一、非特异性IgG含量对EIA法检测抗-HCV抗体的干扰现象（论文文献综述）
蒲嵩[1]（2017）在《抗凝与非抗凝血标本对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响》文中研究表明本研究通过研究枸橼酸钠抗凝血与非抗凝血的乙肝表面抗原的酶联免疫法（ELISA）检测结果,确定抗凝血与非抗凝血标本两者间的检测结果是否存在差异,探讨枸橼酸钠抗凝剂对血液标本的乙肝表面抗原的酶联免疫法（ELISA）检测结果的影响。通过随机选取浆员及申请成为献血浆者的人员共2100名,分别留取枸橼酸钠抗凝血和非抗凝血标本,采用酶联免疫法（ELISA）对4000人份有效血样进行乙肝表面抗原的检测,检测结果进行配对T检验,分析检测结果是否存在差异,并对选取的部分样本进行双孔复试。结果显示,抗凝与非抗凝血标本检测结果差异有统计学意义（p<0.05）,复试后抗凝与非抗凝血标本检测结果反应性一致。本研究结果表明抗凝与非抗凝血标本对采用酶联免疫法（ELISA）检测乙肝表面抗原的检测结果虽然存在着一定的干扰（P<0.05）,可能由于多种原因导致假阳性的出现,但可通过对其进行复试排除抗凝剂干扰因素。在单采血浆实际工作中,对于抗凝血初次检测实验结果不确定的标本,应经过重复试验方能下最后的定论,特别是对灰区的标本,建议使用不同厂家的试剂或者不同原理的试剂进行复检,结合复检结果确定最终结论,进而减少漏检情况的发生,增加检测结果的准确性。
杨冬[2]（2014）在《基于Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针的构筑及其在即时检测的应用研究》文中提出近年来，以胶体金、荧光量子点、上转换化学发光材料为载体的即时检测（Point-of-care Testing，POCT）成为医学诊断领域的研究热点。核壳结构Fe3O4/Au纳米粒子或花状Fe3O4/Au/Fe3O4纳米粒子（以下统称为金磁微粒）作为潜在的生物标记材料备受关注。这种新型无机/无机复合材料具有高比表面积、便捷的生物或药物分子修饰以及良好的超顺磁性，已经被用于磁酶免化学发光检测、磁导靶向给药等领域。但将水相合成的金磁微粒（GoldMag）用于POCT检测，包括侧向流免疫层析和光学比色检测，尚需克服材料本身的一些缺陷，如在缓冲液中的聚集、纳米Fe3O4种子对金磁微粒的局域表面等离子共振（LSPR）及分散度的影响。另外，复杂的表面对探针组成-检测性能的关系、纳米粒子-生物界面的相互作用产生干扰，限制了金磁微粒在目视化或快速层析检测中的应用。为此，研究兼具光学和磁学特性、具有良好分散和稳定性能的免疫探针，并将其应用于临床即时检测，包括基于光学的目视化检测和基于磁学的定量检测，是纳米金磁微粒深入研究的一项挑战，也对临床快速检测新方法的建立具有积极意义。本研究结合纳米粒子表面改性技术及表面功能化技术，选择多种抗原和抗体标记，在经修饰的金磁微粒表面进行固定化，构筑了基于Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针，并将其用于纳米粒子比色光学检测方法的建立和免疫层析定性及定量系统的构建。本论文主要包括以下三方面内容：（1）Fe3O4/Au纳米粒子的制备及稳定机理的建立。考察了不同表面活性剂对金磁微粒预分散效果的影响，研究了十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）与Fe3O4/Au纳米粒子的相互作用及稳定机理。以巯基化十一烷酸（MUA）部分配体取代CTAB得到MUA-Fe3O4/Au纳米粒子。采用聚丙烯酸钠（PAA）及聚甲基丙烯酸钠（PMAA）在CTAB-Fe3O4/Au纳米粒子表面组装，制备PAA-Fe3O4/Au纳米粒子及PMAA-Fe3O4/Au纳米粒子。CTAB与MUA的协同作用使MUA-Fe3O4/Au纳米粒子在较宽pH范围内具有良好的分散稳定性。PAA-Fe3O4/Au纳米粒子及PMAA-Fe3O4/Au纳米粒子在高离子浓度的溶液中表现出更好的耐离子屏蔽作用，聚合物长链不但为纳米粒子提供了离子稳定性，还提供了空间位阻效应。配体取代和聚合物改性得到的羧基化表面纳米粒子，为后续抗体偶联提供了活性基团。（2）基于Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针的构建及在光学比色检测中的应用研究。研究对比了两种表面修饰方法得到纳米粒子的稳定性：在生理缓冲液中都具有良好的分散稳定性，而在高离子浓度溶液中（I=100mmol/L），PAA-Fe3O4/Au纳米粒子比MUA-Fe3O4/Au纳米粒子的稳定性更强。以1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（EDC）为连接子，将羊抗兔IgG偶联于改性的纳米粒子表面，并用于液相体系中对应抗体兔IgG的光学比色检测。结果表明：基于PAA-Fe3O4/Au和MUA-Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针都可以实现比色检测，而动力学研究表明金磁免疫探针与靶抗体的反应符合二级反应特征。基于MUA-Fe3O4/Au纳米粒子构建得到的免疫探针比基于PAA-Fe3O4/Au纳米粒子构建的探针对待检测物的反应更灵敏，其即时检测灵敏度为50nmol/L，且反应速率常数是后者的二倍。（3）基于Fe3O4/Au纳米粒子的免疫层析系统用于定性及定量即时检测的研究。通过不同表面特性纳米粒子的筛选，PMAA-Fe3O4/Au纳米粒子适用于构建氨基末端脑尿肽（NT-proBNP）检测用免疫层析系统，而PAA-Fe3O4/Au纳米粒子则适用于梅毒螺旋体抗体（anti-Tp）检测用免疫层析系统。分别将NT-proBNP抗体及重组梅毒螺旋体抗原（r-Tp）偶联于Fe3O4/Au纳米粒子表面，通过双抗夹心原理分别实现目标待检物的高度特异性即时检测。以检测灵敏度为目标函数，调整体系参数。结果表明：基于PMAA-Fe3O4/Au纳米粒子的免疫层析试纸条，检测限达到100pg/mL，而针对anti-Tp抗体的检测Cut-off值达到1NCU/mL。将基于PMAA-Fe3O4/Au纳米粒子的免疫层析试纸条应用于磁免疫色谱分析系统（MAR）采集磁信号，磁信号强度与待检测浓度呈线性关系（R2=0.998），可实现定量检测的目标。将基于PAA-Fe3O4/Au纳米粒子的免疫层析试纸条应用于1020例临床实验，结果表明，相较于商业化试纸条，其检测的血清阳性符合率及阴性符合率分别为97.7%和97.1%。第三方试剂实验验证结果表明，基于PAA-Fe3O4/Au纳米粒子构建的免疫层析系统具有更高的准确性和检测灵敏度，可用于梅毒患者的初筛。
刘玉磊[3]（2012）在《基于纳米材料的微流控技术在HIV和HCV检测中的应用研究》文中指出研究背景：艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（HIV, Human Immunodeficiency Virus）感染导致的全身免疫缺陷性疾病,目前尚无有效的疫苗可以预防HIV的感染。2010年全球HIV感染存活人数3400万,同时,流行病学调查显示50%的HIV感染者合并有丙型肝炎病毒（HCV）感染。由于HIV和HCV检测方法的准确度和灵敏度不断提高,HIV和HCV的病原检测与诊断取得了重大进展。如能够同时检测HIV抗体和P24抗原的第四代酶联免疫试验（ELISA）试剂盒,将进一步降低了血液筛查检测窗口期。实时荧光定量PCR检测技术作为辅助检测手段,使得HIV和HCV的核酸检测同时达到定性及定量效果。免疫印迹（WB）试验仍然是敏感度最高、特异性最好的HIV感染确证实验方法。但是,由于ELISA检测的非特异性及WB检测高耗时、高成本性,我们仍需要研发一种新的高敏感度和特异性、低成本、高通量和快速的HIV和HCV检测方法,一种适用于发展中国家和不发达国家的HIV和HCV检测技术。纳米科技为研发一种新的高通量HIV和HCV同时快速检测技术提供了重要的手段。目前,各种基于纳米科技的基因和蛋白芯片的高度集成化、自动化的新型检测技术正在不断涌现。其中基于纳米材料和纳米科技的微流控芯片技术正在被逐渐应用到分析检测领域,并发展到HIV和HCV检测领域。这种微流控芯片检测技术具有高敏感度、高特异性、高通量、经济和快速的特点,既适用于大规模的血液筛查也适用于确证病毒的感染,因此具有广阔的应用和发展前景研究目的：本研究利用纳米材料聚二甲基硅氧烷（PDMS, polydimethylsiloxane）制作微流控芯片。利用微流控芯片的微通道中流体特殊的物理特性及PDMS材料的表面吸附性,在微流控芯片微管道系统的微反应区域完成抗原抗体的反应,对血浆中的HIV、HCV抗体进行定性、半定量分析,以评价微流控芯片检测系统对血浆样本中HIV和HCV抗体定性检测的效果,探索检芯片检测的优势和检测条件。