一、英国培育出新型转基因克隆猪（论文文献综述）
李兆龙[1]（2021）在《猪克隆技术的研究进展》文中认为自从1986年我国首次自主成功克隆猪,克隆技术在猪的研究获得较大推进,国内陆续报道了地方品种猪的成功克隆。然而,对于克隆猪在生产中的应用研究,暂时未见有较多报道。本文从动物克隆技术的发展、国内外研究进展以及克隆技术在生猪生产应用中存在的难点和缺点进行阐述,进一步推动猪克隆技术在猪生产中应用。
詹群美[2]（2020）在《利用CRISPR/Cas9基因编辑技术生产MSTN基因敲除巴马香猪》文中提出巴马香猪是原产于中国巴马县的特色地方猪品种,具有风味好、抗逆性强等特点,但在生产上也表现出瘦肉率低、脂肪含量高、饲料转化率低和生长速度慢等不足。猪的传统遗传改良周期长、费用高,而以CRISPR/Cas9为代表的基因编辑技术能够高效、快速地对猪进行定向基因改造,因而在猪的遗传改良生产实践中具有巨大的应用潜力。肌肉生成抑制素（Myostatin,MSTN）是目前已知的影响动物体肌肉生长的负调控因子,研究表明MSTN自发功能缺失突变或经基因编辑敲除,能显着促进肌肉生长,提高包括猪在内的家畜瘦肉率。本研究旨在针对巴马香猪生长速度慢和瘦肉率低的劣势,通过利用CRISPR/Cas9来编辑巴马香猪MSTN基因,以实现促进巴马香猪生长速度和提高瘦肉产量的生产目的。首先设计基因编辑载体,其次通过脂质体转染方法制备MSTN基因编辑肾脏成纤维细胞系,然后用其制备体细胞核移植胚胎,最后通过胚胎移植产生基因编辑巴马香猪。研究表明,脂质体转染后共获得MSTN基因纯合突变单克隆细胞系7个,将#1-5（△1/△1）、#1-10（+1/+1）两株细胞进行外源基因整合及脱靶验证后,将通过体细胞核移植操作后获得的1000枚胚胎,移植给4头代孕母猪,其中两头成功妊娠,并产下3头存活克隆小猪,最终获得2头断奶雌性巴马香猪,整体克隆效率为0.3%,存活克隆猪健康状况良好,生长发育正常,与野生型相比体重存在显着差异,且未出现外源基因整合及脱靶现象,生产追踪表明MSTN敲除巴马香猪的生长速度明显加快,并表现出明显的双肌现象。MSTN基因敲除巴马香猪规模化推广应用将极大地提升其的生产效率,并推动相关产业的发展。
潘玉[3]（2019）在《沟通“不确定性”：转基因议题的知识建构研究》文中研究指明2000年以来,转基因议题逐渐转变为全球性的社会公共议题,引发广泛关注。转基因技术与应用迅速发展的同时,社会各方对转基因的争论从未终止,科学的“不确定性”特征突显。相对于其他公共议题的知识构建,科学议题有其特殊性:一方面,由于科学议题造成的风险与“不确定性”,媒介场域中的各利益相关者都可能会传达有效信息之外的信息,造成科学认知的混乱;另一方面,社会公众由于知识结构与个人经历的局限,很难直接对某一科学知识进行全面、深入地了解。因而,公众对于转基因议题的科学认知与理解往往更容易受到媒介场域的影响,媒体在转基因议题的知识建构中承担重要作用。由此,本研究通过对转基因这一科学争议中的“不确定性”进行综合而深入的考察,帮助社会各方更好地理解科学知识内涵,参与科学决策,从而缓解当前日趋矛盾的科学争议。媒体通过转基因议题的知识表征,可以更好地发挥其社会功用,为科学的“不确定性”沟通提供知识对话空间与传播平台,在一定程度上化解与规避转基因所引发的科学风险,从而减缓社会公共危机。同时,转基因议题的知识建构过程反映出科学议题的知识表征特征、实践规律与协商机制的转向,研究试图从理论层面完善与扩展科学知识传播内涵与理论框架。本研究较全面地论述了媒介与科学知识建构的关联性研究,搭建了媒介建构科学知识、引导科学理性的阐释框架,体现了科学传播领域的现实关切与理论关照,赋予该研究领域一定的创新性。本研究基于知识社会学视角,围绕科学的“不确定性”这一核心话题,就转基因议题的“不确定”语境及其要素研究、“不确定性”呈现内容研究、“不确定性”沟通意义研究、“不确定性”管理研究逻辑,探究转基因议题的知识建构过程——转基因议题的知识表征、知识实践、知识争论与知识共享。研究分为四大部分:第一,转基因议题的“不确定性”语境考察。“不确定”语境有哪些要素?呈现出怎样的语境特征?第二,转基因议题的话语变迁与知识实践研究。基于“不确定性”语境特征,从历时性维度,研究选择中美媒体关于转基因议题的媒体报道为研究文本进行梳理与总结,进而探讨不同社会语境下转基因议题的媒体“注意周期”与空间互动特征;从共时性维度,研究就议题内容、消息来源、话语立场与知识属性四个方面考察转基因议题的媒体框架与知识实践过程。第三,转基因议题的知识争论研究。依据反思冲突、化解冲突、超越冲突的研究逻辑,探讨不同相关利益主体如何围绕科学争议的“不确定性”展开知识的协商与对话?媒体在其中扮演什么样的角色?采用哪些话语修辞策略?科学与社会之间如何达成知识对话与共识?第四,转基因议题的知识共享与“不确定性”管理探究。如何反思风险社会的转基因科学知识的生产与传播?怎样完善与提升社会公众对转基因科学知识的理解?进而对我们反思科学知识传播的理念与模式有何启示?研究试图通过对上述研究问题的探讨,考察转基因议题的话语实践,并基于更宏观地社会语境,思考科学与社会之间的互动关系与影响。研究以转基因这一争议性科学议题为研究对象,选择2000-2018年期间的媒体报道本文进行话语分析、对比分析与个案探究。通过阐释转基因议题的话语建构特征反映科学议题的知识建构过程。转基因议题的知识实践最终目的是为了使社会各相关利益主体更好地理解科学知识,并在科学话语的互动协商中将专业的科学知识进行整合,形成日常化的、已被社会接受的“公共知识”,进而参与到科学知识的再生产与“不确定性”管理过程中。因此,在一个日益多元化社会中,不同文化、价值观之间的争议与冲突的释放与调试需要科学的对话与理解,完善与提升社会公众的科学素养以加强科学知识理解,搭建基于科学议题的“知识联盟”可实现转基因这一争议性科学议题传播的知识共享与理解,探索和推动多样化社会讨论与科学对话方式的形成,以消除知识间的差异与不对等,管理争议性知识建构过程中的科学“不确定性”,进而助力科学决策的制定与完善。
