一、Transgenic mice overexpressingγ-aminobutyric acid transporter subtypeⅠ develop obesity（论文文献综述）
白梦鸽[1]（2021）在《PEDF通过前额叶调节小鼠抑郁抵抗的代谢组学初步研究》文中研究表明研究背景抑郁症（Major depressive disorder,MDD）又称抑郁障碍,是一种常见的精神疾病,以心境低落、兴趣缺失、社交回避为主要临床表现,具有发病率高、复发率高及致残率高的特点,影响了正常的社会交往与学习工作,严重者甚至伴有自残或自杀行为,给家庭和社会造成了严重负担。虽然过去对抑郁症的研究取得了一定进展,但仍对抑郁症的病理生理机制不明,缺乏快速、准确的诊断指标。目前确定的抑郁症病因假说有单胺假说、神经递质受体假说、神经营养假说、下丘脑-垂体-肾上腺（Hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA）轴紊乱等。色素上皮衍生因子（Pigment epithelium-derived factor,PEDF）是一种多功能糖蛋白,由SERPINF1编码。我们前期研究发现,相较于健康对照组,PEDF在首次发病且未经抗抑郁治疗的重度抑郁患者血浆中显着下调,经抗抑郁治疗有效后上调,并且PEDF在慢性不可预知性温和刺激（Chronic unpredictable mild stress,CUMS）与慢性社会挫败应激（Chronic social defeat stress,CSDS）两种经典抑郁动物模型的血清和海马区的表达也显着下降。越来越多的证据表明PEDF与抑郁症相关,前额叶（Prefrontal cortex,PFC）作为一个调节认知、记忆与情绪的关键脑区,在研究抑郁发病机制中被广泛研究,而有关PEDF与前额叶之间的联系目前还鲜有报道。目的1.验证MDD患者血浆中PEDF的表达改变;2.基于抑郁小鼠模型验证抑郁状态下PEDF在血清及PFC中的表达变化;3.评估小鼠PFC中过表达PEDF后是否存在行为学改变,通过定量检测明确PEDF的过表达引起小鼠前额叶中与抑郁相关的代谢物变化情况,进一步探索PEDF在前额叶发挥抑郁抵抗效能的机制。方法1.收集临床MDD患者与健康体检者血浆样本,通过酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immuno-absorbent Assay,ELISA）分析PEDF含量变化;2.构建CSDS抑郁小鼠模型,行为学评估后收集血清及前额叶,采用ELISA和Western blotting技术分别验证小鼠血清和前额叶中PEDF的表达;3.通过脑立体定位注射技术在野生型小鼠PFC中注射PEDF过表达病毒,采用液相色谱串联质谱（Liquid chromatography-coupled tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）检测PFC中28种关键神经递质,并筛选出差异表达的神经递质代谢物。结果1.相对于健康对照组,MDD患者血浆中PEDF含量显着减少;2.Western blotting结果显示相比于对照组,CSDS组小鼠前额叶中PEDF表达显着降低,CSDS小鼠血清内PEDF含量较对照组有下降趋势;3.行为学结果显示,PEDF过表达组小鼠相较于对照组表现出“抑郁抵抗”样行为;对比两组小鼠前额叶的神经递质水平,发现PEDF过表达组中5-羟基吲哚乙酸（5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA）、犬尿氨酸（Kynurenine,Kyn）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、鸟氨酸（Ornithine,Orn）、谷氨酰胺（Glutamine,Gln）均显着上调,而五羟色胺酸（5-hydroxytryptophan,5-HTrp）、谷氨酸（Glutamic acid,Glu）、天冬氨酸（Aspartic acid,Asp）下调。结论本研究首次发现PEDF在抑郁动物模型的前额叶脑区中存在下调表达,在小鼠前额叶过表达PEDF后出现抑郁抵抗表型,代谢组学结果显示过表达PEDF后的小鼠前额叶神经递质改变主要集中于色氨酸通路与谷氨酸通路。我们提出PEDF会通过前额叶发挥抗抑郁作用,是在抑郁症的病理生理机制研究的又一探索,提示PEDF可能是MDD的一个新的诊断和治疗靶点。
赵腾[2]（2021）在《NMDA受体亚基GluN2A/GRIN2A功能丧失型基因突变所致癫痫的发病机制及精准药物干预研究》文中进行了进一步梳理研究背景:N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体（NR）是脑内兴奋性神经递质-谷氨酸的主要受体。其作为一种配体门控型的离子通道,在突触内主要参与介导兴奋性突触后电流（EPSC）的产生及传递,在突触外还可参与γ-氨基丁酸（GABA）能中间神经元突触前GABA释放,进而影响抑制性突触后电流（IPSC）的产生。而构成神经元网络的兴奋性突触信号和抑制性突触信号的失衡是形成癫痫的重要原因。因此,NR应该是影响神经元网络兴奋/抑制平衡的关键因素。通过一些临床病例及细胞水平受体功能分析证实,NR功能增强型（Go F）基因突变和功能丧失型（Lo F）基因突变均可导致癫痫。而作为NR的亚基之一,GluN2A/GRIN2A突变的患者中78%表现为癫痫,是目前NR基因变异相关癫痫研究的重点。目前,Lo F型NR基因突变所致癫痫的发病机制尚不明确,在转基因动物水平进行在体、离体电生理及行为学研究,进而明确该型基因突变致病的特点和机制意义重大。另外,一些变构调节剂可以逆转部分基因变异所致的NR功能异常。通过细胞水平筛选并在动物水平干预,可能筛选出对Lo F型NR较为有效的正向变构调节剂（positive allosteric modulator s,PAMs）,从而为临床精准化治疗提供重要理论和实践支持。研究方法:本课题以临床报道及细胞水平受体功能分析证实较为典型的Lo F型突变GluN2A/GRIN2A-V685G为研究位点。首先利用非洲爪蟾卵母细胞在细胞水平进行NR功能验证,并根据文献资料选择了孕烯醇酮硫酸酯（PS）、24（S）羟基胆固醇（24（S）-HC）、妥布霉素、花生四烯酸、D-丝氨酸、精胺以及谷氨酸、甘氨酸做为备选药物在细胞水平进行敏感药物筛选,选出1-2种最为敏感的药物作为干预药物。利用胚胎显微注射法制备GluN2A/GRIN2A-V685G转基因小鼠,而后将小鼠分为空白组（WT）、功能丧失型突变组（Lo F）、空白治疗组（WT+drug）、突变治疗组（Lo F+drug）。在行为学方面,观察各组小鼠自发癫痫发作的情况,进行癫痫等级评分。若无自发癫痫的表型,则在各组建立高热癫痫模型,评估癫痫发作的阈值（发作潜伏期）。应用新颖物体识别实验（NOR）以及新颖物体位置识别（NOL）实验评估各组小鼠的认知状况;应用悬尾实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验评估各组小鼠的抑郁行为状况。在体检测各组小鼠皮层脑电图异常放电水平,并将各组小鼠断头取脑,应用膜片钳技术检测海马CA1区锥体神经元突触后膜NR所介导的电流（EPSC）以及GABA能中间神经元所介导的m IPSC水平,同时检测全锥体神经元动作电位的变化。最后利用Real-time PCR和Western blot技术检测GluN2A亚基的表达情况。研究结果:本课题利用非洲爪蟾卵母细胞在细胞水平进行了NR功能验证,结果显示转染GRIN2A-V685G突变c DNA的蛙卵表面NR电流较对照组明显下降,功能基本丧失。将备选药物应用到转染细胞,结果显示24（S）-HC可以部分逆转该突变的NR功能。结合相关文献,最终选择可以增加脑内及血清24（S）-HC水平且已经临床应用于抗HIV治疗的依法韦仑（efavirenz,EFV）作为干预药物。而后将动物分为了WT组、Lo F组、WT+EFV组、Lo F+EFV组。行为学评价显示,各组小鼠均未出现自发性癫痫发作,在建立高热惊厥模型后,Lo F组小鼠癫痫发作潜伏期较短,而Lo F+EFV组癫痫发作潜伏期则较Lo F组明显延长,各组小鼠的发作强度和发作时持续时间无明显差异。在认知功能评价中,各组在新颖物体识别实验（NOR）中无明显差异,在新颖物体位置识别实验（NOL）中,Lo F组与WT组差异也无显着性,但观察趋势可见Lo F组小鼠较WT组识别指数稍有降低。而Lo F+EFV组的NOL识别指数较Lo F组明显增高,差异有显着性,可见Lo F小鼠可能存在空间记忆能力减退,而EFV可以逆转这种趋势。在抑郁行为评估中,各组小鼠均未发现明显差异,且Lo F组和Lo F+EFV组小鼠在悬尾不动实验中不动时间反而更短。