乙肝患者进行HBV准种研究。首先,我们将研究对象分为三组（三组间无配对关系）,即未治疗组、治疗1年组和治疗10年组（病毒学突破组）,分别取不同时期的患者血清进行HBV准种研究。对于治疗1年组,我们根据患者治疗1年以后病毒应答的时间情况,分为A组（1年<HBV应答时间<3年）和B组（3年<HBV应答时间<6年）。采用PCR产物克隆测序的方法对逆转录酶（reverse transcriptase,RT）区准种进行分析,比较不同治疗时间点的HBV准种差异,探讨核苷（酸）类似物治疗1年时HBV准种的特征与之后病毒学应答的关系及RT基因的准种进化规律。本研究第三部分对一例乙肝病毒表面抗原（Hepatitis B surface Antigen,HBsAg）和抗-HBs共存的HBV准种基因组进行克隆、测序、生物信息学比较及荟萃分析。[结 果]第一部分:经过长期NAs抗病毒治疗,HBVDNA的对数值（log10 IU/mL）治疗后降为 1.28（1.28,1.40）IU/mL 低于治疗前的 6.92（5.06,7.89）IU/mL（P<0.05）,恩替卡韦组较非恩替卡韦治疗组下降幅度更大（P<0.05）。随访结束时,病毒学突破人数为28人,突破率为26.17%,恩替卡韦组与非恩替卡韦组无差异（P>0.05）。治疗1年时HBV DNA不可测为病毒学突破的保护因素（HR=0.235（0.103,0.538）,P<0.05）。67.9%患者 HBsAg 定量低于 1500 IU/ml,6.54%（7例）患者HBsAg消失并于治疗24～48周时获得早期病毒学应答。乙肝病毒e抗原（Hepatitis B e Antigen,HBeAg）消失率为 71.21%,血清转换率为 40.91%。患者HBeAg消失与基线HBV DNA、ALT水平、HBV DNA转阴时间无关（P>0.05）。6 例患者（5.61%,6/107）发生恶性肿瘤,其中 3 例（2.80%,3/107）发生肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）、均为恩替卡韦治疗患者。APRI指数治疗后为 0.44（0.31,0.56）,低于治疗前 1.05（0.53,1.75）（P<0.01）,随访结束后患者肝硬度值为4.9（4.0,6.2）KPa。第二部分:我们采用24例慢乙肝患者451条HBV RT克隆序列用于下游分析,研究不同抗病毒效果患者的病毒学机制,结果如下:1.A组40%（2例）患者检测到耐药突变,B组75%（6例）患者检测到耐药突变,治疗10年组50%（3例）患者检测到耐药突变。B组和治疗10年组均有50%的患者积累了插入、缺失或终止密码子突变。2.在RT基因的核苷酸和氨基酸水平,治疗1年组的复杂度均显着高于未治疗组（P<0.05）,而且治疗1年或10年组的平均遗传距离均显着高于未治疗组（P<0.05）。在RT基因的核苷酸水平,A组复杂度（Sn=0.9734）均显着高于 B 组（Sn=0.8875,P=0.0393）和治疗 10 年组（Sn=0.8524,P=0.0141）。A组和B组的平均遗传距离、平均同义替换数目及平均非同义替换数目水平相当,均低于治疗10年组,但无统计学意义（P>0.05）。在RT基因的氨基酸水平,A组复杂度（Sn=0.8874）显着高于治疗10年组（Sn=0.7098,P=0.0473）,但三组间的平均遗传距离无显着差异（P>0.05）。3.与治疗1年组（A组和B组）相比,未治疗组和治疗10年组的系统进化树具有较为简单的拓扑结构。治疗1年组（A和B组）平均枝长（0.0029±0.00029）显着大于未治疗组（0.0012±0.0003,P=0.0137）。A 组平均枝长（0.0028±0.0005）和 B 组的平均枝长（0.003±0.0004）均显着大于治疗10年组（0.002±0.0004）（P<0.001）,但A组和B组的平均枝长差异不显着（P=0.6368）。4.我们对三组患者HBVRT的选择压力（ω=dN/dS）进行分析。结果表明,三组患者HBV均经历了正选择,治疗10年组积累了更多的正选择信号。在基因型B、C及B/C中,三组患者具有相似的ω值分布趋势。在B/C基因型中,A组的选择压力（ω=0.296±0.0332）和B组的选择压力（ω=0.291±0.0469）没有差异,均低于治疗10年组（ω=0.5679±0.1722）。5.治疗1年时RT准种复杂度（核苷酸水平）与相应的HBV DNA载量呈负相关（P=0.0163,R=-0.6493）。RT的准种复杂度（核苷酸和氨基酸水平）与相应的ALT 水平呈负相关（P=0.0437,R=-0.5661;和 P=0.0117,R=-0.673）。平均遗传距离、平均同义替换数和平均非同义替换数与相应的HBV DNA载量、ALT水平无统计学相关性。第三部分:本研究分析1例HBsAg和抗-HBs共存的基因型为Ⅰ型的慢性乙型肝炎患者HBV准种基因组特征,该病毒准种基因组具有高度复杂的准种异质性和高频的HBsAg突变,其中69%的克隆发生PreS缺失和HBsAg氨基酸变异。Meta分析结果表明,PreS缺失与HBsAg和抗-HBs共存具有相关性,总体风险估值为 4.09（95%CI（2.18,7.68））。[结 论]NAs长期抗病毒治疗可以使患者不同程度获益,与HBV准种异质性密切相关。在抗病毒药物压力下,HBVRT准种的异质性与核苷（酸）类似物抗病毒治疗应答早晚有关,该基因的准种的高复杂度可能提示治疗应答佳。在治疗1年时,高复杂度的HBV准种,有利于HBV DNA和ALT水平下降,但低水平的ALT反而不利于HBVDNA清除。抗病毒治疗效果差的患者积累了较多的耐药突变、缺失、或终止密码子突变,提示这些突变不利于病毒学应答,可能与免疫逃逸有关。治疗10年组具有较为简单的进化模式与更多的正选择信号,提示这些变化可能与病毒学突破有关。个案HBV基因组准种分析与Meta分析表明,高频的preS1缺失,与HBsAg与抗-HBs共存相关。