朱向星[4]（2018）在《广西地方特色小型猪的体细胞克隆与基因修饰》文中研究指明巴马小香猪与环江小香猪是分别原产于广西巴马瑶族自治县和环江毛南族自治县的地方小型猪品种,具有很高的农业开发和的生物医学研究利用价值。本研究将就体细胞克隆（Somatic Cell Cloning）及其介导的基因修饰（Genetic Modification）在巴马小香猪和环江小香猪的应用展开研究,以期为广西地方特色小型猪的种质资源保存、良种快繁、遗传选育以及培育具有农业和生物医学实际用途的体细胞克隆和基因修饰广西地方特色小型猪奠定基础。本研究主要开展的工作和结果简述如下:（1）体细胞克隆巴马小香猪的生产和转基因克隆胚胎的制备本章旨在建立巴马小香猪体细胞克隆和转基因克隆胚胎制备的技术体系。首先制备新生雄性巴马小香猪肾脏成纤维细胞,验证其不仅具有优异的细胞增殖活性,还能支持克隆胚胎完全的体外和体内发育潜能,并最终获得0.66%（11/1658）的体细胞克隆猪生产效率,表明新生猪肾脏成纤维细胞是一种适于生产体细胞克隆巴马小香猪的细胞资源。然后利用Xfect转染试剂和红色荧光蛋白DsRed转基因质粒来检验新生巴马小香猪肾脏成纤维细胞是否适于基因修饰操作。结果表明在经优化的转染条件（DNA剂量与Xfect试剂比例为5.0 μg/1.5 μL;转染孵育时间为12h）下可以获得16.6 ±0.6%的细胞转染效率,纯化培养的转基因细胞具有正常的细胞形态和旺盛的增殖活性。基因修饰未损害其支持克隆胚胎体外发育的潜能,而且外源基因DsRed能够在克隆胚胎体外各个发育时期均高效表达。（2）转增强型绿色荧光蛋白基因体细胞克隆环江小香猪的构建作为原产于广西境内的地方特色小型猪,环江小香猪的体细胞克隆和基因修饰尚未见报道。本章旨在基于巴马小香猪体细胞克隆和转基因技术体系,尝试构建转基因体细胞克隆环江小香猪。首先制备新生环江小香猪皮肤成纤维细胞,用Xfect转染试剂制备出表达绿色荧光蛋白的转基因细胞。然后利用体细胞核移植制备出克隆胚胎和在体外各个发育时期均表达绿色荧光蛋白的转基因克隆胚胎,并且验证采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid处理能显着提升环江小香猪克隆和转基因克隆胚胎的体外发育潜能。最后,通过胚胎移植成功获得存活转绿色荧光蛋白基因克隆环江小香猪,克隆效率为0.6%（3/504）,并且验证绿色荧光蛋白转基因能够在转基因环江小香猪多种器官或组织中表达。（3）转hGFAP-DsRed基因体细胞克隆巴马小香猪的构建本章旨在利用人胶质酸性蛋白（Human Glial Fibrillary Acidic Protein,hGFAP）启动子构建在星形胶质细胞中特异性表达标记基因DsRed的转基因体细胞克隆巴马小香猪,从而为星形胶质细胞相关研究提供一种大动物模型。首先制备转hGFAP-DsRed基因的巴马小香猪肾脏成纤维细胞并用于制备克隆胚胎,然后采取提高每头代孕母猪移植胚胎数的策略成功获得存活的转基因体细胞克隆巴马小香猪。转基因巴马小香猪健康状况和生长发育正常,基因型鉴定表明外源基因在其基因组中整合,组织学鉴定表明DsRed在星形胶质细胞中特异性启动表达。（4）携带帕金森氏症α-突触核蛋白致病突变巴马小香猪的构建本章旨在利用体细胞克隆技术结合CRISPR/CAS9介导的基因修饰技术构建携带帕金森氏症（Parkinson’s Disease,PD）α-突触核蛋白致病突变的巴马小香猪,从而为PD研究提供一种更有价值的大动物模型。首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备出携带导致PD的α-突触核蛋白三位点（E46K/H50Q/G51D）单等位基因突变的巴马小香猪肾脏成纤维细胞,并且验证其没有发生外源基因整合和脱靶。然后将基因修饰细胞经体细胞核移植技术获得9头存活克隆巴马小香猪,经基因型鉴定其中8头携带预期突变。基因突变巴马小香猪健康状况良好并表现正常的生长发育,但在3月龄时尚未表现PD样临床表征和病理变化。考虑到PD在人类临床上呈现非常高的年龄相关性,因此还需对基因突变巴马小香猪持续观察PD样病理特征的发生以评估该模型的有效性。综上所述,本研究将为利用体细胞克隆技术开展广西地方特色小型猪的种质资源保存和优良种猪快繁,以及为利用体细胞克隆技术介导的基因修饰技术培育具有农业和生物医学用途的基因修饰广西地方特色小型猪奠定基础。