在体电生理学检测显示Lo F组小鼠的皮层脑电图出现癫痫样放电（seizure-like events,SLEs）的频率明显增加,而Lo F+EFV组则较少出现SLEs,说明EFV可以部分抑制突变小鼠的脑内异常放电。随后利用膜片钳进行突触内NR电流（EPSC）水平检测显示Lo F组电流幅度和最大电流面积均明显降低,Lo F+EFV组则较Lo F组明显升高,差异均有显着性。m IPSC水平检测显示各组电流的振幅峰值（peak amplititude）检测中未发现明显差异,但在电流发放频率（event frequency）检测中,Lo F组较WT组明显下降,而Lo F+EFV组则无下降。随后进行全细胞动作电位检测显示与WT组相比,Lo F组小鼠海马CA1区锥体细胞动作电位阈值有所下降,动作电位幅度值增加,动作电位输入电阻增加,相同电流刺激下动作电位根数明显增加,差异有显着性。而Lo F+EFV组较Lo F组在动作电位上述指标中有逆转的趋势,但差异无显着性。而后进行的Real-time PCR和Western blot检测显示各组在GluN2A表达中无明显差异。研究结论:（1）GRIN2A-V685G突变可使GluN2A亚基配体结合结构域（ABD）功能障碍,致谷氨酸效力丧失,进而导致NMDA受体功能障碍。（2）GluN2A/GRIN2AV685G转基因小鼠海马CA1区锥体神经元突触内NR介导的EPSC降低,而由突触外NMDAR参与的GABA能中间神经元所介导的m IPSC也下降。使神经元网络的兴奋/抑制平衡失调,最终导致锥体神经元兴奋性增高。（3）GluN2A/GRIN2A-V685G转基因小鼠容易出现癫痫发作,其皮层脑电图可见异常放电增多。（4）抗HIV药依法韦仑（EFV）可以通过增加脑内24（S）羟基胆固醇水平来部分恢复GluN2A/GRIN2A-V685G突变所致的NMDAR功能丧失,减少皮层的异常放电,抑制转基因小鼠的癫痫发作。
Huang Kuang,Yu-Ge Zhu,Zhi-Feng Zhou,Mei-Wen Yang,Fen-Fang Hong,Shu-Long Yang[3]（2021）在《Sleep disorders in Alzheimer’s disease: the predictive roles and potential mechanisms》文中进行了进一步梳理Sleep disorders are common in patients with Alzheimer’s disease, and can even occur in patients with amnestic mild cognitive impairment, which appears before Alzheimer’s disease. Sleep disorders further impair cognitive function and accelerate the accumulation of amyloid-β and tau in patients with Alzheimer’s disease. At present, sleep disorders are considered as a risk factor for, and may be a predictor of, Alzheimer’s disease development. Given that sleep disorders are encountered in other types of dementia and psychiatric conditions, sleep-related biomarkers to predict Alzheimer’s disease need to have high specificity and sensitivity. Here, we summarize the major Alzheimer’s disease-specific sleep changes, including abnormal non-rapid eye movement sleep, sleep fragmentation, and sleep-disordered breathing, and describe their ability to predict the onset of Alzheimer’s disease at its earliest stages. Understanding the mechanisms underlying these sleep changes is also crucial if we are to clarify the role of sleep in Alzheimer’s disease. This paper therefore explores some potential mechanisms that may contribute to sleep disorders, including dysregulation of the orexinergic, glutamatergic, and γ-aminobutyric acid systems and the circadian rhythm, together with amyloid-β accumulation. This review could provide a theoretical basis for the development of drugs to treat Alzheimer’s disease based on sleep disorders in future work.
Xin-Yu Liu,Lin-Po Yang,Lan Zhao[4]（2020）在《Stem cell therapy for Alzheimer’s disease》文中指出Alzheimer’s disease（AD） is a progressive neurodegenerative disease characterized by memory loss and cognitive impairment. It is caused by synaptic failure and excessive accumulation of misfolded proteins. To date, almost all advanced clinical trials on specific AD-related pathways have failed mostly due to a large number of neurons lost in the brain of patients with AD. Also, currently available drug candidates intervene too late. Stem cells have improved characteristics of self-renewal, proliferation, differentiation, and recombination with the advent of stem cell technology and the transformation of these cells into different types of central nervous system neurons and glial cells. Stem cell treatment has been successful in AD animal models. Recent preclinical studies on stem cell therapy for AD have proved to be promising. Cell replacement therapies, such as human embryonic stem cells or induced pluripotent stem cell–derived neural cells, have the potential to treat patients with AD, and human clinical trials are ongoing in this regard. However, many steps still need to be taken before stem cell therapy becomes a clinically feasible treatment for human AD and related diseases. This paper reviews the pathophysiology of AD and the application prospects of related stem cells based on cell type.