俞曦[5]（2018）在《乙肝患者外周血CD8+CD28-和CD4+CD25high调节性T细胞的分布特性及其临床意义的比较分析》文中研究表明[目的]CD8+CD28-T细胞是一群免疫抑制性细胞亚群,目前发现其在人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）等病毒的慢性感染和肿瘤发生中均呈现增加现象,并对机体的免疫应答产生调节作用。然而,该细胞群体在乙型肝炎病毒（Hepatitis virus B,HBV）感染引起的疾病进展过程中的特性,及其与临床病症间的关系尚不清楚。此外,在乙肝的进展过程中,该抑制性细胞亚群与表达叉状头转录因子 3（Forkhead transcription factor p3,Foxp3）为特征的 CD4+CD25+调节性 T 细胞（也以CD4+CD25high为特征）的分布特性及其临床意义之间的差异,也尚不清楚。因此,该研究分析了这两群免疫调节性T细胞亚群在HBV感染进展过程,从慢性阶段到以肝硬化和肝细胞癌为特征的晚期阶段中的分布特性,并比较了它们与临床病症间相关性的差异。[方法]采用多色荧光标记和流式细胞术检测了健康志愿者、乙肝慢性和晚期阶段患者外周血CD8+CD28-and CD4+CD25high调节性T细胞的比例;采用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测乙型肝炎血清学标志;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA,检测结果以>5×102 copies/ml判断为阳性;采用罗氏全自动生化分析仪检测肝功能指标谷丙转氨酶（Alanine aminotransaminase,ALT）和谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）。数据统计及相关性分析采用GraphPad Prism 6.0 软件。[结果]结果表明,与正常对照组相比,乙肝慢性和晚期阶段患者外周血中CD8+CD28-和CD4+CD25high调节性T细胞的比例均发生增加,但两病例组间无显着性差异。在乙肝感染的慢性阶段,CD8+CD28-调节性T细胞亚群与ALT、AST水平呈负相关,但与HBV DNA载量无显着相关性;而在此阶段,CD4+CD25high调节性T细胞与HBV DNA载量、ALT和AST均呈现正相关性。在乙肝感染进展的晚期阶段,CD8+CD28T细胞与HBV DNA载量、ALT和AST的水平无相关性,而CD4+CD25high调节性T细胞与HBVDNA载量和ALT水平呈负相关。[结论]首次证实CD8+CD28T细胞在HBV感染过程中明显增加,并在HBV感染的慢性阶段对免疫介导的肝损伤具有一定的保护作用。CD8+CD28-和CD4+CD25high调节性T细胞可能在HBV感染的不同阶段,参与调节抗病毒免疫应答和缓解肝脏免疫损伤。这些发现为HBV感染者提供了潜在的临床诊断指标和临床治疗的干预靶点。
张卫云[6]（2018）在《献血者人群隐匿性乙型肝炎病毒感染分子与细胞免疫特征分析》文中认为背景和目的慢性乙型病毒性肝炎（CHB）的发生及发展机制与乙肝病毒变异、宿主的免疫状态、宿主性别、年龄、遗传基因和肝脏内炎症活动密切相关。然而,隐匿性HBV感染（OBI）在病毒学特征、合并感染、宿主免疫应答以及表观遗传学等方面尚未阐述清楚,特别是感染宿主的分子与细胞免疫功能少有报道。本研究目的为探讨献血人群的隐匿性HBV感染状态,揭示OBI携带者HBV特异性分子细胞免疫反应特征与OBI发生的作用机制。研究对象2016年8月至2017年12月广州血液中心无偿献血者人群。建立的研究队列包括:OBI 组 37 例,CHB 组 53 例（含 CHB-HBeAg-组 42 例,CHB-HBeAg+组 11例）,HBV感染康复组47例,HBV非感染组56例（含疫苗免疫组33例,正常对照组23例）,合计193例。方法采用化学发光法对研究队列血浆样品进行乙肝表面抗原（HBsAg）检测,核酸检测法（NAT）检测HBVDNA,qPCR定量检测病毒载量,巢式PCR进行病毒基因扩增并测定其核苷酸序列。采用HBV Core和HBV Pol多肽库特异性刺激物,体外刺激研究人群外周血单个核细胞（PBMCs）,采用T细胞增殖试验（CFSE）检测T细胞增殖情况,酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测HBV特异性T细胞分泌IFN-γ的频数,细胞内细胞因子染色（ICS）检测 IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10、IL-17A、IL-21 和TGF-β的CD4+和CD8+T细胞频数及细胞来源,流式微球试验（CBA）检测PBMCs分泌细胞因子的总体水平。