一、常规机械通气激活支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞（论文文献综述）
蔡甜甜[1]（2021）在《健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究》文中研究指明目的:1.通过一项探索性临床研究,采用随机、双盲安慰剂对照临床试验方法,观察健脾益肺Ⅱ号方中医药早期干预治疗COPD的有效性和安全性,探讨中医药早期干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治COPD提供循证医学依据,为进一步研发针对COPD的中药新药提供临床研究基础。2.通过观察香烟暴露对呼吸道病毒感染后小鼠宿主免疫应答的影响,以及呼吸道病毒感染在诱发COPD急性加重过程中的免疫病理改变,建立符合慢阻肺急性加重的急性气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.利用熏烟联合流感病毒感染的小鼠动物模型,以健脾益肺Ⅱ号减少急性加重为出发点,探讨健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制,探讨中医培土生金法的现代科学内涵,为研发针对预防COPD急性加重的药物提供研究基础。方法:1.随机对照探索性临床试验:健脾益肺Ⅱ号治疗COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级探索性临床研究探索性临床研究,采用随机双盲安慰剂平行对照研究方法,纳入符合COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级患者,采用健脾益肺Ⅱ号与健脾益肺Ⅱ号安慰剂进行疗效比较,随机分为治疗组和安慰剂组,治疗组给予健脾益肺Ⅱ号方颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次;安慰剂组给予健脾益肺Ⅱ号方安慰颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次。筛查期2周,治疗12周,随访12周。记录并测定两组患者治疗前后组间急性加重频次以及急性加重发生率,并且评估组间治疗前后肺功能、SGRQ、CAT量表、mMRC评分、BODE指数改变情况,探索健脾益肺Ⅱ号方干预治疗COPD的疗效并观察药物使用的安全性,探讨中医药干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治慢阻肺提供循证医学依据。2.基础研究:健脾益肺Ⅱ号方减轻香烟暴露联合病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成4组:假熏烟假攻毒组,熏烟假攻毒组,假熏烟攻毒组,熏烟联合攻毒组。第1-4天对小鼠进行熏烟处理,3次/天,每次3支香烟,烟雾用60ml注射器注入熏烟箱中。于9am,12am,3pm进行,每次1h;第5天进行攻毒,用1ml注射器共抽取2ml异氟烷均匀洒在麻醉瓶中,随后将小鼠置于麻醉瓶中旋紧瓶盖,待小鼠出现深快呼吸后取出,迅速向小鼠鼻内滴注PR8病毒30ul/只。假熏烟小鼠放入另一干净且相同大小的塑料箱内,不做熏烟处理;假攻毒组鼻内滴注MEM培养基30ul/只,其余操作同上,分别观察攻毒后5天小鼠变化。第10天取材留取小鼠支气管肺泡灌洗液,检测细胞计数和细胞分类计数:留取小鼠肺组织用实时定量PCR法检测小鼠肺组织细胞因子、趋化因子、金属蛋白酶、病毒复制水平及干扰素mRNA表达水平。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成8组:分别为假熏烟假攻毒组;假熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;假熏烟攻毒组;假熏烟攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟假攻毒组;熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟联合攻毒组;熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,每组10只。熏烟、攻毒方法同上。药物干预组,造模方法同熏烟联合攻毒组,从第1天开始进行药物干预,连续给药10天。第10天部分进行小鼠肺功能检测;其余小鼠取材,留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;留取小鼠肺组织实时定量PCR法检测各组肺组织细胞因子、趋化因子以及金属蛋白酶、病毒NP以及干扰素mRNA表达情况;化学发光法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液ROS的产生,Western Blot法检测各组小鼠肺组织gp91和HO-1的蛋白表达;病毒空斑实验观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠病毒载量的影响;以及观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠肺功能的影响。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究选取SPF级雌性Balb/c小鼠60只,随机分成6组:分别为假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（3天）组;熏烟联合攻毒（3天）+PYFⅡ治疗组;假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（5天）组;熏烟联合攻毒（5天）+JPYFⅡ治疗组;每组10只。熏烟联合攻毒组第1-4天进行熏烟处理,第5天进行攻毒,分别观察攻毒后3天和5天小鼠情况。熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,造模方法同前,从第1天开始进行药物干预,连续给药5天。假熏烟假攻毒组,标准饲养8、10天,不做任何干预。留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;Real-time PCR法检测肺组织中细胞因子、病毒复制水平,观察健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠持续预防作用。结果:1.临床研究:本次探索性临床试验共入组慢阻肺患者62例,纳入全分析集患者共62例,治疗组和安慰剂组各31例,其中安慰剂组脱落2例。对比治疗组和安慰剂组两组患者性别、年龄,体重指数,两组患者慢阻肺严重程度,包括两组患者基线时CAT、SGRQ、mMRC、BODE指数、6WMT;以及慢阻肺基线肺功能情况,包括舒张前后FEV1、FVC的情况。经过治疗组和安慰剂组的基线情况比较,两组间各指标差异均无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。治疗组较安慰剂组可显着性降低患者CAT评分（P<0.05）、SGRQ评分（P<0.05）、mMRC评分（P<0.05）,减少慢阻肺急性加重发生频次（P<0.05）,一定程度降低急性加重发生率（P>0.05）;治疗组对运动耐力具有一定程度的改善作用,但治疗后在BODE指数改善与安慰剂比较无显着性差异（P>0.05）。对于肺功能改善方面,与安慰剂相比,健脾益肺Ⅱ号颗粒剂对于舒张后FVC和舒张后FEV1/FVC具有改善趋势,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组和安慰剂组都有不良事件发生,但两组患者不良事件发生率均较低,且与用药无因果关系。2.基础研究:（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响①熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞计数的影响攻毒5天后,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞均显着性增多（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠细胞总数、中性粒细胞数较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞数较假熏烟假攻毒组与假熏烟攻毒组显着性增多（P<0.05）。②熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织中炎症因子、趋化因子、金属蛋白酶及对支气管肺泡灌洗液ROS产生的影响与假熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织中IL-6表达水平显着性升高（P<0.01）;与熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织IL-6、MMP12表达显着性增多（P<0.05）;与熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组相相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织MMP12表达水平显着性升高（P<0.01）。假熏烟攻毒组、熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率显着性升高（P<0.05）。熏烟攻毒小鼠肺组织CXCL1、CXCL5、CCL2表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织CXCL5表达水平显着性升高（P<0.01）。③熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织肺部病毒复制水平及干扰素表达的影响与熏烟假攻毒组相比,假熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组、熏烟联合攻毒组小鼠肺组织IFN α、IFN β表达水平有显着性升高（P<0.05）。熏烟联合攻毒组小鼠肺组织Influenza matrix、NP表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组均显着性升高（P<0.05）。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响①健脾益肺Ⅱ号可减轻熏烟联合流感病毒诱导的气道炎性细胞浸润与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性减少小鼠细胞总数、中性粒细胞数（P<0.01）。②健脾益肺Ⅱ号可降低香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺组织炎症因子、趋化因子及金属蛋白酶表达与熏烟攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织IL-6、CXCL1、CXCL2表达水平（P<0.05）,也可降低小鼠肺组织CXCL5、CCL2表达,但无统计学差异（P>0.05）。③健脾益肺Ⅱ号方可减轻香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺部氧化应激攻毒5天后,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着降低小鼠支气管肺泡灌洗液中ROS表达水平,可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠肺组织HO-1、gp91的表达水平（P<0.05）。④健脾益肺Ⅱ号可减少香烟暴露、流感病毒感染及二者联合小鼠肺部病毒复制水平及干扰素表达病毒空斑实验发现,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠病毒载量（P<0.05）。与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织NP表达水平（P<0.01）。⑤健脾益肺Ⅱ号方增加香烟联合流感病毒感染小鼠吸气量（IC）和用力肺活量（VC）小鼠肺功能实验发现,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠功能残气量FRC有显着性升高（P<0.01）;与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性升高小鼠IC深吸气量、VC肺活量（P<0.05）。