吕君文[5]（2020）在《经典MHCⅠ类分子在癫痫中的表达及功能的初步研究》文中进行了进一步梳理目的癫痫作为神经系统常见疾病之一,其发病机制十分复杂,目前仍未完全阐明。研究表明经典MHCⅠ类分子作为重要的免疫分子其不仅在发育及成年中枢神经系统表达并发挥重要的非免疫学作用例如参与神经发育、调节突触可塑性等,且在一些神经系统疾病中异常表达并发挥一定功能。迄今为止,经典MHCⅠ类分子在癫痫中的表达及功能尚不清楚。因此,本研究旨在探究经典MHCⅠ类分子在癫痫中的表达、功能及可能的作用机制。方法首先利用Western Blot、免疫组化和免疫荧光探究人癫痫脑组织中经典MHCⅠ类分子的表达及临床意义;然后利用成年C57BL6/J野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠,建立海人酸（KA）诱导的小鼠癫痫模型,利用Western Blot检测MHCⅠ类分子在野生鼠癫痫模型急性期中的表达。比较野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠在KA诱导癫痫持续状态期间的行为学差异。收集癫痫急性期不同时间点的小鼠海马组织,利用Fluoro-Jade C（FJC）染色、免疫组化和RT-q PCR比较野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠癫痫急性期神经元变性和小胶质细胞改变的差异;最后利用Western Blot检测野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠生理条件下和癫痫急性期海马部位突触相关蛋白的表达来初步探究MHCⅠ类分子在KA诱导小鼠癫痫模型中的作用机制。结果1.收集76例不同病理类型的难治性癫痫患者手术切除的脑组织石蜡标本及临床资料,14例手术切除新鲜脑组织及6例尸检对照新鲜脑组织。免疫组化和Western Blot结果显示经典MHCⅠ类分子在不同病理类型的难治性癫痫FCD各型及非特异性病变（NSL）的神经元和小胶质细胞中表达均上调,且该分子在神经元上的表达与其在小胶质细胞上的表达存在弱线性相关性。统计学分析进一步表明MHCⅠ类分子在神经元和小胶质细胞上的表达与癫痫发病持续时间和手术年龄间无线性相关性。免疫荧光双标结果显示除了表达在神经元和小胶质细胞上,经典MHCⅠ类分子还表达在发育异常的神经元上。2.利用成年C57BL6/J野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠,建立海人酸（KA）诱导的小鼠癫痫模型,收集癫痫急性期野生鼠海马组织,Western Blot结果显示经典MHCⅠ类分子在野生鼠癫痫模型急性期表达增加。3.利用Racines分级对小鼠行为学进行分析,行为学结果显示与野生鼠相比,MHCⅠ类分子基因敲除鼠癫痫持续状态期间癫痫发作程度较重,癫痫发作潜伏期缩短约21.6%,致痫剂量减少约11.4%。4.利用FJC染色、免疫组化和RT-q PCR检测野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠KA诱导癫痫急性期神经元变性的情况和小胶质细胞的改变,结果显示野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠海马部位变性神经元数目、小胶质细胞数目及炎症因子m RNA表达均增加,且MHCⅠ类分子基因敲除鼠在各时间点比野生鼠增加的明显。5.Western Blot结果显示与野生鼠相比,生理条件下MHCⅠ类分子基因敲除鼠海马部位突触相关蛋白Synapsin-1和VGlu T1表达上调,而VGAT表达下调,VGlu T1/VGAT比值增加,PSD95和Gephyrin表达没有变化。6.Western Blot结果显示KA诱导癫痫急性期,野生鼠和MHCⅠ类分子基因敲除鼠突触相关蛋白均出现相应的变化,MHCⅠ类分子基因敲除鼠Synapsin-1、VGlu T1和PSD95的表达始终高于野生鼠,VGAT的表达始终低于野生鼠。结论1.经典MHCⅠ类分子在癫痫病灶神经元和小胶质细胞上表达上调。2.MHCⅠ类分子参与KA诱导的小鼠癫痫模型的发生发展,且该分子对KA诱导的神经元损伤具有保护作用,并调节小胶质细胞的增生和活化。3.MHCⅠ类分子可能通过调节突触相关蛋白表达影响癫痫易感性及癫痫疾病的进展。本研究为阐明MHCⅠ类分子在癫痫中的功能及可能致病机制提供思路,有助于理解MHCⅠ类分子在神经系统疾病中的作用。
Michael Ntim[6]（2020）在《TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究》文中认为背景:TRIM32（Tripartite motif-containing protein 32,TRIM32）是TRIM蛋白（Tripartite motif protein）家族中的一种,既是一种神经干细胞抑制相关蛋白又影响转录进程。环状结构域的存在使TRIM家族的大多数成员都具有E3泛素连接酶的活性,能够对特定的底物进行泛素化,这是它们发挥生物学功能的手段之一。生理学上,E3泛素连接酶控制机体的稳态、细胞周期以及几种DNA修复途径。E3泛素连接酶主要通过大量泛素修饰反应对靶标进行翻译后修饰,最终将泛素基耦联到靶底物上。Nicklas等报道TRIM32启动神经元的分化和自我更新,这种作用可被c-Myc转录因子的泛素化和某些micro RNAs的激活所抑制。在海马齿状回（dentate gyrus,DG）区内层的神经干细胞有较高的TRIM32蛋白水平,在神经干细胞发育成神经细胞或未成熟神经元时转移到DG外层,但在海马脑室下区（subventricular zone,SVZ）和DG中的神经干细胞未见TRIM32表达。这些报道提示神经干细胞分化时可见TRIM32表达的上调。另外,TRIM32参与神经发生、抑制神经细胞增殖和细胞凋亡,而且脑内很多蛋白分子的异常表达均与TRIM32上调或下调有关。许多神经系统疾病,例如抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、自闭症和注意缺陷障碍的发生发展都与TRIM32的调节作用密切相关。学习记忆功能的障碍是许多神经疾病的共性,但是TRIM32缺乏对记忆的影响未见直接报道。有研究推测TRIM32的缺乏有可能引起突触可塑性改变损害学习和记忆功能,但是有关TRIM32对突触可塑性影响的确切报道至今未见。因此,本课题旨在研究TRIM32是否通过改变突触可塑性来影响学习和记忆。方法:本课题包括体内和体外实验两部分。用电生理学方法检测长时程增强（LTP）、输入/输出（I/O）曲线和双脉冲易化,以确定突触可塑性的变化。Western Blotting检测突触蛋白（Synaptophysin、Synapsin I、GAP-43、PSD95）、AMPA受体、NMDA受体、GABA受体、兴奋性和抑制性神经递质转运蛋白（EAAT2、SLC32A1）的表达水平。利用Western Blotting对Notch及其相关分子进行分析。免疫组织化学染色形态学观察相关蛋白的表达。RT-PCR和real-time PCR检测m RNA表达水平。