一、葡萄糖对JAL1~*杂交瘤细胞生长代谢的影响（论文文献综述）
孙晓莹[1]（2021）在《CPV ID3单抗细胞株无血清培养基的筛选优化》文中提出犬细小病毒病是危害我国养犬业最为严重的传染病之一,注射犬细小病毒单克隆抗体（Canine Parvovirus Monoclonal Antibody,CPV McAb）是治疗犬细小病毒病最有效的手段之一。用含血清的培养基培养细胞生产单克隆抗体弊端诸多,而用无血清培养基悬浮培养细胞,其培养工艺易于放大、且稳定性髙。为实现利用无血清培养基安全高效的培养细胞生产CPV McAb,本研究以稳定表达CPV McAb的贴壁培养的CPV ID3细胞株进行悬浮驯化和无血清培养基筛选优化,为CPV McAb的高效工业化生产提供基础数据支持。首先用商业无血清培养基通过连续传代培养方法将用含血清培养基培养的CPV ID3细胞驯化成能用无血清培养基培养的悬浮细胞,建立CPV ID3细胞株的无血清悬浮细胞主库。通过比较批次培养和恒速流加谷氨酰胺两种培养方式培养CPV ID3细胞的生长数据,确定用恒速流加谷氨酰胺作为无血清培养基筛选优化试验中的培养方式。在此基础上,利用Design Expert软件中的Simplex Centroid Design方法和Central Composite Design方法进行无血清培养基筛选优化试验,并使用最佳培养基配方SBMY培养基连续传代培养细胞以及与其他商业培养基进行对比来验证最优培养基,经验证筛选出的SBMY无血清培养基能维持CPV ID3细胞株稳定连续传代,最大活细胞密度达8.87×106cells/m L。以提高抗体效价为目的,将SBMY培养基作为基础培养基,进行补料培养基及其流加策略的筛选试验,经比较筛选出最佳补料培养基组合及其相对应的最佳流加策略,即从接种细胞后的第2天开始,每天流加占初始培养体积1.50%的Max FA、0.15%的Max FB、1.00%的小麦水解物及1.25%的200 m M谷氨酰胺。最后经摇瓶和3 L生物反应器验证筛选优化出的无血清培养基组合及其流加策略,最大活细胞密度可达14.70×106cells/m L,反应器体系与摇瓶体系中获得的抗体效价均可达到1:3840,且超过用原含血清的培养基灌流培养所获得的最高抗体效价1:640。综上所述,筛选优化出适合CPV ID3细胞株高效生产CPV McAb的无血清培养基组合。
贺凌煜[2]（2020）在《抗肺炎支原体特异性单克隆抗体的研究》文中提出肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）是能引起呼吸道感染的病原体,大约40%的社区获得性肺炎由此引起,易感人群为老人和婴幼儿,且近年来耐药菌株也逐年增加,严重危害人体健康。肺炎支原体培养产量低,给其研究带来了困难。目前尚未研发成功MP疫苗。疫苗研发工艺中,抗原的定量是疫苗研发瓶颈技术,同时,肺炎支原体的检测也依赖高质量的抗体。[目 的]获得特异性和高效性的抗MP单克隆抗体,为疫苗抗原定量和快速检测提供有力工具。[方 法]1、肺炎支原体培养方法的优化及其抗原纯化:将MP在体外大量培养,通过对培养基、培养条件、离心等工艺进行优化,获得纯度和蛋白量高的MP菌体。保存于-80℃冰箱备用。2、抗肺炎支原体特异性单克隆抗体杂交瘤株的筛选:将纯化后的抗原免疫Balb/C小鼠得到的脾细胞与SP2/0细胞融合,对培养上清呈阳性的杂交瘤细胞进行有限稀释,挑选单一、可以分泌高效性抗体的细胞株冻存。3、抗肺炎支原体特异性单克隆抗体的纯化及其鉴定:筛选出可以分泌特异性好、OD值高的杂交瘤细胞株,进行小鼠腹水培养。采用亲和层系纯化抗体;用SDS-PAGE电泳检测其纯度、BCA法测定其抗体浓度、与其他种支原体进行交叉反应检测其特异性、效价、抗体亚型、生长抑制试验（GI）和代谢抑制试验（MI）检测其对抗原的抑制程度,挑选出具有高特异性和高效价的单克隆抗体。4、肺炎支原体单克隆抗体在双抗体夹心ELISA法中的运用:采用兔抗MP多克隆抗体包被ELISA板,封闭后分别添加裂解和未裂解MP抗原,洗板后加入纯化的MP单抗,再添加羊抗鼠酶标抗体。采用棋盘试验优选出最佳抗体、酶标抗体稀释度,并进行交叉反应检测,并通过调整降低交叉反应,最后建立完善的双抗体夹心ELISA检测体系。[结 果]采用自制马血清大量培养MP,MP形态菌落未发生变化且产量较高。在离心力条件优化中发现,当采用3000 rpm和25000 rpm差速离心时,可获得杂质含量较低纯度较高的MP菌体。在制备单克隆抗体时,将抗原免疫三次后获得脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经过有限稀释多次筛选,共获得42株能够稳定分泌抗体的细胞株。经交叉反应得到9株无交叉反应的细胞株,抗体亚型为14B1、18F1、17A1为IgG2b,38A5、5B7 为 IgG1,14H1、14A5、14A1、18A2 为 IgG2a。抗体轻链均为 k 型。经过纯化,抗体纯度达标。经过效价检测以及生长代谢抑制试验选出4株效价较高的单克隆抗体。在双抗体夹心ELISA体系建立中,发现裂解后抗原抗体能够更好的结合。通过更换抗体、酶标稀释液,使交叉反应降低,在“S”型曲线中直线范围的R2可以达到0.98,可以运用于抗原定量。[结 论]1、优化肺炎支原体大量培养技术,可以降低成本获得大量MP;采用差速离心可以获得更高质量的MP抗原。肺炎支原体单克隆抗体制备中,成功筛选出9株高特异性抗体。2、经纯化鉴定,9株杂交瘤细胞均鉴定核实,且其中4株具有较高效价。3、利用得到的单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA体系后,可以检测稀释128倍后的抗原含量。
