一、氟中毒对小鼠学习记忆行为及脑内SOD活性和MDA含量的影响（论文文献综述）
冉龙艳[1]（2021）在《NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究》文中提出目的:长期摄入过量的氟能够通过血脑屏障沉积在脑组织中,引起中枢神经病理学改变和认知功能障碍,导致慢性氟中毒性脑损伤。其海马区功能和分子水平的变化机制研究,是目前慢性氟中毒脑损伤的研究重点。氧化应激学说对慢性氟中毒引起的机体多系统病理改变能给出较全面的和相对合理的解释,是慢性氟中毒脑损伤机制中较重要的支撑性理论,但仍需继续丰富和进一步证实。近年来,已发现慢性氟中毒导致的中枢神经系统损伤与自噬水平改变有关,且自噬在氧化应激产生的细胞信号传导改变和细胞损伤过程中起到关键作用。NRH:醌氧化还原酶2（NRH:quinone oxidoreductase 2,NQO2）具有高活性分子特征,能够导致活性氧（Reactive oxygen species,ROS）产生,加重氧化应激损伤,也能造成自噬异常改变。但是,在慢性氟中毒脑损伤机制中,氧化应激水平升高和自噬改变之间是否有相关关系、两者之间是否有关键因子相连接等仍不清楚。本课题主要研究慢性氟中毒导致的大鼠脑组织海马区域氧化应激和自噬功能的改变,并研究氧化应激和自噬改变之间是否通过NQO2相连接,来探讨慢性氟中毒脑损伤的发生机制。方法:1、慢性氟中毒大鼠研究:（1）动物模型复制:采用不同含氟浓度饮水（5 ppm,50 ppm和100 ppm）分别饲喂Sprague-Dawley（SD）大鼠3个月和6个月,复制慢性氟中毒动物模型。实验结束时观察大鼠氟斑牙形成,测定大鼠血液、尿液、骨组织和脑组织中含氟量,用以评价模型复制情况。（2）动物行为学研究:使用Morris水迷宫开展定向巡航实验和空间探索实验以评价长期摄入氟对实验动物学习和记忆能力的影响。（3）脑组织病理学观察:用苏木精-伊红染色法检查大鼠脑组织一般组织形态改变;用神经元尼氏染色法观察动物大脑海马区域神经元尼氏小体的变化。（4）海马组织氧化应激水平检测:使用流式细胞仪和生化方法检测大鼠脑组织ROS和脂质过氧化物代谢产物丙二醛（Malonydialdehyde,MDA）含量及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性。（5）海马组织自噬水平检测:使用透射电子显微镜观察大鼠脑组织海马区域神经元亚显微结构变化以及自噬体数量;蛋白印迹法检测自噬相关蛋白,包括:哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Mechanistic target of rapamycin,m TOR）,自噬相关蛋白5（Autophagy related5,ATG5）,微管结合蛋白1A/1B轻链3B（Microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3B,LC3Ⅱ）和自噬接头蛋白p62（p62/sequestosome-1,p62/SQSTM1）的表达变化;荧光免疫组化检测大鼠海马区域自噬相关蛋白m TOR、ATG5和p62的表达。（6）实验动物海马组织转录组和蛋白组测序以及生物信息学分析:采用高通量RNA测序（RNA-seq）和串联质谱标签（Tandem-Mass-Tag,TMT）蛋白组学技术对大鼠海马组织进行测序;通过差异分析和聚类分析评价高氟处理对于大脑海马组织基因和蛋白层面的影响;使用相关性分析和交集分析获取在基因和蛋白层面协同变化的分子,并挑选与氧化应激和自噬有关的分子——NQO2进行后续研究;转录组和蛋白组测序数据采用实时荧光定量聚合酶链反应（Quantitative real-time PCR,q RT-PCR）和平行反应检测（Parallel reaction monitoring,PRM）靶向蛋白组学技术进行验证。（7）NQO2表达与自噬及氧化应激相关性:蛋白印迹法检测动物脑组织NQO2的蛋白表达,并与自噬相关蛋白和氧化应激指标进行皮尔森相关性分析。2、体外培养SH-SY5Y（人神经母细胞瘤）细胞NQO2改变相关性机制研究:（1）RNA干扰和小分子药物处理干扰NQO2表达:构建靶向NQO2的干扰慢病毒转染SH-SY5Y细胞,并使用NQO2抑制剂S29434及激活剂Menadione来调控氟处理的SH-SY5Y细胞模型中NQO2的表达;（2）分析靶向调控氟处理的SH-SY5Y细胞模型中NQO2的表达后自噬和氧化应激改变:检测NQO2抑制或活化状态下,氟处理对自噬水平和氧化应激水平的影响。结果:1、慢性氟中毒大鼠模型复制成功:染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,血液、尿液、骨组织和脑组织中氟含量均明显高于对照组,且与染氟剂量成正相关关系。2、慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低:染氟组大鼠逃避潜伏期明显高于对照组;普遍出现穿台次数减少和在目标象限停留时间减少的现象。3、慢性氟中毒大鼠脑组织神经元病理改变:HE染色显示,经氟处理后大鼠脑组织海马CA3区未见明显形态学变化;尼氏染色结果显示染氟组大鼠脑组织海马CA3区神经元尼氏小体较对照组数量明显减少,染色变浅。4、染氟组大鼠脑组织氧化应激水平增高:慢性氟中毒大鼠大脑海马组织MDA和ROS含量明显升高,SOD活性明显降低。5、透射电镜观察结果:染氟组大鼠海马CA3区神经元细胞出现核型不规则,核膜皱缩、凹陷呈锯齿状、染色质聚集;胞浆内自噬体明显增多,但未见自噬体数量随染氟时间延长而增多的情况。6、慢性氟中毒大鼠海马组织LC3II及p62蛋白水平表达改变:p-m TOR表达降低,ATG5、LC3 II和p62表达升高,提示自噬流阻滞,自噬水平异常。7、转录组学和蛋白组学测序结果:与对照组相比,差异表达基因主要富集在认知功能,学习记忆能力,长时程增效以及自噬调控信号通路中。联合转录组学和蛋白组学分析发现13个变化趋势一致的差异基因,其中NQO2表达差异性最高。8、慢性氟中毒大鼠脑组织NQO2蛋白表达水平改变:蛋白印迹和免疫荧光组织化学结果均显示NQO2在慢性氟中毒大鼠海马组织中呈现高表达状态,与染氟剂量呈正相关关系;NQO2表达量与自噬相关蛋白的变化以及氧化应激指标呈显着相关性。9、体外培养细胞NQO2调节机制研究结果:氟处理后,SH-SY5Y细胞NQO2表达升高,p-m TOR表达降低,ATG5、LC3 II和p62表达升高,提示自噬流阻滞,自噬水平异常;细胞MDA和ROS含量明显升高,SOD活性降低,提示氧化应激水平升高。采用慢病毒干扰和小分子化合物特异性处理调控NQO2表达,结果提示抑制NQO2表达能够降低p62表达,恢复自噬流水平,降低氧化应激影响。结论:1、慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低可能与海马区氧化应激水平升高、自噬功能异常有关:染氟大鼠脑组织ROS及MDA含量增多,SOD活性降低;自噬启动相关蛋白p-m TOR表达降低,自噬体形成相关蛋白ATG5和LC3 II表达增加,自噬溶酶体功能相关蛋白p62积累。2、慢性氟中毒大鼠智力损伤与海马区基因及蛋白水平改变密切相关:差异基因主要出现在富集于与学习、记忆能力和大脑奖赏机制相关的信号通路;部分与认知相关的基因改变持续存在,无法逆转。3、慢性氟中毒大鼠海马组织NQO2增加,可能促进氧化应激水平增加及自噬功能异常:NQO2升高与染氟剂量有关,且与自噬功能异常和氧化应激水平显着相关。4、氟可以促进自噬启动,在一定程度是一种代偿性保护机制;但是随着损伤积累,自噬流不畅,自噬清除功能受阻。而抑制NQO2能够降低氧化应激水平、恢复自噬流通畅,提示NQO2可能是调控自噬流的关键因子。