采用SPSS 20.0统计分析软件,正态分布的计量资料采用两独立样本t检验,多组间比较采用One-Way ANOVA分析;非正态资料组间比较采用Mann-Whitney U检验,各组间比较采用Mann-Whitney U检验;相关性检验采用Spearman’s相关分析;P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.OBI献血者人群特征。研究发现HBcAb阳性的献血者人群OBI发生率较高,特别是在单独HBcAb 阳性者更高;OBI发生率随年龄增长而增高,男性高于女性;OBI毒株基因型以B型为主。2.T细胞增殖特征。采用CFSE方法,在非特异性刺激物PHA刺激下,以CD8+T淋巴细胞增殖为主,总体比较六组研究对象T淋巴细胞增殖结果差异不显着（P=0.403）,但OBI组和CHB组的增殖率低于正常对照组（74.0%,78.1%vs.82.1%）;在特异性刺激物HBV Core和Pol多肽库刺激下,以CD4+T淋巴细胞增殖为主,总体比较六组研究对象T淋巴细胞增殖结果差异显着（P<0.001）,其中OBI组和CHB组的增殖率显着高于正常对照组（3.0%,3.3%vs.1.7%）,差异显着（3.0%vs.1.7%,P=0.016;3.3%vs.1.7%,P<0.001）。3.特异性IFN-γ分泌T细胞频数测定。采用ELISPOT检测方法,在PHA刺激下,OBI组和CHB组特异性T细胞的免疫应答高于其他三组,差异显着（P=0.004）。在三种重组蛋白（HBcAg,HBsAg-ayw,HBsAg-adw）和多肽库的刺激下,总体比较六组研究对象特异性T细胞应答强度,结果差异显着（P<0.05）。OBI组（160 SFC/106 PBMCs）对HBcAg重组蛋白刺激的应答强度高于正常对照组（95 SFC/106 PBMCs）,低于CHB-HBeAg-组（208 SFC/106 PBMCs）。在HBV Core和Pol多肽库刺激下,OBI组（25 SFC/106 PBMCs）和CHB-HBeAg-组（25 SFC/106 PBMCs）的应答强度均高于正常对照组（5 SFC/106 PBMCs）。比较两种多肽刺激下的总体阳性反应率,HBV Core多肽库显着高于HBV Pol多肽库（44.6%vs.16.1%）,HBV Core多肽库刺激下的T细胞ELISPOT阳性反应率以OBI组（64.0%）最高,其次是HBV感染康复组（53.2%）,显着高于正常对照组（21.7%）。4.胞内细胞因子T细胞频数及胞外分泌型细胞因子水平测定。ICS检测结果显示,在PMA刺激下,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-10和TGF-β的CD4+和CD8+T细胞频数在OBI组和CHB组中均高于正常对照组（P<0.05）,而分泌IL-17A和IL-21的T细胞频数在OBI组均低于CHB组（P<0.05）。在HBV Core多肽库刺激下,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-21 和TGF-β的CD4+和CD8+T细胞频数在HBV感染康复组中高于OBI组和正常对照组（P<0.05）;而分泌IL-2和IL-10的T细胞频数在OBI组和CHB组中高于正常对照组（P<0.05）。在HBV Pol多肽库刺激下,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-17A和IL-21的CD4+和CD8+T细胞频数在CHB组显着低于其他组（P<0.05）,而分泌IL-10和TGF-β的CD4+T细胞频数在OBI组显着低于其他组（P<0.05）。胞外分泌型细胞因子水平CBA检测结果显示,在HBV Core多肽刺激下,IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17A在OBI组和CHB组中高于正常对照组（P<0.05）;在HBVPol多肽刺激下,IFN-γ、IL-2和IL-17A在OBI组和CHB组中高于正常对照组（P<0.05）。ICS与CBA实验检测细胞内、外因子结果基本一致。5.MDSCs水平测定。根据细胞亚群计数显示,OBI携带者外周血中M-MDSCs水平显着低于CHB患者（P<0.001）,而与正常对照组差异不显着（P=0.860）;G-MDSCs水平在五组人群中无差别（P=0.914）。OBI携带者和CHB患者外周血中 M-MDSCs 和 G-MDSCs 水平与 ALT、AST、TBIL、DBIL、TBA、ALB、ADA、CHE、γ-GT和TP等肝功能指标无相关性（P>0.05）。结论OBI携带者和CHB患者均呈现显着高于HBV感染康复者及非感染者的HBV特异性T淋巴细胞增殖反应;OBI携带者与HBV感染康复者及CHB患者均呈现显着的特异性分泌IFN-γ的T细胞频数增高,以OBI组阳性反应率最高,HBV感染康复组和CHB-HBeAg-组次之,CHB-HBeAg+组最低;HBV感染康复组特异性分泌IFN-γ、TNF-α、IL-17A和IL-21细胞因子的CD4+和CD8+效应T细胞频数显着增高,而OBI组和CHB组分泌IL-10细胞因子的抑制T细胞频数增高,CHB组效应T细胞频数较低而OBI组分泌IL-2和IL-17A的T细胞频数相对升高;CHB组分泌IL-10细胞因子水平增高,而OBI组分泌IL-17A细胞因子水平相对较高。因此,OBI携带者的HBV特异性T效应细胞反应水平居于HBV感染康复者与CHB患者之间,而CHB患者T抑制细胞反应水平较高,从而导致了三组HBV感染者的不同转归状态。创新之处1.献血者人群通常为未经抗病毒等治疗的健康人群。本论文以HBV感染不同转归状态的献血者为研究对象,排除了抗病毒治疗等干扰;采用新鲜分离的PBMCs进行实验,避免了淋巴细胞由于冻存和复融发生死亡和免疫功能的改变对结果的影响。2.与以往研究选用HBV重叠多肽不同,本研究合成的HBV Core和HBV Pol多肽是经研究证实能刺HBV产生特异性细胞免疫应答的HLA-Ⅰ型和HLA-Ⅱ型限制性多肽,结果更能反应HBV感染后不同转归人群对T淋巴细胞免疫应答状态。3.本研究根据HBV感染献血者不同转归状态,分析了 T细胞亚群分泌的七种特异性细胞因子的频数及分泌型细胞因子的水平,阐明了 OBI携带者、CHB患者及HBV感染康复者的三种转归状态的分子细胞免疫基础。