刘素生[3]（2019）在《抗铁蛋白杂交瘤细胞无血清培养技术研究》文中研究指明杂交瘤细胞具有无限繁殖和抗体分泌的双重优势,其规模化培养工艺是当前生产抗体产品的重要技术。规模化无血清培养杂交瘤细胞具有简化工艺、降低生产成本、提高抗体产量等优点。本文研究了血清对骨髓瘤及杂交瘤细胞生长的影响,在此基础上研发了适合杂交瘤细胞生长的无血清培养基,并进一步研究了杂交瘤细胞无血清培养基的转瓶扩大培养,主要内容包括以下几个部分:第一,配制含不同血清浓度（10%、7.5%、5%）的DMEM培养基,将生长状态良好、处于对数期的5H2、Sp2/0-Ab、Sp2/0三种细胞分别以三种不同的接种密度接种到含上述培养基的12孔细胞培养板中,考查了不同血清浓度、不同接种密度对细胞生长与增殖的影响。通过细胞计数仪测量的数据表明血清浓度对三种细胞都有较大影响,三种细胞在10%血清浓度培养基中正常生长而在低血清浓度中不能正常生长,在相同的血清浓度下,具有高细胞接种密度的细胞增殖较快并且倍增时间短。第二,将DMEM培养基、Ham’s F-12培养基和RPMI1640培养基按照一定比例配制成基础培养基,在此基础上加入不同量的胰岛素、水解蛋白、转铁蛋白、胆固醇和乙醇胺等成分配制成无血清低蛋白培养基。通过细胞的无血清驯化培养考查了细胞在配制的无血清培养基和市售的无血清培养基中的生长情况,结果表明,配制的Z4培养基与市售培养基有相同的效果,细胞可以正常生长。第三,用Z4和H-SFM培养基分别进行5H2细胞转瓶批培养,测量培养基中葡萄糖、谷氨酰胺、乳酸、氨及抗体浓度的变化情况。结果表明,H-SFM培养基细胞数量在第5天达到最高点14.57×105个/mL,抗体生成速率明显提高,到第7天时抗体浓度为39μg/mL。Z4培养基细胞数量在第6天达到最高点19.87×105个/mL,第7天时抗体浓度为56μg/mL。Z4培养基和H-SFM培养基中葡萄糖和谷氨酰胺浓度都呈现下降趋势,乳酸和氨浓度都呈上升趋势,适当提高葡萄糖和谷氨酰胺的起始浓度细胞生长也会有所提升。
孙静静,周伟伟,周雷鸣,赵巧辉,李桂林[4]（2018）在《杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展》文中指出单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。
刘国庆[5]（2011）在《表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的开发与优化》文中进行了进一步梳理单克隆抗体应用于医学很多领域,具有重要的社会和经济价值,然而由于动物细胞表达效率和规模的限制,目前其产能尚不能满足日益增长的市场需求。动物细胞培养基的开发与优化是动物细胞培养中的重要环节之一。传统的无血清培养基中通常含有潜在污染源的动物源蛋白,加之商业无蛋白培养基成本高、成分复杂且保密,不利于后续培养过程的开发和优化。因此,开发能支持细胞高密度生长和产物高浓度表达的无蛋白培养基,以满足抗体生产过程中的低成本和高产能的诉求,是抗体成功迈向产业化进程中一项必不可少的工作,也是本文研究工作的核心所在。本文以表达单克隆抗体的CHO细胞为研究对象,首先在已具有自主知识产权无血清培养基SF的基础上,开发了能够支持细胞生长和稳定传代的无蛋白培养基PF1,摇瓶批培养达到最高细胞密度与最高抗体浓度分别为35.0×105cells/mL和160 mg/L,与SF培养基相比分别提高了21%和36%。之后,进一步研究了主要营养物质如氨基酸、维生素和葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响。实验发现,对培养过程中一些消耗较多的氨基酸进行补充,虽然不能显着提高细胞密度,但却促进了培养后期细胞活性维持,使抗体产量提高了25%；而维生素能有效促进细胞生长并延长培养时间,3组维生素的添加分别使最终抗体浓度提高了22%、53%和24%；此外,葡萄糖作为重要的碳源和能源物质,其浓度过低或过高时均会抑制细胞生长,不利于抗体合成。通过维持葡萄糖在适当浓度（5-30mmol/L）,能有效促进细胞生长并延长培养时间,其批培养的抗体产量相比低糖与高糖浓度时分别提高了126%与67%。最后,基于上述研究结果,通过合理调整基础无蛋白培养基PF1中各营养物质的浓度配比,形成了优化的无蛋白培养基PF-Opt。细胞在该培养基中的最高密度与抗体产量分别达到52.6×105cells/mL和274 mg/L,其最高细胞密度是商业培养基HyQ SFM4CHO与Ex-cel1302的1.3和1.9倍,抗体产量则是二者的1.1和2.3倍。通过本文的工作,成功开发并优化了表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基,为单克隆抗体的高效工业化生产奠定了基础,并为其后续过程开发和优化提供了参考,同时对其它动物细胞无蛋白培养基的研究开发具有重要的借鉴作用。
胡素文[6]（2011）在《悬浮培养重组中国仓鼠卵巢细胞CHO-C12表达抗EGFRvⅢ嵌合抗体C12研究》文中提出嵌合抗体C12具有对EGFRvⅢ表达阳性肝癌的潜在治疗价值。本论文对表达该C12抗体的的rCHO-C12细胞进行了无血清悬浮培养驯化,并对其在体外培养的生长代谢特性及在生物反应器中的流加补料和灌注培养工艺进行了初步研究。1)采用直接降血清方法对rCHO-C12细胞进行了无血清驯化。rCHO-C12细胞完全适应EX302无血清培养条件后,最大细胞密度可达到6×106cells/mL;降血清后对数生长期内抗体C12的比产率略有降低；同时对该rCHO-C12细胞在EX302（JRH）,CHO-CD （Gibco）, SAF-CHO-G-001（清大有为）三种培养基中的生长曲线的比较,CHO-CD （Gibco）对rCHO-C12具有更好的细胞培养性能（如细胞存活率和最大活细胞密度）,但从经济和实验性能比较,EX302更适合于该CHO细胞在生物反应器内的大规模培养。2)比较了rCHO-C12细胞分别在摇瓶和5L生物反应器分批培养时的生长代谢及抗体表达特性。结果表明：（1）该细胞在生物反应器中培养时细胞生长最大密度为4×106cells/mL, C12抗体最高表达量达到190mg/L,其均约为摇瓶批培养细胞密度和抗体表达水平的2/3；（2）在生物反应器中批培养时葡萄糖的限制浓度在6mmol/L左右,而谷氨酰胺限制性浓度为1mmol/L左右。同时发现部分氨基酸如Asp、Glu、Asn、Cys、Thr、Met、Trp、Ser、Ile、Leu、Lys比消耗速率较大,并且Asp、Glu、Asn在细胞生长期耗竭,这可能是影响细胞在生物反应器中最大活细胞密度及抗体表达量的一个重要因素。这为建立氨基酸平衡流加培养提供了基础。3)建立了rCHO-C12细胞生物反应器中流加培养和灌注培养等方式高效表达C12抗体。结果表明：（1）氨基酸平衡流加培养和灌注培养有利于维持高细胞存活率,以延长培养周期；（2）与流加培养方式相比,灌注培养的底物的细胞得率(（YVx/Gluc和YVx/Glun）和底物形成抗体C12的得率系数（YAb/gluc和YAb/glun）均最大,分别为13.87×108cells/g、291.94×108cells/g、44.72mg/g和721.40 mg/g,而且灌注培养获得的总抗体量最多,达到1854mg,而氨基酸平衡流加培养达到的总抗体浓度最大,为282mg/L；同时,发现灌注培养代谢副产物乳酸和氨的最大浓度仅分别为15mmol/L和3.8mmol/L,低于其它培养方式。因此,灌注培养方式是rCHO-C12细胞表达抗体C12的最佳培养方式。