罗永珍[2]（2020）在《基于转录组学和蛋白质组学的小鼠氟中毒脑损伤研究》文中指出氟在人类日常生活中分布非常广泛,虽然初期研究认为其能够改善龋齿等疾病,但后续研究揭示氟能够轻松穿透血脑屏障和胎盘,通过母婴之间胎盘和乳汁途径严重影响胎儿和新生儿的智力发育、造成神经细胞凋亡和炎症反应等。因此开展氟暴露对亲子代间神经系统损伤及其发育过程干扰的机制问题刻不容缓。在本研究中,通过亲子代小鼠连续给予10mg/L和50mg/L的NaF水溶液处理一定时间（亲代60d,子代30d）后,采集脑组织样品,随后提取其RNA和蛋白质,用转录组学研究及蛋白质组学研究手段,分别在低剂量氟处理小鼠、高剂量氟处理小鼠、以及亲子代之间进行对比分析,并对转录组和蛋白质组数据加以联合分析,而后全面绘制了不同氟剂量暴露和亲子代之间的基因响应图谱,并尝试找出产生这些影响的分子生物学机制及其关键调控基因和蛋白。结果显示:氟暴露对脑组织的影响并非与剂量呈效应关系。在亲代中,氟离子主要表现为对神经系统及神经元活动的抑制作用;在子代中,氟离子对脑组织免疫系统表现出显着提升现象,而对神经系统的抑制作用相对较弱。故此推测在子代神经发育过程中,可能存在着某种对氟损伤的自我修复机制。进一步联合网络分析也发现一系列关键调节因子,如:Notch1、Kit、Smad6、Lef1、Tal1等,不仅能够起到调控神经发育过程的作用,而且能够影响多个重要的细胞信号通路。本研究在组学层面对亲子代间长期氟暴露导致的神经功能损伤和神经发育过程干扰做了一定的探索,并提出了新的调控节点和信号通路网络,为下一步验证氟对神经系统的影响机制及保护措施提供科学依据。
张健[3]（2020）在《亚慢性铝中毒影响大鼠海马铁稳态的机制》文中提出铝是一种慢性、蓄积性神经毒物,参与多种神经退行性疾病的发生与发展,研究表明铝的神经毒性与铁稳态失衡导致的氧化应激有关。维持铁稳态需要铁相关蛋白和铁调节因子正常表达和相互协作调节铁的摄取、存储和释放过程,而铝对这一过程的影响尚不清楚。本试验从铁稳态角度切入,探讨铝的神经毒性机制。选用4周龄雄性Wistar大鼠120只,随机等分为对照组（CG,0 mg/kg B.W.Al Cl3）、低剂量组（LG,50 mg/kg B.W.Al Cl3）、中剂量组（MG,150 mg/kg B.W.Al Cl3）和高剂量组（HG,450 mg/kg B.W.Al Cl3）。通过饮水染铝90d建立亚慢性铝中毒模型,对大鼠海马组织中铝和铁含量、大鼠行为学、海马组织学及氧化应激水平进行检测,探讨海马组织中铝和铁含量与氧化应激及海马损伤的关系。检测铁转运蛋白（Tf R、DMT1和Fpn1）、铁储存蛋白（Fn）及铁调节因子（IRPs和铁调素）蛋白及m RNA的表达,旨在探究铝中毒对大鼠海马铁稳态的影响机制。结果如下:（1）铝中毒组大鼠海马铝、铁含量均显着高于CG（p<0.05,p<0.01）,且铁含量与铝含量成正比;表明亚慢性铝中毒导致大鼠海马铝、铁含量增加。（2）定位航行测试中MG和HG大鼠潜伏期显着长于CG（p<0.05,p<0.01）,说明铝损害大鼠学习能力;空间探索测试中,MG和HG大鼠在目标象限活动路程和滞留时间显着低于CG（p<0.05,p<0.01）,说明铝损害大鼠记忆能力;表明亚慢性铝中毒导致大鼠认知障碍。（3）显微结构观察显示,CG和LG大鼠海马神经细胞排列整齐而紧密,呈卵圆形,结构完整而清晰,MG大鼠海马神经细胞排列不规则,出现大量空泡化细胞,HG大鼠海马神经细胞排列松散、杂乱,数量减少,部分细胞形态结构发生变化,核深染固缩;海马CA1区坏死神经细胞定量分析显示,铝中毒各组大鼠海马CA1区神经元丢失显着多于CG（p<0.05,p<0.01）,且与铝呈剂量依赖效应;表明亚慢性铝中毒导致大鼠海马显微结构受损。（4）氧化应激水平检测显示,铝中毒各组大鼠海马ROS和MDA含量均显着高于CG（p<0.05,p<0.01）,MG和HG大鼠海马羰基含量均极显着高于CG（p<0.01）;铝中毒各组大鼠海马SOD和T-AOC活性均显着低于CG（p<0.05,p<0.01）,MG和HG海马CAT活性均极显着低于CG（p<0.01）;表明亚慢性铝中毒导致大鼠海马氧化应激。（5）铁相关蛋白检测显示,MG和HG大鼠海马DMT1 m RNA表达均极显着高于CG（p<0.01）,铝中毒各组大鼠海马DMT1蛋白表达均显着高于CG（p<0.05,p<0.01）,MG和HG大鼠海马Tf R m RNA和蛋白表达均极显着低于CG（p<0.01）;铝中毒各组大鼠海马Fpn1m RNA表达均极显着低于CG（p<0.01）,MG和HG大鼠海马Fpn1蛋白表达均极显着低于CG（p<0.01）;铝中毒各组大鼠海马Ftl m RNA和蛋白表达与CG相比均无明显变化（p>0.05）,MG和HG海马Fth m RNA和蛋白表达均极显着低于CG（p<0.01）;表明亚慢性铝中毒扰乱大鼠海马铁相关蛋白的表达。（6）铁调节因子检测显示,铝中毒各组大鼠海马IRP1 m RNA和蛋白表达与CG相比均无明显变化（p>0.05）;IRP2 m RNA和蛋白表达均极显着低于CG（p<0.01）;铁调素m RNA和蛋白表达均极显着高于CG（p<0.01）;表明亚慢性铝中毒导致大鼠海马铁调节因子表达异常。以上结果表明,Al Cl3通过改变海马铁调节因子表达,扰乱铁相关蛋白的表达,造成铁含量增加,进而导致海马氧化应激、结构损伤及大鼠认知功能障碍。
徐侨[4]（2020）在《梨果仙人掌和葫芦巴的提取工艺及其提取物对酒精性脑损伤预防作用机制的探究》文中研究表明目的:慢性酒精中毒是全球公共卫生问题之一,长期酗酒是诱导许多慢性疾病的原因[1]。酒精诱导肝脏损伤的机制及其药物的研究已较成熟,而酒精对大脑损伤机制的研究较少。酒精对机体细胞的损害主要通过诱导细胞氧化应激,调节体内各种酶的活性来实现。过量长期饮酒会导致机体脑细胞中SOD（超氧化物岐化酶）、GSH（还原谷胱甘肽酶）活性的改变并进一步导致细胞氧化应激损害中枢神经。梨果仙人掌和葫芦巴药用历史悠久,有良好的抗氧化作用和调节脑内神经递质含量的作用,本研究致力于探究梨果仙人掌多糖、葫芦巴黄酮对慢性酒精性脑损伤的预防作用。方法:1.提取工艺的研究:利用响应曲面优化的方法研究乙醇提取浓度、料液比、微波提取功率对梨果仙人掌多糖提取率的影响及料液比、提取次数、提取时间对葫芦巴黄酮提取率的影响。2.建立慢性酒精性脑损伤的动物实验模型:用试剂盒测定小鼠体内酒精代谢的各种酶的活性,包括小鼠血液中的AST（谷草转氨酶）、ALT（谷丙转氨酶）和小鼠脑细胞中SOD、GSH、MDA（丙二醛）、AchE（乙酰胆碱酯酶）的活性。进一步测定5-HT（5-羟色胺）、NE（去甲肾上腺素）、DA（多巴胺）等脑内神经递质的活性。并通过软件分析各项指标来判断长期过量饮酒对脑部神经的损害。利用气相色谱法检测血液酒精浓度并测定ADH酶活性。3.基于醉酒实验模型,对比不同给药组实验结果,分析葫芦巴、梨果仙人掌对慢性酒精性脑损伤的预防作用。结果:1.响应曲面优化获得最佳提取工艺:梨果仙人掌多糖类最佳提取工艺为乙醇浓度70%,料液比1:10,微波功率450w,得梨果仙人掌多糖提取率为8.45%。2.葫芦巴黄酮类最佳提取工艺为料液比1:4,提取时间1.5h,提取次数为3次,重复进行3次实验得提取率为2.01%。3.小鼠慢性酒精性脑损伤模型实验:与空白组比模型组的AST和AST/ALT均升高,肝系数、脑系数增大,脑部SOD、GSH活性受到抑制,MDA含量上升,脑部的DA、5-HT的含量升高、NE、AchE的活性下降。4.葫芦巴黄酮类和梨果仙人掌预防慢性酒精性脑损伤实验:与模型组比葫芦巴、梨果仙人掌高剂量组和低剂量组的AST和AST/ALT均降低,脏器系数减小,脑部SOD、GSH活性上升MDA含量下升,脑部DA、5-HT下降,AchE、NE含量上升。5.ADH酶活性检测及酒精浓度时间曲线:各组大鼠ADH酶活性大小排序为葫芦巴高剂量组>梨果仙人掌高剂量组>梨果仙人掌低剂量组>模型组。各组大鼠在给药给酒后1h时血液中酒精浓度比较排序为模型组浓度>葫芦巴低剂量组>梨果仙人掌低剂量组>梨果仙人掌高剂量组>葫芦巴高剂量组。
唐乐,张佳勇,胡晓晓,阮琴,欧阳玮,章子贵[5]（2020）在《慢性氟暴露致小鼠海马损伤及L-型钙拮抗剂的干预作用》文中研究表明探讨了慢性氟暴露致小鼠海马损伤及L-型钙通道拮抗剂的干预作用.将140只初断乳ICR雄性小鼠随机分为7组:对照组（C组）、高氟组(HF组,饮用30 mg·L-1 NaF溶液)、低氟组(LF组,饮用5 mg·L-1 NaF溶液)、高/低氟+L-型钙通道激动剂组（FPL64176）（HF/LF+FPL）、高/低氟+L-型钙通道拮抗剂组（Nifedipine）（HF/LF+NIF）.染氟6个月,染氟结束前1周,HF/LF+FPL和HF/LF+NIF组分别每天腹腔注射激动剂或拮抗剂(5 mg·kg-1·d-1).用TUNEL法检测小鼠海马CA1区细胞凋亡水平,用Western Blot法检测细胞膜L-型钙通道Cav1.2、Ca2+信号通路分子和下游凋亡调节相关分子蛋白表达水平等.结果表明,与对照组比,HF/LF组小鼠海马组织抗氧化能力显着降低（p<0.05或p<0.01）,细胞凋亡水平极显着上升（p<0.01）,Cav1.2与Bcl-2蛋白表达水平显着下降（p<0.05或p<0.01）,Ca2+信号转导通路CaM、CaMKII和促凋亡Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达水平显着上升（p<0.05或p<0.01）.注射FPL64176的小鼠海马细胞和上述分子指标的损伤加剧,而注射NIF对海马细胞和上述分子蛋白表达有一定的逆转作用.提示L-型钙离子通道介导了氟暴露致小鼠海马损伤,氟暴露致海马细胞膜L-型钙离子通道Cav1.2蛋白、细胞内Ca2+信号转导通路分子和下游凋亡调节相关蛋白表达异常是其分子机制之一,而L-型钙通道拮抗剂NIF可能是一种新型有效的抗氟药物.