陈建文[5]（2012）在《利用RNA干扰和乳腺生物反应器生产抗腹泻病转基因猪育种新材料的研究》文中研究指明仔猪腹泻是养猪业中常见的疾病，给世界养猪业造成了极大地经济损失。传统预防和治疗猪腹泻的方法如改善环境、服食抗菌素和免疫接种等缺点日渐明显，存在很多风险和问题，因此，迫切需要我们用新的方法和手段来有效控制这种疾病的发生。随着分子生物学技术的快速发展，通过转基因操作改良性状的生物育种方法，直接针对育种目标，目的性强、周期短，直接跨越基因互作的消极影响，可以同时改良多个重要经济性状，这是一种新的富有生命力的疾病控制方法，具有传统的免疫学方法控制疾病所无法比拟的优势。因此，利用转基因技术开展猪抗病育种研究，开发出具有自主知识产权和抗腹泻病转基因猪抗病新品种，提高疾病控制水平，有效控制这种疾病，意义重大。本研究主要从两个方面入手创制转基因抗病育种新材料：一是通过RNAi技术，培育特殊抗病力（ETEC F18）的转基因猪生物育种新材料；二是通过乳腺生物反应器模型培育一般抗病力抗病转基因猪生物育种新材料。主要结果如下：1.通过RNAi技术培育转基因猪育种新材料的工作如下：1)建立了一种基于Cre-LoxP的多启动子介导多个shRNA的方法，获得了干扰FUT1的转基因囊胚；2)建立了一种由慢病毒介导shRNA的方法，获得了7头转基因猪，并从其相关免疫学指标及小肠粘附抑制等生物学功能进行了抗病性研究；3)利用2)中获得的慢病毒感染猪小肠上皮细胞（IPEC-J2），结果显示RNA干扰前后F18大肠杆菌对小肠上皮细胞的粘附能力无显着差异，结合国内外研究，证明了FUT1不是F18大肠杆菌致病的主要受体基因；2.通过乳腺生物反应器模型培育转基因猪育种新材料的工作如下：1)为探讨转pBD-1基因小鼠在疾病方面的抗病作用，利用小鼠可以在SPF这一环境下饲养的这一优势，开展pBD-1在动物水平群体抗病性及上的功能研究，建立了一种猪防御素-1（pBD-1）转基因小鼠模型，为建立大动物抗病育种模型奠定了基础；2)为了评估表达载体设计的合理性和高效性，为进一步开展利用乳腺生物反应器模型培育一般抗病力的生物新品种奠定基础，建立了一种乳腺生物反应器载体验证的细胞模型，同时通过细胞模型预测转基因成体动物相关免疫应答通路奠定了基础及建立了研究模型；3)建立了转人溶菌酶的转基因细胞系，并进行移植，获得了9头胎儿；4)建立了转pBD-1的转基因细胞系，并进行移植，获得了转基因囊胚。本研究的创新点：首次建立了一种由4启动子介导4个shRNA的全部筛选标记可去除的表达载体，并首次获得了干扰FUT1的转基因囊胚；首次通过体细胞核移植获得了慢病毒介导的RNA干扰的大动物模型；首次在细胞学水平上证明了FUT1不是导致仔猪腹泻与水肿病的主效受体基因；首次利用细胞模型对猪防御素进行了研究，初步建立了一种乳腺生物反应器的细胞模型；首次获得了转pBD-1的转基因小鼠与转基因猪囊胚。
索郎拉姆[6]（2011）在《转基因技术提高动物生产性能的研究进展》文中指出动物转基因技术是在基因工程、细胞工程及胚胎工程的基础上发展起来的一种综合性的生物技术。利用该技术,人类可以按照自己意愿去改变动物的遗传组成,提高动物生长率,改进动物脂肪质量、动物乳品质量以及羊毛产量和品质,还可获得用于治疗或预防人类疾病的转基因生物药品等。然而,动物转基因技术仍在探索之中,许多问题尚未解决,转基因动物的往往出现异常表现,身体异常,成活率和繁殖力低下;转基因动物还存在一些潜在危险,转基因移植可能加大人畜共患病的传播机会,转基因动物产品的安全性不能确定,还会引发一系列社会伦理等问题,需要谨慎对待,必须严格执行国际转基因食品法典,整合资源,加强安全管理,建立健全一套科学的评价办法,正确宣传转基因技术及其产品。
张然,王媛媛,鲍永华,赵杰,李宁[7]（2010）在《转基因动物应用的研究现状与生物安全评价》文中研究说明转基因动物技术自诞生以来在医药、农业、环保、生物材料等方面展示了广阔的应用前景。本文就动物转基因的应用及其产业化前景进行了概述,并从全球角度对转基因生物安全作出评估。
王睿琪,陈斌[8]（2010）在《转基因技术在猪的分子育种中的应用》文中指出随着多种转基因动物问世,转基因技术已成为现代生物技术中一个重要的研究领域,是21世纪生物技术发展的热点之一。综述了我国猪的分子育种现状以及转基因研究方法及其在猪的育种上的应用,同时指出了转基因动物存在的问题。
范守城,张云茹,罗敏,王金勇[9]（2005）在《猪克隆技术的研究进展及其应用前景》文中研究表明
奇云[10]（2002）在《向异种器官移植迈出的重要一歩》文中提出英国PPL医疗公司2002年1月2日宣布,该公司的研究人员日前培育出了5只新型转基因克隆猪,它们体内有一个基因被“关闭”了。研究者认为,这是异种器官移植研究领域的又一重要进展,将给器官移植业带来一场革命。或许,通过异种器官移植来挽救人类生命的梦想已不再遥远。
二、英国培育出新型转基因克隆猪（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、英国培育出新型转基因克隆猪（论文提纲范文）
（1）猪克隆技术的研究进展（论文提纲范文）
| 1 动物克隆技术简介 |
| 1.1 胚胎分割克隆技术 |
| 1.2 胚胎细胞核移植 |
| 1.3 胚胎干细胞核移植 |
| 1.4 胎儿成纤维细胞核移植 |
| 1.5 体细胞核移植 |
| 1.6 胚胎嵌合 |
| 2 猪的胚胎克隆 |
| 2.1 猪克隆技术简介 |
| 2.2 猪克隆研究进展 |
| 2.3 猪的克隆技术 |
| 2.3.1 卵母细胞的体外成熟、受精和培养 |
| 2.3.2 核转移 |
| 2.3.3 胚胎移植 |
| 4 存在的问题与不足 |
| 5 结论 |
（2）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术生产MSTN基因敲除巴马香猪（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 质粒与菌种 |