范里[7]（2010）在《GS-CHO细胞无血清培养过程的开发与优化》文中进行了进一步梳理肿瘤坏死因子受体-Fc抗体融合蛋白（TNFR-Fc抗体融合蛋白）在治疗风湿性、类风湿性关节炎方面具有明显的疗效,拥有广阔的市场前景和巨大的经济价值。但是由于动物细胞表达抗体融合蛋白能力低,以及现有培养工艺和培养规模的局限,目前TNFR-Fc抗体融合蛋白的产能不能满足病患者对其日益增长的需求。因此针对表达TNFR-Fc抗体融合蛋白的GS-CHO细胞,建立经济、高效的流加培养和灌注培养过程,满足制药企业对药品生产过程低成本、高产能和经济性的诉求,是TNFR-Fc抗体融合蛋白成功迈向产业化过程中一项必不可少的工作。在GS-CHO细胞培养过程中,营养物耗竭和代谢副产物累积所导致的培养环境恶化和宿主细胞抗体融合蛋白表达能力低下是限制/抑制细胞生长和产物表达的主要问题。为此深入认识GS-CHO细胞生长、代谢和产物合成特性,了解培养环境对细胞生理状态和产物合成的影响,是解决上述问题的前提,也是本文研究工作的核心所在。首先,本文通过37℃批式培养和流加培养实验系统研究了GS-CHO细胞的生长、代谢和产物表达特性。实验发现培养液中葡萄糖浓度对细胞生长、代谢及产物表达起重要作用。当葡萄糖浓度大于15 mmol/L时其利用率较低,乳酸的平均比生成速率和单位葡萄糖消耗的乳酸平均得率最大,分别为9.99 mmol/（109cells-day）和1.49 mmol/mmol,导致乳酸大量累积,从而加速培养环境的恶化；而当葡萄糖浓度低于5 mmol/L时,乳酸生成受到一定程度的限制,其比生成速率仅为1.01 mmol/（109cells-day）,但同时也限制了细胞生长及产物表达；当葡萄糖浓度维持在5-15 mmol/L时,其余营养物质（氨基酸和磷酸根等）的比消耗速率基本保持不变,细胞生长及产物合成不受限制,细胞平均比生长速率与抗体融合蛋白的平均比生成速率分别为0.7day-1和5.67 mg/（109cells-day）,且能有效地控制乳酸的生成。另外,通过测定和分析培养过程中氨基酸、磷酸根等营养物的消耗,发现基础培养基中的营养物浓度配比与其比消耗速率不够均衡,不能满足高密度、长时间维持过程中细胞对营养物的需求,其中亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸、缬氨酸和磷酸根的比消耗速率相对较大。在研究过程中发现温度对GS-CHO细胞生长、代谢和产物表达具有显着影响,为此本文开展了三种培养温度（30℃、33.5℃和37℃）条件下的批式培养和细胞生长-维持两阶段温度分别控制的流加培养实验。结果表明,随着培养温度的降低,细胞的比生长速率下降,特别在30℃培养条件下细胞生长完全受到抑制,细胞群体中处于G1/G0期的细胞比例、细胞干重以及单个细胞蛋白质、碳水化合物、脂类和核酸质量等均有不同程度的提高。另外实验也发现,低温（30℃）条件下营养物如葡萄糖、谷氨酰胺、谷氨酸和磷酸根的比消耗速率以及代谢副产物如乳酸、氨和丙氨酸的比生成速率明显降低,精氨酸和苏氨酸的比消耗速率却比37℃时提高了2.7倍和0.9倍,而其他营养物的比消耗速率基本保持不变。在上述实验基础上通过代谢途径流量分析,发现低温（30℃）条件下葡萄糖比消耗速率、进入糖酵解途径和磷酸戊糖途径的绝对流量与常温条件相比显着降低,但葡萄糖进入TCA循环的比例提高了125%,由丙酮酸生成代谢副产物乳酸的绝对流量从常温（37℃）培养时的0.765 mmol C/（109cells-day）锐减至低温（30℃）培养时的0.053 mmol C/（109cells-day）,降幅达90%。此外氨基酸参与细胞合成和生成代谢副产物丙氨酸的绝对流量减少,而用于抗体融合蛋白合成的绝对流量比常温（37℃）条件下提高了3-5倍。能量代谢分析也表明30℃时,细胞处于产能效率最高的状态,经氧化磷酸化途径生成ATP所占比例最高,为96.8%。由此可见,采用低温（30℃）培养方式能显着提高营养物的利用效率和能量代谢效率,抑制代谢副产物乳酸和丙氨酸的生成,能有效缓解营养物耗竭和代谢副产物累积的矛盾。在抗体融合蛋白表达方面,其比生成速率随着培养温度的降低而明显提高,30℃时其比生成速率最高,为18.64±1.46mg/（109cells-day）,比常温条件（37℃）提高了200%。进一步研究表明,低温（30℃）条件下GS-CHO细胞的抗体融合蛋白表达水平提高与产物目的基因mRNA转录水平的上调有密切关系,而且两者随着培养过程中活细胞密度的提高呈现显着下降,其中高密度维持培养的抗体融合蛋白比生成速率远低于低密度维持培养。采用平行实验方法专门考察了细胞生长-维持两阶段流加培养过程中的细胞低温维持阶段,分析了各细胞密度条件下的营养物、代谢副产物、环境参数和细胞本身等的差异,尚未发现维持阶段高细胞密度、低抗体融合蛋白表达水平的现象与已知营养物供给、副产物（乳酸、氨）累积、渗透压增高和细胞周期等差异有任何关系。最后,本文以上述GS-CHO细胞的生长代谢特性、化学计量学关系和动力学分析结果为基础,采用理性设计方法设计合理的流加和灌注培养基,平衡营养供应；以葡萄糖为关键控制参数,通过测定培养液中的葡萄糖浓度对其消耗进行及时预测,调整流加/灌注速率,既满足细胞生长代谢和产物合成对营养物的需求,又抑制副产物的累积,缓解/解决营养物消耗和代谢副产物累积之间的矛盾；在此基础上充分利用培养温度和细胞密度对TNFR-Fc抗体融合蛋白比生成速率的影响,采用控制细胞密度和降温维持手段提高GS-CHO细胞抗体融合蛋白表达水平,建立以满足细胞生长代谢需求和提高宿主细胞产物表达水平为基本原则的两阶段动态流加和灌注培养过程设计模型。在此控制模型的指导下,不仅能够较为均衡地提供营养物,而且也有效地控制了代谢副产物的生成和积累,从而大幅度延长了细胞合成抗体融合蛋白的维持时间,提高了过程生产效率。与批式培养过程相比,两阶段动态流加培养过程的培养周期延长了16天,TNFR-Fc抗体融合蛋白比生成速率达到17.37 mg/（109cells-day）,提高了1.9倍,浓度达到574mg/L,提高了11倍,目标产物的产率提高了2.4倍。另外,两阶段灌注培养过程的目标产物比生成速率、浓度和反应器体积产率等指标也有不同程度的提高。通过本文的研究工作,建立了经济、高效的GS-CHO细胞两阶段动态流加培养过程和两阶段灌注培养过程,为TNFR-Fc抗体融合蛋白的高效工业化生产奠定了基础。另外,本文所采用的研究方法和控制策略以及对GS-CHO细胞生长代谢所取得的认识,对其它带有GS系统的动物细胞培养过程的研究开发和抗体药物工业化生产过程的优化均有重要的借鉴作用。
