一、水通道蛋白在外伤性脑水肿中的作用（论文文献综述）
刘亚玲,于秋红,王丛,薛连璧[1]（2021）在《脑损伤后继发脑水肿的分型及其分子机制研究进展》文中研究指明脑水肿是脑损伤后最常见的病理表现之一。最新研究认为脑损伤后不同类型的脑水肿可能具有相似的分子机制,并在此基础上重新将脑水肿分为细胞性水肿、离子性水肿、血管源性水肿和出血转换。各种不同离子通道、转运体及水通道蛋白在不同类型脑水肿中发挥的作用不尽相同,本文对上述不同类型脑水肿形成及其分子机制进行了阐述,深刻理解上述机制对于指导脑水肿的临床治疗具有重要的临床意义。
蒋鸿雁[2]（2021）在《大麻二酚（CBD）改善脑损伤血脑屏障渗透性的研究》文中研究表明[目的]1.探索创伤性脑损伤（TBI）致伤后8 h、24 h、2d、3d、5 d、7 d大鼠脑组织含水量情况,确定脑水肿的高峰期;2.探索大麻二酚（CBD）梯度剂量（5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg）对TBI大鼠的干预作用,确定CBD最佳干预剂量;3.探索CBD最佳干预剂量对TBI大鼠血脑屏障（BBB）渗透性的改善作用。[方法]（1）采用“改良Feeney自由落体撞击法,建立大鼠TBI模型”,随机分为TBI 致伤后 8h、24h、2d、3d、5d、7d 组,同时设置 Sham 组（n=3）,通过计算干/湿重比值,确定脑水肿发生的高峰期。（2）脑水肿发生的高峰期确定为 TBI 后 24 h,设置 Sham 组、TBI+vehicle 组、TBI+CBD 5 mg/kg 组、TBI+CBD 10 mg/kg 组和 TBI+CBD 20 mg/kg 组（n=3）[CBD 30 mg/kg 因有致死情况而被剔除],通过行为学、形态学、分子生物学和ELISA实验,探索CBD最佳干预剂量。（3）CBD最佳干预剂量确定为10 mg/kg,设置Sham组、TBI+vehicle组、TBI+CBD 10mg/kg组（n=3）,通过形态学、分子生物学和伊文思蓝染色实验,探索CBD 10 mg/kg对TBI后BBB渗透性的改善作用。[结果]1 探索TBI后脑水肿高峰期干/湿重比结果显示:与Sham组相比,TBI致伤后随时间点推移（8 h、24 h、2 d、3 d、5 d、7 d）大鼠脑组织含水量呈现出上升趋势,均有统计学差异（P<0.05）。其中TBI后24 h的脑组织含水量达到高峰。2 探索CBD最佳干预剂量2.1 改良神经功能缺损评分（mNSS）（1）与Sham组相比,TBI组大鼠mNSS评分明显增高（P<0.01）;（2）与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg组的mNSS评分最低（P<0.05）。2.2 ELISA实验（S100-β为脑损伤标记物）（1）与Sham组相比,TBI组S100-β含量明显增加（P<0.001）;（2）与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg组S100-β含量最低（P<0.001）。2.3干/湿重比（1）Sham组大鼠的左侧脑组织（损伤对侧）和右侧脑组织（损伤侧）含水量无明显变化;（2）TBI组损伤侧脑组织含水量较损伤对侧增加（P<0.05）;（3）在大鼠右侧（损伤侧）脑组织中:①与Sham组相比,TBI组脑组织含水量增多（P<0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10mg/kg组脑组织含水量最低（P<0.05）。2.4 HE染色（大鼠损伤侧皮质区）（1）Sham组神经元形态正常,着色均匀,细胞结构完整,轮廓清晰,胞质丰富,胞核清晰、核大而圆、位于细胞中央,核仁明显;（2）与Sham组相比,TBI组神经元出现病理学变化,即细胞肿胀,细胞核深染,轮廓不清,胞质溶解,出现空泡;（3）与TBI组相比,CBD 5 mg/kg干预组仍有神经元胞体肿胀,细胞核深染,胞质溶解等病理学改变,CBD 10 mg/kg与CBD 20 mg/kg干预组神经元胞体仍有轻度肿胀。2.5 尼氏染色（大鼠损伤侧皮质区）（1）Sham组神经元形态正常,细胞轮廓清晰,尼氏体丰富,染色均匀,细胞核染成淡紫色、呈圆形、位于细胞中央,核仁明显;（2）与Sham组相比,TBI组神经元的细胞核和核仁消失,胞体浓缩呈三角形,出现大量的固缩性坏死（P<0.01）;（3）与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg组的固缩性坏死神经元数量最少（P<0.01）。2.6 免疫荧光单标染色（大鼠损伤侧皮质区）（1）星形胶质细胞标记物GFAP。1)GFAP阳性细胞的形态学变化:①Sham组GFAP阳性表达的星形胶质细胞胞体较小、突起呈细长状;②与Sham组相比,TBI组星形胶质细胞胞体变大、突起增多和变粗,呈激活状态;③与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 5 mg/kg组星形胶质细胞的激活状态出现减弱,CBD 10 mg/kg组星形胶质细胞激活状态减弱明显,CBD 20 mg/kg干预组星形胶质细胞形态变化和CBD 10 mg/kg干预组近似。2)对GFAP阳性表达的平均荧光强度进行定量分析:①TBI组GFAP的荧光强度较Sham组增强（P<0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg组GFAP的荧光强度较TBI组明显减弱（P<0.05）。（2）水通道蛋白AQP4。1)AQP4阳性表达的形态学变化:①Sham组AQP4阳性表达在细胞膜上,呈中空小管状结构;②与Sham组相比,TBI组AQP4阳性表达的形态变化不大;③与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,AQP4阳性表达的形态仍呈中空小管状。2)对AQP4阳性表达的平均荧光强度进行定量分析:①TBI组AQP4的荧光强度较Sham组增强（P<0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg组AQP4的荧光强度较TBI组明显减弱（P<0.05）。2.7 Western blotting实验（大鼠损伤侧皮质区）（1）GFAP、AQP4、TNF-α和IL-1β的蛋白表达:①与Sham组相比,TBI组GFAP、TNF-α和IL-1β的蛋白表达升高（P<0.05）,AQP4的蛋白表达变化不具有统计学意义（P>0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,除了 TNF-α的蛋白外,CBD 10 mg/kg组GFAP、AQP4和IL-1β的蛋白表达最低（P<0.05）。（2）Claudin-5 和 Occludin 的蛋白表达:①与 Sham 组相比,TBI 组 Claudin-5和Occludin的蛋白表达变化无明显差异（P>0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,Claudin-5和Occludin的蛋白表达变化无明显差异（P>0.05）。