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究①健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数持续作用的影响健脾益肺Ⅱ号未能降低熏烟联合攻毒小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数,与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天细胞总数的数量。②健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠肺组织炎症因子、Influenza matrix持续作用的影响与熏烟联合攻毒组相比,感染前给予健脾益肺Ⅱ号未能改善感染后第3天和第5天免疫细胞浸润与炎症因子的表达。与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天小鼠肺组织IL-1 β和IL-6的表达水平。结论:1.本研究为一项随机、双盲安慰剂对照的探索性临床研究,通过观察健脾益肺Ⅱ号对急性加重发生的影响,发现健脾益肺Ⅱ号颗粒剂可减少患者急性加重的频次,提高早期慢阻肺患者生活质量、改善临床症状,疗效优于安慰剂,且具有良好的安全性。早期对COPD患者进行干预,特别是稳定期有效干预,将改善患者生存质量,是减少COPD急性加重的重要手段,对于延缓疾病进展以及减轻患者经济负担具有重要的意义。本研究证实健脾益肺Ⅱ号可减少慢性肺病人急性加重,基于这一发现我们对健脾益肺Ⅱ号在减少慢阻肺急性加重发生方面的潜在作用机制将进行深入探讨。2.香烟暴露联合低剂量流感病毒感染会增加小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞数量,尤其是诱导小鼠气道以巨噬细胞和中性粒细胞增多为主的气道炎症,伴随急性炎症因子升高,过氧化物的增多和金属蛋白酶表达升高,且气道炎症浸润、氧化应激、金属蛋白酶以及肺部病毒载量水平明显高于单纯熏烟或单纯病毒感染小鼠。本研究一方面明确了香烟烟雾暴露和流感病毒感染是小鼠发生气道炎症重要的致病因素,初步探讨了香烟暴露对病毒诱导气道炎症的影响;另一方面通过熏烟联合病毒感染,成功建立了慢阻肺气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.健脾益肺Ⅱ号方减少了熏烟联合病毒感染小鼠气道炎症细胞的浸润,尤其中性粒细胞下调明显,并可抑制熏烟联合病毒感染小鼠促炎细胞因子、趋化因子的表达,减少了肺组织免疫细胞的募集,对氧化应激起到了抑制作用,并可减少流感病毒的复制。表明健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠肺部炎症、氧化应激具有抑制作用,可能与健脾益肺Ⅱ号方的抗病毒作用密切相关。从而可保护小鼠肺组织免受病毒感染所引起的炎症攻击,可能具有治疗流感病毒诱发慢性阻塞性肺疾病急性加重的作用。4.健脾益肺Ⅱ号方未能在熏烟阶段通过改善肺部损伤及炎症状态,从而减少病毒诱导的急性炎症;健脾益肺Ⅱ号方减少流感病毒诱导的熏烟小鼠气道炎症和氧化应激的主要环节可能在于流感病毒感染阶段;此外单纯的抗病毒作用,可能不足以改善病毒诱导的熏烟小鼠肺组织急性炎症。
张勇[2]（2021）在《紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用》文中提出急性肺损伤（ALI）是动物饲养过程中严重的呼吸道疾病,严重威胁着畜禽的生命安全。越来越多的研究表明ALI的发生发展过程与炎症和氧化应激反应密不可分。因此,减轻炎症和氧化应激反应对于改善ALI具有重要意义。紫檀芪是一种具有生物活性的纯天然物质,多存在于常见的蓝莓、葡萄等植物中,有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌等药理活性,同时越来越多的研究表明紫檀芪能够显着改善多种组织器官的损伤。本论文以紫檀芪为研究对象,建立LPS诱导的ALI小鼠模型,初步研究紫檀芪对其保护作用及其潜在机制。而后应用紫檀芪防治ALI雏鸡,观察紫檀芪对雏鸡的保护效果。首先,构建LPS诱导的ALI小鼠模型,分别用10、20和40 mg/kg紫檀芪对该模型进行预处理。其次,检测小鼠肺脏湿干重比值（W/D）的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;对支气管肺泡灌洗液（BALF）中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞进行计数,以及测定总蛋白浓度;测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;然后,测定肺组织抗氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,以及氧化应激指标丙二醛（MDA）含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化;最后,Western blotting检测NF-κB信号转导通路中p-IκB和p-p65蛋白以及Nrf2/HO-1信号转导通路中Nrf2和HO-1蛋白水平。结果显示,LPS诱导的ALI小鼠模型构建成功;紫檀芪降低了ALI小鼠肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;减少BALF中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数目,以及总蛋白浓度;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达;降低肺组织中p-IκB和p-p65蛋白水平,升高肺组织中Nrf2和HO-1蛋白水平。提示紫檀芪对ALI的保护作用机制主要是通过抑制NF-κB和激活Nrf2/HO-1信号转导通路,即抑制炎症反应和氧化应激反应。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型具有保护作用,可作为治疗或保护LPS诱导的ALI雏鸡的候选药物。构建LPS诱导的ALI雏鸡模型,分别饲喂50、100和200 mg/kg紫檀芪对该模型进行处理。每日对雏鸡进行称重,并观察其采食量以及精神和体征状态;眼观肺脏形状、颜色、充血和坏死情况等组织病理学变化;检测雏鸡肺脏W/D的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;测定肺组织MPO活性;测定肺组织抗氧化应激指标SOD、CAT、GSH-Px活性,以及氧化应激指标MDA含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化。结果显示,LPS诱导的ALI雏鸡模型构建成功,但其每日采食量以及精神和体征状态并无明显异常;紫檀芪提升了ALI雏鸡的体重日增长率;雏鸡肺组织随着紫檀芪剂量的增加,形状和颜色逐渐趋于正常,充血和坏死情况有所改善;降低了ALI雏鸡肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI雏鸡模型具有保护作用。综上所述,本论文证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型发挥保护作用,并初步揭示其作用机制是通过抑制炎症和氧化应激反应来实现的,而应用紫檀芪防治雏鸡ALI也证实了良好的保护效果。以上结果不仅为生产实践中有效防治ALI提供借鉴和参考,而且也可为雏鸡功能性饲料添加剂的研发提供实验依据。
欧顶琴[3]（2021）在《肺血管内皮糖萼脱落在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用及机制研究》文中研究表明[目 的]探究肺血管内皮糖萼（endothelial glycocalyx,EG）脱落与大鼠呼吸机相关性肺损伤（ventilator-inducedlunginjury,VILI）的关系,以及在大鼠VILI中EG脱落的部分机制。[方 法]根据随机数字表可将72只SPF级雄性SD大鼠分为6组:①假手术组（S组）;②-⑤高潮气量机械通气2h,4h,6h,8h组（HTV2组,HTV4组,HTV6组,HTV8组,Vt=40mL/kg）;⑥低潮气量机械通气4h组（LTV4组,Vt=8 mL/kg）,每组12只。各组大鼠在麻醉有效下（腹腔注射3%戊巴比妥钠:50mg/kg）,经气管切开插管术,S组保留自主呼吸,HTV2组进行高潮气量机械通气2h,HTV4组进行高潮气量机械通气4h,HTV6组进行高潮气量机械通气6 h,HTV8组进行高潮气量机械通气8 h,LTV4组进行低潮气量机械通气4 h,呼吸机参数设置:RR=80 次/分,I:E=1:2,FiO2=21%,PEEP=0 cmH2O,并于机械通气结束后过量麻醉药安乐死大鼠,即刻采集支气管肺泡灌洗液（BALF）,腹主动脉血液和肺组织。苏木精-伊红（H&E）染色用以观察大鼠肺组织病理改变,采用肺组织湿/干比（W/D ratio）,BALF中的总蛋白浓度及伊文思蓝染色法来评估肺组织渗透性变化,计数BALF中的炎症细胞数,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）来测定大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）,透明质酸（HA）,硫酸乙酰肝素（HS）和多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）的浓度,实时荧光定量法（RT-qPCR）检测肺组织 SDC-1,GPC-1,perlecan,NF-κB,IκBα,TNF-α,MMP-9 mRNA 表达水平,蛋白质印迹试验（WB）检测肺组织SDC-1,NF-κB,IκBα,p-IκBα,TNF-α,MMP-9蛋白表达水平,免疫荧光法检测肺组织SDC-1蛋白的表达。[结 果]大鼠肺组织切片的H&E染色实验结果显示,S组的大鼠肺组织结构清楚,HTV4、HTV6和HTV8组的肺组织表现出不同程度肺泡间隔增厚,充血和出血,炎症细胞聚集等病理学改变;与HTV4组比,LTV4组上述肺损伤病理改变较轻。与S组比,HTV4、HTV6和HTV8组肺组织W/D ratio,伊文思蓝含量,BALF中总蛋白浓度和血清中细胞因子TNF-α水平均升高;与HTV4组比,LTV4组上述指标均较低,差异有统计学意义。ELISA结果显示,HTV2、HTV4、HTV6和HTV8组血清中SDC-1、HS、HA水平高于S组;与HTV4组比,LTV4组血清中SDC-1、HS水平降低,差异有统计学意义。与S组比,HTV2、HTV4、HTV6和HTV8组肺组织SDC-1蛋白表达降低;与HTV4组比,LTV4组肺组织SDC-1蛋白表达较高。HTV4、HTV6和HTV8组肺组织NF-κB,IκBα,TNF-α,MMP-9mRNA表达水平高于S组,LTV4组低于HTV4组。HTV4组肺组织核NF-κB,p-IκBα,TNF-α,MMP-9蛋白表达水平高于S组,LTV4组低于HTV4 组。[结 论]1、肺血管EG的脱落可能参与了大鼠VILI的发生发展,NF-κB信号通路激活介导的炎症机制可能是大鼠VILI中EG脱落的部分原因。2、低潮气量机械通气可能通过减轻NF-κB信号通路激活,降低TNF-α,MMP-9蛋白表达,减轻EG脱落,发挥一定的肺保护作用。
朱长乐[4]（2020）在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中提出本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。