安芳兰,杨保田,董文教,武发菊,宋玉霞,董金杰,牟克斌,刘学荣[8]（2009）在《动物细胞代谢工程进展》文中研究指明动物细胞被越来越广泛地用于工业生产,一些现代化企业已采用分子生物学技术,将一些比较重要的基因导入动物细胞,生产具有医用价值的药物。但该技术并未成熟,主要是因为体外培养的细胞,其生长代谢及生理模式都比较复杂,而且细胞的应答机制还受外界因素的影响。因此,采用细胞代谢工程手段,提高体外培养细胞的生长率、产品产率及有效性,成为人们追求的新目标。我们从细胞代谢中心途径、抑制细胞调亡的因素、细胞生长周期的控制及其相关代谢、多基因共表达代谢工程及糖基化代谢工程等方面对代谢工程进行阐述,为动物细胞的培养提供新的思路。
刘元花[9]（2008）在《杂交骨髓瘤细胞培养模型化研究》文中研究说明现代基因工程药物主要来自于重组微生物和动物细胞培养,如单克隆抗体、细胞生长因子和生长素等。动物细胞培养的突出优势在于在很多情况下能分泌出具有正确折叠和后修饰的、具有生命活性的蛋白质。然而,采用动物细胞培养获取的生物药品产率相当低。主要的原因有:1)培养条件的专一性;2)在培养条件的微小扰动下动物细胞的产率变化和细胞死亡的敏感性增加。欲实现培养过程的仿真、优化和控制,最终达到提高产率的目的,模型化是先导。本文以杂交骨髓瘤细胞培养为例,根据对动物细胞代谢机理和细胞周期机理的现有认知,研究了在不同应用层面上的动物细胞模型化方法,给出了模型的具体数学描述,并进行了初步验证。详细描述如下:首先,本文研究了杂交骨髓瘤细胞培养的改进的集总参数动力学模型（Macrokinetic Model with Lumped Parameters）。传统的集总参数动力学模型,尤其是Monod模型,形式简单并取得了广泛应用。然而,众所周知,Monod模型不能描述接种或补料操作后的细胞生长迟滞现象。为此,本文根据细胞代谢酶系调节机理,提出了模仿细胞内酶调节的代谢调节模型,该代谢调节模型与Monod模型相结合,可以更好的描述细胞比生长速率。另外,鉴于细胞培养过程中氨基酸的限制性影响,本文建立了重要氨基酸的代谢模型。通过这两方面的改进,使得集总参数动力学模型的实用性得到了增强,如模型能够描述氨基酸耗尽后细胞维持短期生长的现象。利用上述改进模型对杂交骨髓瘤细胞间歇培养和脉冲式补料间歇培养进行仿真,较好描述了活细胞和死细胞的密度以及葡萄糖、谷氨酰胺、赖氨酸和乳酸的浓度的动态变化。论文提供了仿真结果与实验值的对比。论文建立的第二个模型是基于细胞周期机理的杂交骨髓瘤细胞培养的群体平衡模型（Population Balance Model）。真实的细胞系统往往是一个异质系统,细胞群体中的个体表现出不同的细胞行为或细胞性状。获得细胞群体关于这些细胞行为或细胞性状的分布信息,对于与细胞周期相关的重组蛋白（如单抗）的产率优化至关重要。文献中平衡模型的优势正是在于描述细胞系统的各类分布信息。然而,目前动物细胞培养的平衡模型研究还有很大的提升空间,如细胞周期特性信息的充实和模型的验证。为此,本文根据细胞周期和周期调控机理的生物学信息,把细胞体积和DNA含量作为细胞周期时相以及时相内细胞与细胞之间的区分标志,进而建立了杂交骨髓瘤细胞群体平衡模型。这个模型能够直接仿真DNA和体积分布的动态变化。论文利用DNA分布实验数据验证了上述细胞群体平衡模型。实验验证是文献中现有平衡模型未能做到的事。细胞群体平衡模型还能用来计算细胞周期各时相的细胞分率（各时相细胞数目占总细胞数量的百分比）的动态变化,以及活细胞和死细胞密度、底物（葡萄糖和氨基酸）浓度以及副产物（乳酸）的浓度。对此,论文也给出了实验验证结果。与集总参数动力学模型相比,平衡模型能提供更多的用于细胞培养过程优化和控制的信息,如细胞周期各时相的细胞分率和DNA分布的动态变化,可以为细胞群体周期动力学的控制提供理论依据。同时,DNA分布的模型仿真有助于更好的设计细胞周期控制过程。然而,由于模型本身数学描述的复杂性,实现平衡模型仿真的计算负担远比集总参数动力学模型大得多,在实际应用中有一定的难度。论文建立的第三个模型是基于酶系调控的杂交骨髓瘤细胞培养控制论模型（Cybernetic Model）。控制论模型是从动物细胞内部代谢和代谢酶调节的机理分析出发,研究细胞生长、消耗底物和生成副产物的情况。控制论模型的前提假设为生物系统经过长期的进化,已经形成了一套自我优化的策略。基于这个前提,细胞可以通过对酶水平和酶活性的控制来调节细胞代谢网络生化反应的进行。在控制论代谢网络中,酶系根据最优化原则竞争利用胞内物质资源。根据文献中代谢机理的分析,谷氨酰胺的利用过程中存在转氨和脱氨作用的竞争,这种竞争直接影响到副产物氨和丙氨酸的生成,以往的控制论模型没有考虑到这一竞争关系。另外,以往的控制论模型往往忽略了氨基酸的（谷氨酰胺除外）竞争性利用。本文提出的控制论模型重点考虑了这两方面因素的影响。该模型不但能描述细胞生长、底物（葡萄糖和谷氨酰胺）代谢和副产物（乳酸、氨和丙氨酸）形成等宏观变量的动态变化,还能仿真细胞内部物质（代谢中间产物和酶）的动态变化,为细胞培养提供了胞内水平的控制变量。控制论模型考虑细胞代谢酶调节机理,因而能描述细胞生长对营养扰动的延迟响应。从这一点来看,控制论模型相比其它类型的代谢机理模型更具优势。以上三种模型化方法各有优势,适用于不同的场合:集总参数动力学模型结构简单,易于实现,适于环境扰动不太明显、不确定因素较少的培养过程;群体平衡模型侧重于提供细胞群体关于细胞周期特性的动力学信息,适用于重组蛋白对细胞周期特性比较敏感的细胞培养过程;控制论模型的细胞代谢和代谢调节机理性强,模型参数具有明确的物理意义,适用于环境或其它扰动比较明显、不定因素较多的培养过程。除此之外,本文还初步探讨了模型在细胞培养过程中补料策略优化和控制中的应用,给出了仿真研究结果。
牛红星,朱明龙,谭文松[10]（2007）在《杂交瘤细胞流加培养过程中不同拟稳态下的代谢动力学分析》文中指出采用流加培养方式,实现了杂交瘤细胞在营养物富裕、葡萄糖限制和谷氨酰胺限制3种条件下的拟稳态培养。代谢动力学分析表明:葡萄糖限制时,葡萄糖比消耗速率（qGluc）降低到1.1×10-9mmol/（cell·d）,相比营养物富裕时降低了40%以上;乳酸生成量降到最低。谷氨酰胺限制时,谷氨酰胺的最小比消耗速率（qGln）约为0.28×10-9mmol/（cell·d）,相比营养物富裕时降低了56%以上;氨的比生成速率降低到0.23×10-9mmol/（cell·d）,营养物富裕时为0.93×10-9mmol/（cell·d）;丙氨酸的生成降到最低。3种拟稳态下单抗的比生成速率都在29×10-937×10-9mg/（cell·d）。本文的流加培养设计方法为快速认识细胞的代谢规律,设计相应的培养基和调控策略,实现细胞高密度和产物高浓度的培养过程提供了指导。