采用Nissl染色法观察神经元数目的变化。高尔基染色来分析树突棘密度。宽频带（0.01-40000 Hz）记录神经元的电位信号,分析脉冲频率、局部场电位（LFPs）及各种振荡频宽（Delta、Theta、Alpha、Beta、Gamma）。同时,在体外实验中,在原代培养神经元上应用notch抑制剂DAPT梯度抑制notch,并使用上述一些技术验证其效果。统计分析采用不配对t检验分析两组间差异,采用单因素方差分析分析两组以上差异（Turkey’s post-hoc analysis分析比较差异）。结果:1、LTP为衡量突触可塑性的重要指标,在学习记忆中起着重要作用。高频刺激后诱导LTP,结果发现TRIM32敲除小鼠的局部场电位兴奋性突触后电位（f EPSP）的斜率和振幅较野生型小鼠相比显着降低（p<0.05）。输入/输出（I/O）曲线主要反映突触的基本传递效能,在本实验中TRIM32 KO型小鼠与野生型小鼠的I/O曲线无统计学差异,说明TRIM32基因敲除对小鼠神经元突触的基本传递效能未产生明显影响。双脉冲易化（PPF）是一种短时程突触可塑性模型。TRIM32基因敲除小鼠和野生型小鼠进行对比,PPF曲线无明显统计学差异,说明TRIM32的敲除不直接改变突触前膜的神经递质释放水平。2、树突棘的多少可以反应突触的形态可塑性。我们研究结果发现TRIM32敲除小鼠树突棘的平均数量是上调的,但是在海马CA1区域却是明显减少的。另外,TRIM32敲除小鼠的树突棘更纤细。说明TRIM32的敲除后突触形态可塑性减低。3、神经冲动传导过程中,突触前和突触后相关机制在LTP维持中被认为是非常重要的,首先我们观察了突触前及突触后标志分子的变化及神经递质及转运体的改变。结果发现,TRIM32敲除鼠的Syp、Syn1、GAP-43和PSD-95的蛋白及m RNA表达降低,免疫组织化学染色的结果也证实与此相一致。其次,我们也发现TRIM32 KO小鼠中与LTP密切相关的突触受体GABAA表达显着降低,NMDA受体NR1、NR2A、NR2B亚基蛋白表达水平升高。虽然NR1的增加幅度不大,但NR2A和NR2B的增加幅度明显。免疫组化结果也发现TRIM32敲除小鼠中NR2A和NR2B蛋白表达上调。同样,PCR结果也证实了相应蛋白分子的m RNA水平的变化。Western blot结果还发现TRIM32敲除小鼠谷氨酸转运体EAAT2蛋白表达水平明显升高,GABA转运体SLC32A1表达水平明显降低。海马和皮层部分区域的EAAT2（红色）和SLC32A1（绿色）荧光双染证实了此结论。以上结果表明TRIM32基因敲除后,可影响参与学习记忆的神经递质及突触上关键分子的表达。4、脑电图的频率及幅度高低间接反应学习记忆情况。我们对TRIM32敲除小鼠的脑电活动进行了分析。对4000s的记录结果进行统计发现,与野生小鼠相比,TRIM32敲除小鼠放电幅度和频率明显升高,证实了TRIM32敲除小鼠神经电活动失衡。整体的LFP是突触活动的体现,滤波结果显示TRIM32敲除小鼠的LFP显着降低。在TRIM32敲除小鼠中,Delta波和Beta波的功率谱显着升高,而Theta波和Gamma波的功率谱显着降低。5、神经元是神经系统的结构和功能单位,我们通过Nissl染色观察神经元的完整性,发现敲除小鼠大脑皮层和海马区神经元数量都显着减少,也预示学习记忆及突触可塑性的减低。6、Notch信号通路可参与突触可塑性,我们体内外实验研究了TRIM32调控notch信号通路进而调节突触可塑性的机制。Western blots结果发现TRIM32敲除小鼠脑内notch相关基因（Notch1,Hes1,NGN3）表达明显高于同窝野生鼠。RT-PCR也证实了这些基因的m RNA表达水平的变化。同时,TRIM32敲除小鼠的NGF蛋白和m RNA表达水平也明显低于野生型小鼠。DAPT（γ分泌酶抑制剂）,是众所周知的notch抑制剂。原代培养神经元上应用DAPT处理,发现notch1、hes1、ngn3 m RNA和蛋白表达呈现浓度依赖性下调。NGF在DAPT处理后保持不变（所有浓度）。Mash1也被发现以浓度依赖的方式上调。与此相一致的是,DAPT处理后神经元AMPA、NMDA（NR1、NR2A、NR2B）受体蛋白表达明显下调。GABAA受体表达也轻度下调。同时我们还测定了它们对兴奋性（EAAT2）和抑制性（SLC32A1）转运蛋白的总体影响。DAPT处理后下调EAAT2和上调SLC32A1的表达。从而证实了我们的推论。结论:本研究表明,TRIM32的缺失会损伤突触可塑性,主要表现为LTP受损、树突棘数量减少、突触可塑性相关蛋白下调、兴奋和抑制的失衡导致神经元数量的减少。这些都是造成这种可塑性损伤的原因。脑电的变化也反映了TRIM32基因敲除突触可塑性的破坏。进一步研究结果表明,在TRIM32敲除小鼠脑内,notch及其相关分子的表达发生了改变,notch信号通路可能是TRIM32 KO小鼠突触可塑性受损的分子机制。综上所述:TRIM32可通过调控notch信号通路进而调节突触可塑性的变化。
Muhammad Sajid[7]（2019）在《阿维菌素和噻虫嗪两种农药对水稻转录组的影响》文中提出农业害虫（Insect Pests,IPs）是制约作物增产的重要因子之一。作物保护旨在防止和避免农业害虫造成的损失。长期以来,育种家和植保科学家一直奋斗于寻求更好的方法应对农业害虫危害,并创制了大量技术、方法,各种技术均对病虫害防治有着重要贡献,但不同技术也同时伴随着各种局限。目前,农药是控制农业害虫危害最有效和最简单的方法。杀虫剂在高效控制农业害虫的同时,通常伴随着严重环境污染和生态破坏。目前,虽然已有大量工作报道杀虫剂对植物和动物的直接危害,但是其是否直接影响植物生理、代谢过程鲜有研究。在本研究中,我们在营养阶段给水稻喷了 2次种不同类型商业杀虫剂阿维菌素（Abamectin,ABM）和噻虫嗪（Thiamethoxam,TXM）。随后,利用高通量测序技术对各样本基因表达水平进行检测。在ABM处理下,共鉴定到470个基因发生差异表达（DEG）,GO富集分析发现这些基因主要参与多个重要生物学过程,包括环境应激响应、信号传递和蛋白代谢等。与ABM相比,TXM对植物内源性代谢过程的影响略大。在TXM处理的水稻中,我们检测到670个DEGs。其中,504个基因为TXM特异诱导差异表达基因,这些基因富集于多种GO terms和细胞过程,与TXM的广谱特征紧密相关。剩余166个DEGs在两种农药处理下均显着差异表达。此外,比较分析农药处理后不同时间节点,我们发现与3h和3d相比,1d诱导的DEGs数量最多,表明农药对基因表达没有长期持续影响。两种农药处理诱导有限的DEGs,表明农药不会显着影响水稻的生产性能。作为植物发育激素,生长素在植物生长和发育过程中起着重要作用。在本研究中,我们发现ABM调节部分生长素响应基因,包括1个生长素外排载体基因（Os01g69070）、3个生长素抑制基因（Os03g22270、Os11g44810和Os08g35190）和2个生长素响应基因（Os06g45970、Os02g07110）,表明ABM可能会影响水稻中的生长素信号。除了用于解析DEGs,RNA-seq也是分析基因可变剪接（AS）的重要资源。数据分析发现,在两种农药处理下,共鉴定到274个DE AS,涉及270个基因。