江银玲[5]（2020）在《原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究》文中指出研究背景与目的:急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）是常见的呼吸危重症,可由多种原因引起,其发生与发展过程复杂,发病机理尚未完全阐明。可能的机制包括氧化应激损伤、炎症因子风暴等损伤肺上皮细胞与微血管内皮细胞,引起肺血管通透性增加,大量含蛋白质的液体进入肺间质和肺泡腔,从而诱发顽固性呼吸衰竭。百草枯是一种常用的杂环除草剂,因其具有嗜肺性,中毒后主要引起急性呼吸窘迫综合征而具有较高的毒性,可用于制作ARDS动物模型,且百草枯中毒目前暂无有效解毒剂,故进一步深入探究其引起急性呼吸窘迫综合征的致病机制具有极大的临床价值。鉴于氧化损伤与炎症反应是引起百草枯的系列毒性反应的主要原因,我们设想抗氧化与抗炎治疗可有效防治百草枯引起的肺损伤。抗氧化应激损伤、减轻炎症反应也一直是这几年来ARDS治疗领域的研究热点。原花青素是具有很强抗氧化能力的天然提取物,其对于百草枯所致ARDS有无治疗作用及相关作用机理暂未见报道。本研究通过使用原花青素β2处理百草枯染毒大鼠ARDS模型观察其疗效,并探究其可能的机制。研究方法:1.ARDS模型的建立:通过腹腔注射百草枯染毒SD大鼠,观察动物一般情况及肺组织切片HE染色,确定成功制备ARDS动物模型。2.对氧化应激、肺血管通透性的影响:实验动物分为对照组（control组）,百草枯组（PQ组）,低剂量原花青素β2组（25mg/kg-PCβ2）,中等剂量原花青素β2组（50mg/kg-PCβ2）,高剂量原花青素β2组（100mg/kg-PCβ2）。处死大鼠后测定肺组织MDA、SOD、MPO等过氧化指标、肺湿干比及肺泡灌洗液中PMN。3.机制研究:Elisa法测定肺泡灌洗液中IL-1β、IL-18,RT-PCR法测定肺组织中IL-1β、IL-18 m RNA含量,western blot测定肺组织NLRP3炎性小体的表达。4.静默NLRP3基因,观察各组大鼠肺通透性、BALF中PMN的变化,测定肺组织中IL-1β、IL-18含量进一步探究NLRP3炎性小体在百草枯所致ARDS中的作用及原花青素β2发挥肺保护作用的机制。研究结果:1.大鼠一般情况:生理盐水组活泼强壮,食欲、反应均正常,活动敏捷,毛色均匀有光泽,呼吸平稳。造模组大鼠腹腔注射百草枯溶液30分钟-2小时左右即开始出现进食饮水减少、活动减少、反应迟钝、毛发竖起。72小时后精神萎靡、毛发蓬松、饮食欠佳、呼吸急促,口唇、肢端、鼠尾发绀明显,有的出现鼻腔、口腔出血,深大呼吸等。PCβ2组一般状况较PQ组有所改善,呈剂量依赖性。2.肺组织病理改变:对照组大鼠肺组织镜下肺泡结构清晰正常,肺泡腔清晰,肺泡壁结构无异常,肺泡间隔均匀一致,没有出血、坏死及炎症渗出。PQ组大鼠肺泡内皮细胞肿胀、毛细血管充血、肺泡腔内大量渗出、有大量炎性细胞浸润、肺泡壁明显增厚;PCβ2组肺组织内皮细胞肿胀、毛细血管充血、炎性细胞浸润均较PQ组减轻,且呈剂量依赖性。PQ组肺损伤评分显着高于空白对照组（P<0.001）,PCβ2组肺损伤评分较PQ组下降（P<0.05）,且呈剂量依赖性。3.肺湿干比计算:对照组大鼠未见明显肺水肿,PQ组大鼠肺含水量增加,肺水肿明显,肺湿干比明显高于对照组（P<0.001）,而PCβ2组大鼠肺含水量随剂量增加依次减轻,肺湿干比呈下降趋势,且呈剂量依赖性（P<0.05）。4.肺通透指数检测:PQ组肺通透指数显着高于对照组,P<0.001,PCβ2组肺通透指数明显下降,且随着给药剂量的增加,肺通透指数下降更明显,较PQ组变化均有统计学意义,但仍高于空白对照组。5.肺泡灌洗液PMN计数:PQ组BALF中PMN计数显着高于空白对照组,而PCβ2组BALF中PMN计数呈下降趋势,且呈剂量依赖性。6.氧化应激指标的变化:PQ组与PCβ2组较对照组MDA水平、MPO活性明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,MDA水平、MPO活性均有不同程度的下降。PQ组与PCβ2组较对照组SOD活性明显下降,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,SOD均有不同程度的上升。7.BALF中IL-1β、IL-18含量的变化:PQ组IL-1β、IL-18水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,IL-1β、IL-18含量均有不同程度的下降,且随着原花青素剂量的增加,IL-1β、IL-18含量均呈下降趋势。8.肺组织中IL-1β、IL-18 m RNA的变化:PQ组IL-1β、IL-18m RNA水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,IL-1β、IL-18 m RNA含量均有不同程度的下降,且随着原花青素剂量的增加,IL-1β、IL-18 m RNA含量均呈下降趋势。9.肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1水平的变化:PQ组NLRP3、ASC、caspase-1水平较对照组明显升高,PCβ2组（低、中、高剂量组）与PQ组相比较,NLRP3、ASC、caspase-1含量均有不同程度的下降,且呈剂量依赖性。10.静默NLRP3基因对肺组织及IL-1β、IL-18水平的影响:NLRP3基因静默组肺组织W/D、肺通透性及BALF中PMN较PQ组明显下降,其肺组织中IL-1β与IL-18的含量较PQ组明显下降（P<0.01）,PCβ2组IL-1β与IL-18的含量与基因静默组相仿,差异无统计学意义。NLRP3基因静默组大鼠IL-1β、IL-18较空白对照组明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）。研究结论:本实验通过腹腔注射百草枯成功建立ARDS模型,可用于ARDS的研究。原花青素β2可降低ARDS大鼠肺血管通透性,减轻肺水肿,降低BALF中PMN。其抗氧化作用可降低肺组织中MDA水平与MPO活性,上调SOD活性从而减轻肺损伤。静默NLRP3基因提示NLRP3炎性小体参与介导百草枯所致的ARDS。原花青素β2可通过抑制NLRP3炎性小体而下调IL-1β、IL-18的表达从而对百草枯所致ARDS起到一定的干预效果。
王智超[6]（2020）在《基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究》文中研究指明目的:在前期实验研究“感毒清的质量控制成分黄芪甲苷对PM2.5所致急性肺损伤肺组织结构保护作用”的基础上,进一步探讨黄芪甲苷保护PM2.5所致急性肺损伤的作用机制。方法:将35只大鼠随机分成5组:空白组、模型组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组。实验设计为造模前经腹腔注射（intraperitoneal injection,i.p）预防性给药,以观察药物对PM2.5造成损伤的保护性作用。预防性给药3日后开始制备急性肺损伤大鼠模型,以气道滴注PM2.5混悬液的方式进行,造模时间为预防性给药开始后的第3日、第5日。预防性给药剂量为:黄芪甲苷低剂量50mg/kg/b.w,每日给药1次;黄芪甲苷高剂量100mg/kg/b.w,每日给药1次;法舒地尔剂量10mg/kg/b.w,每日给药1次;空白组和模型组给与等体积生理盐水。本次实验于第二次造模后开始计时,计时24h时后麻醉大鼠处死,获取肺组织及肺泡灌洗液进行检测。右肺膈叶做干湿比观察肺组织水肿情况;右肺尖叶做HE染色及Mc Guigan病理评分观察病理损伤程度;副叶检测ICAM-1、IL-1β、MPO水平判断肺损伤炎症水平;BCA法检测肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白的含量,同时做细胞计数及细胞分类判断肺损伤渗出水平;部分右肺膈叶做透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤情况;免疫组化法观察肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2定位、Western Blot法检测肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2、NF-κB、p-NF-κB、IκB、p-IκB、E-cadherin含量。实验结果采用SPSS 22.0统计软件进行数据统计及分析,Graph Pad Prism 8.0进行绘图。结果:（1）肺组织水肿情况:与空白组相比,模型组大鼠的干湿比、总肺含水量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织干湿比、总肺含水量明显降低（P<0.001）。（2）肺组织中总蛋白含量和细胞渗出情况:在BCA法检测总蛋白渗出中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显降低（P<0.001）。在细胞计数和中性粒细胞瑞氏-吉姆萨染色中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显升高（P<0.001）;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量组和法舒地尔组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显下降（P<0.001）,黄芪甲苷低剂量组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数有所下降（P<0.01）。（3）肺组织形态学观察:HE染色结果表明空白组大鼠肺组织结构基本完整;模型组大鼠肺泡结构出现塌陷,肺泡充血、出血明显,大量含蛋白质水液渗出,中性粒细胞和成纤维细胞聚集;各给药组大鼠肺组织结构较模型组明显好转。在病理评分中,与空白组相比,模型组大鼠病理总积分明显升高（P<0.001）,在出血（P<0.01）、肺泡充血（P<0.05）、肺泡壁增厚或透明膜（P<0.05）评分中有升高;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量明显降低病理总积分（P<0.001）和出血评分（P<0.01）;黄芪甲苷低剂量、法舒地尔可以降低病理总积分（P<0.01）。（4）肺组织中炎症水平:与空白组相比,模型组大鼠IL-1β水平（P<0.01）、MPO活性（P<0.001）、ICAM-1活性（P<0.001）明显升高;与模型组相比,各给药组IL-1β、ICAM-1水平明显降低（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量组、低剂量组MPO活性明显降低（P<0.001）,法舒地尔组MPO活性有所降低（P<0.01）。（5）肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构:空白组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积正常,肺泡结构基本正常。模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积增大且不规则,排空明显呈空泡化,肺泡结构紊乱。各给药组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构较模型组明显好转,肺泡结构基本正常。（6）Rho A/ROCK蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,ROCK2蛋白活性有一定升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白活性明显降低（P<0.001）。与模型组相比,各给药组Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,法舒地尔明显抑制ROCK2蛋白活性（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量可抑制ROCK2蛋白活性（P<0.05）;黄芪甲苷高剂量组E-cadherin蛋白活性有所升高（P<0.05）,黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组E-cadherin蛋白活性明显升高（P<0.01）。（7）NF-κB蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显降低（P<0.001）。结论:（1）黄芪甲苷可以保护PM2.5诱导的急性肺损伤,抑制PM2.5造成的炎症因子、水肿液和蛋白质渗出。（2）黄芪甲苷可以抑制PM2.5所致的炎症反应,保护肺组织的正常结构和功能。（3）黄芪甲苷对肺组织结构的保护作用可能是通过Rho A/ROCK/NF-κB信号通路发挥作用。