二、葡萄糖对JAL1~*杂交瘤细胞生长代谢的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、葡萄糖对JAL1~*杂交瘤细胞生长代谢的影响（论文提纲范文）
（1）CPV ID3单抗细胞株无血清培养基的筛选优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 犬细小病毒病及犬细小病毒单克隆抗体 |
| 1.1.1 犬细小病毒病 |
| 1.1.2 犬细小病毒单克隆抗体 |
| 1.2 动物细胞培养技术概况 |
| 1.2.1 动物细胞培养技术 |
| 1.2.2 动物细胞培养技术的应用 |
| 1.3 CPV ID3细胞的概述 |
| 1.4 无血清培养基 |
| 1.4.1 无血清培养基的分类 |
| 1.4.2 培养基的理化性质 |
| 1.4.3 培养基的基本成分 |
| 1.4.4 无血清培养基的优化方法 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 1.6 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验细胞株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 仪器与设备 |
| 2.2 培养基配制 |
| 2.3 细胞培养方法 |
| 2.3.1 贴壁培养 |
| 2.3.2 悬浮培养 |
| 2.4 检测分析方法 |
| 2.4.1 细胞计数 |
| 2.4.2 代谢副产物浓度的测定 |
| 2.4.3 抗体表达量的检测 |
| 2.4.4 抗体效价的检测 |
| 2.5 计算方法 |
| 2.5.1 细胞生长速率 |
| 2.5.2 活细胞密度对时间的积分 |
| 2.6 CPV ID3细胞株的悬浮驯化试验 |
| 2.7 不同细胞培养方式的对比试验 |
| 2.8 基础培养基的筛选优化 |
| 2.8.1 培养基混料试验 |
| 2.8.2 培养基组分优化试验 |
| 2.8.3 优化结果验证 |
| 2.9 补料培养基的筛选优化 |
| 2.9.1 补料培养基种类和补料体积的筛选试验 |
| 2.9.2 植物水解物的筛选试验 |
| 2.10 3L生物反应器验证试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 CPV ID3细胞的无血清悬浮驯化结果 |
| 3.1.1 CPV ID3细胞株无血清悬浮驯化的过程 |
| 3.1.2 CPV ID3细胞株悬浮细胞库的建立 |
| 3.2 培养基筛选优化中细胞培养方式的确定 |
| 3.3 基础培养基的筛选优化结果 |
| 3.3.1 培养基混料试验 |
| 3.3.2 培养基组分优化试验 |
| 3.3.3 连续传代培养试验 |
| 3.3.4 新培养基与其他商业培养基的对比试验 |
| 3.4 补料培养基的筛选优化结果 |
| 3.4.1 补料培养基筛选试验 |
| 3.4.2 植物水解物筛选试验 |
| 3.5 3L生物反应器的培养结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞的悬浮驯化 |
| 4.2 试验培养方式的选择 |
| 4.3 基础培养基的筛选优化 |
| 4.4 流加培养基的筛选优化 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）抗肺炎支原体特异性单克隆抗体的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 菌株、抗原、抗体 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 耗材 |
| 1.4 仪器及设备 |
| 1.5 培养基配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 菌体的制备 |
| 2.2 单克隆抗体的制备 |
| 2.3. 肺炎支原体单克隆抗体的纯化及鉴定 |
| 2.4. 肺炎支原体单克隆抗体在ELISA体系中的运用 |
| 结果 |
| 1. 肺炎支原体大量培养条件的优化 |
| 2. 肺炎支原体单克隆抗体的制备 |
| 3. 肺炎支原体单克隆抗体的纯化及鉴定 |
| 4. 肺炎支原体单克隆抗体在ELISA体系中的运用 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肺炎支原体检测技术的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）抗铁蛋白杂交瘤细胞无血清培养技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 杂交瘤细胞概述 |
| 1.1.1 杂交瘤细胞的定义及优点 |
| 1.1.2 单克隆抗体的制备 |
| 1.1.3 单克隆抗体的应用 |
| 1.1.4 单克隆抗体的纯化方法 |
| 1.2 规模化培养 |
| 1.2.1 规模化培养概述 |
| 1.2.2 规模化培养的方法 |
| 1.3 本文研究目的和研究内容 |
| 第2章 血清对骨髓瘤和杂交瘤细胞的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 血清浓度对5H2细胞生长的影响 |
| 2.3.2 血清浓度对Sp2/0-Ab细胞生长的影响 |
| 2.3.3 血清浓度对Sp2/0 细胞生长的影响 |
| 2.4 本章总结 |
| 第3章 骨髓瘤和杂交瘤细胞无血清培养基的制备 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 配制多种无血清培养基 |
| 3.3.2 5H2细胞的无血清培养 |
| 3.3.3 Sp2/0-Ab细胞的无血清培养 |
| 3.3.4 杂交瘤无血清培养基的驯化比较 |
| 3.3.5 各种培养基的价格对比 |
| 3.4 本章总结 |
| 第4章 杂交瘤细胞无血清培养基的转瓶批培养代谢特性 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 5H2细胞在H-SFM中的无血清转瓶批培养 |
| 4.3.2 5H2细胞在Z4中的无血清转瓶批培养 |
| 4.3.3 抗体纯化 |
| 4.4 本章总结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 一、攻读学位期间发表的论文 |
| 二、攻读学位期间获得的荣誉 |