张一彤,张忠玲[6]（2019）在《氟中毒性神经损伤与拮抗保护的研究进展》文中提出氟中毒导致神经系统损伤越来越受到氟病研究者的重视。氟中毒可导致患者记忆力减退,引起儿童智商减低和认知功能障碍等神经系统损伤的行为学表现。氟中毒神经损伤机制涉及氧化应激、信号转导和神经递质及受体改变等方面。氧化应激是氟中毒性神经损伤机制的中心环节,有研究提示除了一些抗氧化的药物和制剂,作为食品的黑蒜,同样具有抗氧化等很多生物学功效。本文根据黑蒜的抗氧化应激和神经保护作用进行了分析、推论,提示黑蒜可能对氟中毒神经损伤具有保护作用,其作用效果及机制尚有待进一步研究。
叶宏[7]（2019）在《预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究》文中研究说明[目 的]观察自主跑轮预适应、缺血后适应以及两者联合应用对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用有无差异,结合氧化应激指标、细胞凋亡因子的检测,探寻可能的潜在调控机制。[方 法]实验由三个部分组成:第一部分实验动物小鼠分为5组:1.假手术组。2.脑缺血再灌注损伤模型组。3.缺血后适应组。4.自主跑轮预适应组。5.自主跑轮预适应联合后适应组。在第一部分实验结果的基础上设定第二部分实验分组:小鼠分为3组:1.假手术组。2.缺血后适应组。3.自主跑轮预适应联合后适应组。为验证第一、二部分的实验推论,将第三部分实验动物分为4组:1.缺血后适应组。2.自主跑轮预适应联合后适应组。3.自主跑轮预适应+后适应-PI3K抑制剂组。4.自主跑轮预适应+后适应-STAT3抑制剂组。实验采用神经功能缺损评分表,检测小鼠神经功能障碍评分;水迷宫检测认知功能;TTC实验检测脑梗死灶体积;分子生物学系列实验检测氧化应激生化指标以及神经元凋亡情况;细胞免疫的改变,采用Western blot检测凋亡、信号通路相关因子的蛋白表达。[结 果]第一部分实验:与脑缺血再灌注组比较,自主跑轮预适应改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积的作用不明显,后适应显着改善小鼠脑缺血再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积,自主跑轮预适应联合后适应进一步增强改善小鼠脑缺血/再灌注损伤后的神经功能、认知功能和减少脑梗死灶体积的作用,明显强于单独的预适应或后适应。与脑缺血再灌注组比较,预适应略有升高超氧化物歧化酶（SOD）活性和降低丙二醛（MDA）含量的作用,后适应能显着升高脑组织中SOD活性和降低MDA含量,自主跑轮预适应联合后适应,升高脑组织SOD活性,降低MDA含量的作用进一步增强,明显强于单独的自主跑轮预适应或后适应。与模型组比较,自主跑轮预适应减少缺血区脑组织的神经细胞凋亡数量不明显,后适应明显减少神经细胞凋亡数量,自主跑轮预适应联合后适应减少神经元细胞凋亡的作用进一步增强,明显强于单独的自主跑轮预适应或后适应。Western blot检测凋亡相关因子的蛋白表达,与脑缺血再灌注组比较,其中促凋亡因子Bax、Caspase-3的蛋白表达,预适应联合后适应的表达减弱,自主跑轮预适应或缺血后适应的表达无明显统计学意义;抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达,预适应联合后适应的表达增强,自主跑轮预适应或缺血后适应的表达无明显统计学意义。第二部分实验:Western blot检测信号通路相关因子的蛋白表达,其中PI3K、STAT3的蛋白表达,缺血后适应升高PI3K、STAT3活性。自主跑轮预适应和后适应联合干预提升PI3K、STAT3通路活性强于单独的后适应。第三部分实验:分别使用PI3K抑制剂LY294002、STAT3抑制剂SH454后,自主跑轮预适应联合后适应的脑保护作用明显减弱,表现为:神经功能评分降低,认知功能减退,脑梗死体积增大,TUNEL检测的凋亡细胞数量增多,促凋亡因子线粒体内细胞色素C、Bax、Caspase-3的蛋白表达增强,抗凋亡因子胞质内细胞色素C、Bcl-2的蛋白表达减弱。[结 论]1.后适应对小鼠脑缺血/再灌注损伤有保护作用,自主跑轮预适应联合后适应能进一步增强上述作用。2.自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用的增强可能依赖于激活抗氧化、抗凋亡的PI3K和STAT3信号通路。3.分别使用PI3K、STAT3抑制剂后,自主跑轮预适应联合后适应的脑保护作用明显减弱。
曾晓晓[8]（2019）在《白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用》文中指出目的:长期摄入过量氟可造成全身病理性损害,其主要损害机制与氟离子导致的氧化应激水平升高（Oxidative stress,OS）有关。研究表明,白藜芦醇（Resveratrol,RSV）是沉默信息调节因子2同源蛋白1（Silent mating type information regulation 2 homolog,SIRT1）激动剂,在多种疾病中具有抗氧化作用。本研究选择实验性氟中毒实验大鼠及其所生不同日龄仔鼠脑组织和经氟化钠（NaF）处理的体外培养神经细胞,研究RSV在实验性氟中毒造成的中枢神经系统氧化应激损伤中的神经保护作用。方法:1.研究对象:动物实验造模:用Sprague-Dawley（SD）大鼠,随机分成4组（每组8只）,即对照组:自由饮用自来水（含氟量<1 mg/L）;RSV组:饮水同上,饲养4个月后经灌胃给予RSV（50 mg/kg/天）,持续3个月;染氟组:饮水中加入NaF（F-含量为50 mg/L）;染氟加RSV组:饮水同染氟组,饲养4个月后经灌胃给予RSV（50 mg/kg/天）,持续3个月;对照组和染氟组大鼠在饲养4个月后经胃给予与RSV同等容量的生理盐水3个月;总实验周期为7个月。取上述饲养分组动物,饲养6个月后分雌雄合笼（2:1）饲养,妊娠生产后取不同日龄（1、7、14、21及28天）新生仔鼠进行相关测定。细胞实验造模:用SD大鼠脑组织海马区域原代神经细胞及神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞系神经细胞进行体外培养,采用NaF（4 mmol/L F-）、RSV（10或20 mol/L）、苏拉明（Suramin,SIRT1抑制剂）（200或300μg/mL）,分别或合并处理培养神经细胞,孵育时间为48 h。2.测定方法:观察实验性氟中毒动物氟斑牙形成程度,用氟电极方法测定尿液、血清、脑组织与骨组织氟含量;用Morris水迷宫方法测定动物学习记忆能力;用Western blotting方法检测动物大脑组织和体外培养细胞中SIRT1、过氧化物酶体增殖激活受体γ辅激活因子（Peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α）、α7尼古丁型乙酰胆碱受体（Nicotinic Acetylcholine Receptors,α7 nAChRs）蛋白水平;用CCK-8试验检测体外神经细胞的存活率;用生化方法测定超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-Glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）等酶活性,以及丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、H2O2及蛋白氧化产物羰基含量,用ELISA测DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷（8-Hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHdG）含量。