并通过检测大量血浆样本及与WB检测方法的比对,验证该方法的稳定性及准确度。研究方法：利用软刻蚀技术将光刻胶按照AutoCAD设计的尺寸与形状印制在硅片上,将液态PDMS与固化剂的混合物倒入后固化形成芯片。利用相同的PDMS材料在平板上固化形成厚度均一的基片。组装带通道的芯片与基片后,利用芯片微通道引入HIV和HCV的多种抗原并将其包被在基片上,然后经垂直交叉的芯片通道引入待测血浆样本及各种对照样品,基片上包被的多种抗原捕获样本中待测的目标抗体,将荧光素标记的二抗滴加在通道交叉区域,反应一定时间后,荧光显微镜下观测结果。反应微区域荧光强度（光密度）与样本中的目标抗体含量相关。Image Pro Plus6.0图像处理软件分析各反应点荧光强度,通过与阳性对照、阴性对照对比,按cutoff值对样本中目标抗体进行定性或定量。研究结果：1.利用HIV和HCV重组抗原及单克隆抗体,进行微流控芯片检测系统的分析敏感度试验。结果显示,各反应区域荧光强度与检测样本中目标单克隆抗体浓度成正相关,包被抗原后无封闭条件下微流控检测系统检测单克隆抗体的敏感度达10ng/mL。2.检测梯度浓度的单克隆抗体,建立抗体浓度-荧光亮度（光密度）剂量反应曲线。结果显示,抗体浓度与荧光强度之间具有较好的相关性（P<0.01）,相关系数达0.99。3.利用微流控芯片检测系统重复检测固定的HIV阳性血浆样本,测试该检测系统的精密度和可重复性试验。不同时间重复检测4次的数据进行数据组内及组间精密度和组间一致性分析,平行检测15个点,重复4次的检测数据组内变异系数分别为27%、27%、27%和30.8%,组间变异系数为6.2%,4次重复试验荧光强度组间无显着性差异（p>0.05）。4.利用微流控芯片检测系统检测120份血浆样本中HIV抗体,检测结果与原始记录符合率达100%,即检测准确度为100%；经国产及进口ELISA试剂盒检测和核酸检测过的160份血浆样本进行HCV抗体检测,检测准确度为90.6%,存在漏检和错检样本；另外,利用本检测系统对29份HIV、HCV共感染血浆样本进行检测,检测结果符合率达100%。5.为验证本检测系统在确证HIV感染上的能力,对共计10份HIV强阳性、弱阳性及阴性样本同时进行WB检测和微流控检芯片检测,微流控检测结果与WB检测结果在所有样本各检测指标上的符合率为80%。研究结论1.基于纳米技术的微流控芯片检测系统在HIV、HCV抗体检测中具有可行性,检测的敏感度（10ng/ml）和可重复性较高（组间变异系数6%）,而精密度有待改进（组内变异系数27%）。2.微流控芯片检测系统检测血浆样本中HIV时的准确度比检测HCV的准确度高（100%和90%）,一方面来源于样本质量的影响,另一方面来源于包被抗原质量的差异。3.微流控芯片检测方法与WB检测相比,检测结果具有较高的一致性（80%）,能够检测出WB检测不确定的样本。微流控芯片检测系统用作HIV感染的确证实验具有一定的可行性。4.微流控检测既有应用在血液筛查时需要的高敏感度、高通量、速度快的优点,又具有应用于HIV确诊时需要的低成本、高特异性的特点,具有广阔的应用前景,特别是在发展中国家及不发达国家。但是,该系统仍然存在样本引入困难,定量检测结果可重复性较低等缺陷,因此,要应用到血液检测的实际工作中,还需要不断改进。
李桂民[4]（2011）在《HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用》文中研究指明荧光定量PCR技术因具有快速、准确、灵敏度和重复性高,可减少污染等特点而广泛应用于分子生物学和医学研究领域,可以对很多种病原微生物进行定量检测。本研究的目的是建立起特异性强、灵敏度高、重复性好的HBV、HCV和HIV-1实时定量血清（或血浆）病毒检测方法。另外本实验还建立了一种能同时检测、鉴定和定量三种病毒的多重实时定量RT PCR检测方法。定量PCR有多种类型。本实验对Taqman PCR进行了研究并与LUX方法进行了比较,结果表明LUX方法不支持一步法RT-PCR并且重复性差,因而不适合病毒的检测。而Taqman PCR有很好的特异性、灵敏度和重复性,因而更适于对HBV、HCV和HIV-1的核酸进行定量。血清（或血浆）DNA（或RNA）的提取是实时PCR检测的重要一环,因为它直接影响病毒载量测定的准确性。本实验我们建立了一种基于磁珠的快速、高效血清病毒核酸提取方法。核酸在高浓度离液盐的情况下与磁珠结合,在微碱性条件下被洗脱。该方法DNA的回收率为80%以上,而RNA的回收率在70%以上。将这种方法的灵敏度与Qiagen公司的病毒DNA和RNA提取试剂盒进行比较,结果表明它们有很好的相关性。这些特点决定了这种提取方法适用于传染病的诊断和病毒载量的测定。本实验使用这种基于磁珠的快速、高效的病毒核酸提取方法,建立了特异性强、灵敏度高、重复性好的HBV、HCV和HIV-1实时PCR检测体系,可用于血清病毒载量的测定。通过分别检测系列10倍稀释的HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA（10-106拷贝/反应）来评价三种检测体系,结果表明,每一种检测体系的Ct值与DNA或RNA的Log10值之间都能形成很好的线性关系。三种检测体系具有很高的灵敏度,最低可达50拷贝/ml。HBV、HCV和HIV-1的检测体系为监测治疗效果、研究病毒载量与疾病的不同阶段的关系提供了理想的工具。本实验还建立了能同时检测和定量HBV、HCV和HIV-1三种病毒的多重实时定量RT-PCR检测方法。在这种三联的检测中,荧光染料我们分别选择了FAM, HEX和Cy5,并且挑选出HBV, HCV和HIV-1最佳的引物探针组合。结果显示一种病毒核酸的扩增不会对其它两种产生影响。通过在一管中同时检测系列10倍稀释的HBVDNA、HCV RNA和HIV-1 RNA（10-106拷贝/反应）来评价三种检测体系,结果表明,多重检测体系的Ct值与DNA或RNA的Log10值之间都能形成很好的线性关系。该检测体系具有很高的灵敏度,最低可达50拷贝/ml。与单重的检测相比也显示出很好的相关性。这表明这种检测体系有大规模用于献血筛查的潜力。HBV实时PCR检测体系被用来研究血清病毒DNA和血清标志物之间的关系。取HBsAg和HBV DNA均为阳性的样本检测HBeAg.抗-HBc,抗-HBs和抗-HBe。在121份HBsAg和HBV DNA均为阳性的样本中总结出了10种血清HBV M的模式。含高拷贝HBV DNA的样本多数都是HBeAg阳性的模式,但有些HBeAg阴性的样本也含有高水平的HBV DNA。本实验还通过AFP的检测,确定了18例原发性肝癌（AFP>400 ng/ml）。所有这些样本均为HBeAg阴性,其中12份样品的DNA水平还比较低。综上所述,HBV M的检测与HBV DNA的检测结合起来具有十分重要的意义,这样才能够更准确地反应HBV感染和复制的状况。
葛玉婷[5]（2011）在《淋巴增强因子-1表达对人结直肠癌细胞生物学行为影响的研究》文中提出背景与目的结直肠癌是危害人类健康的恶性肿瘤之一。近年来呈现逐年增长的趋势。目前结直肠癌的治疗仍无有效的治疗方法,传统的手术治疗具有疗效慢,创伤大等弊端,以致近年来结直肠癌患者的生存率没有显着提高。分子生物学的发展为肿瘤的治疗带来了希望。以肿瘤基因为靶向的基因治疗有望为肿瘤等恶性疾病的治疗翻开崭新的一页。目前兴起的RNA干扰技术,为肿瘤相关基因的功能研究、靶向基因治疗的研究提供了可以利用的方法。因此选择好基因的靶点将是基因治疗的关键所在。肿瘤的发生涉及多种基因,是一个庞大复杂的调控网络。LEF-1基因位于人染色体4q23-4q25, mRNA开放阅读框（ORF）大小为1200 bp,其基因组序列至少跨距140 kb,含有12个外显子及11个内含子,其中有一个大的第3个内含子（75 kb）可能含有可选择性的外显子。LEF-1是一个多启动子基因,第一个启动子转录全长LEF-1 mRNA,编码具有β-catenin的结合区的产物,第二个启动子转录截短形式的LEF-1,缺乏β-catenin的结合区,具有Wnt信号的负向调控作用。它与肿瘤的发生发展,侵袭转移密切相关。LEF-1作为LEF/TCF家族的成员之一,通过募集转录激活因子β-catenin到靶基因介导Wnt信号通路。Wnt致癌的关键是β-catenin不能被降解,胞内过多β-catenin入核并与LEF/TCF结合,激活下游靶基因c-myc、cyclin-D1、astrin、survin、VEGF、ASEF的转录,导致肿瘤的发生。因此,阻断异常的Wnt信号通路,可以抑制肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡。LEF/TCFs-β-catenin作为Wnt信号通路的最终效应物,将是抗癌治疗的重要靶点。针对LEF/TCF上β-catenin的结合位点开发出小分子药物封闭特异的信号分子,是分子水平治疗肿瘤有效策略。