| 2.1.2 动物实验伦理 |
| 2.1.3 主要耗材 |
| 2.1.4 主要试剂与溶液配制 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 基因编辑载体构建 |
| 2.2.2 基因编辑细胞系制备与鉴定 |
| 2.2.3 基因编辑克隆猪生产与鉴定 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 基因编辑载体构建与分析 |
| 3.1.1 巴马香猪MSTN基因1 号外显子序列分析 |
| 3.1.2 基因编辑靶位点sg RNA设计与鉴定 |
| 3.2 基因编辑细胞系构建与鉴定 |
| 3.2.1 基因编辑细胞基因分型 |
| 3.2.2 外源基因整合鉴定 |
| 3.2.3 脱靶鉴定 |
| 3.3 基因编辑克隆猪生产 |
| 3.3.1 体细胞核移植与胚胎移植 |
| 3.3.2 基因编辑克隆猪鉴定 |
| 3.3.3 基因编辑克隆猪生长发育追踪 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 中国地方猪种亟需遗传改良 |
| 4.2 CRISPR/Cas9 基因编辑在中国地方猪遗传改良上具有重要作用 |
| 4.3 利用 CRISPR/Cas9介导MSTN基因编辑能显着促进巴马猪生长 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他成果 |
| 附录 |
| 附录A 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录B |
| 附录C 英文缩略词表 |
（3）沟通“不确定性”：转基因议题的知识建构研究（论文提纲范文）
| 内容摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论:转基因议题的发展与影响 |
| 第一节 研究缘起：作为社会公共议题的科学知识传播 |
| 一、科学知识传播的演变与实践 |
| 二、“科学媒体化”：转基因议题的媒体呈现 |
| 三、转基因议题带来的“不确定性”沟通与知识争论 |
| 第二节 文献综述：转基因议题、沟通“不确定性”与知识传播 |
| 一、科学知识传播中的转基因议题研究 |
| 二、媒体与转基因议题的“不确定性”沟通研究 |
| 三、媒体与科学家、社会公众的关系探讨 |
| 四、转基因议题的知识建构研究 |
| 第三节 理论工具：理解科学的知识社会学取向 |
| 一、作为知识的转基因议题 |
| 二、科学知识与社会的互动关系 |
| 三、语境成为科学知识传播的重要变量 |
| 第四节 研究意义与研究目的 |
| 一、研究意义与价值 |
| 二、研究目的与内容 |
| 第五节 研究方法与设计 |
| 一、研究方法 |
| 二、研究文本选择与说明 |
| 第二章 转基因议题的知识表征与“不确定性”语境 |
| 第一节 转基因议题的演变逻辑与知识特征 |
| 一、转基因议题的演变逻辑 |
| 二、转基因议题的知识构成要素及特征 |
| 第二节 转基因议题的多元知识争论 |
| 一、转基因技术与产品的安全性问题 |
| 二、转基因的引进与商业化推广问题 |
| 三、转基因技术与产品对人类社会生活的影响问题 |
| 第三节 转基因议题的“不确定性”语境特征 |
| 一、科学技术自身的“不确定性” |
| 二、被媒体建构的科学“不确定性” |
| 三、被各相关利益主体认知的科学“不确定性” |
| 第三章 转基因议题的知识实践与“不确定性”呈现 |
| 第一节 中美转基因议题的媒体报道趋势变化 |
| 一、我国转基因议题的“注意周期” |
| 二、美国转基因议题的“注意周期” |
| 三、中美转基因议题的空间互动 |
| 第二节 我国转基因议题的媒体框架与知识实践 |
| 一、议题内容与分布：经济与全球化议题占据主导 |
| 二、消息来源：科学专家成为重要信源 |
| 三、话语立场：先“挺”后“反”的话语实践 |
| 四、知识属性：陈述性知识与程序性知识生产呈现不对等特征 |
| 第三节 转基因议题的科学“不确定性”呈现 |
| 第四章 转基因议题的知识争论与“不确定性”沟通 |
| 第一节 反思冲突：转基因议题的知识生产困境 |
| 一、“挺转”、“反转”之争背后的冲突性科学话语 |
| 二、转基因议题的理性冲突与多元对话 |
| 三、冲突性科学话语开启“不确定性”沟通的可能性 |
| 第二节 化解冲突：转基因议题传播的修辞策略 |
| 一、修辞资源：运用科学理论与论证依据 |
| 二、修辞工具：引入专业身份与知识背景 |
| 三、修辞技巧：使用数据/实例 |
| 四、修辞手段：诉诸于权威声誉 |
| 第三节 超越冲突：科学与媒体的冲突与合作 |
| 一、媒体在转基因议题传播中的角色功能 |
| 二、科学家与媒体的互动关系 |
| 三、科学家与媒体的知识对话与沟通 |
| 第四节 转基因议题的科学“不确定性”沟通 |
| 第五章 转基因议题的知识共享与“不确定性”管理 |
| 第一节 由“专业知识”到“公共知识”：转基因议题的知识共享 |
| 一、新的科学概念与转基因议题的勾连关系 |
| 二、由“科学问题”向“社会公共议题”的构建 |
| 三、转基因议题的知识协商与共享 |
| 第二节 由“知晓”到“理解”：公众科学素养的完善与提升 |
| 一、跨越公众与科学之间的知识鸿沟 |