2.8 RT-PCR实验（大鼠损伤侧皮质区）（1）GFAP、AQP4、TNF-α 和 IL-1β 的 mRNA 表达:①与 Sham 组相比,TBI 组 GFAP、AQP4、TNF-α 和 IL-1β 的 mRNA 表达升高（P<0.05）;②与 TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,除了 TNF-α的mRNA外,CBD 10 mg/kg组GFAP、AQP4 和 IL-1β 的 mRNA 表达最低（P<0.05）。（2）Claudin-5 和 Occludin 的 mRNA 表达:①与 Sham 组相比,TBI 组 Claudin-5和Occludin的mRNA表达降低（P<0.05）;②与TBI组相比,不同剂量CBD干预组中,CBD 10 mg/kg 组 Claudin-5 和 Occludin 的 mRNA 表达最高（P<0.05）。3 探索CBD对BBB渗透性的改善3.1 免疫荧光单标染色（大鼠损伤侧皮质区）（1）星形胶质细胞标记物GFAP。1)GFAP阳性表达的星形胶质细胞形态学变化:①Sham组星形胶质细胞胞体小、突起细长、突起末端的足板贴附在血管壁上;②与Sham组相比,TBI组星形胶质细胞呈激活状态,胞体大、突起增多、突起末端的足板肿胀,贴附在血管处有断裂;③与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组星形胶质细胞的激活状态减弱。2)对GFAP阳性表达的平均荧光强度进行定量分析:①TBI组GFAP荧光强度较Sham组增强（P<0.05）;②CBD 10 mg/kg干预组GFAP荧光强度较TBI组减弱（P<0.05）。（2）紧密连接蛋白Claudin-5。1)Claudin-5阳性表达的形态学变化:①Sham组Claudin-5的阳性表达的形态多呈线条状;②与Sham组相比,TBI组Claudin-5阳性表达的线条状发生断裂,多呈点状;③与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组Claudin-5阳性表达的形态有所恢复,接近正常的线条状。2)对Claudin-5阳性表达的平均荧光强度进行定量分析发现:①TBI组Claudin-5荧光强度较Sham组明显减弱（P<0.01）;②CBD 10 mg/kg干预组Claudin-5荧光强度较TBI组明显增加（P<0.05）。（3）紧密连接蛋白Occludin。1)Occludin阳性表达的形态学变化:①Sham组Occludin的阳性表达出现在细胞之间呈线条状;②与Sham组相比,TBI组Occludin阳性表达的形态发生改变,线条状不再连续,呈断裂或点状;③与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组Occludin阳性表达的形态有所恢复。2)对Occludin阳性表达的平均荧光强度进行定量分析:①TBI组Occludin荧光强度较Sham组明显减弱（P<0.01）;②CBD 10 mg/kg干预组Occludin荧光强度较TBI组增加（P<0.05）。3.2 免疫荧光双标染色（大鼠损伤侧皮质区）（1）星形胶质细胞标记物GFAP。1)GFAP阳性细胞的形态学变化:①在Sham组中,血管处GFAP 阳性表达的星形胶质细胞胞体小、突起细长、突起末端的足板贴附在血管壁上;②与Sham组相比,TBI组星形胶质细胞呈激活状态,胞体大,突起增多,突起末端的足板肿胀,贴附在血管处出现断裂;③与TBI组相比,CBD 10mg/kg干预组星形胶质细胞的激活状态减弱。（2）水通道蛋白AQP4。1)AQP4阳性表达的形态学变化:①Sham组AQP4阳性表达在细胞膜上,呈中空小管状结构;②与Sham组相比,TBI组AQP4阳性表达的形态变化不大;③与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组AQP4阳性表达的形态仍呈中空小管状。（3）对GFAP与AQP4 阳性共表达的平均荧光强度进行定量分析:①在Sham组中,GFAP（绿色）与AQP4（红色）存在共表达（黄色）;②TBI组GFAP与AQP4共表达荧光强度较Sham组增强（P<0.01）;③CBD 10 mg/kg干预组GFAP与AQP4共表达荧光强度较TBI组减弱（P<0.05）。3.3 Western blotting实验（大鼠损伤侧皮质区）（1）GFAP、TNF-α和IL-1β的蛋白表达:①与Sham组相比,TBI组GFAP、TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显增加（P<0.05）;②与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组GFAP、TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显降低（P<0.05）。（2）Claudin-5 和 Occludin 的蛋白表达:①与 Sham 组相比,TBI 组 Claudin-5和Occludin的蛋白表达明显降低（P<0.05）;②与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组Claudin-5与Occludin的蛋白表达增加（P<0.05）。3.4 RT-PCR实验（大鼠损伤侧皮质区）（1）GFAP、TNF-α 和 IL-1β 的 mRNA 表达:①与 Sham 组相比,TBI 组GFAP、TNF-α和IL-1 β的mRNA表达显着增加（P<0.05）;②与TBI组相比,CBD 10 mg/kg 干预组 GFAP、TNF-α 和 IL-1β 的 mRNA 表达明显下降（P<0.05）。（2）Claudin-5 和 Occludin 的 mRNA 表达:①与 Sham 组相比,TBI 组 Claudin-5的mRNA表达无明显差异（P>0.05）,Occludin的mRNA表达出现下降（P<0.05）;②与 TBI 组相比,CBD 10 mg/kg 干预组 Claudin-5 和 Occludin 的 mRNA表达显着上升（P<0.05）。3.5伊文思蓝示踪（EB）染色（大鼠损伤侧皮质）（1）对脑组织外观观察:Control组未见蓝染;Sham组出现少许蓝染;TBI组蓝染明显;CBD 10 mg/kg干预组蓝染明显;（2）对损伤侧皮质区脑组织EB含量进行检测:①与Control组相比,Sham组的EB含量稍微有升高,但是无统计学意义（P>0.05）;②与Sham组相比,TBI组的EB含量明显升高（P<0.01）;③与TBI组相比,CBD 10 mg/kg干预组的EB含量明显下降（P<0.05）。[结论]1.TBI大鼠的脑水肿高峰期发生在TBI致伤后24 h;2.在CBD梯度剂量中,CBD 10 mg/kg为本实验的最佳干预剂量;3.CBD 10 mg/kg能改善TBI大鼠神经功能缺损,减弱星形胶质细胞激活和增加紧密连接蛋白表达,从而改善BBB结构完整性和渗透性,减轻TBI后继发性脑水肿。