结果:1.动物实验:成功建立实验性氟中毒动物大鼠及仔鼠模型,表现为染氟组（包括染氟组、染氟加RSV组）动物均出现氟斑牙,尿液、血清、骨及脑组织内氟离子含量均高于对照组（对照组、对照+RSV组）,RSV并不能减少机体内氟离子蓄积。慢性氟中毒动物学习记忆能力明显降低,RSV处理减弱了实验性氟中毒动物学习和记忆能力下降的水平。慢性氟中毒大鼠及其所新生28日龄仔鼠海马及皮质区SIRT1、PGC-1α及α7 nAChR蛋白表达均明显降低,而上述改变均可被RSV逆转。慢性氟中毒动物大鼠及其所新生不同日龄仔鼠脑组织及血清中OS水平升高,包括MDA、蛋白氧化产物羰基、8-OHdG及H2O2等含量上升,而抗氧化酶活性,如SOD、γ-GCS与CAT等均明显降低;应用RSV后,OS水平降低的程度有所减弱。相关分析显示,氟中毒大鼠及其仔鼠OS（MDA、羰基、8-OHdG等）含量升高与SIRT1表达水平呈负相关关系,而抗氧化酶（SOD、γ-GCS与CAT）活性降低程度与SIRT 1蛋白表达呈正相关关系,两者间有统计学意义。2.细胞模型:原代培养大鼠海马神经元细胞及SH-SY5Y神经细胞经NaF处理后,SIRT 1、PGC-1α、α7 nAChR及α4 nAChRs蛋白表达水平均明显下降,OS水平增高;经RSV预处理,可减轻氟化物引起的SIRT1、PGC-1α、α7 nAChR及α4nAChR蛋白表达降低,OS水平降低,而苏拉明则加重NaF引起的上述蛋白表达及OS水平的改变。结论:1、慢性氟中毒引起大鼠及其所生28天龄仔鼠学习记忆能力降低,造成氟中毒成年动物及仔鼠脑组织中SIRT 1、PGC-1α及α7 nAChR等蛋白表达降低,同时造成动物脑组织和血清中抗氧化水平降低;2、高浓度氟处理的神经细胞中亦出现SIRT 1、PGC-1α、α7及α4 nAChRs等蛋白表达降低,OS水平升高;3、RSV处理虽然不能减少氟化物在慢性氟中毒动物体内的蓄积,但是可以减少氟化物慢性氟中毒大鼠学习记忆能力降低的程度,减少氟处理引起的SIRT1、PGC-1α及α7 nAChR等蛋白表达降低的水平,对抗氟引起的OS水平升高;4、慢性氟中毒大鼠脑组织中OS升高的水平与SIRT 1降低的水平有明显的相关性。研究结果指出,RSV可能通过提高SIRT 1蛋白表达增加其抗氧化能力,对抗氟中毒的神经损伤作用,其机制可能与PGC-1α表达异常有关。
年未未[9]（2019）在《L—型钙通道在饮水型氟致脑海马损伤过程中的作用及机制》文中研究表明氟是人体必需的微量元素,但过量摄入会造成多系统、多器官的毒性作用,称为地方性氟中毒,简称地氟病。氟中毒不仅能够损害牙齿、骨骼等骨相器官,还可对非骨相器官造成损伤,如脑。氟中毒可引起细胞内钙离子超载,诱导钙信号转导系统中与学习记忆功能相关的基因或蛋白表达异常,进而对神经系统造成损伤。Ca2+是细胞内重要的信息分子,L-型钙离子通道在调节胞质内Ca2+的水平中发挥重要作用,但氟致细胞内钙离子超载的原因及其对脑海马内L-型钙离子通道及下游凋亡相关分子的影响鲜有相关报道。亚慢性和慢性小鼠氟中毒实验均选用140只初断乳健康ICR雄性小鼠,适应一周后,随机平均分为7组。对照组（C）、高氟组（HF）、低氟组（LF）、高氟激动剂组（HF+FPL）、高氟拮抗剂组（HF+NIF）、低氟激动剂组（LF+FPL）、低氟拮抗剂组（LF+NIF）。对照组饮用自来水,高氟组和低氟组分别饮用30和5mg/L的氟化钠溶液。分别饲养90天与180天,染氟结束前一周,按体重5mg/（kg·d）分别腹腔注射生理盐水、钙离子通道激动剂FPL64176、钙离子通道拮抗剂Nifedipine。联合氟染毒结束后,观测小鼠空间自主探索能力和学习记忆力及观察氟斑牙发生情况、检测各组血/尿氟含量,以验证小鼠氟中毒模型是否复制成功。再检测SOD、GSH-PX活力及MDA含量、海马CA1区神经细胞形态和细胞凋亡情况、钙离子通道Cav1.2、钙调蛋白CaM、钙调蛋白激酶CaMKⅡ、Bcl-2和Bax基因和蛋白表达水平。通过上述实验,探讨饮水型氟暴露致脑功能损伤的分子机制,初步探明L-型钙通道在饮水型氟中毒致脑功能损伤过程中的作用,进一步完善氟致“钙矛盾”学说,探求治疗氟中毒的新途径和新方法。研究结果如下:（1）血/尿氟含量测定结果显示,与对照（C）组比,3月龄和6月龄各染氟组尿氟含量显着上升（P<0.05）。另外,LF组切齿有较轻的氟斑牙症状。HF组切齿氟斑牙症状显着。根据以上指标可认为本研究氟中毒模型复制成功。（2）行为检测结果显示,与C组比,3月龄和6月龄小鼠不同氟浓度暴露后跑动格数和站立次数较对照组有下降趋势,逃避潜伏期显着下降（P<0.05）,穿越平台次数明显下降,表明氟染毒小鼠空间探索和学习记忆能力下降。（3）脑组织相关酶检测结果显示,与C组比,3月龄和6月龄染氟组小鼠脑组织GSH-Px较对照组活力降低。SOD活力及MDA含量显着升高（P<0.05）。6月龄较3月龄HF+NIF组MDA含量显着下降（P<0.05）。（4）海马CA1区神经细胞形态和凋亡检测结果显示,与C组比,氟染毒3个月和6个月小鼠脑海马染氟组细胞形态改变。3月龄及6月龄不同浓度的氟染毒组脑海马CA1区细胞凋亡率显着性升高（P<0.05）,拮抗剂组海马CA1区细胞凋亡率较激动剂组显着降低（P<0.05）,但高于对照组。染氟6个月较3个月相同浓度氟处理组海马CA1区细胞凋亡率极显着升高（P<0.01）。（5）PCR及Western blot检测结果显示,与C组比,HF和LF组3月龄和6月龄海马内Cav1.2基因表达水平均显着升高（P<0.05）,但蛋白表达水平显着下降。3月龄和6月龄CaM基因表达水平显着下降（P<0.05）,但蛋白表达水平升高,其表达水平不一致的原因,有待进一步阐明。3月龄CaMKⅡ基因和蛋白表达水平均有下降趋势,而6月龄显着升高。3月龄和6月龄Bax基因和蛋白表达水平及Bax/Bcl-2基因和蛋白表达水平比值均显着升高（P<0.05）,而Bcl-2基因表达水平均显着降低（P<0.05）。与相同氟浓度染毒组比,3月龄激动剂组Cav1.2基因和蛋白表达水平显着下降（P<0.05）,拮抗剂组有降低趋势。3月龄和6月龄CaM基因和蛋白表达水平有升高的趋势,拮抗剂组有下降的趋势。3月龄激动剂组和拮抗剂组CaMKⅡ基因和蛋白表达水平均有下降的趋势,而6月龄无统计学意义。3月龄激动剂组和拮抗剂组Bax基因和蛋白表达水平无明显显着性（P>0.05）,而6月龄激动剂组有上升的趋势,拮抗剂组有下降趋势。3月龄和6月龄激动剂组Bcl-2基因和蛋白表达水平均有下降趋势,拮抗剂组有升高趋势。3月龄和6月龄激动剂组Bax/Bcl-2基因和蛋白表达水平比值显着升高（P<0.05）,拮抗剂组有下降趋势。综合上述,本研究在饮水型氟中毒模型复制成功的基础上,所得研究结果表明,亚慢性和慢性氟中毒小鼠学习记忆力、自主行为和探究能力下降,脑组织抗氧化能力降低,海马CA1区凋亡细胞数增加。这可能与脑海马内钙离子通道Cav1.2蛋白和凋亡相关分子Bcl-2、Bax蛋白表达异常及Bax/Bcl-2表达比值升高有关,且海马神经细胞内上述分子的表达水平与氟暴露的剂量及时间呈正相关。提示,脑海马内Bcl-2、Bax凋亡途径可能是氟致小鼠行为改变及脑神经细胞凋亡的分子机制之一。此外,Ca2+通道激动剂FPL64176能进一步加剧氟引起的小鼠学习记忆能力的损伤,并并脑海马细胞内钙离子通道Cav1.2及下游CaMK II、CaM与Bcl-2、Bax基因和蛋白表达异常程度加基,表现出协同毒性作用,而钙离子拮抗剂Nifedipine则可逆转氟中毒对小鼠上述行为及分子异常表达,提示钙离子拮抗剂Nifedipine可能是一种新型有效的抗氟药。