| 二、打破公众与专家之间的专业壁垒 |
| 三、建立公众与政府之间的对话关系 |
| 第三节 “知识联盟”：转基因议题的“不确定性”管理 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 后记 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（4）广西地方特色小型猪的体细胞克隆与基因修饰（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 广西地方特色小型猪 |
| 1.3 基因修饰猪的构建方法 |
| 1.3.1 原核注射法 |
| 1.3.2 慢病毒转染法 |
| 1.3.3 精子介导法 |
| 1.3.4 体细胞核移植法 |
| 1.4 核移植技术在猪基因修饰中的应用 |
| 1.4.1 猪核移植技术发展历程 |
| 1.4.2 应用核移植构建随机整合和同源重组基因修饰猪 |
| 1.4.3 核移植结合转座子技术 |
| 1.4.4 核移植结合干细胞技术 |
| 1.4.5 核移植结合基因编辑技术 |
| 1.5 体细胞克隆与转基因克隆猪生产技术体系优化 |
| 1.5.1 供体细胞基因修饰 |
| 1.5.2 卵母细胞的获取与成熟培养 |
| 1.5.3 克隆胚胎构建 |
| 1.5.4 克隆胚胎体外培养 |
| 1.5.5 胚胎移植 |
| 1.6 猪体细胞克隆和转基因克隆技术在农业领域的应用 |
| 1.6.1 利用体细胞克隆技术进行猪种质资源保存和良种快繁 |
| 1.6.2 利用转基因克隆技术培育转基因猪新品种 |
| 1.7 猪体细胞克隆和转基因克隆技术在生物医学领域的应用 |
| 1.7.1 制备同型和近交系猪用于生物医学研究 |
| 1.7.2 培育猪-人异种移植器官 |
| 1.7.3 构建人类疾病基因修饰猪模型 |
| 1.8 开展广西地方特色小型猪体细胞克隆和基因修饰的意义 |
| 第二章 体细胞克隆巴马小香猪的生产和转基因克隆胚胎的构建 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 动物材料 |
| 2.2.2 主要仪器与耗材 |
| 2.2.3 主要试剂与溶液配制 |
| 2.2.4 实验方法 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 新生巴马小香猪肾脏成纤维细胞的制备 |
| 2.3.2 巴马小香猪克隆胚胎的构建 |
| 2.3.3 克隆巴马小香猪的生产 |
| 2.3.4 DNA剂量对细胞转染率和存活率的影响 |
| 2.3.5 孵育时间对细胞转染率和存活率的影响 |
| 2.3.6 转基因巴马小香猪肾脏成纤维细胞的制备 |
| 2.3.7 转基因与非转基因巴马小香猪克隆胚胎体外发育潜能的比较 |
| 2.3.8 转基因巴马小香猪克隆胚胎荧光观察 |
| 2.4 分析与讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 转增强型绿色荧光蛋白基因体细胞克隆环江小香猪的构建 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 动物材料 |
| 3.2.2 主要仪器与耗材 |
| 3.2.3 主要试剂与溶液配制 |
| 3.2.4 实验方法 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 环江小香猪皮肤成纤维细胞的制备 |
| 3.3.2 转GFP基因环江小香猪皮肤成纤维细胞的制备 |
| 3.3.3 环江小香猪克隆与转基因克隆胚胎的制备与体外发育 |
| 3.3.4 Scriptaid提高环江小香猪克隆与转基因克隆胚胎体外发育潜能 |
| 3.3.5 转基因环江小香猪的生产 |
| 3.3.6 细胞与组织荧光观察 |
| 3.4 分析与讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 转hGFAP-DsRed基因体细胞克隆巴马小香猪的构建 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 动物/细胞材料 |
| 4.2.2 主要仪器与耗材 |
| 4.2.3 主要试剂与溶液配制 |
| 4.2.4 实验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 转hGFAP-DsRed基因体细胞制备 |
| 4.3.2 转基因巴马小香猪的生产 |
| 4.3.3 基因型鉴定与转基因克隆猪生长发育追踪 |
| 4.3.4 组织学鉴定 |
| 4.4 分析与讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 携带帕金森氏症α-突触核蛋白致病突变巴马小香猪的构建 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 动物/细胞材料 |
| 5.2.2 主要仪器与耗材 |
| 5.2.3 主要试剂与溶液配制 |
| 5.2.4 实验方法 |
| 5.3 试验结果 |
| 5.3.1 突变靶点设计 |
| 5.3.2 同源修复模板质粒和CRISPR/Cas9质粒的制备 |
| 5.3.3 基因编辑细胞的制备 |