张玉婷,张琪,郭抗抗,许信刚,周宏超[3]（2021）在《水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展》文中指出水通道蛋白（AQP）是细胞上存在的一种膜孔道蛋白。动物、植物、微生物细胞上均有水通道蛋白的表达,其主要功能是参与机体的水与电解质代谢。近年来,针对水通道蛋白在机体所发挥的功能方面研究较多,发现水通道蛋白不仅参与机体生理方面的调控,而且在一些疾病的发生发展过程中也发挥重要的作用。综述概括了水通道蛋白在脑、肺、肾脏、肠道等组织器官的定位;重点阐述了水通道蛋白在动物脑部疾病、肺部疾病、肾脏疾病、肠道疾病发展过程中所发生的变化。旨在为患病动物出现水与电解质代谢紊乱症状时,对水通道蛋白发生的变化研究提供参考。
田方泽[4]（2020）在《通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究》文中研究表明缺血性脑卒中是全球高发病率和高死亡率的主要疾病之一。脑水肿是缺血性脑卒中最大的并发症之一,是大面积缺血性脑卒中患者急性期恶化和死亡的主要原因。星形胶质细胞是脑水肿的重要参与细胞,其与脑血管功能变化,与水转运蛋白的活性改变密切相关,且在脑水肿的稳态中起到重要的作用。高迁移率组1（High-mobility group box 1,HMGB1）/Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）通路作为炎性的标志性通路,在缺血性脑卒中早期脑水肿的病程发展中起了十分重要的作用。HMGB1是炎症级联反应的有效诱导物,主要在胶质细胞上表达,引起神经水肿和诱导巨噬细胞合成肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白介素-6（inter-leukin-6,IL-6）、白介素 1β（inter-leukin-β,IL-1β）,导致炎症细胞的聚集和渗透,同时诱发炎症和一系列继发性组织损伤。因此,在缺血性脑水肿的研究中,星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路对AQP4和血脑屏障的影响具有重要的意义。通络清脑方（Tong LuoQingNao,TLQN）是本实验室前期研究用来治疗缺血性脑卒中急性期脑水肿的中药新药,其主要由三七总皂苷（Panax Notoginseng Saponins,PNS）、栀子苷（Geniposide,GE）,黄芩苷（Baicalin,BA）三类有效成分组成,对脑缺血的炎性反应有明显的抑制作用,具有缓解脑水肿,能降低水通道蛋白（Aquaporin-4,AQP4）的表达的作用。本课题研究TLQN及其有效组分对星形胶质细胞HMGB1/TLR4炎性通路对AQP4和血脑屏障影响,从而探寻TLQN抑制缺血性卒中脑水肿的作用机制。第一部分通络清脑方对缺血再灌注大鼠脑水肿及星形胶质HMGB1/TLR4通路和血脑屏障的影响目的:应用大鼠脑缺血再灌注模型,观察TLQN及其有效组分对缺血再灌注大鼠急性期脑水肿的影响和对星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路及血脑屏障的影响。方法:线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组（Sham）,再灌注组（Cerebralischemia-reperfusion,CIR）,通络清脑方（TLQN）42mg/kg 组（其中黄芩苷:栀子苷:三七总皂苷=1:12:6）,三七总皂苷（PNS）13.3mg/kg组、栀子苷+黄芩苷（BA+GE）26.5mg/kg+2.2mg/kg组,手术当天给药,尾静脉注射给药2d,1次/d。设立再灌注24h、48h为观察期。1.通过体重、神经功能评分、脑干湿重和功能性核磁共振的方法;观察TLQN对脑缺血再灌注大鼠急性期脑水肿的影响;2.采用生化法检测CIR大鼠脑缺血侧皮层和血液中IL-6,IL-1β,TNF-α浓度含量;3.采用Western Blot和免疫荧光的方法,检测TLQN及其有效组分对缺血再灌注大鼠24h,48h皮层AQP4、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。4.采用透射电镜和免疫组化的方法,检测TLQN及有效组分对缺血再灌注大鼠细胞肿胀及血脑屏障的影响。结果:1.体重和神经功能评分结果显示,再灌注大鼠出现明显的神经功能缺损症状,TLQN组大鼠神经功能缺损评分在24h,48h明显降低（P<0.05）,PNS组和BA+GE组在48h大鼠神经功能缺损评分出现明显降低（P<0.05）。2.脑含水量结果显示:与Sham组相比,缺血再灌注24 h大鼠,脑含水量明显增加（P<0.05）;TLQN组大鼠24 h后脑含水量明显降低（P<0.05）;再灌注48 h后,TLQN、BA+GE组和PNS组脑含水量明显降低（P<0.05）。核磁共振结果显示:再灌注24h后CIR大鼠大脑海马、胼胝体和前皮层三个区域ADC信号明显降低（P<0.01）,TLQN组、PNS组和BA+GE组大鼠前皮层和胼胝体ADC明显高于CIR组（P<0.05）,而海马区域有上升趋势（P>0.05）。3.生化检测显示,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显上升（P<0.01）;分别给予TLQN、PNS、BA+GE,24h和48h干预后,大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显下降（P<0.05）4.免疫荧光结果与Western-Blots相似,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高（P<0.01）,GFAP激活（P<0.01）,并且HMGB1、TLR4、p-NF-κB也明显上升（P<0.01）;分别给予TLQN、PNS、BA+GE,24h和48h干预后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显着降低（P<0.05）;GFAP明显收到抑制（P<0.05）,HMGB1、TLR4、p-NF-κB 含量也明显下调（P<0.05）5.透射电镜、GFAP的周长、和免疫组化Claudin-5的检测中显示,TLQN、PNS和BA+GE对缺血再灌注大鼠内皮细胞星形胶质细胞肿胀有明显的缓解作用,并且能够改善血脑屏障的紧密连接使其屏障功能得以修复。第二部分通络清脑方及其有效成分对氧糖剥夺/再复氧（Oxygen-glucose deprivation/Reperfusion,OGD/R）星形胶质细胞神经炎症及HMGB1/TLR4通路的影响目的:应用离体培养人脑星形胶质细胞与星形胶质细胞/微血管内皮细胞共培养实验方法,观察TLQN及单体对OGD/R损伤星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路及内皮细胞紧密连接的影响。方法:1.使用正常的星形胶质细胞检测TLQN及其各有效成分（PNS、BA、GE）的药物毒性浓度,以备后续的药效实验做基础。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,观察细胞形态。2.构建OGD/R细胞模型,氧糖剥夺6h/复氧复糖12h（OGD/R6/12）,星形胶质细胞分为正常（Control）组和OGD/R组,药物组（TLQN、PNS、BA、GE）分别在2.5～50 μg/ml进行干预,探索TLQN及单体对OGD/R损伤的星形胶质细胞的药效及给药浓度。