伍宵[7]（2017）在《中国慢性HBV感染者病毒基因型分布及其临床意义的Meta分析》文中提出研究背景乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染严重危害人类健康,随着人们对乙肝病毒认识的不断深入,乙肝病毒基因型的研究越来越受到人们重视,中国乙型肝炎病毒基因型在地理位置和人口学分布上也有明显差异,这可能与不同区域的人群,种族,乙肝病毒感染率及生活方式等相关,本文旨在探究乙型肝炎病毒基因型在中国不同地区和民族的分布特点,以及不同乙肝病毒基因型与不同肝病临床表现之间的联系,这项研究的发现有助于评估未来乙肝病毒感染的疾病负担,并且有助于发展乙肝病毒感染的控制措施。方法在万方数据库和NCBI数据库检索从2000年到2014年间有关中国HBV基因型分布的文章,根据严格的纳入和排除标准进行文献纳入,然后再按照地区、民族及感染类型的不同将不同基因型归类,最终应用Meta分析来研究中国基因型分布特点及其临床意义。结果在数据库检索出560篇有关乙肝病毒基因型的原始文献,经纳入排除标准后有220篇文献符合条件进行数据收集及数据统计,我们得知中国的HBV基因型主要以B基因型和C基因型为主,区域1（北部地区）HBV基因型A、B、C、B/C、D和其他型分别为0.1%、22.2%、69.1%、3.8%、0.5%和1.5%,其中C基因型比例显着高于其它区域（P<0.05）;区域2（中部地区）HBV基因型A、B、C、B/C、D和其他型分别为0.2%、62.6%、27.4%、3.8%、0.5%和2.4%,其中B基因型比例显着高于其它区域（P<0.05）;区域3（南部地区）HBV基因型A、B、C、B/C、D和其他型分别为0.6%、36.3%、49.4%、2.8%、2.6%和3.4%,其中C基因型比例显着高于区域2的27.4%（P<0.05）;区域4（青藏高原）感染HBV HBV基因型A、B、C、B/C、D和其他型分别为6.0%、22.5%、11.7%和59.3%,其中C/D混合型比例显着高于其他区域（P<0.05）。不同民族的基因型分布也显着不同,藏族人群的C/D混合型比例（49.3%）显着高于其他民族（所有P<0.05）,哈萨克族的D基因型比例（58.1%）显着高于其他民族（所有P<0.05）。此外,以慢性HBs Ag携带显的统计学差异。并且HBs Ag的水平随着疾者作为对照组,C基因型与慢性乙型肝炎、HBV相关性肝硬化、肝癌显着相关（ORs:1.979、3.888、4.399,所有P<0.001）。结论中国主要基因型为B基因型和C基因型,不同地区和民族的HBV基因型分布也显着不同,中国南部地区和北部地区以C基因为主,中部地区以B基因型为主,并且本研究表明B基因型可能是中国乙型肝炎病毒的起源基因,同时本研究表明藏族人群中的乙肝病毒基因型以C/D混合型为主,回族和维吾尔族人群中的乙肝病毒基因型主要为C基因型和D基因型,D基因型主要分布于哈萨克族,另外,研究表明C基因型更有可能引起严重的肝损害,如肝硬化、肝细胞癌等。
朱宇清[8]（2012）在《乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估》文中指出研究背景乙肝表面抗原是人类在感染乙型肝炎病毒后出现的第一个病毒血清学标志物,通常在临床症状出现之前即在血液中出现。我国是乙型肝炎的高发区,加强对乙型肝炎（简称乙肝）的检出能力,是保障我国人民健康,促进经济发展和社会进步的重要措施。病毒感染的窗口期问题、乙肝试剂检测质量以及实验中的各种不确定因素,影响着实验室对乙肝病毒的检测。随着医疗检验技术的发展,临床检测乙肝表面抗原采用的方法有了新的发展,即时检验（point of care testing, POCT）目前已成为临床医学关注的热点之一,在及时对患者诊断治疗、提高功效比、缩短标本的周转时间（turn around time, TAT）上起着重要作用。胶体金免疫层析法（金标法）检测HBsAg就是POCT的一种。结合我国乙肝病毒感染的现状,选择反应快、灵敏度和特异度均高但又成本低的检测方法至关重要。在追求低成本、快速、简便检测的同时,必须保证检测的质量。研究目的本研究旨在了解目前临床乙肝表面抗原检测方法的变化,并对胶体金免疫层析法血清快速测定乙肝表面抗原的性能作出评价,以利于临床实验室检测质量的提高和快速简便的检测项目在临床的推广应用。研究内容描述性分析上海市医疗机构临床实验室2006-2010年乙肝病毒学标志物的检测方法,并评估胶体金免疫层析法血清快速测定乙肝表面抗原的检测性能指标,评价其临床应用价值。研究方法对2006年-2010年五年内所有参加上海市临床检验中心乙肝病毒血清学标志物室间调查的医疗机构临床实验室,收集其每年10月的第二次室间调查的反馈结果,对反馈结果进行描述性分析。