| 5.3.4 基因编辑体细胞克隆猪的生产和基因型鉴定 |
| 5.3.5 组织病理鉴定 |
| 5.4 分析与讨论 |
| 5.5 小结 |
| 总结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩写-中文名称对照表 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文 |
（5）利用RNA干扰和乳腺生物反应器生产抗腹泻病转基因猪育种新材料的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 插图（表）清单 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1 猪腹泻与水肿病概况 |
| 1.1 猪腹泻与水肿病现状 |
| 1.2 猪腹泻与水肿病病原学基础 |
| 1.2.1 肠毒素大肠杆菌 |
| 1.2.2 猪流行性腹泻病毒 |
| 1.3 猪腹泻与水肿病的免疫学与营养学调控基础 |
| 1.4 主要抗性与功能基因 |
| 1.4.1 ETEC 受体基因 |
| 1.4.2 抗菌肽基因 |
| 1.4.3 人溶菌酶基因 |
| 2 RNA 干扰技术与转基因育种研究概况 |
| 2.1 RNA 干扰技术的发现 |
| 2.2 RNA 干扰技术在畜禽哺乳类动物中的应用 |
| 2.2.1 RNAi 在口蹄疫中的应用 |
| 2.2.2 RNAi 在阮病毒中的应用 |
| 2.2.3 RNAi 在抗流感中的应用 |
| 2.2.4 RNAi 在其他疾病中的应用 |
| 2.2.5 RNAi 在肉质改良中的的应用 |
| 3 转基因猪研究概况 |
| 4 研究的目的和意义 |
| 第一章 利用 RNA 干扰技术生产抗仔猪腹泻与水肿病转基因猪育种新材料的研究 |
| 引言 |
| 第一节 利用 CRE-LOXP 介导的多启动子 RNA 干扰猪 FUT1 基因生产转基因克隆猪胚胎 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器及耗材 |
| 1.2 细胞与载体 |
| 1.3 溶液配制与试剂 |
| 1.4 引物合成和 DNA 测序 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 2.1.1 FUT1 基因 RNAi 干扰载体靶点设计、合成和构建 |
| 2.1.2 表达载体的线性化 |
| 2.1.3 pGenesil1.1，pGenesil1.2，pGenesil1.3，pGenesil1.4 表达载体的构建 |
| 2.1.4 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 2.2 Cre-LoxP 介导的 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 2.2.1 MCS-3s-LoxP-GFP 多功能全标记去除骨架载体的构建 |
| 2.2.2 Cre-LoxP 介导的 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 2.3 猪胎儿成纤维细胞培养和转基因稳定细胞系的建立 |
| 2.3.1 猪胎儿成纤维细胞系的建立(组织块法) |
| 2.3.2 猪胎儿成纤维转基因细胞系的建立 |
| 2.3.3 猪胎儿成纤维细胞转基因细胞系目的基因整合检测 |
| 2.3.4 Real-time PCR 对转基因稳定细胞系的检测 |
| 2.4 卵母细胞的体外成熟 |
| 2.5 体细胞核移植显微操作 |
| 2.6 重构卵的融合与激活 |
| 2.7 转基因胚胎的鉴定 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 3.2 Cre-LoxP 介导的 FUT1 基因多启动子 RNAi 干扰载体的构建 |
| 3.3 猪胎儿成纤维转基因细胞系的建立与鉴定 |
| 3.4 转基因克隆胚的构建与鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于 RNAi 研究策略 |
| 4.2 关于转基因动物生物安全 |
| 5 小结 |
| 第二节 慢病毒介导的 RNA 干扰猪 FUT1 基因生产转基因克隆猪 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器及耗材 |
| 1.2 细胞、载体与菌株 |
| 1.3 溶液配制与试剂 |
| 1.4 引物合成和 DNA 测序 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 FUT1 基因 RNAi 干扰载体靶点设计、合成和构建 |
| 2.1.1 siRNA 的设计 |
| 2.1.2 双链 Oligo（ds oligo）的制备 |
| 2.1.3 FUT1 基因 RNAi 干扰载体的构建 |
| 2.2 FUT1 基因过表达载体的构建 |
| 2.2.1 FUT1 基因的克隆 |
| 2.2.2 pEGFP-N1-FUT1 表达载体的构建 |
| 2.3 RNA 干扰有效靶点筛选 |
| 2.3.1 RNA 干扰有效靶点 mRNA 水平的筛选 |
| 2.3.2 RNA 干扰有效靶点蛋白水平的验证 |
| 2.4 RNA 干扰有效靶点慢病毒表达载体的构建 |