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,观察细胞形态。3.采用生化法检测细胞培养有液IL-6,IL-1β,TNF-α的含量;Western Blot、免疫细胞荧光法检测细胞GFAP、AQP4、HMGB1、TLR4、p-NF-κB表达的变化。4.采用免疫荧光和透射电镜技术,在HA/BMECs共培养体系中发现,检测OGD/R后HA细胞的培养液可降低BMECs细胞的存活率,降低细胞间的紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1和影响细胞内部的影响。结果:1.通过药物毒性结合药效学实验可以看出,TLQN及其有效成分PNS、BA、GE在2.5～50μg/ml浓度内无明显毒性。2.与 OGD/R 后的 HA 细胞对比,TLQN（5μg/mL）和 PNS（10 μg/mL）干预后,细胞活力明显增强（P<0.05）且作用最佳,能够明显改善细胞状态。3.免疫荧光结果与Western-Blots结果相似:1)与Control组相比,OGD/R组HA细胞AQP4浓度明显升高（P<0.01）,,并且HMGB1、TLR4、p-NF-KB也明显上升（P<0.01）;给予 TLQN（5mg/kg）和 PNS（10mg/kg）干预后,HA 细胞 AQP4 浓度显着降低（P<0.05）;HMGB1、TLR4、p-NF-κB含量也明显下调（P<0.01）,且加入丙酮酸乙酯（EP）后,抑制了 OGD/R 组 HA 细胞 AQP4、HMGB1、TLR4、p-NF-κB 的表达。4.CCK8结果显示,GD/R后HA细胞外液对BMECs的存活率有显着的降低（P<0.05）;免疫荧光结果显示,BMECs细胞间的紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1有明显的下降。在TLQN和PNS干预之后,BMECs的存活率上升,细胞间的Claudin-5、ZO-1的数量增加,上述结果与EP干预后的结果有一致的趋势,表明TLQN具有通过星形胶质细胞抑制内皮细胞损伤的功能。结论:通过体内和体外实验研究表明,基于“神经血管单元”理论,通络清脑可以减轻缺血再灌注大鼠急性期脑水肿,尤其是皮层水肿的作用。其机制是通过星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路抑制AQP4表达和星形胶质细胞肿胀,同时减少水肿相关炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,;通络清脑方通过星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路增加内皮细胞的紧密连接程度,改善血脑屏障功能。其作用的有效组分是活血组（三七总皂苷）。
杨依霖[5]（2020）在《水通道蛋白（AQP）在糖尿病大鼠脑出血后继发性损伤的机制研究》文中研究表明目的:脑出血在脑卒中具有很高的发病率和死亡率,一旦发生脑内出血,血肿会引起躯体功能障碍,并且炎症反应,血凝块产生的神经毒性因子,周围脑水肿会引起继发性损伤,这些都会引起严重的神经功能障碍。众多危险因素均与脑出血有关,最重要的危险因素之一就是高血糖症,研究表明糖尿病患者较非糖尿病病人更易罹患脑出血,且预后较差。不仅如此,动物实验表明,在糖尿病脑出血后多种因素如氧化应激,炎症反应均与神经功能障碍有关。最近的研究表明,水通道蛋白（Aquaporins,AQPs）家族在缺血性脑卒中和脑外伤引起的脑水肿中起着至关重要的作用。有研究表明,内皮组织细胞的水通道蛋白参与新血管的形成。新生血管可以为损伤的大脑组织有效提高血氧成分,有利于损伤组织的修复,因此新生血管在脑出血及其后续的恢复起着非常重要的作用。然而,对AQPs在脑出血后新血管形成中的作用却缺乏研究。本次研究首先观察糖尿病对大鼠海马区AQP1,AQP3,AQP4和AQP9的蛋白水平的影响。然后观察胶原酶引起脑出血中AQP9蛋白水平,海马区神经元,新生血管形成和血脑屏障完整性的改变,并评估了糖尿病和非糖尿病大鼠脑出血后的神经功能,旨在通过以上研究探讨糖尿病对脑出血后神经恢复的影响。方法:选取平均体重在180g-200g的雄性SD大鼠,2只/笼,给予12h:12h的光照循环,给予充足的食物和水。一周后再进行实验。实验分组:1)空白对照组;2)胶原酶诱发脑出血非糖尿病大鼠组;3)和胶原酶诱发脑出血糖尿病大鼠组。腹膜内注射链酶佐菌素（STZ）诱导I型糖尿病,立体定向注射胶原酶诱发脑出血;所有的行为测试都在脑出血后7天进行,通过Longa评分、Berderson评分和肢体对称试验评分对大鼠行为学进行评估。应用FITC-dextron尾静脉注射和激光扫描共焦显微镜对损伤脑组织周围区域的微血管系统血液灌注情况进行半定量评估,用TUNEL法检测海马组织细胞凋亡水平。Evans染色及荧光素实时定量PCR检测血脑屏障破坏情况。蛋白免疫印迹法测定水通道蛋白及紧密结合蛋白的表达情况。数据用平均±标准差表示。所有的数据分析是用统计软件SPSS 20.0分析,P<0.05有统计学意义。结果1. 胶原酶诱发的脑出血对行为缺失的影响:脑出血七天后,相对于对照组,胶原酶诱发的脑出血longa评分,平衡木评分,Berderson评分,肢体对称评分增加(单因素方差分析F（2,24）=29.98,P<0.0001,Tukey检验,P<0.05),而糖尿病脑出血大鼠这些评分增加的更为显着（Tukey检验,P<0.05）。2. 胶原酶诱发的脑出血对AQPs表达的影响:糖尿病大鼠海马区AQP9表达较非糖尿病大鼠增加（t检验,P<0.01）,但AQP1,AQP3和AQP4不增加。在脑出血七天后相对于对照组,胶原酶诱发的脑出血在大鼠的海马区周围血肿组织AQP9表达增加。另外,在脑出血七天后,内生迟发超敏胶原酶引起的脑出血相对于非糖尿病大鼠,糖尿病大鼠在海马区周围血肿组织AQP9表达显着增加（Tukey检验,P<0.05）。3. 胶原酶诱发的脑出血对血管生成的影响:脑出血七天后,损伤的脑组织开始出现血管样结构和新血管的形成。相对于非糖尿病大鼠,糖尿病大鼠在颅内注射溶媒周围的血液灌注趋势是偏低的,但并没有明显的损害。但在糖尿病大鼠脑出血7天后脑组织周围的血流灌注降低,且随着灌注降低,更容易血管痉挛（单因素方差分析F（2,24）=21.01,P<0.001;Tukey检验,P<0.05）。在空白对照组,只检测出很少的体细胞核抗原（PCNA）阳性细胞,然而,非糖尿病大鼠脑出血七天后,在海马区周围血管性血友病因子（v WF）阳性扩张的血管中,PCNA阳性细胞是增加的（单因素方差分析F（2,24）=26.57,p<0.001;Tukey检验,P<0.05）。进一步的研究表明,与非糖尿病大鼠比较,糖尿病大鼠脑出血后v WF阳性的血管中,PCNA阳性细胞显着减少（Tukey test,P<0.05）。4. 胶原酶诱发的脑出血对海马区神经元缺失的影响:与空白对照组比较,非糖尿病大鼠的海马区注射胶原酶七天后会检测到TUNEL阳性细胞。(单因素方差分析F（2,24）=19.66,P<0.01;Tukey检验,P<0.05)。非糖尿病大鼠海马区的TUNEL阳性细胞比糖尿病大鼠显着减少（Tukey检验,P<0.05）。5. 胶原酶诱发的脑出血对血脑屏障（BBB）完整性的影响:糖尿病大鼠血脑屏障的完整性破坏更严重。诱导脑出血七天后,糖尿病大鼠和非糖尿病大鼠注射部位同侧的血脑屏障完整性都有所破坏,而对侧则不受影响(单因素方差分析F（2,24）=31.36,P<0.01;Tukey检验,P<0.05)。与空白对照组比较,脑出血的糖尿病和非糖尿病大鼠中海马区ZO-1和闭合蛋白的表达水平是降低的(单因素方差分析,F（2,24）=19.07,P<0.01),糖尿病大鼠ZO-1和闭合蛋白的表达水平则更低（Tukey检验,P<0.05）。结论:糖尿病加剧了脑出血后的继发性损害,包括血管生成损害,海马区神经元的缺失,和血脑屏障的破坏。AQP9对脑出血引起的行为缺失起着至关重要的作用。AQP9是糖尿病患者脑出血后恢复障碍的重要机制之一。本研究不仅提升了对卒中引起的脑损伤中AQPs介导的机制的理解,而且为糖尿病病人脑出血后促进恢复提供了潜在的治疗目标。