通过检测临床标本和卫生部临床检验中心的定值参考血清,对胶体金免疫层析法血清快速测定乙肝表面抗原的功能灵敏度、干扰实验作出评估。并通过收集临床标本510例,分别用ELISA法和胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原,评估两者检测的一致性。并对结果不一致的标本进行确认实验,计算胶体金免疫层析法的特异度、阳性预测值、阴性预测值以及符合率。研究结果对上海市医疗机构临床实验室每年10月份的乙肝病毒血清学标志物检测的室间调查分析结果表明：2006年-2010年上海医疗机构临床实验室开展乙肝病毒血清学标志物检测的方法以酶联免疫吸附法（酶免法）为主,但比例在逐年下降,其比例从2006年的83.12%下降至2010年的66.88%。化学发光法检测呈逐年上升的趋势,同时胶体金免疫层析法检测也逐步上升,比例从2006年的1.91%上升至2010年的5.19%。采用胶体金免疫层析法检测乙肝病毒血清学标志物的医院主要集中在社区卫生服务中心以及民营医院；分析2009年第二次乙肝病毒血清学标志物的室间调查结果发现,采用胶体金免疫层析法检测HBsAg的实验室,其满分率只有71.43%,而不合格率则较高,此次调查中不合格的六家实验室均采用了胶体金免疫层析法。对胶体金免疫层析法血清快速检测乙肝表面抗原的检测性能评估发现：其检测灵敏度为4. OTU/ml（根据2IU/ml=lng/ml单位换算后结果为2ng/ml）,而自1995年开始,我国对酶联免疫吸附法检测HBsAg的试剂实行批批检,要求酶联免疫吸附试验的灵敏度是≤0.5ng/ml,胶体金免疫层析法则无明确要求。脂血（18.5mmol/L）对检测没有干扰,黄疸和溶血对检测有一定干扰。对510例临床标本平行进行了胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法的检测,得出阳性漏检是胶体金免疫层析法存在的最严重的问题。在低值标本中（ELISA法的测定OD值<1.0）,胶体金免疫层析法存在18例漏检,胶体金免疫层析法的灵敏度和特异度分别为92.53%和100%。根据本次研究的结果,对胶体金免疫层析法在临床更好的推广应用提出如下建议：在上海地区,胶体金免疫层析法只适用于献血员、急诊病人手术前以及郊县乡卫生院开展HBsAg的初筛,不能作为临床诊断和治疗的依据。
张志明,计玉仙[9]（2012）在《低水平乙型肝炎病毒表面抗原研究现状》文中研究表明乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）一直以来作为诊断乙型肝炎病毒感染的重要指标,虽然从20世纪70年代开始,已经逐步建立了HBsAg的检测方法,并且近年来HBsAg的检测的方法和技术在不断更新,检测敏感性也得到显着提高,但各种检测方法还是会受到某些限制,特别是近年来HBV疫苗、高效价免疫球蛋白以及抗病毒药物的广泛应用,造成HBsAg
陈秀美[10]（2011）在《乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义》文中研究说明目的:了解乙肝病毒的血清标志物检测方法,探讨乙肝病毒血清标志物检测的临床意义,总结临床使用血清标志物检测进行乙肝诊疗的经验。方法:对60例乙肝患者使用酶联免疫法进行血清标志物检测,然后对检测结果进行综合分析。结果:经过检测研究发现,HBsAg、HBeAg、抗-HBc检测阳性者为16例,阳性率26.7%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc检测阳性者为13例,阳性率21.7%。结论:对乙肝患者进行血清标志物检测,然后根据血清标志物检测的结果有利于制定相应的乙肝防治策略,这对在实际临床中进行乙肝的防治具有重要的指导作用。而且对于低水平的血清患者,提高检测的灵敏度对临床预防乙肝有积极意义。
二、低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义（论文提纲范文）
（1）激活免疫检查点OX40对HBV复制的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 慢性HBV感染的自然史 |
| 1.2 慢性HBV感染的免疫应答 |
| 1.2.1 慢性HBV感染中固有免疫反应 |
| 1.2.2 慢性HBV感染中适应性免疫反应 |
| 1.3 慢性乙型肝炎免疫治疗进展 |
| 1.3.1 靶向固有免疫的治疗策略 |
| 1.3.2 靶向适应性免疫的治疗策略 |
| 1.3.3 其它免疫治疗策略 |
| 1.4 免疫检查点OX40/OX40L、PD-1、4-1BB研究现状 |
| 1.4.1 OX40/OX40L相关研究进展 |
| 1.4.2 PD-1 相关研究进展 |
| 1.4.3 4-1BB相关研究进展 |
| 第2章 OX40/OX40L及其可溶性分子在慢性乙肝患者中的表达及临床意义 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 人的样本来源 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 外周血采集及血浆分离与保存 |
| 2.2.2 外周血单个核细胞提取 |
| 2.2.3 流式细胞术检测PBMCs中OX40/OX40L的表达 |