汪晓宇[10]（2019）在《L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究》文中认为氟（fluorine,F）是人体所必需的微量元素之一,长期摄入过量,会造成全身性生理病理改变,称为地氟病。氟暴露不仅能损伤骨相器官,还可引起神经、泌尿等非骨相器官病变。肾脏是机体氟暴露的主要靶器官之一。氟致肾脏损伤的分子机制逐渐引起关注,氟对肾脏尤其是对其上皮细胞的损害主要表现在对细胞内酶合成代谢的抑制和对细胞内膜结构的破坏两方面。Ca2+是机体细胞内重要的信息分子,L-型钙离子通道在调节胞质内Ca2+的水平中发挥重要作用。氟中毒能引起细胞内钙超载,但氟中毒如何引起细胞内钙超载以及钙超载对肾脏细胞L-型钙离子通道下游凋亡相关分子的影响却鲜有报道。本实验分为亚慢性和慢性氟致肾脏损伤两部分,分别选用初断乳ICR雄性小鼠140只,随机分为7组:对照组（C）、高氟组（HF）、低氟组（LF）、高氟注射钙通道激动剂组（FPL64176）（HF+F）、高氟注射钙通道拮抗剂组（Nifedipine）（HF+N）、低氟注射钙通道激动剂组（LF+F）、低氟注射钙通道拮抗剂组（LF+N）,对照组自由饮用自来水,高氟组和低氟组分别饮用30和5mg/L的氟化钠溶液。染氟期分别为90天与180天,染氟结束前1周,对照组、低氟组和高氟组腹腔注射生理盐水,其余各组分别腹腔注射激动剂或拮抗剂（5mg/kg·d）,染氟结束后,先分别检测小鼠肾脏脏器系数、肾脏损伤相关血液指标、肾脏组织结构和肾脏抗氧化能力。然后再分别检测肾脏细胞凋亡以及L-型钙离子通道Cav1.2基因/蛋白和下游肾脏细胞凋亡调节分子CaMKⅡ、CaM、Bax、Bcl-2基因/蛋白的表达水平。通过上述实验,探讨饮水型氟暴露致肾脏损伤的分子机制,初步探明L-型钙通道在饮水型氟中毒致肾脏损伤过程中的作用,进一步完善氟致钙矛盾学说,探求治疗氟中毒的新途径和新方法。实验结果:1.小鼠体重与脏器系数测定结果:各组小鼠体重与脏器系数均无显着差异（P>0.05）。2.小鼠肾脏损伤相关血液指标测定结果:与对照组比,3月龄HF、LF和HF+F组尿素氮,HF与HF+F组尿酸含量均极显着增加（P<0.01）,HF+N、LF+F和LF+N组尿素氮,LF和HF+N组尿酸含量均显着增加（P<0.05）,6月龄HF和HF+F组尿素氮,HF、HF+F、HF+N和LF+F组肌酐,HF、LF、HF+F、HF+N和LF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）,HF+N和LF+F组尿素氮,LF+N组尿酸含量显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+N组尿素氮,HF+F与HF+N组肌酐含量显着降低（P<0.05）,HF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）,HF+N组尿酸含量极显着降低（P<0.01）,6月龄HF+F组尿素氮、肌酐、尿酸含量均极显着增加（P<0.01）,HF+N组肌酐含量显着降低（P<0.05）;与LF组比,LF+N组尿素氮含量极显着降低（P<0.01）,3月龄LF+N组、6月龄LF+F组肌酐、尿酸含量显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF组尿素氮,HF、LF、HF+F、HF+N和LF+F组肌酐含量显着降低（P<0.05）,LF+N组肌酐含量均极显着降低（P<0.01）,HF+F组尿素氮,HF与HF+N组尿酸含量显着增加（P<0.05）,HF+F与LF+F组尿酸含量极显着增加（P<0.01）。3.小鼠肾脏组织结构观测结果:对照组肾结构中肾小球肾小囊结构清晰,肾小管上皮细胞正常,染氟组肾小囊腔扩大,肾小管上皮部分细胞出现空泡样变。HF组肾小球整体缩小,肾小管上皮细胞界限不清,出现肿胀、空泡样变,部分变性坏死,间质有炎性细胞。氟与激动剂联合暴露组进一步加剧,而氟与拮抗剂联合暴露组上述变化有所逆转。6月龄较3月龄上述改变明显加重。4.小鼠肾脏酶活测定结果:与对照组比,3月龄HF组GSH-PX,LF、HF+N、LF+F与LF+N组SOD活力显着降低（P<0.05）,LF与LF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF+F组GSH-PX,HF与HF+F组SOD活力极显着降低（P<0.01）,HF、HF+F、HF+N与LF+F组MDA含量极显着增加（P<0.01）;6月龄LF+N组GSH-PX,LF与LF+N组SOD活力显着降低（P<0.05）,LF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF、LF、HF+F、HF+N与LF+F组GSH-PX,HF、HF+F、HF+N与LF+F组SOD活力均极显着降低（P<0.01）,HF、LF、HF+F、HF+N与LF+F组MDA含量极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+F组GSH-PX,LF+F组SOD,HF+N组MDA活力显着降低（P<0.05）,HF+N组GSH-PX活力,HF+F组MDA含量显着增加（P<0.05）,6月龄HF+N组GSH-PX活力极显着增加（P<0.01）,HF+N组SOD活力,HF+F组MDA含量显着增加（P<0.05）,HF+F组SOD活力显着降低（P<0.05）,HF+N组MDA含量极显着降低（P<0.01）;与LF组比,3月龄LF+F组GSH-PX活力显着降低（P<0.05）,6月龄LF+N组GSH-PX活力显着增加（P<0.05）;与3月龄比,LF+F与LF+N组GSH-PX活力,HF+F组MDA含量显着降低（P<0.05）,HF、LF、HF+F与HF+N组GSH-PX活力均极显着降低（P<0.01）,HF与HF+N组MDA含量显着增加（P<0.05）。5.小鼠肾脏细胞凋亡观测结果:与对照组比,3月龄与6月龄各组肾脏细胞凋亡数量均极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+N组细胞凋亡率显着下降（P<0.05）,6月龄HF+N组细胞凋亡率极显着下降（P<0.01）;与LF组比,6个月LF+N组细胞凋亡率显着下降（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF、LF、HF+F与LF+F组细胞凋亡率极显着增加（P<0.01）,HF+N组细胞凋亡率显着增加（P<0.05）。6.RT-PCR mRNA检测结果:与对照组比,3月龄与6月龄HF+F、LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,HF+F与HF+N组Cav1.2基因表达水平组显着增加（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平显着增加（P<0.05）,6月龄LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平显着下降（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF、HF+F与HF+N组Cav1.2基因表达水平显着增加（P<0.05）,LF+F与LF+N组Cav1.2基因表达水平极显着降低（P<0.01）。与对照组比,3月龄与6月龄各组CaMKⅡ基因表达水平均出现显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着降低（P<0.05）,HF+N组CaMKⅡ基因表达水平极显着增加（P<0.01）,6月龄HF+N组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）,LF+N组CaMKⅡ基因表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF+F组CaMKⅡ基因表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,HF、HF+F和HF+N组CaM基因表达水平显着降低（P<0.05）,LF+F组CaM基因表达水平显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF+N和LF+N组CaM基因表达水平显着降低（P<0.05）,LF+F组CaM基因表达水平极显着增加（P<0.01）。