廖帅[6]（2020）在《亚低温对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织钙调蛋白、水通道蛋白-4的表达及脑水肿的影响》文中指出目的:创伤性颅脑损伤（traumatic brain injury,TBI）是一种高发病率的外伤性疾病,而颅脑损伤后继发性脑损伤如钙信号系统激活,神经细胞凋亡,脑水肿等均是颅脑损伤病情加重的重要因素。其综合治疗措施一直是神经外科研究的重要方向。亚低温（mild hypotherm ia）治疗是一种针对创伤性颅脑损伤的有效脑保护措施。本实验通过研究亚低温治疗对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织钙调蛋白（Calmodulin,CAM）、水通道蛋白-4（Aquaporin-4,AQP-4）的表达及脑水肿的影响,探讨颅脑损伤及亚低温治疗的相关机制,为亚低温治疗颅脑损伤进一步提供理论支持。方法:选取72只健康成年SD（Sprague-Dawley）大鼠,雌雄不限,体重270-300g,均由西南医科大学动物实验中心提供,标准条件饲养。随机分为假手术组（仅开骨窗,不打击,37℃）、常温组（开骨窗后打击制作颅脑损伤模型,37℃）及亚低温组[开骨窗后打击制作颅脑损伤模型,（32±0.5）℃并持续6h],每组24只。使用控制性皮层损伤（controlled cortical impact,CCI）颅脑创伤仪建立大鼠颅脑损伤模型,使用冰床、冰水浸浴及乙醇擦拭等方式制作亚低温治疗模型。各组于颅脑损伤后取6、12、24、48h四个时间点,各个时间点取6只大鼠行头颅MRI检查脑水肿程度及范围后断头处死取脑组织,分别采用荧光定量PCR法、免疫组化法和蛋白免疫印迹法（western-blot）检测各组大鼠脑组织的中CAM mRNA和蛋白表达情况,采用免疫组化法检测24h常温组和亚低温组大鼠脑组织中AQP-4表达情况。结果:1.通过荧光定量PCR法可知:亚低温组、常温组各时间点CAM mRNA表达较同时间点假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.001）;6、12、24h亚低温组CAM mRNA表达较同时间点常温组减少,差异有统计学意义（P<0.001）,48h亚低温组CAM mRNA表达较48h常温组差异无统计学意义（P>0.05）。2.通过western-blot法可知:亚低温组、常温组各时间点CAM表达相对于同时间点假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.001）;亚低温组各时间点CAM表达较同时间点常温组减少,差异具有统计学意义（P<0.001）。3.通过免疫组化法可知:亚低温组、常温组CAM表达相对于假手术组增加,差异有统计学意义（P<0.001）;亚低温组CAM表达较常温组减少,差异具有统计学意义（P<0.001）;24h亚低温组AQP-4表达较24h常温组减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.通过头颅M RI可知:亚低温组、常温组相对于假手术组脑水肿显着,脑组织水肿区体积明显增加;亚低温组脑组织水肿区体积相对于常温组减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.颅脑损伤后大鼠脑组织CAM表达增加,可能与继发性脑损伤机制有关。2.采取亚低温措施可以减弱大鼠颅脑损伤后脑组织CAM与AQP-4表达,提示亚低温可能通过抑制CAM及AQP-4表达,从而抑制钙信号系统激活及脑水肿等继发性脑损伤机制,发挥脑保护作用。3.采取亚低温措施可以减轻颅脑损伤后大鼠脑水肿程度,发挥脑保护作用
段升强,段虎斌[7]（2019）在《水通道蛋白-4与脑水肿的相关性研究进展》文中认为水通道蛋白4（AQP4）是一种高度表达于细胞膜且能够允许水分子跨膜转运的膜蛋白,主要位于脑内星形胶质细胞、软脑膜、室管膜上皮细胞等与水平衡密切相关的部位。AQP4的这种分布特征说明对水分子出入脑组织具有一定的调节作用,在各种脑水肿的发生发展中起重要作用。对AQP4的结构、分布、功能、调控机制及与脑水肿的关系进行综述。
彭云川[8]（2019）在《水通道蛋白-4和神经元素-3在创伤性脑损伤中的表达及分布》文中进行了进一步梳理目的:探讨水通道蛋白-4（Aquapofins-4,AQP4）和神经元素-3（Neurogenin3,Ngn3）在创伤性脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）后脑组织中的表达及分布,探索其在创伤性脑损伤中的作用及调控机制,为创伤性脑损伤后脑水肿的预防及临床治疗以及神经再生与神经功能恢复的研究提供实验室依据。方法:随机将30只健康成年SD大鼠（雌雄均有、体质量280-300g）分为正常对照组（5只）和创伤性脑损伤模型组（25只）,模型组再分为5个亚组（每组5只）。10%的水合氯醛3.5 ml/Kg腹腔麻醉后,采用自制改良的marmarou自由落体打击器撞击大鼠头部,建立大鼠创伤性脑损伤模型（TBI）,分别于6h、1d、2d、5d、7d收集模型组脑组织及正常对照组脑组织进行组织学处理,模型组与正常对照组均采用免疫组织化学SABC法染色观察AQP4和Ngn3在脑组织中的表达及分布,Western-blot检测AQP4、Ngn3蛋白在创伤性脑损伤后脑组织中的表达及变化。结果:AQP4在正常大鼠脑组织中不表达或表达较弱,阳性反应主要分布在脑组织中的血管内皮及胶质细胞;Ngn3在正常大鼠脑组织主要表达于室管膜上皮。TBI模型组6 h时,AQP4在脑组织内的表达无明显变化,和正常对照组比较,无统计学差异（P>0.05）,1 d时AQP 4大量表达于髓质、毛细血管内皮及神经胶质,2 d时表达开始下降,5 d时表达再次出现高峰,1 d后AQP4在模型组的表达与正常对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。模型组6 h时,大脑皮质可见少量的Ngn3阳性神经元,局灶性聚集或散在分布,1 d时海马区出现少量未分化的大颗粒细胞呈Ngn3阳性,5 d时海马区Ngn3阳性细胞数量达到高峰,高表达状态持续至第7 d,模型组各时段Ngn3的表达与正常对照组比较存在差异,并具有统计学意义（P<0.05）。结论:AQP4在创伤性脑损伤中的表达水平直接影响着与脑水肿的程度,对脑水肿的发生、发展具有重要的调控作用,在脑水肿的预防和靶向治疗上具有重要的临床意义;创伤性脑损伤后,Ngn3在皮质区神经元呈短暂性表达,可能与脑损伤的应激及神经元损伤有关,海马区未分化的大颗粒细胞可能为神经干细胞,其分化可能参与脑损伤后的神经元再生。