| 2.2.4 免疫组化检测肝组织内OX40/OX40L的表达 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附试验检测血浆中sOX40/OX40L水平 |
| 2.2.6 统计处理方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 研究对象人口学资料及临床特征 |
| 2.3.2 慢性乙肝患者中OX40/OX40L及其可溶性分子的表达 |
| 2.3.3 慢性乙肝患者中OX40/OX40L及其可溶性分子的水平与临床的相关性研究 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 PD-1、4-1BB分子及其可溶性形式在慢性乙肝患者中的表达及临床意义 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 人的样本来源 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 复苏外周血单个核细胞和准备血浆 |
| 3.2.2 磁珠分选人外周血T细胞亚群 |
| 3.2.3 PBMCs中总RNA的提取 |
| 3.2.4 qRT-PCR检测PBMCs中PD-1和4-1BB mRNA水平 |
| 3.2.5 酶联免疫吸附试验检测血浆sPD-1和s4-1BB |
| 3.2.6 免疫组化检测肝脏内PD-1和4-1BB的表达 |
| 3.2.7 统计处理方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 研究对象人口学资料及临床特征 |
| 3.3.2 慢性乙肝患者中PD-1及其可溶性形式在慢性乙肝患者中的表达与临床相关性研究 |
| 3.3.3 慢性乙肝患者中4-1BB及其可溶性形式在慢性乙肝患者中的表达与临床相关性研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 rAAV8/1.3HBV小鼠模型的构建及在HBV小鼠模型中激活免疫检查点OX40对HBV复制的影响的相关研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物和r AAV8/1.3HBV病毒 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 建立经尾静脉注射腺相关病毒的HBV模型 |
| 4.2.2 检测小鼠血清内HBsAg、HBe Ag水平 |
| 4.2.3 小鼠肝脏灌流分离肝内浸润淋巴细胞 |
| 4.2.4 小鼠肝脏组织全基因组DNA提取 |
| 4.2.5 qRT-PCR法检测小鼠HBV DNA定量 |
| 4.2.6 流式细胞术检测小鼠肝内T细胞亚群比例 |
| 4.2.7 CBA法检测小鼠血清内细胞因子 |
| 4.2.8 检测小鼠血清ALT,AST水平 |
| 4.2.9 处理小鼠肝脏组织和制备切片 |
| 4.2.10 小鼠肝脏组织HE染色 |
| 4.2.11 免疫组化检测小鼠肝组织内HBsAg和HBcAg |
| 4.2.12 数据统计处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 rAAV8/1.3 HBV小鼠模型的构建 |
| 4.3.2 激活免疫检查点OX40抑制HBV复制同时伴随着肝脏炎症的产生 |
| 4.3.3 激活免疫检查点OX40抑制HBV复制的同时伴随着T细胞亚群比例及免疫细胞因子的变化 |
| 4.3.4 激活免疫检查点OX40抑制HBV复制具有药物剂量依赖性 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 激活免疫检查点OX40抑制HBV复制相关机制的初步研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 小鼠体内CD4~+和CD8~+T细胞的剔除 |
| 5.2.2 流式细胞术检测小鼠外周血的T细胞 |
| 5.2.3 小鼠血清HBsAg和肝脏组织内HBV DNA的检测 |
| 5.2.4 小鼠血清ALT水平检测 |
| 5.2.5 小鼠肝脏灌流分离肝内浸润淋巴细胞 |
| 5.2.6 小鼠肝脏内淋巴细胞mRNA的提取及文库构建测序 |
| 5.2.7 数据统计处理 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 CD4~+T和CD8~+T 细胞缺陷的rAAV8/1.3HBV小鼠模型的构建 |
| 5.3.2 激活OX40靶点抑制HBV复制的过程相对于CD4~+ T细胞似乎更依赖于CD8~+ T细胞的作用 |
| 5.3.3 激活OX40靶点抑制HBV复制的过程中基于mRNA测序的小鼠肝内浸润淋巴细胞的转录组学研究 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（2）经NAs治疗的慢性乙型肝炎患者血清HBV pgRNA的表达及其临床意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 1. 研究对象 |
| 1.1 病例及标本来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2. 主要实验试剂 |
| 3. 主要实验仪器及耗材 |
| 4. 实验方法 |
| 4.1 一般资料 |
| 4.2 HBsAg与HBeAg检测 |