其中,ABM和TXM处理下分别有178和167个DE AS事件。我们将DE AS分为四类,外显子跳跃（ES）丰富最高（67.15%）,其次是可变3’剪接位点（A3SS）（20.44%）,内含子保留（IR）和可变5’剪接位点（A5SS）比例最少,仅占总体的6.93%和5.47%。随后,我们使用MapMan分析将DE AS进行注释,发现它们显着富集于RNA和蛋白质代谢。选择性剪接伴随着宿主基因表达的改变,说明基因可变剪切也是植物响应农药处理的重要途径。长链非编码RNA（longnon-coding RNA,lncRNA）是生物体基因表达中另一个重要调控因子,本研究发现部分lncRNA也受两种农药诱导。在ABM和TXM处理下,我们共检测到83个lncRNA（DELS）显着差异表达。部分LncRNA可充当miRNA“海绵”以调控蛋白质编码基因的表达,例如,我们鉴定到lncRNA TU9050A和TU38959通过miRNA的海绵活性诱导其相邻编码基因的表达。TE插入是除lncRNA之外的植物中基因表达的另一个重要贡献者。我们在ABM和TXM处理下共鉴定到193和387 DETEs,其中,92个DETEs在两种农药处理下均显着差异表达。与随机TEs相比,DETEs在基因附近显着丰富,表明DE TEs可能通过参与调控邻位基因或lncRNA表达而响应农药处理。综上,本研究可为有效使用农药防治病虫害提供一定参考。
陈可钦[8]（2019）在《苹果SND1与MYB46转录因子的功能及作用机制》文中研究表明盐胁迫与渗透胁迫等能够影响果树的生长发育和果实品质的形成。木质素是维管植物体内的第二大生物聚合物,不仅为细胞提供机械保护,也在提高植物抗逆性等方面发挥着不可替代的作用。本研究以苹果（Malus domestica）中木质素合成途径中的NAC关键转录因子SND1和MYB关键转录因子MYB46为出发点,通过转基因技术,体外分子试验等手段阐明了它们的功能,揭示了苹果中木质素代谢途径的转录调控网络,并初步探明了它们提高苹果对非生物胁迫耐受性方面的分子机制。主要研究结果如下:1.从苹果中克隆了MdSND1基因。氨基酸序列比对结果表明MdSND1中的DNA绑定结构域与其它物种中的SND1具有高度保守性,亚细胞定位实验及酵母双杂实验结果表明MdSND1均为定位在细胞核内的转录激活因子。2.从苹果中鉴定得到SND1下游木质素合成调控的关键转录因子MdMYB46,通过氨基酸序列比对发现,MdMYB46中的R2R3结构域（DNA绑定结构域）与其它物种中的MYB46具有高度保守性,亚细胞定位实验及酵母双杂实验表明MdMYB46为定位在细胞核内的转录激活因子。3.苹果中具有与拟南芥中相同的SND1-MYB46木质素合成调控模式。苹果中的SND1都能直接绑定下游MYB46基因的启动子,并调控其表达;苹果中的MYB46能绑定下游木质素合成相关基因的启动子调控其转录从而促进木质素合成。4.在50μM ABA、200 mM NaCl及300 mM甘露醇模拟的非生物胁迫处理下,MdSND1和MdMYB46的表达水平均出现明显上调。与野生型苹果植株‘GL-3’相比,过表达MdSND1、MdMYB46的转基因苹果对盐和干旱胁迫表现出更强的耐受性,而沉默MdSND1、MdMYB46的苹果植株的耐受性则较差。5.苹果中受渗透胁迫诱导的基因MdABRE1A、MdAREB1B、MdDREB2A、MdRD22和MdRD29A的表达量在MdSND1过表达和沉默的苹果植株中均显着上调和下调;而MdABRE1A、MdDREB2A、MdRD22和MdRD29A基因的表达量在MdMYB46过表达和沉默苹果植株中也出现显着升高和降低。6.对MdABRE1A、MdAREB1B、MdDREB2A、MdRD22和MdRD29A基因的启动子序列进行分析,发现其中含有多个MYB转录因子的结合位点,包括SMRE,M46RE和MYBCORE位点,以及SND1结合位点（SNBE位点）。凝胶迁移、萤火虫荧光报告基因及染色体免疫沉淀实验证明MdSND1通过直接绑定到MdABRE1A、MdAREB1B、MdDREB2A、MdRD22和MdRD29A基因的启动子上激活其表达;而MdMYB46能直接结合到MdABRE1A、MdDREB2A、MdRD22和MdRD29A基因的启动子而对其进行转录调控。本研究解析了苹果中木质素合成途径的转录调控网络,明确了MdSND1和MdMYB46在协同调控木质素积累及提高植株抗盐、抗渗透胁迫能力方面的作用,为苹果抗逆基因工程等的研究提供了重要的理论支持。
薄立军[9]（2016）在《七氟醚及右美托咪定对体外培养海马神经元发育的影响及机制研究》文中指出第一部分培养新生SD原代大鼠海马神经元、观察其形态学改变及纯度鉴定目的:掌握新生SD大鼠海马神经元的体外培养技术;观察新生原代大鼠SD海马神经元的形态学改变;采用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度。方法:取新生24h内的SD乳鼠,用碘酊和75%乙醇消毒,剪断头,分层剪开大鼠头部的皮肤和打开颅骨,用弯镊取出其整个大脑,置于预先冷却的DMEM液中,找到并剥离两侧完整的海马组织,置于解剖显微镜下,剥离并去除海马表面的血管和被膜,移入加有木瓜酶的DMEM中,温度为37°C,置于5%CO2培养箱中,消化30分钟。置入含有10%血清的DMEM液中2分钟,终止组织消化。在含有血清的DMEM液中,用维纳斯剪剪碎消化完成的组织块,反复轻轻吹打三到五次,置入200目细胞筛,过筛。取0.9 ml筛过的组织液,采用台盼蓝拒染法,计量活细胞数,将配制成1×106/ml密度的细胞悬液,每孔加500μl,种植于Matrigel基膜包被的24孔培养板上,置于恒温37°C,5%CO2的培养箱内培养6 h。全量更换成无血清Neurobasal培养基。于培养的第48 h时,加入终浓度为10μmol/L的阿糖胞苷。此后每2天半量更换培养液,密切观察神经元的生长状态。于培养7天后,应用免疫荧光化学技术,按不同的荧光标记得情况,可以分清神经元和星形胶质细胞。应用荧光显微镜观察神经元的状况并镜下留取照片,用于计数。按照随机原则,分别选取3个孔的随机3个视野,高倍视野（10×20倍）下,对神经元、星形胶质细胞及所有细胞核进行计数,通过计算神经元所占的百分比的均值,作为每孔神经元纯度。结果:体外培养的新生原代SD大鼠海马神经元,形态典型,突起连接成网,生长状态良好;体外培养的新生原代SD大鼠海马神经元细胞核染色清晰,海马神经元纯度为（94.81±1.90）%,各组间比较无统计学意义（p=0.81）。结论:体外培养的原代sd新生乳鼠海马神经元形态典型,纯度在90%以上,能够满足进一步的实验要求。第二部分七氟醚对发育期海马神经元的影响目的:探讨七氟醚对原代培养的发育期6d的sd乳鼠海马神经元影响方法:取原代培养第6d的海马神经元,随机分为4组:对照组（c组）七氟醚组随机分成3组,分别供应对照组空气,1MAC七氟醚3h、6h、12h的七氟醚处理（f1组、f2组、f3组）。所有海马神经元继续培养12h后,为各组神经元全量换液,并用pbs清洗2次,加入培养基继续培养24h,随机选取视野为神经元拍照。所得照片用moticmed6.0软件处理,使用其测量长度工具测量视野内轴突和树突的总长度,计数该视野神经元总数,以该视野神经元平均突起总长度作为统计指标。