王玥琦[7]（2020）在《固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响》文中认为背景:慢性阻塞性肺疾病是以不完全可逆的气流受限为特征的阻塞性肺病。急慢性炎症交替持续存在,造成气道重构和肺气肿,表现为劳力性呼吸困难等,为患者的日常生活和社会带来沉重负担。中医药治疗慢阻肺不仅可缓解症状,还能减少急性加重,延缓疾病进展,而其机制缺乏深入研究。黏膜免疫具有重要作用,但中医药对呼吸道黏膜免疫影响机制的研究数量少、处于起步阶段。固本止咳中药方是一个针对慢阻肺稳定期的病机特点,具有扶正祛邪之功效的经验方。前期临床研究表明其能够缓解患者的症状、提高肺功能、调节免疫功能。动物实验研究显示其能够减轻慢阻肺模型小鼠气道炎症,改善肺功能和病理损伤,机制有待进一步研究。目的:1.研究固本止咳中药方对呼吸道黏膜免疫中关键细胞γ δT细胞及其细胞因子KGF的影响,探究其对黏膜免疫功能的影响及扶正祛邪的机制。2.研究固本止咳中药方对循环中及黏膜局部炎症因子的影响,探讨其改善患者症状及疾病进展严重程度的机制。3.为黏膜免疫功能与“卫气”之间的联系、为中医药以扶正固本实现“治未病”以及为从调节黏膜免疫入手治疗慢阻肺提供实验依据。方法:按照固本止咳中药方制作干浸膏,配制成高剂量0.55g生药/ml、中剂量0.28g生药/ml、低剂量0.09g生药/ml。将125只SPF级ICR雌性小鼠随机分为5组:空白对照组、模型对照组、固本止咳中药方高、中、低剂量组,每组25只。采用持续香烟烟雾暴露12周（除第1、29、57天）加经鼻腔向呼吸道滴入LPS溶液（第1、29、57天,共3次）的方法建立慢阻肺小鼠模型,而后两对照组用蒸馏水、中药组用固本止咳中药方溶液灌胃,共4周。造模及药物干预过程中观察其一般生理活动,监测体重。灌胃结束后用小动物肺功能仪测量肺功能。肺组织切片HE染色后观察形态学改变及细胞浸润,评价小鼠造模效果;肺组织切片进行免疫组化染色,检测小鼠肺组织中α βTCR和γ δ TCR表达情况、KGF和KGFR分泌情况;参考小肠黏膜上皮细胞间淋巴细胞分离方法,总结出肺组织淋巴细胞分离方法,用流式细胞术分析其中的αβT细胞和γ δ T细胞群;肺组织匀浆后采用Western Blot方法检测其中的KGF和KGFR蛋白,应用ELISA方法检测KGF蛋白含量,并用RT-PCR法检测KGF的mRNA水平;收集小鼠的血清、支气管肺泡灌洗液和肠黏液,用ELISA方法检测其中的炎性因子IL-6和IL-13水平。结果:1.一般生命质量情况:空白对照组小鼠无死亡,皮毛光泽柔顺,呼吸和缓,频率适中,节律均匀,活动正常,体重逐渐增加;慢阻肺模型组小鼠死亡10只,毛发枯暗,部分有脱毛,熏烟时躁动蹿跳,后期多扎堆蜷缩,甚则全身颤抖,呼吸急促,胸腹部起伏明显,时有不规则点头运动,甚者张口呼吸,体重较空白组明显偏低（P<0.001）。高剂量、中剂量固本止咳中药方组分别死亡1只,低剂量固本止咳中药方组死亡4只,造模期间一般情况同慢阻肺模型组,给予中药灌胃后与模型组相比毛发较顺泽,躁动程度有所减轻,呼吸困难可见改善,频率减缓,高剂量、低剂量固本止咳中药方组体重明显高于模型组（P<0.001）。2.肺组织切片HE染色显示空白对照组小鼠气道和肺泡结构正常,纤毛整齐,肺泡形状、大小规整,气道黏膜上皮完整;模型对照组支气管黏膜皱襞形成、有片状脱落,使管腔变窄或闭塞;肺泡壁破坏,肺泡腔不规则扩大,部分融合成肺大泡,气道周围及肺间质可见炎症细胞浸润,符合慢阻肺病理学表现。经固本止咳中药方治疗的三组与模型对照组对比,可见形态学方面的改善,体现在支气管和肺泡结构较完整,管腔狭窄程度减轻,气道黏膜上皮相对完整,纤毛排列规则、脱落减少,肺泡大小比较均匀,肺大泡数量减少,气道管壁周围及肺间质内炎症细胞浸润程度减轻。3.肺功能测量:模型对照组呼吸系统粘性阻力、弹性阻力明显高于空白对照组（P<0.05）;呼吸系统动态顺应性明显低于空白对照组（P<0.05）。高、中、低剂量固本止咳中药方组呼吸系统粘性阻力明显低于模型对照组（P<0.05）;中剂量固本止咳中药方组弹性阻力明显低于模型对照组（P<0.05）、呼吸系统动态顺应性明显高于模型对照组（P<0.05）。肺组织阻尼模型对照组明显高于空白对照组（P<0.05）;高剂量、低剂量中药组明显低于模型对照组（P<0.05）。准静态顺应性高剂量固本止咳中药方组明显高于模型对照组,准静态弹性量高剂量固本止咳中药方组明显低于模型对照组（P<0.05）。4.肺组织免疫组化染色实验中,空白对照组可见α β T细胞、γ δT细胞均少量存在于肺组织中;模型对照组几乎未见γ δT细胞存在;高、中、低剂量固本止咳中药方组,可见较多γ δ T细胞存在于气管附近,较模型组有明显升高,小鼠肺组织α β T/γ δT细胞比例在模型组较空白对照组升高,固本止咳中药方组较模型组呈降低趋势。5.肺组织淋巴细胞流式分析:小鼠γδT细胞比例在模型组较空白对照组有降低的趋势,低剂量固本止咳中药方组较模型组有明显升高（P<0.05）。6.肺组织切片免疫组织化学染色,空白对照组肺组织中有少量KGF表达;模型对照组少于空白对照组;高、中、低剂量固本止咳中药方组KGF表达明显高于模型组,且稍高于空白对照组。7.Western blot检测结果显示,KGF、FGFR2蛋白表达量模型对照组较空白对照组明显降低（P<0.05）,中剂量固本止咳中药方组KGF表达较模型对照组明显升高（P<0.05）,高剂量固本止咳中药方组、低剂量固本止咳中药方组FGFR2表达较模型对照组明显升高（P<0.05）。8.ELISA检测结果显示,高剂量固本止咳中药方组KGF蛋白含量较模型对照组明显升高（P<0.05）。9.Real Time PCR检测结果显示,KGF蛋白的mRNA含量模型对照组明显低于空白对照组,中、低剂量中药组明显高于模型对照组（P<0.05）。10.小鼠血清中的IL-6含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高剂量中药组低于模型对照组（P<0.05）;血清中的IL-13含量各组间未见明显差异。BALF中的IL-6含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）;高剂量中药组与模型组对照组对比无统计学差异,中剂量中药组低于空白对照组、模型对照组以及高剂量中药组（P<0.05）,低剂量中药组低于空白对照组、模型对照组以及高剂量中药组（P<0.05）;BALF中的IL-13含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高剂量中药组以及中剂量中药组低于模型组对照组（P<0.05）。肠黏液中的IL-6含量各组间未见明显差异;肠黏液中的IL-13含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高、中、低剂量中药组低于模型组对照组（P<0.05）。结论:1.持续香烟烟雾暴露加经鼻腔向呼吸道内滴入LPS溶液的方法造成小鼠肺部形态学病理改变以及肺功能改变与慢阻肺的特征相吻合。2.固本止咳中药方由黄芪、淫羊藿、炒白术、百部、黄芩、赤芍、防风组成,其可以提高慢阻肺模型小鼠生命质量及体重。3.固本止咳中药方可以改善慢阻肺模型小鼠肺组织形态学病理变化。4.固本止咳中药方治疗可减轻慢阻肺模型小鼠呼吸道阻塞程度、提高肺组织顺应性。5.固本止咳中药方明显减低慢阻肺模型小鼠血清和BALF中的IL-6含量以及BALF和肠黏液中的IL-13含量,有效控制气道及全身炎症状态,改善气道及肺组织结构损伤。6.固本止咳中药方通过调节慢阻肺模型小鼠肺组织γ δT细胞比例,促进KGF及KGFR的分泌,加快肺组织损伤的修复,起到改善呼吸道黏膜完整性、增强黏膜免疫功能的作用。与固本止咳中药方通过扶正祛邪、补气助阳、健脾益肾、止咳化痰、活血化瘀,从而增强“卫气”的作用彼此呼应。据此推测,呼吸道黏膜免疫功能是“正气卫外”作用的物质基础之一,中医药通过调节黏膜免疫功能,实现“扶正祛邪”的作用,从而达到延缓疾病进展、减少急性发作的目的,为慢阻肺的治疗提供了新的思路。7.根据肠上皮细胞间淋巴细胞提取方法,在本研究中总结并完善的肺组织淋巴细胞提取分离的实验操作方法,也将为呼吸道黏膜免疫的研究提供实验基础。
赖芳[8]（2020）在《从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制》文中指出急性肺损伤（ALI）是危重症常见并发症,临床可引发急性呼吸窘迫综合征,脓毒症是引发ALI的主要病因之一。脓毒症ALI发病率高,死亡率高,临床救治困难,目前仅保护性通气策略、限制性液体管理是有循证医学证据支持可改善预后的措施,尚无药物可明确改善脓毒症ALI预后。寻求对脓毒症ALI有效的干预措施是研究的热点之一。中医药治疗脓毒症、ALI等危重症有着悠久的历史,现代中医救治危重症亦有较多进展。目前多数医家将其归于“暴喘”、“喘脱”范畴,无论中医内治法、外治法均多有长足发展。通过系统整理脓毒症ALI的中西医研究进展,我们发现,针刺足三里在干预脓毒症ALI有一定优势。为进一步系统整理现有文献情况,本研究参考SYRCLE动物实验系统评价的方法对文献中针刺足三里干预脓毒症ALI的动物实验文献进行整理,并在此基础上优化设计动物实验并开展研究,提出从胆碱能抗炎通路探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用及机制,为进一步临床研究及应用提供科学依据。目的:1.全面、系统、客观地评价目前针刺足三里干预脓毒症ALI的已有文献报道情况,总结证据特点,在此基础上优化设计动物实验。2.实验证实针刺足三里对脓毒症ALI的作用,并从胆碱能抗炎通路（CAP）探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用机制。方法:1.参考SYRCLE动物实验系统评价的方法,在PubMed、Cochrane图书馆（CENTRAL）、Embase（Excerpt Medica Database）、中国生物医学文献服务系统（CBM）、中国知网（China National Knowledge Infrastructure,CNKI）、万方医学网（Wanfang Data）和维普数据库（VIP Database）7个数据库从建库到2019年5月31日的文献进行系统地检索、筛选、整理有关针刺足三里干预脓毒症ALI的动物实验文献,总结现有实验结果设计、结果情况,分析影响实验结果的因素,结合文献调研情况,优化设计动物实验方案设计,以进一步探讨针刺足三里对脓毒症ALI的作用及机制。2.参照美国胸科协会对脓毒症ALI动物造模的推荐方式及造模成功评判标准,采用脂多糖（LPS）气道内滴入的方法构建大鼠脓毒症ALI模型,进行生存分析,共60只大鼠随机分为4组:假模型组、电针组、模型+同期麻醉组、模型+非同期麻醉组,每组15只。假模型组给予生理盐水气道内滴入;电针组于气道内滴入LPS造模后30min给予执行电针30min,每日1次,共执行3次;模型+同期麻醉组于LPS气道内滴入造模后,每次电针组执行电针时同期给予麻醉药麻醉;模型+非同期麻醉组于造模后不予任何干预。观察各组大鼠生存情况至造模后第7天。3.同上方法及标准构建大鼠脓毒症ALI模型,进行机制探讨,共35只大鼠随机分为7组:假模型组、模型组、电针组、PNU组（使用CAP通路关键受体α 7nAChR激动剂PNU-282987）、MLA组（使用α 7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭）、PNU+电针组、MLA+电针组,每组5只。假模型组给予生理盐水气道内滴入;电针组于造模后30min给予电针30min 1次、造模后24h取材前30min执行电针治疗1次,PNU组、MLA组于造模后30min分别给予PNU-282987、甲基牛扁亭腹腔注射,PNU+电针组、MLA+电针组分别于造模后30min给予相应药物腹腔注射并给予电针30min 1次,造模后24h取材前30min执行电针治疗1次。造模后24h取材,收集大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）,离心后上清液用于BALF蛋白含量测定,细胞沉淀重悬后涂片行白细胞、中性粒细胞计数;称取肺组织湿重及烤干至恒重重量计算肺组织湿干重比;血液离心取上清测定血清蛋白含量,与BALF蛋白含量比较计算肺毛细血管蛋白渗漏程度;取采用肺组织切片HE染色观察肺组织病理改变;采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IL-10含量;采用Western Blot方法检测肺组织NF-κB蛋白水平、α 7nACHR蛋白水平;以组织活性测试盒（南京建成）测定肺组织ChAT、AChE活性。结果:1.动物实验系统评价结果:从7个数据库共检索获得4417篇文献,按照纳入、排除标准,通过标题、摘要筛选获得74篇文献,通过全文获取及阅读最后共纳入19篇文献。（1）目前关于针刺足三里干预脓毒症肺损伤的动物实验文献大多数（约63%）为5年之前发表,肺损伤评价指标相对粗浅、单一,疗效评估未足够全面;（2）19篇文献中仅4篇文献采用足三里单穴进行干预,其余均配以其他穴位进行干预,针刺足三里穴的作用效果未能充分明确;（3）针刺干预时机89.5%的文献为造模前预处理,仅10.5%为造模后立即针刺干预,与临床实际可切入干预时机相距甚远;（4）机制研究方面不够深入,可结合针刺足三里在脓毒症方面的其他研究结果进一步深入探讨;（5）文献的总体质量较低,偏倚风险较高。