随着技术的革新,人们陆续发现了许多新的基因,因此对基因功能的研究方法越来越多,RNAi成为研究特定基因的特效工具,其在分子学领域具有巨大的应用前景。RNAi具有操作敏捷、陈本低、高效、周期短、高特异性等优点,目前可以应用于几乎所有的基因序列。因此,RNA干扰技术在肿瘤的诊断及治疗方面具有潜在的广阔前景。本论文在结合国内外RNAi研究基础上,针对LEF-1基因三种变异体,设计靶向该基因的三条干扰序列,以人结直肠癌Caco-2细胞株为实验材料,运用RT-PCR、Western blot、Hoechst33258染色、MTT法以及体外损伤修复法等方法,研究LEF-1基因被干扰后mRNA水平、蛋白表达水平的变化、细胞凋亡形态学变化、增殖及迁移能力的变化等方面的影响。方法1.在GenBank中搜索人LEF-1基因各变异体的mRNA序列,按照siRNA设计原则,设计优化出三条靶向LEF-1的干扰序列和一条阴性错义对照序列。合成这些序列,将这些序列克隆至载体Pu6.1-GFP。2.摸索出新的转染试剂S-TranG,极大提高了转染效率,分组（NC, shRNASCR, shLEF1-1, shLEF1-2, shLEF1-3）并将质粒导入人结直肠癌（Caco-2）细胞株；3.以western blot分别检测转染24h、48h、72h、96h后各组LEF-1蛋白表达水平；4.以MTT、Hochast33258染色及体外损伤修复法观察分析抑制LEF-1表达后对人结直肠癌（Caco-2）细胞增殖、凋亡形态变化及体外运动能力的影响。结果1.经酶切鉴定和DNA测序证实针对LEF-1的siRNA的重组质粒载体构建成功。2.摸索出新的转染试剂S-TranG,极大提高了转染效率,（转染前细胞汇合率为60%-70%,4μg质粒用量,静置10-15分钟）把重组子高效地导入人结直肠癌细胞。3. western blotting结果显示：转染后干扰组LEF-1蛋白水平下降,转染后72h蛋白表达抑制率最高,且siLEF1-3的抑制作用相比于其它干扰组抑制效率更强。4.MTT法、Hochast33258染色法及体外损伤修复实验结果表明,三个干扰组对Caco-2细胞均有抑制效应,72h,96h细胞增殖和迁移被显着抑制（p＜0.01）, Hochast33258染色结果显示,转染后96 h,干扰组观察到有凋亡特征的细胞,而阴性对照组的增殖力、凋亡及迁移能力在转染后与正常对照组均无明显差异结论通过RNA干扰技术,靶向沉默LEF-1基因在人结直肠癌Caco-2细胞中的表达,可抑制Caco-2细胞体外增殖和迁移能力,促进Caco-2凋亡；阴性对照组的增殖、凋亡及迁移能力无显着变化。通过Western blot检测,说明干扰组的蛋白表达水平明显降低。因此,LEF-1有望成为治疗结直肠癌新的靶点,并为结直肠癌的治疗提供新的依据和策略,对LEF-1基因表达的干预将有巨大的应用潜力。
李婉玉[6]（2011）在《天然免疫和获得性免疫等因素在慢性HBV感染中的作用研究》文中指出乙型肝炎病毒的感染是全球性的公共卫生问题。全球大约有20亿人曾经感染过乙型肝炎病毒（HBV）。HBV通常可以逃避早期和晚期免疫应答导致慢性肝脏疾病——慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化、肝衰竭、肝癌。目前国内外研究证明HBV感染的结局与病毒、肝脏微环境以及宿主抗病毒的免疫应答有关。其中免疫机制在这个过程中最重要,涉及到天然免疫、获得性免疫（细胞免疫及体液免疫）等诸多方面。研究证明,在HBV的清除过程中,细胞免疫起着重要作用,但其所引发的免疫应答也成为肝损伤的发病机制。免疫过激反应虽早期可以清除病毒,但同时也造成了肝细胞的大量坏死,出现急性重症肝炎,甚至导致死亡。近年越来越多的证据表明天然免疫系统在HBV感染的结局以及疾病发病机制过程中发挥着重要作用。其中作为天然免疫主要组成的NK细胞在HBV感染初始阶段以及在慢性感染过程中是否导致肝脏损伤或是清除病毒,目前尚不明确。大量研究表明作为免疫调节介质的细胞因子在HBV感染过程中可以抑制病毒复制亦可导致肝脏损伤。基于免疫系统的复杂性以及HBV疾病谱多样性,目前关于HBV感染的免疫学研究尚不明确。因此本研究采用流式细胞技术和焦磷酸测序等技术：（1）检测慢性HBV感染者NK细胞数量、活化性和抑制性受体以及细胞因子分泌和杀伤功能,并与临床指标进行相关性分析,对改变明显的受体进行体外阻断功能研究；（2）在慢性HBV感染者、HBV感染后自发清除者、健康对照者中对IL-28B上游的rs12979860、rs12980275和下游8KB的rs8099917进行测序；应用ELISA法测不同研究组间血清IL-28B水平；（3）对乙肝和丙肝后肝硬化患者外周血中CD8+T、CD4+T、Treg细胞进行鉴定和分析；同时应用微量样本多指标流式蛋白定量技术（CBA）体外检测Thl、Th2等相关细胞因子浓度,并且就其与临床指标的相关性进行分析。实验结果如下：（1）不同慢性HBV感染者NK细胞数、CD3-CD56highNK、CD3-CD56lowNK细胞的比例以及IFN-y分泌无明显差别。（2）活化性受体NKP46在非活动性HBsAg携带者高于慢性HBV携带者、HBeAg+CHB及健康人。抑制性受体CD158a在慢性HBV携带者高于非活动性HBsAg携带者、HBeAg+CHB。（3）免疫活化期NK细胞杀伤标志CD107a表达显着高于免疫耐受期；体外阻断NKP46后发现NK细胞对靶细胞（K562）及肝癌细胞系（HepG2、HepG2.215）杀伤能力降低。（4）IL-28B三个位点的等位基因与基因型频率均与病毒载量及ALT有关。（5）慢性HBV感染组血清IL-28B水平比自限感染组和健康组明显低。而且血清IL-28B水平与IL-28B基因型有关。（6）肝硬化患者免疫细胞亚群与正常对照存在显着差别。肝硬化患者CD3+CD8+T细胞显着下降,CD3+CD4+T、Treg和CD4/CD8显着升高,而乙肝后和丙肝后肝硬化患者之间无差异。（7）Th2细胞因子（IL-6）在肝硬化患者中显着升高,而Th1细胞因子（IFN-γ）只有在乙肝后肝硬化患者中升高。IFN-γ/IL-6在肝硬化组显着高于健康对照组。综上所述,从我们的研究中可以看出慢性HBV感染者存在广泛的免疫异常包括天然免疫（NK细胞）、获得性免疫（T细胞、Treg）以及细胞因子（IFN-γ、IL-6、IL-28B）,作为复杂的多基因疾病HBV感染可能非单一因素引起,而为免疫细胞及细胞因子综合作用的结果。
肖性龙[7]（2010）在《多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用》文中提出多重荧光PCR与液相芯片技术具有高通量、高灵敏度等特点,可缩短检测周期、减少成本和提高效率,已成为病原体临床诊断和食品安全等领域的研究热点。本文以多重荧光RT-PCR检测病毒和液相芯片检测食源性致病菌为主线,研究关键技术环节,建立了较完整的高通量检测体系并加以应用。研究了以磁珠为介质的病毒总核酸提取方法。具有更高的得率与纯度,适合仪器自动化提取。试剂配方为:裂解液（4.5mol/L异硫氰酸胍,50 mmol/L Tris-HCl,10 % Triton-100,20 mmol/L EDTA,pH6.0）;洗液1（4.5mol/L异硫氰酸胍,46 mmol/L Tris-HCl,pH 6.0）,使用时先加入40%体积无水乙醇;洗液2（75%乙醇）;洗液3（无水乙醇）;磁珠（Promega）。研究了通用型多重荧光PCR反应体系,有效解决了多重PCR反应时面临的常见问题。DNA类体系缓冲液配方为:60 mmol/L Tris-HCl （pH 8.3）, 15 mmol/L KCl, 8 mmol/L （ NH4） 2SO4, 4 mmol/L MgCl2, 1.25 mmol/L dNTP,0.5μL DMSO。RNA类体系缓冲液配方为:60 mmol/L Tris-HCl （pH 8.3）,10 mmol/L KCl, 16 mmol/L （ NH4） 2SO4, 5 mmol/L MgCl2, 1. 5 mmol/L dNTP,1.0 mmol/L Betaine,0.5μL DMSO,0.5μL1mg/mL gp32。两个体系在反应时均加入与Taq酶等量的Taq抗体。研究了含组氨酸标签的假病毒监控内标和阳性对照的制备方法,为病毒检测提供了一种更稳定,更方便的全程监控技术。通过基因工程手段将6个组氨酸插入MS2噬菌体包膜蛋白的β-发夹环结构中,构建成功带组氨酸纯化标签假病毒的通用表达载体。外源基因序列插入载体后,经诱导表达与镍离子亲和层析纯化后,可获得高浓度,高纯度的假病毒。在4℃和-20℃条件下,可用SM缓冲液稳定保存1年以上。分别建立了多重荧光RT-PCR在猪繁殖与呼吸障碍综合症、急性出血性结膜炎与手足口病上的检测体系。