（4）杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展（论文提纲范文）
| 1杂交瘤细胞的特点和培养方式 |
| 2中空纤维系统培养杂交瘤细胞 |
| 3生物反应器培养杂交瘤细胞 |
| 3.1生物反应器参数调控 |
| 3.2营养物质优化 |
| 4展望 |
（5）表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的开发与优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 动物细胞培养生产抗体类药物概述 |
| 1.1.1 动物细胞培养技术的发展 |
| 1.1.2 抗体类药物概述 |
| 1.1.3 动物细胞培养生产抗体类药物的研究进展 |
| 1.2 无蛋白培养基 |
| 1.2.1 细胞培养基的历史与发展趋势 |
| 1.2.2 无蛋白培养基的开发 |
| 1.2.3 无蛋白培养基的研究进展 |
| 1.2.4 动物细胞无蛋白培养存在的问题 |
| 1.3 CHO细胞培养生产单克隆抗体简介 |
| 1.4 本文研究内容、目的及意义 |
| 第2章 无蛋白培养基的开发 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 细胞株与培养基 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 分析方法 |
| 2.2.4 数据处理 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 CHO细胞在自制无血清培养基中的生长与抗体合成 |
| 2.3.2 无血清低蛋白培养基的开发 |
| 2.3.3 无蛋白培养基的开发 |
| 2.3.4 CHO细胞在几种培养基中生长代谢及抗体合成的比较 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 CHO细胞在无蛋白培养基中的生长、代谢与抗体合成特性 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 细胞株与培养基 |
| 3.2.2 细胞培养 |
| 3.2.3 分析方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 CHO细胞在无蛋白培养基中的生长、代谢及产物表达 |
| 3.3.2 氨基酸和维生素对CHO细胞生长、代谢以及抗体合成的影响 |
| 3.3.3 葡萄糖对CHO细胞生长、代谢与抗体合成的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 无蛋白培养基的优化以及不同培养基特性的比较 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 细胞株与培养基 |
| 4.2.2 细胞培养 |
| 4.2.3 分析方法 |
| 4.2.4 培养基的设计 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 CHO细胞在优化的无蛋白培养基中的生长、代谢和抗体合成 |
| 4.3.2 CHO细胞在不同培养基中的培养参数比较 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 全文总结及展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）悬浮培养重组中国仓鼠卵巢细胞CHO-C12表达抗EGFRvⅢ嵌合抗体C12研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.1.1 肝癌及肝癌特异性抗体研究现状 |
| 1.1.2 EGFRvⅢ及C12抗体 |
| 1.1.3 利用CHO细胞表达抗体研究现状 |
| 1.2 动物细胞无血清培养研究进展 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 CHO细胞的无血清无蛋白培养基 |
| 1.2.3 CHO细胞无血清驯化方法 |
| 1.2.4 CHO细胞驯化过程中细胞结团的研究 |
| 1.3 生物反应器大规模培养研究进展 |
| 1.3.1 CHO培养方式选择及培养方法 |
| 1.3.2. CHO基础代谢特征及代谢控制策略 |
| 1.3.2.1 葡萄糖代谢 |
| 1.3.2.2 谷氨酰氨代谢 |
| 1.3.2.3 乳酸及氨代谢 |
| 1.3.3 CHO细胞培养过程参数检测及控制 |
| 1.3.4 对提高rCHO细胞表达产物产量的研究探索 |
| 1.4 论文研究目的及主要内容 |
| 第2章 重组CHO细胞无血清驯化培养 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 |
| 2.2.2 CHO细胞静置贴壁培养方法 |
| 2.2.3 CHO细胞无血清驯化 |
| 2.2.4 细胞生长曲线测定 |
| 2.2.5 CHO细胞无血清培养基的筛选 |
| 2.2.6 C12H9抗体浓度测定 |
| 2.2.7 细胞形态的观察 |
| 2.2.8 细胞密度、存活率及比生长速率的测定及计算 |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 rCHO细胞降血清前后细胞形态,降血清过程中比生长速率、存活率比较 |
| 2.3.2 降血清过程对rCHO细胞生长及抗体表达量的影响 |
| 2.3.3 rCHO细胞无血清培养基的筛选 |
| 2.4. 小结 |
| 第3章 rCHO-C12细胞无血清悬浮培养特性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料、试剂 |
| 3.2.2 细胞培养方法 |
| 3.2.3 分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 接种密度对CHO-C12细胞生长及代谢的影响 |
| 3.3.2 初始葡萄糖浓度对CHO-C12细胞生长及代谢的影响 |
| 3.3.3 初始谷氨酰胺浓度对CHO-C12细胞生长的影响 |
| 3.4. 小结 |
| 第4章 rCHO-C12细胞生物反应器中批培养特性 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验材料、试剂 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.2.1 摇瓶中批培养 |