根据当前研究进展及系统评价结果,提出采用合适、稳健的脓毒症肺损伤模型,通过死亡率、较全面的肺损伤评价指标评价通过足三里单穴进行造模后等待再行干预处理的效果,并从胆碱能抗炎通路对作用机制进行探讨。2.动物实验结果:（1）生存分析:无论是与模型+同期麻醉组还是与模型+非同期麻醉组相比,电针组7天生存率明显提高（P<0.05）。（2）肺组织病理评分:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组、PNU组、PNU+电针组大鼠肺组织病理评分明显下降,差异有统计学意义（P<0.01）,电针组下降趋势更明显;MLA组、MLA+电针组与模型组相比,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）肺组织湿/干重比:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺湿/干重比明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）。（4）BALF白细胞计数、中性粒细胞计数:模型组较假模型组均明显升高（白细胞,P<0.05;中性粒,P<0.01）;与模型组相比,电针组BALF中白细胞、中性粒细胞有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（5）肺毛细血管蛋白渗漏程度:模型组较假模型组明显升高（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺毛细血管蛋白渗漏程度下降,差异有统计学意义（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）。（6）ELISA炎症因子检测:血清IL-6、IL-10水平模型组较假模型组均明显升高（均P<0.01）;与模型组相比,电针组血清IL-6水平明显下降（P<0.05）,其余各组差异无统计学意义（P>0.05）;IL-10水平各组间差异无统计学意义（P>0.05）。（7）肺组织ChAT活性检测:模型组较假模型组明显降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺组织ChAT活性明显升高（P<0.05）。（8）肺组织AChE活性检测:模型组较假模型组明显降低（P<0.01）;与模型组相比,电针组肺组织AChE活性有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（9）肺组织NF-κ B蛋白表达:模型组较假模型组明显升高（P<0.05）;与模型组相比电针组肺组织NF-κ B表达明显下降（P<0.05）,其余各组与模型组差异无统计学意义（P>0.05）。（10）肺组织α 7nAChR蛋白表达:假模型组、模型组、电针组肺组织α 7nAChR蛋白表达无明显差异（P>0.05）,其余各组较上述三组均明显升高（P<0.05）。结论:1.目前文献研究提示电针足三里可能可减轻脓毒症肺损伤,但尚未较全面、系统进行验证,机制研究不够深入,胆碱能抗炎通路可能是电针足三里发挥作用的重要通路。2.本研究以LPS气道内滴入建立脓毒症ALI大鼠模型,模型构建成功。在模型构建成功的基础上验证电针足三里干预的有效性,与模型组相比,电针足三里可改善脓毒症ALI大鼠7天死亡率,造模后24h肺损伤明显减轻。3.通过检测胆碱能抗炎通路关键调控因子的活性,本研究发现,电针足三里可显着提高脓毒症肺损伤大鼠肺组织ChAT活性,降低肺组织NF-κ B表达水平,降低炎症因子IL-6的水平,进一步通过与使用胆碱能抗炎通路关键受体α 7nAChR激动剂及拮抗剂的组别比较,发现电针足三里可能是通过神经电刺激促进神经递质乙酰胆碱的生成和释放而产生激活胆碱能抗炎通路发挥抗炎作用,而不是通过影响α 7nAChR表达或增强α 7nAChR与受体激动剂结合等机制产生作用。
张倩文[9]（2020）在《N-乙酰半胱氨酸对社区获得肺炎氧化应激、炎症和影像吸收的作用》文中研究表明研究背景肺炎曾是威胁人类生命的主要疾病之一,随着广谱抗生素的发展和应用及诊疗技术的提高,肺炎病死率有所下降。但根据世界卫生组织估计,下呼吸道感染占感染性疾病死亡的近35%,每年导致近400万成人和儿童的死亡,与其他感染相比造成更大的疾病负担1。根据文献报道,社区获得性肺炎在美国死亡原因中排第7位2。社区获得性肺炎仍然为影响人类健康的重要疾病和重要的公共卫生问题。随着年龄增加肺炎发病率增加,并且肺炎的病死率随着年龄增加而升高4。并且2020年新型冠状病毒肺炎的流行已经成为严重的世界公共卫生问题。因此,改善肺炎的疾病过程,减轻疾病过程中的损伤有重要的意义。社区获得性肺炎的病理生理过程包括微生物入侵、免疫防御系统的激活、炎症反应及炎症的吸收消散等机制。病原微生物入侵,机体启动初始防御机制,活化的吞噬细胞大量涌入下呼吸道,细菌被吞噬后,诱发吞噬细胞内“呼吸爆发”反应,引起活性氧的生成和释放,产生并释放大量促炎因子和趋化因子,募集并激活血液中的中性粒细胞,趋化中性粒细胞从血管内向肺泡或气道转移24,发挥重要的抗感染作用。中性粒细胞和巨噬细胞利用ROS杀灭病原微生物,维系并增强炎症反应。但在这种情况下,机体内氧化剂生成和抗氧化防御之间出现不平衡,即出现氧化应激。对于肺炎患者来说,大量病原体的入侵导致体内氧化应激增加,是机体清除细菌的一种重要机制,但过度的活性氧的产生将导致组织损伤,包括脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,可引起细胞功能紊乱、细胞损伤和细胞死亡。氧化应激与炎症密切相关,可以影响肺部炎症的分子机制,刺激促炎因子产生,调节许多细胞信号通路,导致转录因子的激活和炎症介质的释放。当炎症反应发生不受控制,这些炎症介质和炎性因子可引起过度的细胞、组织损伤,从而影响患者的预后。氧化应激是肺炎发生和发展过程中的重要环节,所以减轻氧化应激及炎性反应是减轻相关损伤并提高预后的重要手段。目前许多学者提出了在疾病的常规治疗中联合抗氧化治疗可提高预后的观点。N-乙酰半胱氨酸是一种含巯基的还原剂,是谷胱甘肽的前体,具有直接抗氧化作用和间接抗氧化作用。其游离巯基与活性氧作用并清除活性氧发挥直接抗氧化作用21。间接抗氧化作用是其作为谷胱甘肽前体,提供半胱氨酸以增加细胞内谷胱甘肽浓度。N-乙酰半胱氨酸还能够调节细胞的氧化还原状态,从而影响许多通路如转录因子NF-κB途径来减低炎症反应。通过抗氧化和调节细胞因子的产生,N-乙酰半胱氨酸具有改善气道黏液分泌、调节免疫系统等作用75。而且NAC能减少肺泡上皮细胞凋亡,促进凋亡细胞清除和减少胶原沉积,有利于保护肺组织细胞,促进炎症吸收。有许多临床研究报道N-乙酰半胱氨酸改善了慢性阻塞性肺病急性加重患者的氧化应激和炎性反应12,也有H1N1流感患者中应用N-乙酰半胱氨酸治疗受益的报道22。但是目前关于肺炎患者使用N-乙酰半胱氨酸对其氧化应激、炎性反应和肺炎吸收的作用临床报道不多,所以本研究旨在探讨N-乙酰半胱氨酸对社区获得性肺炎患者的氧化和炎症水平的作用,为临床中减轻肺炎的氧化和炎性损伤提供指导。目的通过社区获得性肺炎患者血浆丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（TAOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,比较常规治疗（抗感染、祛痰）联合N-乙酰半胱氨酸（NAC）与单纯常规治疗对社区获得性肺炎患者氧化应激、炎性因子的影响;通过对咳嗽、咳痰量与痰液性状评分及肺炎的胸部影像学评分,评价联合应用N-乙酰半胱氨酸对临床症状和肺炎吸收的影响;从而探讨N-乙酰半胱氨酸对社区获得性肺炎患者的作用,为临床中减轻肺炎的氧化和炎性损伤提供参考。方法连续性纳入2016年8月至2017年3月于威海市立医院呼吸科治疗的社区获得性肺炎（CAP）患者86例。CAP临床诊断标准174:1.社区获得性感染,年龄≥18岁。2.临床表现:（1）新发咳嗽、咳痰,或者原有的呼吸道疾病出现症状加重;（2）发热;（3）肺部听诊可闻及湿啰音,或出现肺实变的体征;（4）外周血常规白细胞计数升高>10×109/L或者下降<4×109/L,出现或不伴核左移。3.胸部影像学表现:新发浸润影、磨玻璃影、肺叶或肺段的实变、肺间质改变或合并胸腔积液。符合上述第1、3和2中任何1项,除外其他疾病如肺肿瘤、淋巴瘤肺浸润、肺栓塞肺梗死、非感染性间质性肺病、肺结核、肺水肿、嗜酸性粒细胞肺浸润等可临床诊断。过程中排除年龄≥70岁、严重肥胖（体重指数BMI≥32）、大量吸烟史（吸烟指数≥200）、患多种其他系统疾病、肺炎PSI评分IV-V、考虑病毒性肺炎、纳入前已应用抗生素治疗的患者29例,排除最终诊断为结核、治疗后拒绝复查胸部CT、中途拒绝继续N-乙酰半胱氨酸治疗或其他原因退出的患者18例,最终39例患者完成研究。纳入时采用分层的方法,根据是否合并其他疾病（合并症）及是否吸烟进行分层,每层随机分配患者于使用N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）和不使用N乙酰半胱氨酸组（非NAC组）。非NAC组接受肺炎常规治疗。肺炎常规治疗药物包括抗菌药物（青霉素类、头孢菌素、喹诺酮类）、化痰药（溴己新、氨溴索）。NAC组接受肺炎常规治疗和NAC 600mg/次日2次口服（1200 mg/日）。N-乙酰半胱氨酸（600mg/片）由海南赞邦制药有限公司（意大利赞邦集团）提供。2组患者均经过10天的用药,整个用药过程无NAC剂量增减,期间监测有无NAC相关副作用及药物相互作用。纳入当日和治疗3日后对2组患者进行咳嗽、咳痰量、痰液性状评分和临床效果综合评价。2组患者均于纳入当日及治疗7日采集静脉血标本4ml,用以测定血浆MDA、TAOC、SOD和TNF-α水平。纳入24小时内和治疗10天对患者行胸部CT检查。用半定量分析评估肺炎影像吸收情况。主要终点指标为NAC组与非NAC组患者相比,治疗后血浆氧化应激和炎症参数MDA、TAOC及TNF-α水平变化程度;次要终点指标为NAC组较非NAC组治疗后临床症状咳嗽、咳痰、痰液黏度改善程度,胸部CT影像学变化程度。结果治疗3天后NAC组与非NAC组患者咳嗽症状（p=0.315）和咳痰量（p=0.130）改善无统计学差异,但痰液性状的改善有明显差别（p=0.012）,总体临床症状效果评价NAC组与非NAC组虽然无统计学意义的差异,但是NAC组显示出有更好的趋势（p=0.058）。治疗7天NAC组比非NAC组血浆MDA和TNF-α水平下降更明显（MDA:NAC组治疗前 3.20±1.43nmol/ml,治疗后 2.01±0.74nmol/ml,非 NAC 组治疗前3.14±1.66nmol/ml,治疗后 2.71±1.17nmol/ml;p 0.004。TNF-α:NAC组治疗前 26.96±6.52 pg/ml,治疗后 17.02±4.13pg/ml;非 NAC 组治疗前25.27±8.15pg/ml,治疗后 19.02±4.76pg/ml,p<0.001）,T-AOC 水平在 NAC组有更明显地升高（NAC组治疗前5.92±3.50 U/ml,治疗后10.07±3.17 U/ml;非 NAC 组治疗前 7.47±3.89U/ml,治疗后 8.74±4.37 U/ml;p 0.005）。但 2组治疗后血浆SOD活性变化无统计学意义（NAC组治疗前58.07±29.80 U/ml,治疗后 64.96±40.11U/ml;非 NAC 组治疗前 63.73±33.04U/ml,治疗后66.93±35U/ml;p=0.368）。治疗10天2组胸部CT阴影吸收≥50%的患者数差别无统计学意义（NAC组12例,非NAC组8例,p=0.429）。2组治疗后胸部CT评分变化亦无统计学意义（p 0.503）。整个治疗过程,每位患者均未产生NAC相关的副作用。结论1.N-乙酰半胱氨酸能够有效地减低社区获得性肺炎患者体内MDA、TNF-α水平,提高总抗氧化能力水平,对减轻社区获得肺炎过程中氧化应激和炎性损伤有积极意义。2.N-乙酰半胱氨酸可有效地改善痰液性状,减轻痰液黏度,有助于感染时黏痰分泌等临床症状的改善。而呼吸道总体症状的改善,也主要归因于痰液黏度改善。3.社区获得肺炎时应用N-乙酰半胱氨酸600mg日2次在10天时未能更有效地改善胸部影像学吸收情况。但提示这方面研究可能需要在增大样本量基础上着重针对缓慢吸收肺炎患者、增加NAC的剂量和疗程、选取恰当的影像学观察节点,为开展进一步研究提供经验。意义N-乙酰半胱氨酸在社区获得肺炎抗氧化抗炎治疗方面有积极意义,拓展了 N-乙酰半胱氨酸在肺炎患者中的应用价值,为临床中减轻肺部感染患者的氧化和炎性损伤治疗提供思路。