各方案在选定的类似病毒范围内,特异性为100%;组内和组间的变异系数均小于2.2%;检测灵敏度高于现有方法;对疑似临床样本进行检测,检测结果与细胞分离鉴定技术或PCR测序结果相符,显示了良好的适用性。手足口病样本中含有PCR抑制因子的概率为1.8-3.4%,假阴性的出现提示了对PCR进行监控的必要性。研制了能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的一步法选择性培养基。其配方为（1L）:胰蛋白胨17g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、葡萄糖2.5g/L、丙酮酸钠2.5g/L、甘露醇5g/L、氯化钠15g/L、氯化锂2g/L、亚碲酸钾0.1mg/L、萘啶酮酸10mg/L。该培养基具有较好的选择性,能使目标菌以相对一致的速度生长,经24h培养后,菌体浓度可达到107CFU/mL以上。研制了能同时富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌的一步法选择性共增菌培养基。其配方为（1L）:BPW培养基的基础上,加入:葡萄糖1.25g、甘露醇1.25g、无水亚硫酸钠1.25g、丙酮酸钠0.05g,氯化钠20g、亚碲酸钾1.0mg和3号胆盐2.5g。该培养基能有效地抑制大部分竞争菌群,经过一步增菌即可富集沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌达到检测限以上。建立了肉类及水产品类常见致病菌流式液相芯片检测体系。在选定的类似病菌范围内,特异性为100%;灵敏度可达100CFU/mL,与荧光PCR技术相当。重复性实验表明,各菌检测变异系数在2%以内。研究得出影响检测信号的三个重要因素:1)目标菌扩增片断长度为100bp左右。2)上游引物也标记生物素,可增加检测信号强度65%以上。3)杂交温度的选择对检测信号也有重要的影响。
刘爱华[8]（2009）在《VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管的研究》文中研究说明目的视网膜新生血管性疾病，如糖尿病性视网膜病变，缺血性视网膜静脉阻塞和早产儿视网膜病变等均会导致视网膜新生血管。血管内皮生长因子（Vascularendothelial growth factor VEGF）是视网膜新生血管形成最主要的生长因子。抑制VEGF的表达，可以减少视网膜新生血管的形成。本文采用RNA干扰技术，从分子水平抑制VEGF的表达。研究的目的是构建VEGFsiRNA的表达质粒，以小鼠氧诱导视网膜病变新生血管动物模型为研究对象，探讨VEGF小干扰RNA（VEGFsiRNA）对小鼠视网膜新生血管模型中视网膜新生血管的抑制作用，评价其治疗视网膜新生血管性疾病的效果。方法本研究包括4部分：1．分别设计针对猴和小鼠的VEGF小干扰RNA，以pSilencer2．1-U6neo为质粒载体，构建VEGFsiRNA表达质粒，转化大肠杆菌，酶切、测序鉴定。2．体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞分成常氧组和二氯化钴缺氧组。缺氧组中，脂质体LipofectamineTM2000（LF2000）介导分别转染空载体质粒（空载体组）和VEGFsiRNA表达质粒（VEGFsiRNA转染组），缺氧组中未转染的细胞为缺氧对照组。常氧组细胞不做转染，为正常组。采用MTT法观察细胞增殖，real-timeRT-PCR检测VEGFmRNA的表达，Western blot检测VEGF蛋白的表达。3．改良的Smith方法建立氧诱导小鼠视网膜病变模型，采用HE染色、FITC-Dextran荧光造影视网膜铺片观察视网膜新生血管的形态变化，real-timeRT-PCR检测视网膜中VEGFmRNA的动态表达。4．C57BL/6J小鼠分为四组。常规空气中饲养小鼠为正常组，氧诱导小鼠视网膜病变小鼠随机分为缺氧对照组、空载体组和基因治疗组，正常组和缺氧对照组小鼠不做处理，空载体组和基因治疗组分别以脂质体LipofectamineTM2000（LF2000）介导玻璃体腔内注射空载体质粒和VEGFsiRNA表达质粒。结果1．将合成的DNA序列退火后克隆到载体上，并做测序分析，经酶切和测序鉴定确定为所需序列。2．MTT法细胞转染24h、48h、72h生长曲线显示VEGFsiRNA质粒转染组细胞的生长速度较其他各组细胞生长速度减慢。real-time RT-PCR和Western blot显示细胞VEGFmRNA及蛋白水平：正常组细胞仅见弱的VEGFmRNA和蛋白表达，而缺氧对照组表达明显上调（P＜0．01），空载体转染组表达与缺氧对照组比较无显着性差异（P＞0．05），VEGFsiRNA转染组较缺氧对照组减弱（P＜0．01），VEGFmRNA和蛋白抑制率分别为48．07%、51．82%。3．氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管在P14开始出现，P17达高峰，以后逐渐下降。氧诱导视网膜病变中VEGFmRNA在P12表达较低，P14达高峰，以后逐渐下降。4．病理切片显示正常组很少见到突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核，而对照组和空载体组中则可见到大量突破视网膜内界膜的内皮细胞细胞核，发生率为100%，基因治疗组较缺氧对照组和空载体组明显减少。免疫荧光染色显示正常组VEGF呈弱阳性表达，对照组和空载体组VEGF表达呈强阳性，基因治疗组VEGF表达明显减少。real-time RT-PCR显示正常组视网膜VEGFmRNA中仅见弱的VEGFmRNA表达，而缺氧对照组表达上调（P＜0．01），空载体组表达与缺氧对照组比较无显着性差异（P＞0．05），基因治疗组较缺氧对照组减弱（P＜0．01），VEGFmRNA抑制率为43．39%。结论1．体外实验：脂质体介导VEGFsiRNA表达质粒能有效抑制猴视网膜微血管内皮细胞的生长速度及VEGFmRNA和蛋白的表达。2．体内实验：采用脂质体介导，玻璃体腔注射VEGFsiRNA表达质粒可有效抑制小鼠缺血性视网膜病变模型新生血管的形成。
李金东[9]（2009）在《RNAi沉默Med19基因对人肺癌A549细胞生长、转移影响的实验研究》文中研究说明目的:探讨应用RNAi技术沉默Med19基因抑制人肺癌A549细胞生长、转移的效果。方法:①以Med19己知序列为靶点,构建siRNA-Med19重组慢病毒载体。②siRNA-Med19慢病毒表达载体与pCDNA3.1（-）- Med19过表达载体共转染293T细胞,Western blot外源筛选靶点。③将siRNA-Med19慢病毒表达载体转染人肺癌A549细胞株,应用Real-time PCR和Western blot检测Med19基因的转录水平及蛋白表达;应用流式细胞术检测细胞周期及凋亡峰;应用MTT、基底膜侵袭实验、细胞克隆形成实验检测细胞增殖、侵袭能力及细胞凋亡。④将siRNA-Med19慢病毒表达载体转染人肺癌A549细胞株,复制裸鼠移植瘤模型,测量肿瘤组织体积及重量,连续病理组织切片, HE染色观察移植瘤及转移瘤结节,并计算各组转移瘤数目和转移率。结果:①成功构建siRNA-Med19重组慢病毒载体,并经基因测序证实。②成功构建目的基因过表达载体pCDNA3.1-Med19,并与siRNA-Med19重组慢病毒载体共转染293T细胞,Western blot外源验证靶点的有效性。③Real-time PCR及Western blot结果显示,转染siRNA-Med19慢病毒表达载体组中Med19的基因转录及蛋白表达水平明显降低。流式细胞术、MTT、基底膜侵袭实验、细胞克隆形成实验结果显示:siRNA-Med19慢病毒表达载体转染组抑制细胞增殖、侵袭,检测到细胞凋亡。④成功建立裸鼠移植人肺癌模型,siRNA-Med19慢病毒表达载体转染组肿瘤体积及重量均低于对照组。连续病理组织切片观察转染siRNA-Med19慢病毒表达载体组肝脏、肺脏转移率低、转移瘤数目少。结论:应用RNAi技术沉默Med19基因可以降低人肺癌A549细胞的转录、表达,导致细胞凋亡,抑制肿瘤的生长、侵袭及转移。