| 4.2.2.2 种子培养方法 |
| 4.2.2.3 生物反应器中批培养方法 |
| 4.2.3 分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 批培养过程中细胞生长及抗体表达量情况 |
| 4.3.2 批培养过程中葡萄糖和乳酸代谢 |
| 4.3.3 批培养过程中谷氨酰胺和丙氨酸、氨代谢 |
| 4.3.4 批培养过程中氨基酸代谢分析 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 rCHO-C12细胞流加与罐注培养特性 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 生物反应器 |
| 5.2.2 培养基 |
| 5.2.3 低密度接种流加培养 |
| 5.2.4 氨基酸平衡 |
| 5.2.5 连续罐注培养 |
| 5.2.6 数据分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 低密度接种流加培养(Fed-batch culture) |
| 5.3.2 氨基酸平衡的流加培养 |
| 5.3.3 Wave生物反应器中罐注培养(Perfusion culture) |
| 5.5 本章结论 |
| 第6章 总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）GS-CHO细胞无血清培养过程的开发与优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 动物细胞培养技术概况 |
| 1.1.1 动物细胞培养技术发展 |
| 1.1.2 利用动物细胞培养技术生产生物技术药物的优势 |
| 1.2 动物细胞培养技术在抗体类药物开发和工业化生产中的应用 |
| 1.2.1 抗体类药物概述 |
| 1.2.2 动物细胞培养技术在抗体类药物研发和生产中的应用 |
| 1.2.3 动物细胞培养技术在抗体类药物研发和生产中面临的问题与挑战 |
| 1.3 动物细胞培养技术应用于抗体类药物研究与开发的主要进展 |
| 1.3.1 提高宿主细胞抗体表达水平 |
| 1.3.2 提高细胞密度和延长细胞培养周期 |
| 1.4 用GS-CHO细胞生产TNFR-Fc抗体融合蛋白概述 |
| 1.4.1 GS-CHO细胞 |
| 1.4.2 重组人肿瘤坏死因子受体-Fc抗体融合蛋白简介 |
| 1.5 本文的研究内容、目的及意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 培养基 |
| 2.2 细胞培养系统和培养方法 |
| 2.2.1 种子细胞培养 |
| 2.2.2 反应器的批式培养 |
| 2.2.3 反应器的流加培养 |
| 2.2.4 反应器的细胞生长-维持两阶段温度分别控制流加培养 |
| 2.2.5 反应器的细胞生长-维持两阶段温度分别控制灌注培养 |
| 2.2.6 反应器的操作和控制 |
| 2.3 分析方法 |
| 2.3.1 细胞计数 |
| 2.3.2 营养物浓度测定 |
| 2.3.3 代谢副产物浓度测定 |
| 2.3.4 细胞组成测定 |
| 2.3.5 细胞周期测定 |
| 2.3.6 渗透压测定 |
| 2.3.7 抗体融合蛋白浓度测定 |
| 2.3.8 TNFR-Fc基因mRNA浓度测定 |
| 2.3.9 摄氧率的在线测定 |
| 2.3.10 线粒体脱氢酶活性测定 |
| 第3章 GS-CHO细胞生长代谢及产物合成特性 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验方案 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 批式培养过程中GS-CHO细胞生长、代谢及产物表达特性 |
| 3.3.2 葡萄糖对GS-CHO细胞生长、代谢及产物表达的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 温度对GS-CHO细胞生长、代谢及产物表达的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验设计 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 温度对重组GS-CHO细胞生长的影响 |
| 4.3.2 温度对重组GS-CHO细胞抗体融合蛋白生成的影响 |
| 4.3.3 温度对重组GS-CHO细胞物质代谢的影响 |
| 4.3.4 温度对重组GS-CHO细胞能量代谢的影响 |
| 4.3.5 温度对TNFR-Fc抗体融合蛋白稳定性的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 低温培养过程中细胞密度对产物合成的影响初探 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验设计 |
| 5.2.1 细胞生长-维持两阶段温度分别控制的流加培养 |
| 5.2.2 平行实验 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 两阶段流加培养过程分析 |
| 5.3.2 平行实验 |
| 5.4 本章小结 |
| 第6章 GS-CHO细胞流加培养和灌注培养过程的设计 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 流加和灌注培养过程的设计与实施 |
| 6.2.1 流加和灌注培养过程的设计原则 |
| 6.2.2 流加和灌注培养过程的设计步骤 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 两阶段动态流加培养过程 |
| 6.3.2 两阶段灌注培养过程 |
| 6.3.3 典型培养过程的结果比较 |
| 6.4 本章小结 |
| 第7章 全文总结和展望 |
| 7.1 全文总结 |
| 7.2 本文创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 研究成果 |
（8）动物细胞代谢工程进展（论文提纲范文）
| 1 代谢中心途径工程 |
| 2 细胞程序化死亡代谢工程 |
| 2.1 信号传导与细胞凋亡机制 |
| 2.1.1 信号传递机制 |
| 2.1.2 酶学机制 |
| 2.2 细胞凋亡的基因调控机制 |
| 3 细胞循环周期的控制 |
| 4 多基因共表达代谢工程 |