用免疫荧光化学法测定各组神经元突触素的含量,采集突触素荧光图像,用image-proplus6.0软件分析各组突触素的平均荧光密度（mod,meanopticaldensity）。用流式细胞检测检测技术,检测各组海马神经元的凋亡情况。结果:1MAC七氟醚暴露3小时（f1组）同对照组（c组）,神经元平均突起总长度差异无统计学意义（p>0.05）;f2组及f3组与c组比较,差异有统计学意义（p<0.05）;f2组和f3与f1组比较,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）。f2组及f3组与c组比较,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）;f1组与c组比较,差异无统计学意义;f2组和f3与f1组比较,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）。1MAC七氟醚暴露3小时（f1组）较对照组（c组）,神经元凋亡率无明显差别,无统计学意义（p>0.05）;随着1MAC七氟醚暴露的时间延长及f2和f3组,神经元凋亡率逐渐增高,差异有统计学意义（p<0.05）;f2和f3组与c组和f1组比较,f2组和f3组神经元凋亡率增高,差异有统计学意义（p<0.05）。结论:1MAC七氟醚暴露6小时及以上影响原代培养的乳鼠海马神经元突起及突触的发育,引起海马神经元的凋亡增加,可能引起乳鼠成年后学习和记忆功能的降低。第三部分七氟醚对发育期海马神经元影响的可能机制目的:探讨七氟醚对发育期海马神经元影响的可能机制。方法:取原代培养第6d的海马神经元,随机分为4组:空白对照组（c组）、1MAC七氟醚3小时组（f1组）、1MAC七氟醚6小时组（f2组）、1MAC七氟醚12小时（f3组）。f1、f2、f3组分别暴露于1MAC七氟醚下;c组暴露于空气下。将海马神经元置于恒温水浴箱中,保持温度于37°c,应用drager麻醉机,给于6l/min的气体流量,1MAC的七氟醚混合95%的空气和5%的co2,连接已预先制备的玻璃容器内,应用七氟醚气体检测仪检测气体浓度,维持七氟醚在容器内为1MAC。对照组置于玻璃器皿内给于除七氟醚以外的气体。12小时后放回培养箱继续培养。westernblot检测各组bdnf和trkb蛋白的表达。结果:bdnf水平在暴露于1MAC七氟醚6小时（f2组）、12小时（f3组）较对照组（c组）图像可见有明显的降低,差异有统计学意义（p<0.05）;而暴露于1MAC七氟醚3小时（f1组）bdnf水平较对照组（c组）图像可见有明显的升高,差异有统计学意义（p<0.05）。bdnf灰度值水平,在暴露于1MAC七氟醚6小时（f2组）、12小时（f3组）较对照组（c组）有明显的降低,差异有统计学意义（p<0.05）;而暴露于1MAC七氟醚3小时（f1组）bdnf水平较对照组（c组）有明显的升高,差异有统计学意义（p<0.05）。c组和f1组、f2组、f3组内参β-actin条带灰度值,差异无统计学意义（p>0.05）。trkb水平在暴露于1MAC七氟醚6小时（f2组）、12小时（f3组）较对照组（c组）图像可见有明显的降低,差异有统计学意义（p<0.05）;而暴露于1MAC七氟醚3小时（f1组）trkb水平较对照组（c组）图像可见有明显的升高,差异有统计学意义（p<0.05）。trkb灰度值水平在暴露于1MAC七氟醚6小时（f2组）、12小时（f3组）较对照组（c组）有明显的降低,差异有统计学意义（p<0.05）;而暴露于1MAC七氟醚3小时（f1组）trkb水平较对照组（c组）有明显的升高,差异有统计学意义（p<0.05）。c组和f1组、f2组、f3组内参β-actin条带灰度值,差异无统计学意义（p>0.05）。结论:1 1MAC七氟醚暴露3小时增加了体外培养海马神经元bdnf和trkb表达但未引起海马神经元凋亡、突起和突触发育的改变。2 1MAC七氟醚暴露时间6小时减少体外培养海马神经元bdnf和trkb表达可能是七氟醚响海马神经元突起及突触发育和神经元细胞凋亡的分子机制之一。3七氟醚对体外培养海马神经元的影响具有双向性,可能与七氟醚暴露的时间有关,其机制可能与七氟醚引起的bdnf和trkb表达的改变相关。第四部分右美托咪定对七氟醚引起的发育期海马神经元的神经毒性的影响目的:探讨右美托咪定对七氟醚引起的发育期海马神经元毒性的影响。方法:取原代培养第6d的海马神经元,随机分为5组:空白对照组（c组）、1MAC七氟醚组（f组）、右美托咪定组（d组）、1MAC七氟醚加右美托咪定组（fd组）、育亨宾组（y组）。fd组分成fd1组给于右美托咪定0.1umol/l;fd2组给于右美托咪定1umol/l;fd3组给于右美托咪定10umol/l。y组分成:y1组,y2组,y3组分别给予右美托咪定0.1umol/l,1umol/l,10umol/l。f组、fd组和y组分别暴露于1MAC七氟醚下6小时;d组加入生理盐水稀释的右美托咪定,使其终浓度为100nmol/l,fd组采取1MAC七氟醚混合95%的空气和5%的co2,6h同时加入生理盐水稀释的右美托咪定,使其终浓度为100nmol/l,c组和d组采用95%的空气和5%的co2,y组先加入育亨宾,使其终浓度为2umol/l,再加入右美托咪定和七氟醚,终浓度同fd组,f组和c组加入等体积的生理盐水。继续培养12h后,为各组神经元全量换液,并用pbs清洗2次,加入培养基继续培养24h,弃去培养基,用pbs清洗两次,收集每组细胞,利用westernblot技术分析各组脑源性神经营养因子（bdnf,brain-derivedneurotrophicfactor）及其特异性受体trkb和坍塌反应调节蛋白2（crmp-2,collapsinresponsemediatorprotein-2）表达的改变。利用gelimageanalysisv2.02软件分析各条带的灰度值,bdnf,trkb和crmp-2蛋白的相对量分别以bdnf,trkb和crmp-2条带的灰度值与内参β-actin条带灰度值的比值表示。用流式细胞检测检测技术,检测各组海马神经元的凋亡情况。结果:1比较各组bdnf,trkb和crmp-2蛋白的表达（1）bdnf:bdnf的表达水平,1MAC七氟醚暴露6小时（f组）及同时给于浓度为0.1umol/l、1umol/l、10umol/l右美托咪定（fd组）和y组比对照组（c组）,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）;单纯右美托咪定组和对照组之间表达无明显差别,差异无统计学意义（p>0.05）;而复合1MAC七氟醚和三种剂量右美托咪定均较单纯1MAC七氟醚暴露,bdnf表达水平有所升高,差异有统计学意义（p<0.05）;fd1组较fd2组和fd3组,bdnf表达水平明显降低（p<0.05）,fd2组与fd3组间表达无明显差别（p>0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,bdnf的表达水平较单纯1MAC七氟醚,数值有所升高,差异有统计学意义（p<0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,bdnf的表达水平较fd组,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）而当给于不同剂量的右美托咪定的y1组、y2组和y3组间,bdnf表达无明显差别。