黄浩[10]（2009）在《利用siRNA沉默PCNA研究对宫颈癌生长的影响》文中进行了进一步梳理研究背景子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁妇女的生命健康。当务之急是发展和寻找有具有潜力的治疗新手段和方法。增殖细胞核抗原（Proliferating cellnuclear antigen，PCNA）是一种核周期性抗原，出现在所有增殖期的细胞核中。根据Bravo′的研究，PCNA在DNA合成中是绝对必需的，在细胞增殖过程中有重要意义，常高表达于肿瘤中，如卵巢癌、肺癌、唾腺癌，尤其是在子宫颈癌最为常见。以下调PCNA的表达，抑制肿瘤的增殖及凋亡已成为肿瘤靶向治疗的重要策略。之前有报道，利用反义技术特异封闭PCNA的研究，能够明显已抑制肿瘤细胞的增殖，阻滞细胞DNA的合成。目前，应用PCNA分子的拮抗物常见如反义核酸、显性负相突变体等，运用这些技术可明显阻滞细胞分裂、促进细胞凋亡、抑制细胞增殖等。在哺乳动物细胞中能降解同源序列的靶基因的RNA干扰技术，能够在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默。最近的体内外实验证实，RNA干扰（RNAinterfering）技术以其高效性，特异性以及多功能性的优点，显示能够成为肿瘤基因治疗的潜在强有力的方法和手段。在本研究中，我们根据PCNA的cDNA的序列设计小发夹结构RNA（Small-interfering RNA，shRNA）的引物，构建正确的真核表达质粒，导入HeLa细胞中并研究其产生小分子干扰RNA（Small-interfering RNAs，siRNA）对HeLa细胞干预的影响。同时观察其在体内实验中对肿瘤细胞表达PCNA的作用，为RNA干扰技术对肿瘤的基因治疗提供了一定理论和实验基础。目的在了解增殖细胞核抗原的分子生物学及免疫学特性的基础上，我们构建PCNA的shRNA的真核表达载体并在HeLa细胞表达，观察PCNA的shRNA对人HeLa细胞体外增殖的影响及生物学特性的改变。同时利用shRNA质粒介导抑制人HeLa细胞表达PCNA，观察其在体内实验中对裸鼠移植肿瘤生长的影响。方法1．根据PCNA的cDNA的序列设计shRNA的引物，插入真核表达载体pGenesil-1，构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4，并通过酶切和测序等方法进行鉴定，将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4转染人HeLa细胞，运用集落形成试验、单细胞凝胶电泳实验观察PCNA的shRNA对人HeLa细胞的生长抑制，免疫组化技术和western blot检测PCNA的蛋白表达，流式细胞仪分析细胞周期变化。2．裸鼠皮下注射HeLa细胞，待形成肉眼可见的皮下肿瘤后，随机分组，分别于肿瘤组织周围进行注射。空白对照组注射生理盐水；阴性对照组注射含无意义序列shRNA质粒；PCNAshRNA组注射含PCNAshRNA质粒；转染试剂Lipofectamine2000组。将稳定表达PCNAshRNA与表达无意义序列shRNA的HeLa细胞，与未转染HeLa细胞分别注射于裸鼠皮下，观察肿瘤成瘤率以及肿瘤生长情况。分别剥离各组移植肿瘤，测量肿瘤组织匀浆上清液测总蛋白含量及PCNA含量。结果1．通过瞬时转染PCNAshRNA，发现PCNA的shRNA能显着抑制人HeLa细胞的生长，并促进细胞凋亡，阻滞细胞于G0／G1—S期2．裸鼠腋部皮下分别注射未转染、稳定表达PCNA shRNA和无意义序列shRNA的HeLa细胞后，移植肿瘤成瘤率100％。接种HeLa细胞第45天起，三组裸鼠的肿瘤平均体积有显着差异，PCNA shRNA组肿瘤体积低于无意义序列shRNA组与对照组，且无意义序列shRNA组肿瘤平均体积也低于对照组(（P＜0．05）。接种第8周末时，PCNA shRNA组肿瘤平均体积比对照组降低。PCNAshRNA组的肿瘤生长到体积为50mm3的时间比无意义序列shRNA组延迟。PCNAshRNA组的肿瘤倍增时间与无意义序列shRNA组有显着差异(（P＜0．05）。PCNAshRNA组肿瘤组织匀浆上清液PCNA含量，比无意义序列组明显降低。PCNAshRNA组肿瘤平均体积比无意义序列shRNA组降低。肿瘤体积的对数回归趋势线分析及对数回归方程分析，显示PCNAhiRNA组的肿瘤生长速率比对照组降低。结论1．本研究成功的构建PCNA的shRNA的真核表达载体并在HeLa细胞中表达，且PCNA的shRNA能显着抑制人HeLa细胞的生长，其抑制作用是通过阻断PCNA蛋白表达实现2．裸鼠皮下移植肿瘤注射，瞬时转染PCNAshRNA质粒三周，肿瘤生长及表达PCNA量均有明显受到抑制。3．PCNAshRNA稳定表达在HeLa细胞中，在移植瘤模型中可见对肿瘤形成有抑制生长的作用，使得肿瘤细胞增殖至50mm3的体积所需的时间延长。
二、非特异性IgG含量对EIA法检测抗-HCV抗体的干扰现象（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、非特异性IgG含量对EIA法检测抗-HCV抗体的干扰现象（论文提纲范文）
（1）抗凝与非抗凝血标本对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 血液制品研究战略意义 |
| 1.2 国内血液制品现状 |
| 1.3 单采血浆行业现状 |
| 1.4 抗凝剂与乙肝检测方法的应用 |
| 1.4.1 抗凝剂的应用 |
| 1.4.2 乙型肝炎及其检测方法 |
| 1.4.3 酶联免疫法(ELISA)的影响因素 |
| 1.5 相关研究成果及进展 |
| 第2章 研究目标、意义及方案设计 |
| 2.1 研究目标 |
| 2.2 研究意义 |
| 2.3 研究方案设计及要求 |
| 2.3.1 研究方案设计路线 |
| 2.3.2 研究要求 |
| 第3章 乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)在对抗凝与非抗凝血液标本检测的差异性实验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 仪器与试剂 |
| 3.1.3 标本来源及处理 |
| 3.1.4 方法 |
| 3.1.5 统计学分析方法 |
| 3.2 实验研究及结果 |
| 3.2.1 有效数据的筛选 |
| 3.2.2 酶联免疫吸附检测血清乙肝表面抗原的结果判定 |
| 3.2.3 非抗凝血标本与枸橼酸钠抗凝血标本两组标本初次检测结果 |
| 3.2.4 各类标本的复检结果 |
| 3.2.5 非抗凝血、枸橼酸钠抗凝血两组标本两种试剂复检结果比较 |
| 3.2.6 样本排除抗凝血剂对照结果 |
| 3.2.7 部分样本的长期追踪研究结果 |
| 第4章 乙肝表面抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)在对抗凝与非抗凝血液标本检测的差异性分析 |
| 4.1 枸橼酸钠抗凝剂对酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响分析 |
| 4.2 枸橼酸钠抗凝剂对酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响的空白对照及后续追踪分析 |
| 4.3 枸橼酸钠抗凝剂对酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响中灰区等异常应对分析 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（2）基于Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针的构筑及其在即时检测的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1 绪论 |
| 1.1 生物医用无机纳米粒子的研究进展 |
| 1.1.1 无机纳米粒子的制备 |
| 1.1.2 无机纳米粒子的稳定机制 |
| 1.1.3 无机纳米粒子的表面修饰 |
| 1.2 纳米粒子用于免疫检测的研究进展 |
| 1.2.1 比色光学检测研究进展 |
| 1.2.2 免疫层析技术研究进展 |
| 1.2.3 抗体与纳米粒子表面的抗体标记 |
| 1.3 金磁纳米复合微粒研究进展 |
| 1.3.1 金磁纳米复合微粒的制备 |
| 1.3.2 金磁纳米复合微粒的表征 |
| 1.3.3 金磁纳米复合微粒表面在生物医药领域中的应用 |
| 1.4 课题的提出 |
| 2. 核壳 Fe_3O_4/Au 纳米粒子的制备及表面修饰 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料及试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 溶液的配制 |
| 2.2.4 金磁微粒的制备及表面性质研究 |
| 2.2.5 金磁微粒的酸处理及预分散 |
| 2.2.6 基于配体交换的表面修饰 |
| 2.2.7 基于阴离子聚合物的表面修饰方法 |
| 2.2.8 金磁微粒的测试与表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 金磁微粒制备及表面性质 |