与对照组比,各组Bax基因表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄与6月龄HF+N组Bax基因表达水平显着降低（P<0.05）;与LF组比,LF+F和LF+N组Bax基因表达水平极显着降低（P<0.01）;与3月龄比,6月龄HF、LF和HF+F组Bax基因表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,3月龄与6月龄HF、HF+F和LF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）,6月龄HF+F组Bcl-2基因表达水平极显着增加（P<0.01）;与LF组比,6月龄LF+F组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄各组Bcl-2基因表达水平显着降低（P<0.05）。7.Western blot蛋白检测结果:与对照组比,3月龄与6月龄各组Cav1.2蛋白表达水平均显着增加（P<0.05）;与HF组比,3月龄HF+F组Cav1.2蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）,6月龄HF+N组Cav1.2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+N组Cav1.2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF、HF+F、LF+F和LF+N组Cav1.2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。与对照组比,3月龄与6月龄HF、LF、HF+F和LF+F组CaMKⅡ蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,LF组CaMKⅡ蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）;与HF组比,3月龄HF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,3月龄LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）,6月龄LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF和LF+F组CaMKⅡ蛋白表达水平极显着增加（P<0.01）,LF+N组CaMKⅡ蛋白表达水平显着增加（P<0.05）。与对照组比,各组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与HF组比,HF+F组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,LF+N组CaM蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,6月龄LF+F组CaM蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与3月龄比,6月龄各组CaM蛋白表达水平无显着差异（P>0.05）。与对照组比,各组组Bax蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与HF组比,6月龄HF+F组Bax蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+N组Bax蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄LF+N组Bax蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。与对照组比,各组Bcl-2蛋白表达水平均显着降低（P<0.05）;与HF组比,HF+F组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与LF组比,6月龄LF+F组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与3月龄比,6月龄HF组Bcl-2蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。综上所述,氟暴露能导致小鼠肾脏损伤,主要表现为:肾脏组织抗氧化能力下降、肾脏组织结构发生病理性改变、肾脏细胞凋亡加剧,其分子机理可能与氟暴露致肾脏细胞Cav1.2、CaMKⅡ与Bax表达水平显着上升,CaM与Bcl-2表达水平显着下降,Bax/Bcl-2比值显着升高有关,且上述这些肾脏细胞内Cav1.2和下游凋亡调节分子的表达水平与氟暴露的剂量和时间呈现一定的相关性;L-型钙离子通道激动剂FPL64176与氟暴露呈协同毒性作用,即加重氟中毒致肾脏损伤,并能并上述肾脏细胞内的分子异常变化变为显着;而L-型钙离子通道拮抗剂Nifedipine则有拮抗作用,能逆转氟中毒致肾脏损伤的上述各项指标。所检测的上述指标中,只有L-型钙离子通道Cav1.2基因/蛋白及下游Bax/Bcl-2基因/蛋白表达水平随氟暴露的浓度增加而上升,呈现规律性变化,提示L-型钙通道Cav1.2可能是氟致肾脏损伤的关键环节,下游Bax/Bcl-2基因/蛋白表达水平异常导致细胞凋亡可能是氟致肾脏损伤原因之一,L-型钙离子通道抑制剂Nifedipine可能是一种新型有效的抗氟药物。
二、氟中毒对小鼠学习记忆行为及脑内SOD活性和MDA含量的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、氟中毒对小鼠学习记忆行为及脑内SOD活性和MDA含量的影响（论文提纲范文）
（1）NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 自噬与脑损伤 |
| 参考文献 |
| 作者简介及攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（2）基于转录组学和蛋白质组学的小鼠氟中毒脑损伤研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 地氟病的概述 |
| 1.1.1 地氟病的形成 |
| 1.1.2 地氟病对人体的影响 |
| 1.1.3 氟中毒对脑组织影响机制的研究现状 |
| 1.2 转录组学研究 |
| 1.2.1 概述 |
| 1.2.2 RNA-seq技术 |
| 1.3 蛋白质组学研究 |
| 1.3.1 概述 |
| 1.3.2 基于质谱的蛋白质组学 |
| 1.3.3 数据获取及分析 |
| 1.4 转录组和蛋白质组学技术在氟中毒影响机制研究中的应用 |
| 1.5 本研究的目的 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 试剂配常制 |
| 2.2 技术路线 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 动物饲养及样品采集 |
| 2.3.2 转录组学研究 |
| 2.3.3 蛋白组学研究 |
| 2.3.4 转录组与蛋白质组数据联合分析 |
| 第3章 结果与分析 |
| 3.1 转录组结果与分析 |
| 3.1.1 总RNA质控分析 |
| 3.1.2 参考基因组比对区域分布 |
| 3.1.3 基因表达值的分布统计图 |
| 3.1.4 显着差异基因分布 |
| 3.1.5 显着差异基因表达分析 |
| 3.1.6 差异基因表达水平聚类分析 |
| 3.1.7 差异基因GO富集分析 |
| 3.1.8 差异基因KEGG富集分析 |
| 3.2 蛋白组结果与分析 |
| 3.2.1 蛋白质样品数据重复性分析 |
| 3.2.2 氟中毒小鼠脑组织蛋白表达谱显着差异蛋白分布 |
| 3.2.3 差异蛋白GO富集分析 |
| 3.2.4 差异蛋白的KEGG富集性分析 |
| 3.3 转录组和蛋白组联合分析 |
| 3.3.1 GSEA转录组模块筛选 |
| 3.3.2 转录组与蛋白质组种子基因网络构建 |
| 3.4 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（3）亚慢性铝中毒影响大鼠海马铁稳态的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 铝的神经毒性 |
| 1.2 铁稳态 |
| 1.2.1 铁转入蛋白 |
| 1.2.2 铁转出蛋白 |
| 1.2.3 铁储存蛋白 |
| 1.2.4 铁调节因子 |
| 1.3 铁稳态与神经毒性 |