| 4.3 HBV RNA检测 |
| 5. 统计学方法 |
| 三、结果 |
| 1. 入组患者的基本情况 |
| 2. NAs抗病毒治疗不同疗程的患者血清HBV pgRNA及HBsAg水平比较 |
| 3. 血清HBV pgRNA与HBsAg相关性 |
| 4. HBeAg阳性组和HBeAg阴性组HBV pgRNA和HBsAg的水平比较 |
| 5. ETV和TDF治疗的患者血清HBV pgRNA和HBsAg水平比较 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）ELISA检测乙肝两对半少见模式和弱阳性结果分析及报告单注释策略（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 乙肝表面抗原与表面抗体共存研究进展 |
| 参考文献 |
（4）慢性乙肝病毒感染者核苷（酸）类似物长期抗病毒治疗疗效与乙肝病毒准种异质性及进化机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 核苷(酸)类似物长期抗病毒治疗疗效分析 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 HBV RT区准种进化模式与核苷类药物抗病毒治疗应答关系的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 HBsAg和抗-HBs共存乙肝病毒基因型Ⅰ感染者HBV准种特征及相关文献回顾Meta分析 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 综述 慢性乙型肝炎患者病毒准种的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）乙肝患者外周血CD8+CD28-和CD4+CD25high调节性T细胞的分布特性及其临床意义的比较分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 一、研究背景 |
| 一、前言 |
| 二、HBV感染及其转归 |
| 三、乙肝免疫缺陷和免疫逃逸 |
| 四、调节性T细胞的种类、特征及其与疾病发展的关系 |
| 五、研究的目的及意义 |
| 参考文献 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 乙型肝炎标志、病毒载量和相关生化指标的血清学检测 |
| 2.2 CD8~+CD28~-与CD4~+CD25~(high) T细胞亚群的流式细胞术检测 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 研究病例的临床基本数据 |
| 3.2 慢性乙肝和乙肝晚期阶段CD8~+CD28~-调节性T细胞分布特性的分析 |
| 3.3 慢性乙肝和乙肝晚期阶段CD4~+CD25~(high)调节性T细胞分布特性的分析 |
| 3.4 慢性乙肝阶段CD8~+CD28~-、CD4~+CD25~(high)调节性T细胞与HBV DNA载量、ALT和AST相关性的比较分析 |
| 3.5 乙肝晚期阶段CD8~+CD28~-、CD4~+CD25~(high)调节性T细胞与HBV DNA载量、ALT和AST相关性的比较分析 |
| 4 讨论 |
| 三、结论 |
| 四、参考文献 |
| 五、附录:缩写词表 |
| 六、致谢 |
（6）献血者人群隐匿性乙型肝炎病毒感染分子与细胞免疫特征分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. 研究背景 |
| 2. 研究目的与意义 |
| 第一章 隐匿性乙型肝炎病毒感染的鉴定和分析 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 研究对象 |
| 1.2.2 主要仪器和设备 |
| 1.2.3 主要试剂 |
| 1.2.4 主要溶液的配制 |
| 1.2.5 血清肝功能和HBV血清标志物检测 |
| 1.2.6 血浆HBV DNA提取 |
| 1.2.7 乙肝病毒载量的测定 |
| 1.2.8 BCP/PC、Whole genome、PreS/S片段的扩增 |
| 1.2.9 HBV野毒株全基因参照序列的获取 |
| 1.2.10 OBI样品基因分型 |
| 1.2.11 统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 HBsAg-/DNA+人群的基本特征 |
| 1.3.2 HBsAg-/DNA+样品qPCR的检测 |
| 1.3.3 HBsAg-/DNA+样品Nested-PCR的检测 |
| 1.3.4 HBsAg-/DNA+样品的分类 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 隐匿性乙型肝炎病毒感染T淋巴细胞增殖特征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 研究对象 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 主要试剂配制 |
| 2.2.5 外周血单个核细胞的提取 |
| 2.2.6 血清肝功能、HBV血清标志物和病毒核酸检测 |