费君[10]（2019）在《奥贝胆酸通过抗炎作用减轻细菌脂多糖所致小鼠急性肺损伤》文中研究说明研究背景急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是一种常见的可导致急性呼吸衰竭和死亡的疾病,在过去的几十年里,ALI的发病率和死亡率一直居高不下,目前没有有效的治疗手段和药物。法尼脂X受体（Farnesoid X receptor,FXR）是一种配体依赖的转录因子,在调节胆汁酸代谢中发挥重要作用,奥贝胆酸（obeticholic acid,OCA）是一种人工合成的FXR激动剂,研究表明FXR亦具有抗炎作用。LPS诱导的ALI模型是目前广泛被使用的急性肺损伤动物模型,本实验研究了OCA激活FXR后是否可以减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,以及是否通过降低炎症信号通路进而减轻急性肺损伤。研究目的（1）OCA是否减轻了LPS诱导的小鼠急性肺损伤;（2）OCA是否通过抑制炎症信号进而减轻了LPS诱导的小鼠急性肺损伤。实验方法将60只雄性小鼠随机分为6组（每组10只）,分别为Control组（即对照组）,单纯OCA组,LPS-2h组,LPS-6h组,LPS+OCA-2h以及LPS+OCA-6h组。单纯OCA组小鼠,以及LPS+OCA-2h组和LPS+OCA-6h组小鼠在LPS注射前72h,48h和24h,分别灌胃补充OCA（OCA,5 mg/kg,溶于玉米油中）,LPS组小鼠给予腹腔注射LPS（1.0 mg/kg,溶于盐水中）,Control组和OCA组注射等体积生理盐水。在LPS腹腔注射后0h,2h以及6h剖杀小鼠,留取肺组织。观察肺系数以及病理的改变。制备肺泡灌洗液,用ELISA的方法检测小鼠血清以及肺泡灌洗液中的炎症因子。用RT-PCR方法检测肺组织中Tnf-α、Il-1β、Tgf-β、Kc、Mcp-1和Il-10的mRNA水平;用Western-Blotting方法检测NF-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）信号、MAPKs信号以及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达。用免疫组化法检测FXR,NF-κB p65和NF-κB p50的阳性细胞定位。研究结果（1）OCA预处理改善LPS引起的小鼠急性肺损伤腹腔注射LPS成功诱导小鼠急性肺损伤模型,灌胃补充OCA可以明显减轻LPS诱导的急性肺损伤。LPS暴露后6 h小鼠绝对肺重量和相对肺系数,与Control相比是明显升高的;病理显示,补充OCA可以有效抑制LPS引起的肺水肿以及炎性细胞浸润,补充OCA明显降低了LPS上调小鼠急性肺损伤病理评分。研究结果显示OCA预处理可以有效减轻LPS引起的小鼠急性肺损伤。（2）OCA预处理减轻LPS引起的肺部促炎因子和趋化因子的升高小鼠肺组织中促炎因子Tnf-α,Il-1β,Tgf-βmRNA水平在LPS暴露后2 h和6h是明显升高的,补充OCA后,有效抑制了LPS引起肺部促炎因子的升高;LPS暴露后,肺中趋化因子Kc和Mcp-1 mRNA是明显上调的,补充OCA后,可以拮抗LPS引起的肺组织中趋化因子的升高;研究还发现,LPS暴露后,肺中抗炎因子Il-10 mRNA在2 h和6 h是明显升高的,补充OCA后,Il-10 mRNA水平在6 h更进一步升高。研究结果显示OCA不仅可以抑制LPS上调小鼠肺中促炎因子和趋化因子,同时还促进了抗炎因子的释放。（3）OCA预处理可以降低LPS引起的血清中炎性因子和趋化因子的释放LPS暴露后,血清中的促炎因子TNF-α水平是明显升高的,补充OCA后,有效抑制LPS暴露引起血清中促炎因子的升高;血清中的趋化因子KC在LPS暴露后明显上调了,补充OCA后明显抑制LPS上调血清中的趋化因子的释放。研究结果显示补充OCA可以抑制LPS上调小鼠血清中促炎因子和趋化因子的释放。（4）OCA预处理可以减弱LPS上调小鼠肺泡灌洗液中的的促炎因子和趋化因子的表达LPS暴露后,小鼠肺泡灌洗液中的促炎因子TNF-α水平是明显升高的,补充OCA后,有效抑制LPS引起的肺泡灌洗液中TNF-α的升高;同时,补充OCA可以抑制LPS暴露引起的小鼠肺泡灌洗液中趋化因子KC表达的上调。同时对肺泡灌洗液进行细胞计数发现,OCA可以降低LPS上调肺泡灌洗液中的炎性细胞数;肺泡灌洗液中的中性粒细胞和巨噬细胞的水平在LPS暴露后是升高的,OCA可以抑制LPS上调肺泡灌洗液中的中性粒细胞和巨噬细胞的含量。研究结果提示补充OCA可以降低LPS引起的肺泡灌洗液中促炎因子和趋化因子的释放。（5）OCA预处理可以缓解LPS激活小鼠肺中NF-κB信号LPS暴露后激活了肺中的NF-κB信号,NF-κB p65和NF-κB p50的核转位水平在LPS暴露后是明显增强的,补充OCA可以有效抑制LPS引起的肺组织中NF-κB p65和NF-κB p50的核转位;本课题进一步分析了肺中的NF-κB p65和NF-κB p50阳性细胞核数,免疫组化的结果发现OCA降低了LPS上调NF-κB p65和NF-κB p50的阳性细胞核数。研究结果提示补充OCA可以缓解LPS激活小鼠肺中NF-κB信号通路。（6）OCA预处理可以减轻LPS激活小鼠肺中MAPKs信号通路LPS暴露可以激活小鼠肺部MAPKs信号通路,肺中的ERK1/2,JNK和p38的磷酸化水平在LPS暴露后是明显增加的,补充OCA后明显减少了ERK1/2,JNK和p38的磷酸化水平。研究结果提示补充OCA可以减轻LPS激活小鼠肺中的MAPKs信号通路。（7）OCA预处理可以抑制LPS激活小鼠肺中PI3K/Akt信号通路LPS暴露可以激活小鼠肺中的PI3K/Akt信号通路,肺中的p-Akt的水平在LPS暴露后是明显上调的,补充OCA后有效减轻了LPS诱导的Akt的磷酸化。研究结果提示补充OCA可以抑制LPS激活肺中的PI3K/Akt信号通路。（8）OCA预处理可以激活小鼠肺组织中FXR信号为了分析OCA发挥抗炎作用的机制,本课题分析了肺组织中的FXR信号。结果发现:补充OCA后肺中Fxr mRNA水平无明显改变。进一步分析肺中的FXR阳性细胞核数发现,补充OCA后促进了小鼠肺中FXR核转位水平,LPS暴露后抑制了OCA上调肺中的FXR的核转位。研究结果提示,补充OCA激活了小鼠肺组织中FXR信号。研究结论本课题研究了肺中FXR的激活对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的拮抗作用,根据以上的研究结果,我们得出了如下的结论:（1）肺组织中FXR的激活对LPS引起的小鼠急性肺损伤有保护作用;（2）肺组织中FXR的激活减轻了LPS诱导小鼠中促炎因子和趋化因子的释放;（3）肺组织中FXR的上调抑制了LPS激活小鼠肺上NF-κB信号、MAPKs信号以及PI3K/Akt信号通路。以上结论提示FXR的激动剂可以在临床上被用来作为治疗炎症引起的急性肺损伤的药物,本研究为治疗以及预防急性肺损伤的药物应用提供一定的理论依据。
二、常规机械通气激活支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、常规机械通气激活支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞（论文提纲范文）
（1）健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 慢性阻塞性肺疾病研究背景 |
| 第二节 慢性阻塞性肺疾病防治策略 |
| 一、慢性阻塞性肺疾病早期干预 |
| 二、中医药防治慢性阻塞性肺疾病作用机制研究 |
| 三、健脾益肺Ⅱ号防治慢性阻塞性肺疾病前期基础 |
| 第三节 慢性阻塞性肺疾病急性加重与呼吸道病毒感染的关系 |
| 一、呼吸道病毒感染在诱发慢阻肺急性加重过程中的免疫病理改变 |
| 二、吸烟对呼吸道病毒感染后宿主免疫应答的影响 |
| 第四节 气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病急性加重中的作用 |
| 一、慢阻肺炎症反应过程中的免疫细胞 |
| 二、炎症反应过程中的炎症介质 |
| 第五节 慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的研究概况 |
| 一、病毒及其模拟物致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 二、细菌感染致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 三、熏烟联合LPS致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 第二章 健脾益肺Ⅱ号干预治疗COPD Ⅰ-Ⅱ级患者探索性临床研究 |
| 一、研究目标 |
| 二、研究对象 |
| 三、治疗方案 |
| 四、数据管理 |
| 五、统计分析 |
| 六、研究结果 |
| 七、讨论 |
| 第三章 健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制 |
| 第一节 香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道炎症的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、研究创新点 |
| 三、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 急性肺损伤研究进展 |
| 1 急性肺损伤概述 |
| 2 急性肺损伤发病机制 |
| 2.1 炎症反应 |
| 2.2 细胞凋亡 |
| 2.3 凝血/纤溶系统失衡 |
| 2.4 氧化应激 |
| 3 急性肺损伤治疗研究 |
| 3.1 机械通气治疗 |
| 3.2 药物治疗 |
| 4 常见急性肺损伤模型 |
| 4.1 机械通气法 |
| 4.2 LPS肺部或全身给药法 |
| 4.3 滴注活菌法 |
| 第二章 紫檀芪研究进展 |
| 1 紫檀芪理化性质 |
| 2 紫檀芪药理活性 |
| 2.1 紫檀芪的抗炎作用 |
| 2.2 紫檀芪的抗氧化作用 |
| 2.3 紫檀芪的抗肿瘤作用 |
| 2.4 紫檀芪的降血脂作用 |
| 2.5 紫檀芪的抑制真菌作用 |
| 3 紫檀芪检测方法 |
| 4 紫檀芪代谢研究 |
| 5 紫檀芪合成研究 |
| 第二篇 实验部分 |
| 第一章 紫檀芪对LPS致小鼠急性肺损伤保护效果的初步研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及处理 |
| 2.2 小鼠急性肺损伤模型构建 |
| 2.3 实验样本采集 |
| 2.4 小鼠肺组织湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.5 小鼠肺组织病理学评估 |
| 2.6 小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及蛋白浓度测定 |
| 2.7 小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.8 小鼠肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.9 qRT-PCR检测小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.10 Western blotting实验检测NF-κB和 Nrf2/HO-1 信号通路蛋白的表达 |
| 2.11 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织病理学变化 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数目与蛋白浓度 |
| 3.4 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织MPO活性 |
| 3.5 紫檀芪提升LPS诱导的ALI小鼠肺组织抗氧化能力 |
| 3.6 紫檀芪抑制LPS诱导ALI小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织中NF-κB信号转导通路 |
| 3.8 紫檀芪激活LPS诱导的ALI小鼠肺组织中Nrf2/HO-1信号转导通路 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 紫檀芪对LPS致雏鸡肺损伤保护效果的观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及给药操作方法 |