刘英亮[9]（2018）在《小分子药物adjudin在创伤性脑损伤后神经保护中的作用及机制》文中进行了进一步梳理研究目的:Adjudin是一种小分子化合物,起初被用作男性避孕药,近年来有文献提及其可能具有神经保护功能。然而,adjudin在创伤性脑损伤（traumatic brain injury,TBI）疾病中的应用尚未见报道。因此,我们利用TBI动物模型,研究了adjudin在治疗脑水肿、减轻血脑屏障损伤及改善神经功能恢复等方面的作用,并进一步探索了其潜在分子机制。研究方法:本实验使用C57BL/6雄性小鼠,随机分组后接受精确控制皮层损伤（Controlled cortex impact,CCI）造模或假手术,外伤后治疗组迅速予以腹腔注射50 mg/kg adjudin。我们应用mNSS评分、转棒实验、水迷宫实验等评价神经功能损伤程度。造模后3天利用磁共振T2WI序列评估脑水肿严重程度,DWI序列ADC图分析主要水肿类型,DCE序列评估血脑屏障（Blood brain barrier,BBB）渗透性变化。麻醉、处死小鼠后,使用干湿称重法计算脑组织含水比例,通过伊文氏蓝渗出实验和紧密连接蛋白表达检测评估BBB完整性,通过real-time PCR、western blot蛋白印迹法和免疫荧光染色等实验方法,检测了AQP4的表达变化,分析了炎症因子的释放情况,观察了炎症细胞的激活量,并深入探索了NF-κB分子通路与adjudin作用的关系。在体外实验中,我们使用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导下培养的原代星形胶质细胞炎症模型检测了炎症因子的释放。研究结果:adjudin治疗可以明显改善小鼠CCI造模后mNSS评分、转棒实验及水迷宫表现。在CCI造模后3天,与溶媒治疗组小鼠相比,adjudin还可以显着减少脑水肿体积,抑制细胞毒性脑水肿,降低BBB渗透性。adjudin可以减轻小鼠CCI造模三天后伊文氏蓝染料渗出,逆转紧密连接蛋白表达减少。adjudin降低脑外伤CCI造模后小鼠AQP4的基因和蛋白表达的上升,减少CCI造模后小胶质细胞和星形胶质细胞的激活,抑制小鼠体内以及体外星形胶质细胞培养中的炎症因子的释放。脑外伤及其周边区域蛋白样本的western blot蛋白印迹法检测结果提示,adjudin可抑制IKKα,IκBα/β和NF-κB p65蛋白的磷酸化,抑制NF-κB p65蛋白的转核过程。结论:小分子药物adjudin可以有效促进TBI后运动和认知等神经功能恢复。应用adjudin治疗可以有效降低TBI引起的脑水肿,减轻血脑屏障损伤。adjudin通过阻断NF-κB通路抑制了炎症发展,减少了星形胶质细胞激活及其足突膜上AQP4的表达,从而减轻星形胶质细胞肿胀,最终减轻脑水肿。这一发现提示我们,adjudin的应用是一种潜在的可以抑制TBI后脑水肿、促进神经功能恢复的治疗方法。
李英彬[10]（2018）在《水通道蛋白AQP4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究》文中提出目的:乳腺癌（BC）是女性最常见的恶性肿瘤,影响全世界数以百万计的妇女,了解促进乳腺癌进展的机制是非常必要的。已有证据表明,水通道蛋白（aquaporin AQPs）参与细胞的增殖、迁移、周围血管生成暗示其在肿瘤的发生、生长过程中起着重要作用,本文将研究AQP4在人乳腺癌细胞中的表达,并进一步探讨下调AQP4抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法:筛选培养乳腺癌细胞,采用Western Blot实验验证检测AQP4表达,通过siRNA转染下调AQP4水平,进行细胞RNA提取,采用RT-PCR、Westem Blot、细胞增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验采集相关数据并进一步分析,根据结果讨论并经实验验证可能的信号通路。结果:（1）AQP4 和 E-Cadherin 在人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231,T47D,MCF-7和ER-ZR-70）中均表达。AQP4在T47D细胞中表达水平最高,E-Cadherin表达无明显区别。（2）通过siRNA转染的细胞AQP4mRNA和蛋白表达明显减少（3）AQP4表达的下调降低T47D细胞和MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭能力（4）下调AQP4的表达会引起E钙粘蛋白表达的增强,抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭（5）下调AQP4可能通过MAPK/ERK通路介导降低乳腺癌细胞的增殖。结论:（1）人乳腺癌细胞中水通道蛋白4表达阳性（2）AQP4调控可以引起E钙粘蛋白表达的改变,通过MAPK/ERK通路的介导实现对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。
二、水通道蛋白在外伤性脑水肿中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、水通道蛋白在外伤性脑水肿中的作用（论文提纲范文）
（2）大麻二酚（CBD）改善脑损伤血脑屏障渗透性的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 大麻二酚在医学上的应用前景 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 水通道蛋白的结构和功能 |
| 2 水通道蛋白在疾病发生发展过程中的变化 |
| 2.1 水通道蛋白在脑部的分布和在脑部疾病发生发展过程中的表达 |
| 2.2 水通道蛋白在肺的分布和在肺部疾病发生发展过程中的表达 |
| 2.3 水通道蛋白在肾的分布和在肾脏疾病发生发展过程中的表达 |
| 2.4 水通道蛋白在肠道的分布和在肠道疾病发生发展过程中的表达 |
| 3 展望 |
（4）通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 高迁移率组1(HMGB1)在缺血性中风及其相关疾病研究进展 |
| References |
| 综述二 星形胶质细胞维持大脑中水平衡的作用 |
| References |
| 综述三 神经血管单元在缺血性脑水肿中作用机制和中药对其治疗的研究进展 |
| References |
| 前言 |
| 第一部分 通络清脑方对缺血再灌注大鼠皮层脑水肿及星形胶质HMGB1/TLR4通路和血脑屏障的影响 |