| 1.3.1 铁与氧化应激 |
| 1.3.2 铁与Aβ和tau |
| 1.3.3 铁与α突触核蛋白 |
| 1.4 铝中毒与铁稳态 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验动物 |
| 2.2 主要仪器与试剂 |
| 2.2.1 主要仪器 |
| 2.2.2 主要试剂 |
| 2.2.3 AlCl_3溶液的配制 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 技术路线图 |
| 2.3.2 试验动物分组及处理 |
| 2.3.3 样品采集及处理 |
| 2.4 检测项目与方法 |
| 2.4.1 海马组织中铝和铁含量的检测 |
| 2.4.2 大鼠学习记忆功能的检测 |
| 2.4.3 海马组织显微结构观察 |
| 2.4.4 海马组织氧化应激状态的检测 |
| 2.4.5 海马组织中铁相关蛋白和铁调节因子mRNA表达的检测 |
| 2.4.6 海马组织中铁相关蛋白和铁调节因子蛋白表达的检测 |
| 2.4.7 海马组织中铁调素蛋白表达的检测 |
| 2.5 试验数据的分析及统计 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 亚慢性铝中毒对大鼠海马铝、铁含量的影响 |
| 3.2 亚慢性铝中毒对大鼠学习记忆功能的影响 |
| 3.2.1 AlCl_3对大鼠定位航行测试的影响 |
| 3.2.2 AlCl_3对大鼠空间探索测试的影响 |
| 3.3 亚慢性铝中毒对大鼠海马结构的影响 |
| 3.4 亚慢性铝中毒对大鼠海马氧化应激的影响 |
| 3.4.1 AlCl_3 对大鼠海马ROS、MDA和羰基含量的影响 |
| 3.4.2 AlCl_3 对大鼠海马CAT、SOD和 T-AOC活性的影响 |
| 3.5 亚慢性铝中毒对大鼠海马铁相关蛋白含量的影响 |
| 3.5.1 AlCl_3对大鼠海马铁转入蛋白的影响 |
| 3.5.2 AlCl_3对大鼠海马铁转出蛋白的影响 |
| 3.5.3 AlCl_3对大鼠海马铁储存蛋白的影响 |
| 3.6 亚慢性铝中毒对大鼠海马铁调节因子的影响 |
| 3.6.1 AlCl_3 对大鼠海马IRPs的影响 |
| 3.6.2 AlCl_3对大鼠海马铁调素的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AlCl_3对大鼠海马铝、铁含量的影响 |
| 4.2 AlCl_3对大鼠行为学的影响 |
| 4.3 AlCl_3对大鼠海马组织结构的影响 |
| 4.4 AlCl_3对大鼠海马氧化与抗氧化状态的影响 |
| 4.5 AlCl_3对大鼠海马铁相关蛋白的影响 |
| 4.6 AlCl_3对大鼠海马铁调节因子的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（4）梨果仙人掌和葫芦巴的提取工艺及其提取物对酒精性脑损伤预防作用机制的探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1.绪论 |
| 1.1 慢性酒精性脑损伤的研究综述 |
| 1.1.1 慢性酒精性脑损伤的公共健康问题 |
| 1.1.2 脑损伤机制的探究 |
| 1.1.3 慢性酒精性脑损伤的治疗手段 |
| 1.2 葫芦巴和梨果仙人掌的化学成分及药理研究进展 |
| 1.2.1 主要化学成分 |
| 1.2.2 主要药理作用 |
| 1.3 多糖和黄酮提取工艺的研究进展 |
| 1.3.1 多糖提取工艺的研究进展 |
| 1.3.2 黄酮提取工艺的研究进展 |
| 1.4 实验立题依据、研究内容和技术路线 |
| 1.4.1 实验立题依据 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 研究技术路线 |
| 2.葫芦巴及梨果仙人掌提取工艺的研究 |
| 2.1 梨果仙人掌的提取工艺 |
| 2.1.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.2 提取方法 |
| 2.1.3 结果与讨论 |
| 2.2 葫芦巴黄酮的提取 |
| 2.2.1 实验仪器及材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 实验结果和讨论 |
| 3.慢性酒精性脑损伤的动物实验模型 |
| 3.1 实验器材 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 预实验与实验分组、用酒 |
| 3.2.2 翻正实验 |
| 3.2.3 脏器系数 |
| 3.2.4 血清转氨酶水平 |
| 3.2.5 脑组织氧化应激标志物 |
| 3.2.6 AchE和脑内神经递质的检测 |
| 3.2.7 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 行为学实验 |
| 3.3.2 脏器系数 |
| 3.3.3 血清转氨酶水平 |
| 3.3.4 脑组织氧化应激标志物 |
| 3.3.5 脑内单胺递质和AchE水平 |
| 3.4 实验讨论 |
| 3.5 实验小结 |
| 4.葫芦巴总黄酮对慢性酒精性脑损伤的保护作用及机制的初探 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果与讨论 |
| 4.3.1 醉酒实验 |
| 4.3.2 脏器系数 |
| 4.3.3 血液中AST、ALT的含量 |
| 4.3.4 小鼠脑部SOD、GSH、MDA的含量 |
| 4.3.5 小鼠脑部AchE和神经递质DA、5-HT、NE的含量 |
| 4.4 实验小结 |
| 5.梨果仙人掌多糖对慢性酒精性脑损伤的保护作用及机制的初探 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 实验结果与讨论 |
| 5.3.1 醉酒实验 |
| 5.3.2 小鼠的脏器系数 |
| 5.3.3 梨果仙人掌组小鼠血清中的AST、ALT的含量 |
| 5.3.4 小鼠脑部SOD、GSH、MDA的含量测定 |
| 5.3.5 小鼠脑部DA、5-HT、AchE、NE的含量测定 |
| 5.4 实验小结 |
| 6.ADH的活性检测及酒精血药浓度时间曲线 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 主要实验材料 |
| 6.1.2 主要实验器材 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 实验动物及用酒 |
| 6.2.2 ADH活性测定 |
| 6.2.3 检测不同时间大鼠血液中乙醇浓度 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 ADH测试结果 |
| 6.3.2 酒精血药浓度时间曲线 |
| 6.4 实验小结 |
| 7.总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）慢性氟暴露致小鼠海马损伤及L-型钙拮抗剂的干预作用（论文提纲范文）
| 1 引言(Introduction) |
| 2 材料与方法(Materials and methods) |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物分组 |
| 2.2.3 小鼠脑组织脂质过氧化酶检测 |
| 2.2.4 各组小鼠海马细胞凋亡水平观测 |
| 2.2.5 Western Blot检测蛋白表达水平 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果与分析(Results and analysis) |
| 3.1 慢性氟暴露对小鼠海马组织抗氧化能力的影响 |
| 3.2 慢性氟暴露对小鼠海马CA1区细胞凋亡的影响 |
| 3.2.1 小鼠海马CA1区细胞凋亡观察结果 |
| 3.2.2 小鼠海马CA1区细胞凋亡率统计结果 |
| 3.3 慢性氟暴露对小鼠海马CA1区细胞膜L-型钙通道Cav1.2、Ca2+信号通道分子CaM、CaMKII蛋白表达水平影响 |