| 2.2 实验样本采集 |
| 2.3 雏鸡肺组织眼观病变及湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.4 雏鸡肺组织病理学评估 |
| 2.5 雏鸡肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.6 雏鸡肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.7 qRT-PCR检测雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡体重增长率 |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺脏眼观病变 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.4 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺组织病理学变化 |
| 3.5 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织MPO活性 |
| 3.6 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡肺组织抗氧化能力 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS致 ALI雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）肺血管内皮糖萼脱落在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 呼吸机相关性肺损伤生物伤研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治急性肺损伤的研究进展 |
| 1 中医对急性肺损伤的认识 |
| 2 急性肺损伤的病因病机 |
| 3 中药复方药干预急性肺损伤的研究 |
| 4 中药单体干预急性肺损伤的研究 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性肺损伤发病机制及治疗药物的研究进展 |
| 1 病因与临床表现 |
| 2 病理特征 |
| 3 ALI的发病机制 |
| 4 ALI的治疗药物 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一部分 清金化痰汤干预急性肺损伤的研究 |
| 前言 |
| 实验一 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 质谱分析清金化痰汤及其含药血清的主要成分 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷对急性肺损伤干预作用的研究 |
| 前言 |
| 实验五 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足及展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 百草枯所致ARDS模型的建立及原花青素β2的干预作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 动物及材料 |
| 2.2 实验动物分组及处理 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 大鼠一般情况监测 |
| 3.2 肺组织大体观察 |
| 3.3 肺湿干比 |
| 3.4 各组大鼠肺通透指数的改变 |
| 3.5 各组大鼠肺组织及肺泡灌洗液中炎症细胞的变化 |
| 3.6 肺组织病理学观察及肺损伤评分 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ARDS模型的建立与评价 |
| 4.2 百草枯与ARDS |
| 4.3 原花青素β2对肺通透性的影响 |
| 4.4 原花青素β2对炎症反应的影响 |
| 4.5 原花青素β2对百草枯所致ARDS的治疗作用 |
| 5 结论 |
| 第二部分 原花青素β2改善百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验药品与试剂 |
| 2.2 溶液配制 |
| 2.3 实验仪器 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 原花青素β2对百草枯所致中性粒细胞炎症和氧化应激的影响 |
| 3.2 原花青素对百草枯中毒大鼠肺泡灌洗液中IL-1β、IL-18含量的影响 |
| 3.3 原花青素对百草枯中毒大鼠肺组织中IL-1β、IL-18 mRNA的影响 |
| 3.4 原花青素对百草枯中毒大鼠肺组织中NLRP3、ASC、caspase-1水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 氧化应激与ARDS |
| 4.2 原花青素β2通过抗氧化应激作用减轻肺损伤 |
| 4.3 NLRP3炎性小体与ARDS |
| 4.4 IL-1β与ARDS |
| 4.5 IL-18与ARDS |
| 5 结论 |
| 第三部分 NLRP3炎性小体在百草枯所致急性呼吸窘迫综合征中的作用研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料与动物分组 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 静默NLRP3基因对大鼠一般状况的影响 |
| 3.2 静默NLRP3基因对肺湿干比的影响 |
| 3.3 静默NLRP3基因对肺通透性的影响 |
| 3.4 静默NLRP3基因对肺泡灌洗液PMN的影响 |
| 3.5 静默NLRP3基因对肺组织中IL-1β与IL-18的表达情况的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本课题的创新点与局限性 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 急性呼吸窘迫综合征发病机制及治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
（6）基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写 |
| 第一部分 文献回顾 |
| 1.颗粒物污染与健康效应 |
| 1.1.细颗粒物PM2.5的理化特征 |
| 1.2.细颗粒物PM2.5对健康效应的影响 |
| 1.3.细颗粒物PM2.5对呼吸系统的影响机制 |
| 2.细颗粒物诱导急性肺损伤的机制探讨 |
| 2.1.急性肺损伤与细颗粒物 |
| 2.2.炎症损伤是细颗粒物致急性肺损伤的重要机制 |
| 2.3.肺泡上皮细胞介导的水液转运功能下降是细颗粒物致肺损伤的关键结局 |
| 2.4.肺微血管内皮细胞介导的炎症渗出是细颗粒物致肺损伤的中心环节 |
| 2.5.粘附分子在细颗粒物致急性肺损伤中的桥梁作用 |
| 3.Rho A/ROCK信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 3.1.小G蛋白Ras超家族中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 3.2.Rho A/ROCK信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的作用机制 |
| 4.NF-κB信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 4.1.NF-κB信号通路中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 4.2.NF-κB信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的直接作用 |
| 5.细颗粒物PM2.5介导急性肺损伤的中医认识 |
| 5.1.中医学对PM2.5为主的大气污染的认识 |
| 5.2.PM2.5所致肺系疾病及急性肺损伤的中医认识 |
| 5.3.中药黄芪的益气功效是预防环境毒邪致病的关键 |
| 6.参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1.本课题的研究思路,内容 |
| 1.1.研究思路 |
| 1.2.研究内容 |
| 1.3.技术路线图 |
| 2.实验材料 |
| 2.1.实验动物 |
| 2.2.动物饲养 |
| 2.3.主要试验仪器和设备 |
| 2.4.实验材料和试剂 |
| 3.试验方法 |
| 3.1.动物分组 |
| 3.2.给药方法 |
| 3.3.造模方法 |
| 3.4.动物处死 |
| 3.5.实验流程图 |
| 3.6.标本获取 |
| 3.7.指标检测 |
| 3.8.统计学方法及绘图 |
| 4.实验结果 |
| 4.1.一般情况 |
| 4.2.肺组织形态学观察 |
| 4.3.肺水肿指标的变化趋势 |
| 4.4.BALF中总蛋白含量的测定 |
| 4.5.肺组织HE染色 |
| 4.6.肺组织Mc Gugan病理评分 |
| 4.7.肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数 |
| 4.8.肺组织中炎症因子水平的测定 |
| 4.9.肺组织中MPO水平的测定 |
| 4.10.肺组织中黏附因子的测定 |
| 4.11.肺组织超微结构的透射电镜分析 |
| 4.12.肺组织中相关蛋白的Western Blot检测 |
| 4.13.肺组织中相关蛋白的免疫组化分析 |
| 4.14.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的相关性分析 |
| 4.15.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的回归性分析 |
| 4.16.小结 |
| 5.讨论 |
| 5.1.PM2.5诱导急性肺损伤大鼠模型的构建 |
| 5.2.基于多步骤黏附理论探讨炎症损伤在PM2.5致ALI中的作用机制 |
| 5.3.黄芪甲苷对PM2.5诱导急性肺损伤大鼠肺组织结构的保护作用 |
| 5.4.基于Rho A/ROCK/NF-κB通路探讨黄芪甲苷保护肺组织结构、抑制炎症渗出的机制 |
| 结论 |
| 本实验创新性及意义 |
| 存在问题及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中药黄芪补气功效与药理作用的研究进展 |
| 1.中药黄芪 |
| 1.1.历史沿革 |
| 1.2.化学成分 |
| 2.黄芪补气之功 |
| 2.1.益气升阳 |
| 2.2.益气止咳喘 |
| 2.3.益卫固表 |
| 2.4.补气利水 |
| 3.药理学作用 |
| 3.1.炎症损伤的药理学机制 |
| 3.2.免疫调节的药理学机制 |
| 4.黄芪及其化合物在急性肺损伤中的运用 |
| 5.总结 |
| 6.参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（7）固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 综述 呼吸道黏膜免疫系统在慢阻肺中的作用及中医药的作用机制研究进展 |
| 一、慢阻肺的疾病概述 |
| 二、慢阻肺中的病理变化导致了疾病的后果 |
| 三、呼吸道黏膜免疫系统在慢阻肺中起到重要作用 |
| 1.黏膜免疫系统概述 |
| 2.黏膜免疫系统在全身以网络方式运作 |
| 3.黏膜定居的微生物群影响黏膜免疫系统的功能 |
| 4.上皮细胞在黏膜免疫作用中表现出多种生物学特性 |
| 5.黏膜免疫中的免疫球蛋白S-IgA通过多种作用保护黏膜 |
| 6.黏膜免疫系统的防御和保护作用对于呼吸道至关重要 |
| 7.黏膜免疫中的关键细胞——γδT细胞 |
| 四、慢阻肺中的炎症损伤 |
| 1.香烟烟雾对肺组织损伤的作用机制 |
| 2.慢阻肺患者存在系统性炎症 |
| 3.慢阻肺的免疫反应 |
| 五、角质细胞生长因子的作用及其在慢阻肺中的作用机制 |
| 六、中医药对黏膜免疫的作用机制研究进展 |
| 1.增强黏膜屏障功能 |