| 2.2.7 CFSE染色、细胞培养及流式细胞术检测 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 研究队列基本资料 |
| 2.3.2 PHA刺激下的T淋巴细胞增殖特征 |
| 2.3.3 HBV Core多肽库刺激下的T淋巴细胞增殖特征 |
| 2.3.4 HBV Pol多肽库刺激下的T淋巴细胞增殖特征 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 PHA刺激下的非特异性免疫应答 |
| 2.4.2 HBV Core多肽库刺激下的特异性免疫应答 |
| 2.4.3 HBV Pol多肽库刺激下的特异性免疫应答 |
| 第三章 隐匿性乙型肝炎病毒感染特异性分子与细胞免疫反应特征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 研究对象 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要试剂配制 |
| 3.2.5 ELISPOT检测IFN-γ试验 |
| 3.2.6 ICS检测胞内细胞因子试验 |
| 3.2.7 CBA检测细胞培养液中细胞因子试验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 ELISPOT检测HBV特异性T细胞分泌IFN-γ |
| 3.3.2 ICS检测T细胞亚群的细胞分泌频数 |
| 3.3.3 CBA检测PBMCs分泌细胞因子水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 HBV特异性T细胞应答反应 |
| 3.4.2 HBV特异性T细胞亚群分泌频数 |
| 3.4.3 HBV特异性T细胞分泌细胞因子水平 |
| 第四章 隐匿性乙型肝炎病毒感染与髓源抑制性细胞的关系 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 研究对象 |
| 4.2.2 主要仪器和设备 |
| 4.2.3 主要试剂 |
| 4.2.4 血清肝功能、HBV血清标志物和病毒核酸检测 |
| 4.2.5 流式细胞术检测MDSCs |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 研究队列基本资料 |
| 4.3.2 外周血M-MDSCs和G-MDSCs的频数比例 |
| 4.3.3 M-MDSCs和G-MDSCs频数与肝功能指标的相关性 |
| 4.3.4 M-MDSCs和G-MDSCs频数与HBV DNA及HBsAg的相关性 |
| 4.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词语表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（7）中国慢性HBV感染者病毒基因型分布及其临床意义的Meta分析（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（8）乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 上海市医疗机构乙肝病毒学标志物检测方法调查分析 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 发表文章 |
| 致谢 |
（9）低水平乙型肝炎病毒表面抗原研究现状（论文提纲范文）
| 1 低水平乙型肝炎病毒表面抗原特征 |
| 2 低水平乙型肝炎病毒表面抗原产生原因 |
| 3 小 结 |
四、低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义（论文参考文献）
- [1]激活免疫检查点OX40对HBV复制的影响及相关机制研究[D]. 湛梦茹. 吉林大学, 2021(01)
- [2]经NAs治疗的慢性乙型肝炎患者血清HBV pgRNA的表达及其临床意义[D]. 曾伊凡. 湖北医药学院, 2021(01)
- [3]ELISA检测乙肝两对半少见模式和弱阳性结果分析及报告单注释策略[D]. 刘嘉清. 安徽医科大学, 2020(02)
- [4]慢性乙肝病毒感染者核苷（酸）类似物长期抗病毒治疗疗效与乙肝病毒准种异质性及进化机制研究[D]. 范晶华. 昆明医科大学, 2019(02)
- [5]乙肝患者外周血CD8+CD28-和CD4+CD25high调节性T细胞的分布特性及其临床意义的比较分析[D]. 俞曦. 苏州大学, 2018(04)
- [6]献血者人群隐匿性乙型肝炎病毒感染分子与细胞免疫特征分析[D]. 张卫云. 南方医科大学, 2018
- [7]中国慢性HBV感染者病毒基因型分布及其临床意义的Meta分析[D]. 伍宵. 安徽医科大学, 2017(01)
- [8]乙型肝炎表面抗原胶体金免疫层析法血清快速测定的性能评估[D]. 朱宇清. 复旦大学, 2012(03)
- [9]低水平乙型肝炎病毒表面抗原研究现状[J]. 张志明,计玉仙. 国际检验医学杂志, 2012(03)
- [10]乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义[J]. 陈秀美. 中国社区医师(医学专业), 2011(35)
标签：基因型论文; 乙肝表面抗原阳性论文; 乙肝两对半对照表论文; 细胞免疫论文; 乙肝阴性论文;