| 2.3.2 GoldMag 的表面性质 |
| 2.3.3 酸处理对金磁微粒的影响 |
| 2.3.4 表面活性剂的筛选 |
| 2.3.5 配体小分子与 Fe_3O_4/Au 纳米粒子表面的作用方式 |
| 2.3.6 聚合物对 Fe_3O_4/Au 纳米粒子表面的修饰作用 |
| 2.4 本章小结 |
| 3. 基于 Fe_3O_4/Au 纳米粒子的金磁免疫探针用于光学比色检测研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.2.3 溶液的配制 |
| 3.2.4 稳定性的比较 |
| 3.2.5 Fe_3O_4/Au 纳米粒子元素分析 |
| 3.2.6 偶联率计算方法的建立 |
| 3.2.7 RIgG-Fe_3O_4/Au 免疫探针的制备 |
| 3.2.8 液相中的光学比色检测 |
| 3.2.9 光学比色检测过程的动力学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 核壳 Fe_3O_4/Au 纳米粒子的稳定性研究 |
| 3.3.2 Fe_3O_4/Au 纳米粒子浓度的计算 |
| 3.3.3 Lowry 法蛋白定量的标准曲线 |
| 3.3.4 EDC 对 Lowry 法蛋白定量的干扰及消除 |
| 3.3.5 pH 及抗体投入量对金磁免疫探针的影响 |
| 3.3.6 比色光学检测限、检测灵敏度的确定 |
| 3.3.7 光学比色检测的动力学研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 氨基末端脑尿肽前体检测用金磁免疫探针的构筑及免疫定量检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料及试剂 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 溶液的配制 |
| 4.2.4 免疫层析试纸条的装配及氨基末端脑尿肽的检测方法 |
| 4.2.5 金磁免疫探针构建的优化及核壳 Fe_3O_4/Au 纳米粒子的筛选 |
| 4.2.6 免疫层析条件的优化 |
| 4.2.7 检测灵敏度、检测特异性的确定 |
| 4.2.8 磁定量检测方法 |
| 4.3 实验结果及讨论 |
| 4.3.1 金磁免疫探针构建的优化及纳米粒子的筛选 |
| 4.3.2 层析条件对系统检测的影响 |
| 4.3.3 检测灵敏度、检测特异性的确定 |
| 4.3.4 磁定量对免疫层析检测的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 梅毒即时检测用金磁免疫探针的构筑及临床实验 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 实验材料及仪器 |
| 5.2.2 免疫层析检测 anti-Tp 抗体用试纸条的装配及检测方法 |
| 5.2.3 溶液的配制 |
| 5.2.4 r-Tp 抗原标记 Fe_3O_4/Au 纳米粒子及优化 |
| 5.2.5 检测灵敏度、检测特异性的确定 |
| 5.2.6 临床实验 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 纳米粒子的选择及标记条件对检测的影响 |
| 5.3.2 检测灵敏度、检测特异性的确定 |
| 5.3.3 临床实验结果及统计学方法分析 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 论文工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文和专利 |
（3）基于纳米材料的微流控技术在HIV和HCV检测中的应用研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 1. 实验对象 |
| 2. 实验材料 |
| 3. 试验方法 |
| 结果 |
| 1. 无封闭微流控芯片快速检测方法的建立 |
| 2. 微流控芯片快速检测血浆中HIV、HCV抗体 |
| 3. 微流控芯片快速检测与WB检测的比较 |
| 讨论 |
| 1. 芯片材料选择和芯片制作 |
| 2. 分析敏感度实验 |
| 3. 血浆样本HIV和HCV检测 |
| 4. 与WB检测方法的比对 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（4）HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 引言 |
| 第一章 荧光定量PCR方法的研究 |
| 1. 前言 |
| 1.1 定量原理 |
| 1.2 荧光化学 |
| 1.3 实时荧光定量PCR的特点 |
| 1.4 定量方法 |
| 1.5 实时荧光定量PCR的应用 |
| 2. 材料方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 标准品的制备 |
| 3.2 LUX荧光定量PCR方法的研究结果 |
| 3.3 Taqman方法研究结果 |
| 3.4 反转录酶抑制PCR反应问题的研究 |
| 3.5 UNG酶破坏cDNA问题的研究 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 引物设计 |
| 4.2 稳定性，重复性 |
| 4.3 一步法荧光定量PCR |
| 4.4 特异性 |
| 4.5 灵敏度 |
| 4.6 价格，适用仪器 |
| 4.7 多重荧光定量PCR |
| 4.8 反转录酶对PCR的抑制作用 |
| 4.9 UNG酶 |
| 第二章 基于磁珠的血清病毒核酸提取方法的建立 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 血清病毒核酸提取方法的评价--回收率的检测 |
| 3.2 血清病毒核酸提取方法的评价--与Qiagen两种提取试剂盒的比较 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 HBV、HCV、HIV-1荧光PCR检测体系和多重PCR检测体系的建立 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 HBV荧光定量PCR检测体系的建立 |
| 3.2 HCV荧光定量PCR检测体系的建立 |
| 3.3 HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立 |
| 3.4 多重荧光定量RT-PCR检测体系的建立 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 HBV、HCV和HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立 |
| 4.2 多重荧光定量PCR检测体系的建立 |
| 第四章 HBV DNA与HBV血清标志物关系的研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 检测方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 HBsAg与HBV DNA的关系 |
| 3.2 抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc与HBV DNA的关系 |
| 3.3 HBV DNA与HBV M不同模式之间的关系 |
| 3.4 AFP与HBV M、HBV DNA的关系 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 HBV血清标志物与HBV DNA载量的关系 |
| 4.2 HBV M不同模式与HBV DNA载量的关系 |
| 4.3 原发性肝癌与HBV M、HBV DNA的关系 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间公开发表论文及着作情况 |
（5）淋巴增强因子-1表达对人结直肠癌细胞生物学行为影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词一览表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 淋巴增强因子-1(LEF-1)与肿瘤进程研究进展 |
| 1.1.1 LEF/TCF家族简介 |
| 1.1.2 LEF-1基因、蛋白结构特点 |
| 1.1.3 LEF-1与Wnt信号通路的关系 |
| 1.1.4 Wnt信号通路与人类疾病及肿瘤的关系 |