| 2.4.1 miR-3 靶点慢病毒载体的构建 |
| 2.4.2 miR-1 靶点慢病毒载体的构建 |
| 2.5 慢病毒包装和病毒滴度的测定 |
| 2.5.1 慢病毒包装 |
| 2.5.2 慢病毒滴度测定 |
| 2.6 猪胎儿成纤维细胞培养和药物（Blasticidin）致死曲线的摸索 |
| 2.7 猪胎儿成纤维细胞转基因细胞系的建立 |
| 2.8 转基因细胞系整合与干扰效率检测 |
| 2.9 转基因细胞系相关通路基因检测 |
| 2.10 ELISA 检测转基因细胞上清液中干扰素和细胞因子应答反应 |
| 2.11 卵母细胞的体外成熟 |
| 2.12 体细胞核移植显微操作 |
| 2.13 重构卵的融合与激活 |
| 2.14 转基因核移植胚胎体外发育研究 |
| 2.15 转基因核移植胚胎移植和妊娠检测 |
| 2.16 转基因克隆猪的产生及鉴定 |
| 2.17 转基因克隆猪耳缘成纤维细胞系的建立 |
| 2.18 转基因猪相关基因组织表达谱检测 |
| 2.19 转基因猪生理生化指标检测 |
| 2.20 转基因猪相关免疫学指标检测 |
| 2.21 转基因猪小肠上皮细胞体外黏附抑制 |
| 2.22 猪小肠上皮细胞 IPEC-J2 转基因细胞系的建立 |
| 2.23 猪小肠上皮细胞 IPEC-J2 转基因黏附检测 |
| 2.24 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 FUT1 基因 RNAi 干扰载体和过表达载体的构建 |
| 3.2 RNA 干扰有效靶点 mRNA 水平的筛选 |
| 3.2.1 RNA 干扰有效靶点 mRNA 水平的筛选 |
| 3.2.2 RNA 干扰有效靶点 mRNA 水平的筛选 |
| 3.3 RNA 干扰有效靶点慢病毒的包转及病毒滴度测定 |
| 3.4 猪胎儿成纤维转基因细胞系的建立 |
| 3.5 转基因细胞整合鉴定 |
| 3.6 猪胎儿成纤维转基因细胞干扰效率及凋亡基因检测 |
| 3.7 猪胎儿成纤维转基因细胞相关通路基因表达检测 |
| 3.8 猪胎儿成纤维转基因细胞上清液细胞因子及干扰素应答检测 |
| 3.9 转基因克隆胚胎体外发育 |
| 3.10 转基因克隆胚胎胚胎移植和产生 |
| 3.11 转基因克隆猪的鉴定 |
| 3.12 克隆猪耳成纤维细胞建系 |
| 3.14 转基因猪相关生理生化指标检测 |
| 3.15 转基因猪相关免疫学指标检测 |
| 3.16 转基因猪相关基因组织表达谱检测 |
| 3.17 转基因克隆猪小肠组织黏附实验 |
| 3.18 猪小肠上皮细胞 IPEC-J2 转基因细胞系的建立 |
| 3.19 猪小肠上皮细胞 IPEC-J2 转基因细胞系黏附实验 |
| 4 讨论 |
| 4.1 RNAi 研究策略的选取 |
| 4.1.1 有效靶点筛选策略 |
| 4.1.2 RNAi 对照组的选取 |
| 4.1.3 RNAi 效应的检测 |
| 4.1.4 RNAi 系统的选择 |
| 4.1.5 RNAi 中细胞来源的选择 |
| 4.2 转基因细胞系质量评价 |
| 4.3 核移植程序改进 |
| 4.4 转基因克隆胚胎体外发育研究 |
| 4.5 转基因猪抗病验证 |
| 4.5.1 转基因猪免疫指标检测 |
| 4.5.2 重组菌与仔猪小肠上皮细胞的体外黏附抑制试验 |
| 4.6 F18 受体鉴定 |
| 5 小结 |
| 第二章 利用乳腺组织特异性表达技术生产抗仔猪腹泻与水肿病转基因猪育种新材料的研究 |
| 引言 |
| 第三节 乳腺特异性表达猪防御素转基因小鼠模型的建立 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器及耗材 |
| 1.2 实验动物与载体 |
| 1.3 溶液配制与试剂 |
| 1.4 引物合成和 DNA 测序 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 pBD-1 基因片段的设计与合成 |
| 2.2 pBD-1 基因乳腺特异性表达载体的构建 |
| 2.3 pBD-1 基因乳腺特异性表达载体的提取与纯化 |
| 2.4 转基因小鼠的制备 |
| 2.4.1 Founder 转基因小鼠制备流程 |
| 2.4.2 Founder 转基因小鼠鉴定 |
| 2.4.3 F1~F2 代转基因鼠的产生与鉴定 |
| 2.4.4 转基因小鼠表达鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 pBD-1 基因乳腺特异性表达载体的鉴定 |
| 3.2 pBD-1 基因乳腺特异性表达载体显微注射 DNA 片段的获取 |
| 3.3 Founder 转基因小鼠鉴定 |
| 3.4 pBD-1 基因的遗传检测 |
| 3.5 pBD-1 基因的表达检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于乳腺特异性表达载体的构建 |
| 4.2 关于转基因小鼠的表达分析 |
| 5 小结 |
| 第四节 利用乳腺特异性表达人溶菌酶生产转基因猪克隆胎儿的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器及耗材 |
| 1.2 细胞、载体与菌株 |
| 1.3 溶液配制与试剂 |