（2）trkb:trkb的表达水平,1MAC七氟醚暴露6小时（f组）及同时给于浓度为0.1umol/l、1umol/l、10umol/l右美托咪定（fd组）和y组比对照组（c组）,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）;单纯右美托咪定组和对照组之间表达无明显差别,差异无统计学意义（p>0.05）;而复合1MAC七氟醚和三种剂量右美托咪定均较单纯1MAC七氟醚暴露,trkb表达水平有所升高,差异有统计学意义（p<0.05）;fd1组较fd2组和fd3组,trkb表达水平明显降低（p<0.05）,fd2组与fd3组间表达无明显差别（p>0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,trkb的表达水平较单纯1MAC七氟醚,无明显差异（p>0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,trkb的表达水平较fd组,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）而当给于不同剂量的右美托咪定的y1组、y2组和y3组间,trkb表达无明显差别（p>0.05）。（3）crmp-2:1MAC七氟醚暴露6小时（f组）及同时给于浓度为0.1umol/l、1umol/l、10umol/l右美托咪定（fd组）和y组比对照组（c组）,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）;单纯右美托咪定组和对照组之间表达无明显差别,差异无统计学意义（p>0.05）;而复合1MAC七氟醚和三种剂量右美托咪定均较单纯1MAC七氟醚暴露,crmp-2表达水平有所升高,差异有统计学意义（p<0.05）;fd1组较fd2组和fd3组,crmp-2表达水平明显降低（p<0.05）,fd2组与fd3组间表达无明显差别（p>0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,crmp-2的表达水平较单纯1MAC七氟醚,数值有所升高,差异有统计学意义（p<0.05）;复合1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,crmp-2的表达水平较fd组,数值有所降低,差异有统计学意义（p<0.05）而当给于不同剂量的右美托咪定的y1组、y2组和y3组间,crmp-2表达无明显差别（p>0.05）。2比较各组海马神经元细胞的凋亡情况。1MAC七氟醚暴露6小时（f组）及同时给于浓度为三种剂量的右美托咪定（fd组）和复合育亨宾的y组均较对照组（c组）,神经元凋亡率明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）;单纯右美托咪定组和对照组之间表达无明显差别,差异无统计学意义（p>0.05）;而复合1MAC七氟醚和右美托咪定较单纯1MAC七氟醚暴露,神经元凋亡率明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）,其中fd1组较fd2组和fd3组,神经元凋亡率明显增高复合（p<0.05）而fd2组与fd3组间无明显差异（p>0.05）;1MAC七氟醚、右美托咪定和育亨宾时,神经元凋亡率较单纯1MAC七氟醚,数值有所降低,较单纯复合右美托咪定组,凋亡率明显增高（p<0.05）;而给于不同剂量的右美托咪定复合七氟醚,育亨宾,y1组、y2组和y3组间无明显差异（p>0.05）。结论:1 1MAC七氟醚减少体外培养海马神经元bdnf,trkb和crmp-2的表达可能是七氟醚影响海马神经元突起及突触发育的分子机制之一;2右美托咪定使七氟醚孵育的体外培养海马神经元中bdnf,trkb和crmp-2的表达增加,可能是右美托咪定能减少七氟醚对体外培养海马神经元突起及突触发育影响的可能分子机制之一;但是右美托咪定本身却使体外培养海马神经元中TrkB的表达减少;3阻滞α2肾上腺素受体可导致BDNF表达减少;4咪唑啉受体可能参与了右美托咪定对七氟醚的神经毒性的保护作用（增加了CRMP的表达）。
Aaron B Bradford,Patrick M McNutt[10]（2015）在《Importance of being Nernst: Synaptic activity and functional relevance in stem cell-derived neurons》文中提出Functional synaptogenesis and network emergence are signature endpoints of neurogenesis. These behaviors provide higher-order confirmation that biochemical and cellular processes necessary for neurotransmitter release, post-synaptic detection and network propagationof neuronal activity have been properly expressed and coordinated among cells. The development of synaptic neurotransmission can therefore be considered a defining property of neurons. Although dissociated primary neuron cultures readily form functioning synapses and network behaviors in vitro, continuously cultured neurogenic cell lines have historically failed to meet these criteria. Therefore, in vitro-derived neuron models that develop synaptic transmission are critically needed for a wide array of studies, including molecular neuroscience, developmental neurogenesis, disease research and neurotoxicology. Over the last decade, neurons derived from various stem cell lines have shown varying ability to develop into functionally mature neurons. In