| 3.4 慢性氟暴露对小鼠海马CA1区细胞内下游凋亡调节相关分子蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论(Discussion) |
（7）预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 第一部分 自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 自主跑轮预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制的研究 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 PI3K、STAT3信号通路介导了自主跑轮预适应联合后适应对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 脑部缺血预适应的诱发因素、机制及应用前景 |
| 参考文献 |
| 综述二 运动与学习和记忆能力关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（8）白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 学位论文数据集 |
（9）L—型钙通道在饮水型氟致脑海马损伤过程中的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1 绪论 |
| 1.1 地氟病的研究概况 |
| 1.1.1 氟中毒对骨相器官的影响 |
| 1.1.2 氟中毒对非骨相器官的影响 |
| 1.1.3 氟中毒发病机制研究 |
| 1.2 钙与氟中毒 |
| 1.2.1 钙的生物学效应 |
| 1.2.2 L型钙离子通道 |
| 1.2.3 钙离子通道激动剂和拮抗剂 |
| 1.3 拟解决的科学问题与研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验分组与处理 |
| 2.3 主要试剂和器材 |
| 2.3.1 主要试剂 |
| 2.3.2 仪器设备 |
| 2.4 研究方法 |
| 2.4.1 血氟、尿氟检测方法 |
| 2.4.2 血钙与尿钙的测定 |
| 2.4.3 小鼠学习记忆能力检测 |
| 2.4.4 脑组织脂质过氧化酶检测方法 |
| 2.4.5 脑海马HE染色 |
| 2.4.6 TUNEL法检测小鼠脑海马CA_1 区细胞凋亡 |
| 2.4.7 RT-PCR检测脑海马相关基因表达 |
| 2.4.8 Western Blot检测相关蛋白表达 |
| 2.5 数据分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 小鼠血/尿氟、血/尿钙含量检测结果 |
| 3.2 小鼠下切齿氟斑牙观察结果 |
| 3.3 ICR小鼠旷场行为和水迷宫检测结果 |
| 3.3.1 旷场行为检测结果 |
| 3.3.2 Morris水迷宫检测结果 |
| 3.4 小鼠脑海马CA_1 区细胞形态结构观察结果 |
| 3.5 小鼠脑海马CA_1 区细胞凋亡观察结果 |
| 3.5.1 海马CA_1 区细胞凋亡观察结果 |
| 3.5.2 海马CA_1 区细胞凋亡率 |
| 3.6 小鼠脑组织相关酶活检测结果 |
| 3.7 小鼠脑海马相关基因表达检测结果 |
| 3.7.1 脑海马Cav1.2 基因表达水平检测结果 |
| 3.7.2 脑海马CaM基因表达水平检测结果 |
| 3.7.3 脑海马CaMKⅡ基因表达水平检测结果 |
| 3.7.4 脑海马Bax基因表达水平检测结果 |
| 3.7.5 脑海马Bcl-2 基因表达水平检测结果 |
| 3.7.6 脑海马Bax/Bcl-2 基因表达水平检测结果 |
| 3.8 小鼠脑海马相关蛋白表达检测结果 |
| 3.8.1 小鼠脑海马Cav1.2 蛋白表达水平检测结果 |
| 3.8.2 小鼠脑海马CaM蛋白表达水平检测结果 |
| 3.8.3 小鼠脑海马CaMKⅡ蛋白表达水平检测结果 |
| 3.8.4 小鼠脑海马Bax蛋白表达水平检测结果 |
| 3.8.5 小鼠脑海马Bcl-2 蛋白表达水平检测结果 |
| 3.8.6 小鼠脑海马Bax/Bcl-2 蛋白表达水平检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论与展望(Conclusion and Outlook) |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（10）L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 1 绪论 |
| 1.1 地氟病的概况 |
| 1.2 氟对骨相器官的危害 |
| 1.2.1 氟斑牙 |
| 1.2.2 氟骨症 |
| 1.3 氟对非骨相器官的影响 |
| 1.3.1 氟对神经系统的影响 |
| 1.3.2 氟对心血管系统的影响 |
| 1.3.3 氟对生殖系统的影响 |
| 1.3.4 氟对泌尿系统的影响 |
| 1.3.5 氟对消化系统的影响 |
| 1.4 氟的发病机制和研究进展 |
| 1.4.1 氟致自由基损伤学说 |
| 1.4.2 氟致内质网应激 |
| 1.4.3 氟致细胞凋亡 |
| 1.4.4 氟致钙矛盾学说 |
| 1.5 钙与氟中毒 |
| 1.5.1 钙与氟中毒的研究进展 |
| 1.5.2 钙离子通道的种类 |
| 1.5.3 L-型钙通道与氟中毒 |
| 1.6 研究意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 实验器材与试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 肾脏脏器系数以及组织匀浆的制备 |
| 2.3.2 肾脏血液相关指标测定 |
| 2.3.3 肾脏组织中总蛋白含量检测 |
| 2.3.4 测定肾脏组织匀浆上清液中GSH-Px、SOD活力和MDA含量 |
| 2.4 小鼠肾脏组织结构观察 |
| 2.5 TUNEL法检测各组小鼠肾脏细胞凋亡情况 |
| 2.6 RT-PCR检测m RNA表达 |
| 2.7 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 氟暴露对小鼠体重及脏器系数的影响 |
| 3.2 肾脏损伤相关血液指标的测定结果 |
| 3.3 氟暴露对肾脏组织形态学的影响 |
| 3.4 小鼠肾脏氧化及抗氧化相关指标的检测 |
| 3.5 氟暴露对肾脏细胞凋亡的影响 |
| 3.6 氟暴露对小鼠肾脏相关基因表达的影响 |
| 3.7 氟暴露对小鼠肾脏相关蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
四、氟中毒对小鼠学习记忆行为及脑内SOD活性和MDA含量的影响（论文参考文献）
- [1]NRH：醌氧化还原酶2介导慢性氟中毒大鼠脑组织氧化应激损伤及自噬功能改变的机制研究[D]. 冉龙艳. 贵州医科大学, 2021
- [2]基于转录组学和蛋白质组学的小鼠氟中毒脑损伤研究[D]. 罗永珍. 西北师范大学, 2020(01)
- [3]亚慢性铝中毒影响大鼠海马铁稳态的机制[D]. 张健. 东北农业大学, 2020(04)
- [4]梨果仙人掌和葫芦巴的提取工艺及其提取物对酒精性脑损伤预防作用机制的探究[D]. 徐侨. 西华大学, 2020(01)
- [5]慢性氟暴露致小鼠海马损伤及L-型钙拮抗剂的干预作用[J]. 唐乐,张佳勇,胡晓晓,阮琴,欧阳玮,章子贵. 环境科学学报, 2020(06)
- [6]氟中毒性神经损伤与拮抗保护的研究进展[J]. 张一彤,张忠玲. 中华地方病学杂志, 2019(07)
- [7]预适应联合后适应增强小鼠脑缺血再灌注损伤保护机制的研究[D]. 叶宏. 昆明医科大学, 2019(05)
- [8]白藜芦醇在实验性氟中毒引起的中枢神经系统氧化应激损伤机制中的作用[D]. 曾晓晓. 贵州医科大学, 2019(07)
- [9]L—型钙通道在饮水型氟致脑海马损伤过程中的作用及机制[D]. 年未未. 浙江师范大学, 2019(02)
- [10]L-型钙通道在氟致肾脏损伤中的作用及机理的研究[D]. 汪晓宇. 浙江师范大学, 2019(02)