| 1.1.5 LEF-1与肿瘤相关性研究进展 |
| 1.2 RNA干扰技术(RNAi) |
| 1.2.1 RNA干扰研究进展 |
| 1.2.2 RNA干扰机制 |
| 1.2.3 RNA干扰工作机制的特点 |
| 1.2.4 质粒载体介导的RNA干扰的应用前景 |
| 第2章 本课题的研究内容与意义、技术路线及创新之处 |
| 第3章 LEF-1-shRNA真核表达载体的构建和鉴定及其对LEF-1基因沉默效应的分析 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 重组质粒及细胞株 |
| 3.1.2 实验仪器及试剂 |
| 3.2 主要试剂的配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 shRNA靶点序列设计、合成及shRNA表达质粒载体的构建 |
| 3.3.2 LEF1-shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 |
| 3.3.3 质粒载体的制备与鉴定 |
| 3.3.4 细胞培养 |
| 3.3.5 细胞转染与效率评估 |
| 3.3.6 Western blots检测LEF-1基因沉默后蛋白的表达水平 |
| 3.3.7 统计学处理 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 LEF1-shRNA质粒表达载体的构建与鉴定 |
| 3.4.2 S-TranG转染试剂转染条件的优化 |
| 3.4.3 LEF-1 RNAi质粒转染效率评估 |
| 3.4.4 Western blots检测LEF-1蛋白表达水平 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 LEF-1基因沉默对人结直肠癌细胞生物学行为的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 质粒及细胞株 |
| 4.1.2 主要实验仪器及试剂 |
| 4.2 主要试剂的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞培养与质粒载体的制备(同第3章) |
| 4.3.2 实验分组与细胞转染 |
| 4.3.3 体外损伤修复法 |
| 4.3.4 细胞增殖能力检测 |
| 4.3.5 细胞凋亡检测(Hoechst33258染色) |
| 4.3.6 统计学处理 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 LEF1-shRNA对Caco-2细胞运动能力的影响 |
| 4.4.2 LEF1-shRNA对caco-2细胞增殖能力的影响 |
| 4.4.3 LEF1-shRNA对Caco-2细胞凋亡的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间的科研成果 |
（6）天然免疫和获得性免疫等因素在慢性HBV感染中的作用研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1篇 绪论 |
| 第1章 HBV感染的天然免疫和获得性免疫学研究进展 |
| 1.1 病毒因素 |
| 1.2 宿主免疫因素 |
| 第2章 HBV感染与细胞因子 |
| 2.1 细胞因子分类 |
| 2.2 细胞因子在乙型肝炎中的研究 |
| 第2篇 实验研究 |
| 第1章 NK细胞在慢性HBV感染中的研究 |
| 第1节 材料和方法 |
| 1 资料和仪器 |
| 2 主要试剂及溶液 |
| 3 主要仪器 |
| 4 方法 |
| 第2节 结果 |
| 1 研究对象的一般信息和临床特点 |
| 2 外周血NK细胞亚群及表型的变化 |
| 3 外周血NK细胞分泌IFN-γ的能力 |
| 4 外周血NK细胞CD107a的表达 |
| 5 体外阻断NKP46识别后NK细胞对K562的杀伤能力 |
| 6 体外阻断NKP46识别NK细胞对肝细胞系HepG2和HepG2.215的杀伤能力 |
| 第3节 讨论 |
| 第2章 IL-28B基因多态性与中国HBV感染的相关性 |
| 第1节 材料和方法 |
| 1 资料和仪器 |
| 2 主要试剂及溶液 |
| 3 主要仪器 |
| 4 实验方法 |
| 第2节 结果 |
| 1 研究对象的一般信息和临床特点 |
| 2 IL28B位点的变异 |
| 3 IL-28B位点变异与慢性HBV感染者临床参数的相关性研究 |
| 4 不同研究组间IL-28B变异位点基因型和等位基因频率 |
| 5 不同研究组间血清IL-28B水平 |
| 第3节 讨论 |
| 第3章 乙肝及丙肝后肝硬化患者外周血淋巴细胞亚群数和细胞因子的变化 |
| 第1节 材料和方法 |
| 1 资料和仪器 |
| 2 主要试剂及溶液 |
| 3 主要仪器 |
| 4 方法 |
| 第2节 结果 |
| 1 研究对象的一般信息和临床特点 |
| 2 外周血淋巴细胞亚群数的变化 |
| 3 外周血淋巴细胞亚群数和临床指标的相关性 |
| 4 Th1和Th2细胞因子的产生 |
| 5 细胞因子水平与临床指标之间的相关性 |
| 第3节 讨论 |
| 第3篇 结论 |
| 本研究的创新点和意义 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（7）多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 病原微生物检测方法的研究概况 |
| 1.2 多重荧光PCR 技术及其应用 |
| 1.3 多重荧光PCR 的影响因素及存在的问题 |
| 1.4 液相芯片技术研究进展 |
| 1.5 共增菌技术的研究现状 |
| 1.6 本课题研究的目的意义和内容 |
| 第二章 磁珠法提取病毒总核酸方法的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 多重荧光PCR 通用反应体系的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 含组氨酸标签的假病毒内标和阳性对照的研制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 猪繁殖与呼吸综合症多重荧光RT-PCR 检测体系的建立 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 急性出血性结膜炎多重荧光RT-PCR 检测体系的建立 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 手足口病多重荧光RT-PCR 检测体系的建立 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 材料与方法 |
| 7.3 结果与讨论 |
| 7.4 本章小结 |
| 第八章 沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌选择性共增菌培养基的研究 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 材料和方法 |
| 8.3 结果 |
| 8.4 本章小结 |
| 第九章 沙门氏菌、副溶血弧菌和霍乱弧菌选择性共增菌培养基的研究 |
| 9.1 引言 |
| 9.2 材料和方法 |
| 9.3 结果与讨论 |
| 9.4 本章小结 |
| 第十章 肉类及水产品类常见致病菌流式液相芯片检测方法的建立 |
| 10.1 引言 |
| 10.2 实验材料与设备 |
| 10.3 实验及分析方法 |
| 10.4 实验结果与分析 |
| 10.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 本论文的主要创新点 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（8）VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、靶向干涉VEGFshRNA质粒载体的构建和验证 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、VEGF小干扰RNA抑制缺氧猴视网膜微血管内皮细胞VEGF的实验研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、氧诱导小鼠视网膜新生血管模型的建立及VEGF的动态表达 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、VEGF小干扰RNA抑制鼠视网膜新生血管的实验研究 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| RNA干扰技术及其在眼科的应用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（9）RNAi沉默Med19基因对人肺癌A549细胞生长、转移影响的实验研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 Med19 与肿瘤研究进展 |