| 1.4 引物合成和 DNA 测序 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 小鼠乳腺癌细胞株 C127 药物 G418 致死曲线的摸索 |
| 2.2 小鼠乳腺癌细胞株 C127 的转染、筛选与整合鉴定 |
| 2.3 外源激素诱导 hLYZ 在转基因细胞中的表达及浓缩 |
| 2.4 hLYZ 在 C127 转基因细胞 mRNA 水平上的表达 |
| 2.5 hLYZ 在 C127 转基因细胞重组蛋白的表达 |
| 2.6 C127 转基因细胞上清液中重组人溶菌酶活性分析 |
| 2.7 猪胎儿成纤维细胞转染 hLYZ 基因稳定细胞系的建立与鉴定 |
| 2.8 卵母细胞的体外成熟 |
| 2.9 体细胞核移植显微操作 |
| 2.10 重构卵的融合与激活 |
| 2.11 转基因胚胎胚胎移植 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 乳腺表达载体的抽提及纯化 |
| 3.2 小鼠乳腺癌细胞株 C127 的转染与整合鉴定 |
| 3.3 RT-PCR 检测 hLYZ 基因在 C127 细胞中的表达 |
| 3.4 Western blotting 检测目的蛋白在转基因细胞中的分泌 |
| 3.5 重组人溶菌酶生物学活性检测 |
| 3.6 转 hLYZ 猪胎儿成纤维转基因细胞稳定细胞系的建立与胚胎移植 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五节 利用乳腺特异性表达猪防御素生产转基因猪克隆胚胎的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器及耗材 |
| 1.2 细胞与载体 |
| 1.3 溶液配制与试剂 |
| 1.4 引物合成和 DNA 测序 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 小鼠乳腺癌细胞株 C127 的转染、筛选与表达验证 |
| 2.2 PBD-1 猪胎儿成纤维转基因细胞稳定细胞系的建立 |
| 2.3 转 PBD-1 基因克隆胚的构建 |
| 2.4 转 PBD-1 基因克隆胚的鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小鼠乳腺癌细胞株 C127 的转染与表达鉴定 |
| 3.2 猪胎儿成纤维细胞转染 pBD-1 基因稳定细胞系的建立与鉴定 |
| 3.3 转 pBD-1 基因克隆胚的构建与鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 关于重组蛋白的检测和纯化 |
| 4.2 关于乳腺特异性表达载体的构建 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 下一步工作设想 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）转基因技术提高动物生产性能的研究进展（论文提纲范文）
| 1 转基因动物技术的研究成果提高动物生长率 |
| 1.1 提高动物生长率 |
| 1.2 提高动物体脂肪质量 |
| 1.3 提高动物乳品质量 |
| 1.4 提高羊毛产量和品质 |
| 1.5 提供生物药品 |
| 1.6 提供动物模型和器官 |
| 1.7 提高动物的观赏价值 |
| 2 转基因动物存在的问题 |
| 2.1 转基因动物的异常表现 |
| 2.1.1 身体异常,成活率低 |
| 2.1.2 繁殖力低下 |
| 2.2 转基因动物的潜在危险 |
| 2.2.1 转基因动物可能加大人畜共患病的传播机会 |
| 2.2.2 转基因动物产品的安全性不能确定 |
| 2.2.3 引发一系列社会伦理问题 |
| 3 小结 |
| 3.1 严格执行国际转基因食品法典 |
| 3.2 建立一套科学的评价办法,正确宣传转基因技术及其产品 |
| 3.3 整合资源,加强安全管理 |
四、英国培育出新型转基因克隆猪（论文参考文献）
- [1]猪克隆技术的研究进展[J]. 李兆龙. 福建畜牧兽医, 2021(02)
- [2]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术生产MSTN基因敲除巴马香猪[D]. 詹群美. 佛山科学技术学院, 2020(01)
- [3]沟通“不确定性”：转基因议题的知识建构研究[D]. 潘玉. 华东师范大学, 2019(09)
- [4]广西地方特色小型猪的体细胞克隆与基因修饰[D]. 朱向星. 广西大学, 2018(06)
- [5]利用RNA干扰和乳腺生物反应器生产抗腹泻病转基因猪育种新材料的研究[D]. 陈建文. 安徽农业大学, 2012(07)
- [6]转基因技术提高动物生产性能的研究进展[J]. 索郎拉姆. 动物医学进展, 2011(04)
- [7]转基因动物应用的研究现状与生物安全评价[J]. 张然,王媛媛,鲍永华,赵杰,李宁. 生物产业技术, 2010(03)
- [8]转基因技术在猪的分子育种中的应用[J]. 王睿琪,陈斌. 畜禽业, 2010(03)
- [9]猪克隆技术的研究进展及其应用前景[J]. 范守城,张云茹,罗敏,王金勇. 上海畜牧兽医通讯, 2005(05)
- [10]向异种器官移植迈出的重要一歩[J]. 奇云. 生活与健康, 2002(07)