| 5 糖基化代谢工程 |
| 6 展望 |
（9）杂交骨髓瘤细胞培养模型化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 动物细胞培养概况 |
| 1.2.1 动物细胞培养技术的实际应用 |
| 1.2.2 动物细胞培养的主要内容 |
| 1.2.3 国内外大规模动物细胞培养发展现状 |
| 1.3 动物细胞培养模型化研究的概况及其应用 |
| 1.3.1 细胞培养模型化研究概况 |
| 1.3.2 动物细胞培养模型的应用 |
| 1.3.3 动物细胞培养模型化研究存在的问题和解决方案 |
| 1.4 本文的主要工作 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 杂交骨髓瘤细胞简介 |
| 2.2 杂交骨髓瘤细胞培养过程 |
| 2.2.1 实验准备 |
| 2.2.2 培养方法及条件 |
| 2.3 分析方法 |
| 2.3.1 细胞密度及活性测定 |
| 2.3.2 葡萄糖和乳酸浓度测定 |
| 2.3.3 氨基酸浓度测定 |
| 2.3.4 铵离子测定 |
| 2.3.5 DNA 分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 杂交骨髓瘤细胞代谢和细胞周期 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 细胞代谢及代谢调控 |
| 3.2.1 糖酵解 |
| 3.2.2 三羧酸循环 |
| 3.2.3 谷氨酰胺酵解 |
| 3.2.4 氨基酸代谢 |
| 3.2.5 细胞代谢酶调节 |
| 3.3 细胞周期及周期调控 |
| 3.3.1 细胞周期 |
| 3.3.2 细胞周期调控 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 改进的集总参数动力学模型 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 集总参数动力学模型一般框架 |
| 4.2.1 比生长速率 |
| 4.2.2 比死亡速率 |
| 4.2.3 底物的比消耗速率 |
| 4.2.4 乳酸和氨的得率 |
| 4.2.5 产物的生成速率 |
| 4.3 杂交骨髓瘤细胞培养改进的集总参数动力学模型 |
| 4.3.1 比生长速率和比死亡速率 |
| 4.3.2 细胞密度的动态平衡 |
| 4.3.3 反应器内营养底物和副产物的动态平衡 |
| 4.3.4 模型验证 |
| 4.3.5 结论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 基于细胞周期机理的群体平衡模型 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 群体平衡模型建模的一般框架 |
| 5.2.1 细胞状态、组份空间、生长速率和约束条件 |
| 5.2.2 细胞周期划分的数学描述 |
| 5.2.3 典型的平衡模型 |
| 5.3 基于细胞周期机理的杂交骨髓瘤细胞群平衡模型 |
| 5.3.1 细胞周期结构 |
| 5.3.2 平衡方程及其边界条件 |
| 5.3.3 细胞特性函数 |
| 5.3.4 营养底物和副产物的动态变化 |
| 5.3.5 仿真 |
| 5.3.6 模型验证 |
| 5.3.7 结论 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 基于酶系调控的控制论模型 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 控制论模型的基本思想 |
| 6.3 控制论模型的一般框架 |
| 6.3.1 细胞培养系统控制论结构 |
| 6.3.2 控制论模型化的主要内容 |
| 6.4 杂交骨髓瘤细胞培养的控制论模型 |
| 6.4.1 杂交骨髓瘤细胞代谢的控制论简化 |
| 6.4.2 基本代谢途径、竞争和控制变量的确定 |
| 6.4.3 生化反应速率动力学 |
| 6.4.4 非生命物质和生命物质的动态平衡 |
| 6.4.5 模型验证 |
| 6.4.6 结论 |
| 6.5 小结 |
| 第7章 动物细胞培养模型应用初探 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 骨髓瘤细胞培养补料优化 |
| 7.3 动物细胞培养过程中的同步化控制 |
| 7.4 重组蛋白生产过程补料优化初探 |
| 7.5 小结 |
| 第8章 结论与展望 |
| 8.1 主要研究内容和结论 |
| 8.2 主要创新之处 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表和录用的学术论文 |
（10）杂交瘤细胞流加培养过程中不同拟稳态下的代谢动力学分析（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 细胞培养 |
| 1.3 分析测定方法 |
| 1.4 参数计算 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 流加培养过程设计 |
| 2.1.1 初始培养基 |
| 2.1.2 流加培养基 |
| 2.2 流加培养过程的分析 |
| 2.2.1 细胞生长和目标培养状态的实现 |
| 2.2.2 营养物消耗和产物生成的动力学分析 |
| 3 结 论 |
四、葡萄糖对JAL1~*杂交瘤细胞生长代谢的影响（论文参考文献）
- [1]CPV ID3单抗细胞株无血清培养基的筛选优化[D]. 孙晓莹. 黑龙江八一农垦大学, 2021(09)
- [2]抗肺炎支原体特异性单克隆抗体的研究[D]. 贺凌煜. 昆明医科大学, 2020
- [3]抗铁蛋白杂交瘤细胞无血清培养技术研究[D]. 刘素生. 河北大学, 2019(08)
- [4]杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展[J]. 孙静静,周伟伟,周雷鸣,赵巧辉,李桂林. 中国生物工程杂志, 2018(10)
- [5]表达单克隆抗体的CHO细胞无蛋白培养基的开发与优化[D]. 刘国庆. 华东理工大学, 2011(06)
- [6]悬浮培养重组中国仓鼠卵巢细胞CHO-C12表达抗EGFRvⅢ嵌合抗体C12研究[D]. 胡素文. 华东理工大学, 2011(07)
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