| 2.调节黏膜免疫细胞及其成分 |
| 3.对呼吸道黏膜免疫作用的研究 |
| 七、小结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验材料 |
| 1.实验小鼠 |
| 2.实验试剂 |
| 3.仪器 |
| 二、方法 |
| 1.技术路线图 |
| 2.实验动物分组 |
| 3.固本止咳中药方药物的制备 |
| 4.慢阻肺小鼠模型建立及给药方法 |
| 5.小鼠肺功能检测 |
| 6.小鼠支气管肺泡灌洗液、血清、肠黏液标本收集 |
| 7.小鼠肺组织形态学标本采集及处理 |
| 8.小鼠肺组织γδT淋巴细胞分离及流式细胞仪检测 |
| 9.小鼠肺组织切片T淋巴细胞受体免疫组化染色 |
| 10.小鼠血清、BALF、肠黏液中炎症因子含量检测 |
| 11.小鼠肺组织中KGF及KGFR的检测 |
| 12.统计方法 |
| 结果 |
| 一、固本止咳中药方提高慢阻肺模型小鼠生命质量及体重 |
| 二、固本止咳中药方改善慢阻肺模型小鼠肺组织形态学病理变化 |
| 三、固本止咳中药方减轻小鼠呼吸道阻塞程度、提高肺组织顺应性 |
| 四、固本止咳中药方降低慢阻肺模型小鼠肺组织αβT/γδT细胞比例 |
| 五、固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF及KGFR含量 |
| 1.免疫组织化学染色实验结果表明固本止咳中药方增加小鼠肺组织KGF含量 |
| 2.Western blot检测结果表明固本止咳中药方可增加小鼠肺组织KGF、FGFR2蛋白表达 |
| 3.ELISA方法检测结果表明固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF蛋白表达 |
| 4.Real Time PCR检测结果表明固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF的mRNA含量 |
| 六、固本止咳中药方增加小鼠血清、肺泡灌洗液中的IL-6含量和肺泡灌洗液、小肠黏液中的IL-13含量 |
| 讨论 |
| 一、中医对慢阻肺的认识 |
| 二、固本止咳中药方的组方及成分药理分析 |
| 三、中医理论中“肺卫”之屏障防御作用与黏膜免疫功能具有相关性 |
| 1.现代医学免疫功能与中医理论之“正气”功能相同 |
| 2.正气中的肺卫之气具有护卫人体的屏障作用 |
| 3.卫气与黏膜免疫在位置结构、性质和作用机制上均有相似性 |
| 四、中医药增强卫气的机制为增强黏膜免疫机械屏障、调节黏膜免疫细胞及因子 |
| 五、黏膜免疫是呼吸系统免疫的首道防线,其中的γδ T细胞与慢阻肺有关 |
| 六、固本止咳中药方可通过下调慢性炎症介质细胞因子减轻慢阻肺炎症反应 |
| 七、固本止咳中药方可通过上调γδT细胞比例减轻慢阻肺的炎症反应、促进组织修复 |
| 八、固本止咳中药方可促进KGF分泌从而有助于慢阻肺中的组织修复 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 脓毒症急性肺损伤的现代医学研究进展 |
| 1.1.1 定义及流行病学 |
| 1.1.2 发病机制 |
| 1.1.3 脓毒症急性肺损伤的西医治疗进展 |
| 1.2 脓毒症急性肺损伤的中医研究进展 |
| 1.2.1 祖国医学对脓毒症急性肺损伤的认识 |
| 1.2.2 祖国医学对脓毒症急性肺损伤的治疗进展 |
| 1.3 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的研究进展 |
| 1.3.1 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的中医理论基础 |
| 1.3.2 针刺足三里干预脓毒症急性肺损伤的西医理论依据及研究进展 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 针刺足三里对实验性脓毒症急性肺损伤的系统评价 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 检索策略 |
| 2.2.2 纳入与排除标准 |
| 2.2.3 数据提取与偏倚风险评价 |
| 2.3 研究结果 |
| 2.3.1 纳入文献筛选流程及结果 |
| 2.3.2 纳入研究的基本特征 |
| 2.3.3 研究质量和发表偏倚 |
| 2.3.4 疗效评价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 影响针刺足三里改善脓毒症急性肺损伤作用的因素 |
| 2.4.2 针刺足三里改善脓毒症急性肺损伤的结局指标的选择及机制探讨 |
| 2.4.3 局限性 |
| 2.4.4 进一步实验研究的方案优化 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症急性肺损伤的作用及机制研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 实验动物 |
| 3.3 实验流程及方案 |
| 3.3.1 实验流程图 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 造模方法 |
| 3.3.4 干预措施 |
| 3.4 取材、指标观察与检测 |
| 3.4.1 血清样本收集 |
| 3.4.2 支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)收集 |
| 3.4.3 BALF白细胞计数及中性粒细胞计数计算 |
| 3.4.4 肺组织取材 |
| 3.4.5 肺组织病理切片、苏木素-伊红(HE)染色 |
| 3.4.6 肺组织毛细血管蛋白渗漏程度评估 |
| 3.4.7 肺湿/干重比值 |
| 3.4.8 酶联免疫吸附法(ELISA)检测 |
| 3.4.9 肺组织病理评分 |
| 3.4.10 肺组织乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性检测 |
| 3.4.11 肺组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性检测 |
| 3.5 统计分析 |
| 3.6 结果 |
| 3.6.1 一般现象观察及生存分析 |
| 3.6.2 肺组织病理结果 |
| 3.6.3 大鼠肺组织湿/干重比(wet/dry ratio,W/D) |
| 3.6.4 BALF白细胞(WBC)、中性粒细胞(NEU)计数 |
| 3.6.5 肺毛细血管蛋白渗漏程度 |
| 3.6.6 ELISA检测结果 |
| 3.6.7 ChAT、AChE活性检测 |
| 3.6.8 Western Blot检测结果 |
| 3.7 小结 |
| 3.8 讨论 |
| 3.8.1 ALI动物模型的评判标准 |
| 3.8.2 本实验采用的脓毒症ALI动物造模方式的理论依据及模型构造情况 |
| 3.8.3 干预措施以外的影响因素 |
| 3.8.4 肺脏局部CAP参与电针足三里对脓毒症ALI的调节 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间科研成果及奖励 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）N-乙酰半胱氨酸对社区获得肺炎氧化应激、炎症和影像吸收的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 1. 社区获得肺炎氧化应激和炎症反应 |
| 2. 抗氧化在疾病治疗中的重要性 |
| 3. N-乙酰半胱氨酸的作用与目前文献研究 |
| 第一章 N-乙酰半胱氨酸对社区获得肺炎血浆MDA、TAOC、SOD、TNF-α的影响 |
| 1. 研究对象 |
| 2.试验方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二章 N-乙酰半胱氨酸对肺炎患者胸部CT影像学吸收的影响 |
| 1. 资料收集 |
| 2. 研究方法 |
| 3. 统计分析 |
| 4. 结果 |
| 5. 讨论 |
| 第三章 局限性、偏倚和进一步探讨分析 |
| 1.局限性分析 |
| 2.偏倚分析 |
| 3. N-乙酰半胱氨酸剂量探讨 |
| 4. N-乙酰半胱氨酸给药方式的探讨 |
| 5.氧化应激标记物及标本选择思考 |
| 6.进一步研究纳入病毒性肺炎患者 |
| 7.进一步针对NAC的分子机制及相关通路设计动物实验 |
| 第四章 创新性、临床意义和进一步研究 |
| 结论 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| English Article |
（10）奥贝胆酸通过抗炎作用减轻细菌脂多糖所致小鼠急性肺损伤（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和来源 |
| 2.2 主要药品和试剂配制 |
| 2.3 主要仪器 |
| 2.4 实验方案 |
| 2.5 动物来源及处理 |
| 2.6 标本获取及处理 |
| 2.7 主要实验方法和技术 |
| 2.7.1 逆转录PCR(Reverse Transcriptase PCR,RT-PCR) |
| 2.7.2 酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA) |
| 2.7.3 小鼠肺泡灌洗液细胞计数 |
| 2.7.4 小鼠肺组织总蛋白的提取 |
| 2.7.5 小鼠肺组织核蛋白的提取 |
| 2.7.6 蛋白免疫印迹法(Western Blotting) |
| 2.7.7 免疫组织化学法(Immunohistochemistry) |
| 2.8 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 OCA预处理减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤 |
| 3.2 OCA预处理减弱LPS暴露引起的肺组织中促炎因子和趋化因子的升高 |
| 3.3 OCA预处理减弱LPS暴露上调小鼠血清中TNF-α和 KC水平 |
| 3.4 OCA预处理减弱LPS暴露上调支气管肺泡灌洗液中炎症因子和趋化因子水平 |
| 3.5 OCA预处理抑制LPS暴露激活小鼠肺组织中NF-κB信号 |
| 3.6 OCA预处理降低LPS激活小鼠肺组织中MAPKs信号通路.. |
| 3.7 OCA预处理下调LPS激活小鼠肺组织中PI3K/Akt信号通路 |
| 3.8 OCA预处理激活小鼠肺组织中FXR信号 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
四、常规机械通气激活支气管肺泡灌洗液中的中性粒细胞（论文参考文献）
- [1]健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究[D]. 蔡甜甜. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用[D]. 张勇. 吉林大学, 2021(01)
- [3]肺血管内皮糖萼脱落在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用及机制研究[D]. 欧顶琴. 昆明医科大学, 2021
- [4]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]原花青素β2对百草枯所致急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制研究[D]. 江银玲. 安徽医科大学, 2020(04)
- [6]基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究[D]. 王智超. 成都中医药大学, 2020
- [7]固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响[D]. 王玥琦. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]从胆碱能抗炎通路探讨电针足三里对脓毒症肺损伤的作用及机制[D]. 赖芳. 广州中医药大学, 2020(06)
- [9]N-乙酰半胱氨酸对社区获得肺炎氧化应激、炎症和影像吸收的作用[D]. 张倩文. 山东大学, 2020(08)
- [10]奥贝胆酸通过抗炎作用减轻细菌脂多糖所致小鼠急性肺损伤[D]. 费君. 安徽医科大学, 2019(07)