| 1 Med 的发现及其结构 |
| 1.1 Med 复合物的发现 |
| 1.2 酵母Med 的结构 |
| 1.3 哺乳动物的Med |
| 2 Med 的功能 |
| 2.1 Med 和RNA 聚合酶Ⅱ之间的相互作用 |
| 2.2 Med 与转录激活 |
| 2.3 Med 与转录阻抑 |
| 2.4 Med 对转录进行调节的机制 |
| 2.5 Med 复合物在真核生物发育过程中的作用 |
| 3 Med19 的功能 |
| 4 Med19 与肿瘤 |
| 5 Med19 与信号传导基因异常 |
| 6 Med19 与代谢类相关基因异常 |
| 7 Med19 与蛋白翻译合成类及其他表达差异基因异常 |
| 8 细胞转录的分子机制 |
| 8.1 原核细胞转录机制的研究 |
| 8.2 真核细胞转录机制的研究 |
| 8.3 RNA 聚合酶Ⅱ的转录过程 |
| 9 Med19 小结与展望 |
| 第二节 RNAi 的研究进展 |
| 1 RNAi 的研究历史 |
| 2 RNA 干扰的作用机制 |
| 2.1 转录后抑制 |
| 2.2 转录抑制 |
| 2.3 翻译抑制 |
| 3 RNAi 的作用特点 |
| 3.1 高度的特异性 |
| 3.2 高效性 |
| 3.3 PTGS 机制 |
| 3.4 高稳定性 |
| 3.5 双干扰系统 |
| 3.6 RNAi 的可扩散性 |
| 3.7 抑制范围广 |
| 3.8 RNAi 对细胞调控机制的影响 |
| 4 RNAi 技术要点 |
| 4.1 siRNA 的设计 |
| 4.2 siRNA 的合成 |
| 4.3 siRNA 导入细胞的方法 |
| 5 RNAi 技术的应用 |
| 5.1 基因功能研究 |
| 5.2 制备RNAi 转基因动物 |
| 5.3 临床应用 |
| 第二章 siRNA-Med19 慢病毒表达载体的构建与鉴定 |
| 第一节 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 质粒与菌株 |
| 1.4 实验细胞 |
| 1.5 抗体 |
| 1.6 培养基 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 siRNA-Med19 慢病毒载体的构建 |
| 2.2 目的基因过表达载体构建pCDNA3.1(-)-Med19 |
| 2.3 Western Blot 外源筛选有效靶点(protocol) |
| 2.4 有效靶点慢病毒大量包装及滴度测定 |
| 第二节 实验结果 |
| 1 构建的siRNA-Med19 慢病毒载体的鉴定 |
| 1.1 酶切pGCSIL-GFP 载体的琼脂糖凝胶电泳鉴定 |
| 1.2 构建的siRNA-Med19 慢病毒载体琼脂糖凝胶电泳鉴定 |
| 1.3 构建的siRNA-Med19 慢病毒载体测序鉴定 |
| 2 目的基因过表达载体pCDNA3.1(-)- Med19 的鉴定 |
| 3 Western blot 外源筛选靶点 |
| 3.1 慢病毒载体共转染293T 细胞情况 |
| 3.2 最佳靶点筛选情况 |
| 4 siRNA-Med19 慢病毒载体的包装及滴度测定 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 RNAi 沉默Med19 基因对人肺癌A549 细胞影响的体外实验研究 |
| 第一节 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 Real-time PCR 验证靶点的有效性(protocol) |
| 2.2 Western blot 验证靶点的有效性(protocol) |
| 2.3 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 |
| 2.4 细胞生长抑制实验(MTT 比色实验法) |
| 2.5 细胞侵袭实验 |
| 2.6 细胞克隆形成实验 |
| 2.7 统计学处理 |
| 第二节 结果 |
| 1 细胞生长状况的观察 |
| 2 Real-time PCR 检测转录影响 |
| 2.1 慢病毒载体对人肺癌A549 细胞的感染情况 |
| 2.2 Real-time PCR 检测siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞Med19 基因转录的影响 |
| 3 Western blot 检测siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞Med19 基因表达的影响 |
| 4 siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞生长周期的影响 |
| 5 MTT 法检测细胞的增殖抑制 |
| 6 siRNA-Med19 对人肺癌A549 细胞侵袭、运动能力的影响 |
| 7 细胞克隆形成试验 |
| 第三节 讨论 |
| 第四章 RNAi 沉默Med19 基因对人肺癌移植瘤生长、转移影响的实验研究 |
| 第一节 材料与方法 |
| 1 主要材料与来源 |
| 2 实验动物 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 人肺癌A549 细胞的培养、慢病毒转染及裸鼠肺癌移植瘤模型的建立 |
| 3.2 观察项目 |
| 第二节 实验结果 |
| 1 观察裸鼠移植瘤出瘤时间、大小、称重 |
| 2 移植瘤组织HE 染色及荧光示踪 |
| 3 移植瘤肺脏转移情况观察 |
| 4 移植瘤肝脏转移情况观察 |
| 第三节 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
（10）利用siRNA沉默PCNA研究对宫颈癌生长的影响（论文提纲范文）
| 缩略语 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 研究路线 |
| 正文 |
| 第一部分 PCNA靶向siRNA真核载体的构建与鉴定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 PCNA靶向siRNA对人宫颈癌HeLa细胞增殖的的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 PCNA靶向siRNA对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
四、非特异性IgG含量对EIA法检测抗-HCV抗体的干扰现象（论文参考文献）
- [1]抗凝与非抗凝血标本对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响[D]. 蒲嵩. 西南交通大学, 2017(03)
- [2]基于Fe3O4/Au纳米粒子的金磁免疫探针的构筑及其在即时检测的应用研究[D]. 杨冬. 陕西科技大学, 2014(05)
- [3]基于纳米材料的微流控技术在HIV和HCV检测中的应用研究[D]. 刘玉磊. 中国疾病预防控制中心, 2012(04)
- [4]HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用[D]. 李桂民. 东北师范大学, 2011(06)
- [5]淋巴增强因子-1表达对人结直肠癌细胞生物学行为影响的研究[D]. 葛玉婷. 陕西师范大学, 2011(10)
- [6]天然免疫和获得性免疫等因素在慢性HBV感染中的作用研究[D]. 李婉玉. 吉林大学, 2011(09)
- [7]多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D]. 肖性龙. 华南理工大学, 2010(12)
- [8]VEGF小干扰RNA抑制视网膜新生血管的研究[D]. 刘爱华. 天津医科大学, 2009(11)
- [9]RNAi沉默Med19基因对人肺癌A549细胞生长、转移影响的实验研究[D]. 李金东. 吉林大学, 2009(08)
- [10]利用siRNA沉默PCNA研究对宫颈癌生长的影响[D]. 黄浩. 华中科技大学, 2009(11)