| 第一节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠急性期水肿的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠24h星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第三节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠48h星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第四节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠血脑屏障保护作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第一部分 小结 |
| 第二部分 通络清脑方及其有效成分对OGD/R星形胶质细胞神经炎症及HMGB1/TLR4通路的影响 |
| 第一节 通络清脑方及其有效成分对OGD/R损伤的星形胶质细胞的保护作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二节 抑制HMGB1后,TLQN和PNS对OGD/R损伤HA细胞HMGB1/TLR4/NF-κB通路及水肿相关炎性相关因子的作用机制研究 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第三节 抑制HMGB1后,TLQN和PNS对OGD/R损伤HA和BMECs细胞共培养紧密连接的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二部分 小结 |
| 结语 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 通络醒脑方主要成分的含量测定 |
（5）水通道蛋白（AQP）在糖尿病大鼠脑出血后继发性损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 AQP研究进展及缺血性和出血性脑卒中治疗方法的新进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）亚低温对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织钙调蛋白、水通道蛋白-4的表达及脑水肿的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 亚低温神经保护作用机制 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）水通道蛋白-4与脑水肿的相关性研究进展（论文提纲范文）
| 1 AQP4的概述及分子结构 |
| 2 AQP4的分布及功能 |
| 3 AQP4的调控机制 |
| 3.1 短期调节 |
| 3.1.1 磷酸化调节 |
| 3.1.2 胞内运输调节 |
| 3.2 长期调节 |
| 3.2.1 氧化应激调节 |
| 3.2.2 蛋白相互作用 |
| 3.2.3 精氨酸加压素 (AVP) |
| 4 AQP4与脑水肿 |
| 4.1 细胞毒性脑水肿 |
| 4.2 血管源性脑水肿 |
| 4.3 脑水肿治疗新靶点 |
| 5 结语与展望 |
（8）水通道蛋白-4和神经元素-3在创伤性脑损伤中的表达及分布（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 创伤性脑损伤(TBI) |
| 1.2 TBI的治疗及预后 |
| 1.3 AQP4 |
| 1.4 Ngn3 |
| 1.5 课题研究目的及意义 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物及分组 |
| 2.1.2 动物模型制备 |
| 2.2 主要试剂 |
| 2.2.1 常用试剂的配制 |
| 2.2.2 免疫组织化学试剂 |
| 2.2.3 Western Blot试剂配制 |
| 2.3 主要实验手术器械及用品 |
| 2.4 主要实验仪器 |
| 2.5 组织学技术及实验方法 |
| 2.5.1 标本收集及处理 |
| 2.5.2 组织切片制作技术 |
| 2.5.3 H& E染色 |
| 2.5.4 免疫组织化学SABC染色法 |
| 2.5.5 组织中总蛋白的提取 |
| 2.5.6 凝胶制备、上样及电泳 |
| 2.5.7 蛋白转印 |
| 2.5.8 牛奶封闭及抗体孵育 |
| 2.5.9 化学发光和曝光 |
| 2.6 结果判断 |
| 2.7 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 形态学观察 |
| 3.1.1 大体形态观察 |
| 3.1.2 显微形态观察 |
| 3.2 免疫组织化学观察AQP4 的表达及分布 |
| 3.3 免疫组织化学观察Ngn3 的表达及分布 |
| 3.4 Western-blot检测AQP4及Ngn3 的表达 |
| 3.4.1 BCA标准曲线绘制 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 创伤性脑损伤及脑水肿 |
| 4.2 AQP4 与脑水肿 |
| 4.3 AQP4在TBI中的表达及临床意义 |
| 4.4 海马结构与神经损伤修复 |
| 4.5 Ngn3与TBI |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表论文 |
（9）小分子药物adjudin在创伤性脑损伤后神经保护中的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写字母表 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 小分子药物adjudin促进小鼠TBI后神经功能恢复 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要研究对象 |
| 2.2.2 主要仪器与试剂 |
| 2.2.3 液体配置 |
| 2.2.4 建立小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型 |
| 2.2.5 小鼠腹腔注射adjudin |
| 2.2.6 mNSS神经功能学评分的测定 |
| 2.2.7 小鼠转棒实验 |
| 2.2.8 小鼠Morris水迷宫实验 |
| 2.2.9 统计方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 adjudin降低小鼠CCI造模后mNSS神经功能学评分 |
| 2.3.2 adjudin改善小鼠转棒实验表现,提高小鼠运动功能 |
| 2.3.3 adjudin改善小鼠Morris水迷宫实验表现,提高小鼠空间学习、记忆功能 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 小分子药物adjudin减轻小鼠TBI后脑水肿、减轻血脑屏障损伤 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要研究对象 |
| 3.2.2 主要仪器与试剂 |
| 3.2.3 液体配置 |
| 3.2.4 建立小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型 |
| 3.2.5 小鼠腹腔注射adjudin |
| 3.2.6 小鼠脑组织含水量的测定 |
| 3.2.7 小鼠脑部3.0T磁共振扫描及水肿体积定量 |
| 3.2.8 小鼠脑部7.0T磁共振DWI序列扫描及ADC值的测量与分析,DCE序列扫描及Ktrans值的分析 |
| 3.2.9 小鼠脑组织伊文氏蓝(Evans Blue)渗出测定 |
| 3.2.10 脑组织冰冻切片的制备 |
| 3.2.11 免疫荧光染色(冰冻切片) |
| 3.2.12 脑组织蛋白质提取 |
| 3.2.13 蛋白印迹实验(Western blot) |
| 3.2.14 总RNA提取(Trizol法) |
| 3.2.15 实时聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,real-time PCR) |
| 3.2.16 脑组织漂片的制备 |
| 3.2.17 免疫荧光染色(漂片) |
| 3.2.18 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 adjudin降低小鼠TBI手术后脑组织含水量 |
| 3.3.2 3.0T MRI提示adjudin降低小鼠TBI手术后脑水肿体积 |
| 3.3.3 7.0T MRIADC图提示TBI手术后三天小鼠以细胞毒性脑水肿为主,adjudin降低小鼠细胞毒性脑水肿 |
| 3.3.4 adjudin降低小鼠TBI手术后MRI所示Ktrans值的升高 |
| 3.3.5 adjudin降低小鼠TBI手术后Evansblue渗出 |
| 3.3.6 adjudin减轻小鼠TBI手术后紧密连接蛋白的破坏 |
| 3.3.7 adjudin降低AQP4的mRNA转录水平 |
| 3.3.8 adjudin降低AQP4的蛋白表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 小分子药物adjudin抑制小鼠TBI后及体外LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应及其机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要研究对象 |
| 4.2.2 主要仪器与试剂 |
| 4.2.3 液体配置 |
| 4.2.4 建立小鼠控制性皮层损伤(CCI)模型 |
| 4.2.5 小鼠腹腔注射adjudin |
| 4.2.6 总RNA提取(Trizol法) |
| 4.2.7 实时聚合酶链反应(Real-time polymerase chain reaction,real-time PCR) |
| 4.2.8 脑组织漂片的制备 |
| 4.2.9 免疫荧光染色(漂片) |
| 4.2.10 细胞计数 |
| 4.2.11 小鼠原代星形胶质细胞的分离、培养与鉴定 |
| 4.2.12 体外LPS诱导星形胶质细胞炎症模型的建立 |
| 4.2.13 CCK8试剂盒检测不同adjudin浓度下原代星形胶质细胞的活性 |
| 4.2.14 体外培养细胞的总RNA提取(Trizol法) |
| 4.2.15 脑组织蛋白质提取 |
| 4.2.16 蛋白印迹实验(Western blot) |
| 4.2.17 细胞核蛋白与细胞浆蛋白分离抽提 |
| 4.2.18 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA) |
| 4.2.19 统计方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 adjudin减少小鼠TBI手术引起的小胶质细胞和星形胶质细胞激活 |
| 4.3.2 adjudin抑制小鼠TBI手术引起的炎症因子释放 |
| 4.3.3 adjudin减少体外培养的星形胶质细胞中LPS诱导引起的炎症因子释放 |
| 4.3.4 adjudin增加小鼠TBI手术后抗炎因子的释放 |
| 4.3.5 adjudin抑制NF-κB分子通路的激活 |
| 4.3.6 adjudin减少核内NF-κB-p65分子 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
（10）水通道蛋白AQP4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 本研究特色和创新点 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略表 |
| 前言 |
| 第一部分 AQP4在乳腺癌细胞系中的表达 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 乳腺癌细胞AQP4下调对细胞增殖、迁移和侵袭的调节 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 AQP4抑制乳腺癌细胞增殖、迁移的相关作用机制探讨 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻博期间发表科研成果目录 |
| 致谢 |
四、水通道蛋白在外伤性脑水肿中的作用（论文参考文献）
- [1]脑损伤后继发脑水肿的分型及其分子机制研究进展[J]. 刘亚玲,于秋红,王丛,薛连璧. 中华物理医学与康复杂志, 2021(06)
- [2]大麻二酚（CBD）改善脑损伤血脑屏障渗透性的研究[D]. 蒋鸿雁. 昆明医科大学, 2021
- [3]水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展[J]. 张玉婷,张琪,郭抗抗,许信刚,周宏超. 动物医学进展, 2021(03)
- [4]通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究[D]. 田方泽. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]水通道蛋白（AQP）在糖尿病大鼠脑出血后继发性损伤的机制研究[D]. 杨依霖. 河北医科大学, 2020(02)
- [6]亚低温对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织钙调蛋白、水通道蛋白-4的表达及脑水肿的影响[D]. 廖帅. 西南医科大学, 2020(10)
- [7]水通道蛋白-4与脑水肿的相关性研究进展[J]. 段升强,段虎斌. 中西医结合心脑血管病杂志, 2019(15)
- [8]水通道蛋白-4和神经元素-3在创伤性脑损伤中的表达及分布[D]. 彭云川. 大理大学, 2019(01)
- [9]小分子药物adjudin在创伤性脑损伤后神经保护中的作用及机制[D]. 刘英亮. 上海交通大学, 2018
- [10]水通道蛋白AQP4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制研究[D]. 李英彬. 武汉大学, 2018(06)