this review, we will discuss the neurogenic potential of various stem cells populations, addressing strengths and weaknesses of each, with particular attention to the emergence of functional behaviors. We will propose methods to functionally characterize new stem cell-derived neuron（SCN） platforms to improve their reliability as physiological relevant models. Finally, we will review how synaptically active SCNs can be applied to accelerate research in a variety of areas. Ultimately, emphasizing the critical importance of synaptic activity and network responses as a marker of neuronal maturation is anticipated to result in in vitro findings that better translate to efficacious clinical treatments.
二、Transgenic mice overexpressingγ-aminobutyric acid transporter subtypeⅠ develop obesity（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Transgenic mice overexpressingγ-aminobutyric acid transporter subtypeⅠ develop obesity（论文提纲范文）
（1）PEDF通过前额叶调节小鼠抑郁抵抗的代谢组学初步研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.局限性 |
| 参考文献 |
| 文献综述:前额叶在神经精神疾病中的研究进展 |
| 1.前额叶与抑郁症 |
| 2.前额叶与精神分裂症 |
| 3.前额叶与帕金森病 |
| 4.前额叶与阿尔茨海默病 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（2）NMDA受体亚基GluN2A/GRIN2A功能丧失型基因突变所致癫痫的发病机制及精准药物干预研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 癫痫的病因学研究进展 |
| 2.1.1 癫痫相关的神经结构与功能 |
| 2.1.2 脑结构性病因与癫痫 |
| 2.1.3 感染性病因与癫痫 |
| 2.1.4 免疫性病因与癫痫 |
| 2.1.5 代谢性病因与癫痫 |
| 2.1.6 遗传性病因与癫痫 |
| 2.2 NMDA受体基因变异与癫痫的相关性研究进展 |
| 2.2.1 NMDA受体的结构及功能 |
| 2.2.2 NMDA受体的分布 |
| 2.2.3 NMDA受体基因变异与癫痫 |
| 2.2.4 NMDA受体基因变异的药物调节 |
| 第3章 研究内容 |
| 3.1 细胞水平评估突变的NMDA受体功能及干预药物筛选 |
| 3.1.1 材料与方法 |
| 3.1.2 结果 |
| 3.2 GluN2A/GRIN2A-V685G转基因鼠制备 |
| 3.2.1 基因信息 |
| 3.2.2 蛋白信息 |
| 3.2.3 转基因载体构建及目的基因片段的获得 |
| 3.2.4 显微注射 |
| 3.2.5 小鼠出生与检测 |
| 3.2.6 交配扩繁 |
| 3.3 转基因鼠癫痫发病机制及精准干预药物研究 |
| 3.3.1 材料与方法 |
| 3.3.2 结果 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 GluN2A/GRIN2A-V685G 突变对 NMDA 受体功能的影响 |
| 4.2 GluN2A/GRIN2A-V685G突变特异性功能增强剂的筛选 |
| 4.3 GluN2A/GRIN2A-V685G突变小鼠行为学改变 |
| 4.3.1 GluN2A/GRIN2A-V685G突变小鼠癫痫发作的特点 |
| 4.3.2 GluN2A/GRIN2A-V685G突变小鼠认知功能变化 |
| 4.3.3 GluN2A/GRIN2A-V685G突变小鼠抑郁行为的表现 |
| 4.4 通过在体及离体电生理学检测探讨 GluN2A/GRIN2A-V685G 突变小鼠癫痫发病的机制 |
| 4.5 依法韦仑(EVF)对 GluN2A/GRIN2A-V685G 突变小鼠行为学、电生理的影响及应用前景 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）Sleep disorders in Alzheimer’s disease: the predictive roles and potential mechanisms（论文提纲范文）
| Introduction |
| Search Strategy and Selection Criteria |
| Potential Predictive Roles of Sleep Disorders in Alzheimer’s Disease |
| Abnormal NREM sleep |
| Sleep fragmentation |
| Sleep-disordered breathing |
| Potential Mechanisms of Sleep Disorders in Alzheimer’s Disease |
| Orexinergic system dysregulation |
| Glutamatergic and GABAergic system dysregulation |
| Circadian rhythm dysregulation |
| Aβaccumulation |
| Conclusions and Future Directions |
（5）经典MHCⅠ类分子在癫痫中的表达及功能的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 经典MHCⅠ类分子在神经系统中功能的研究进展 |
| 1 免疫系统中的经典MHCⅠ类分子 |
| 2 经典MHCⅠ类分子在神经系统中的表达 |
| 3 经典MHCⅠ类分子在神经系统中的功能 |
| 4 展望 |
| 第二章 人癫痫脑组织中经典MHCⅠ类分子的表达及临床意义 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 经典MHCⅠ类分子在海人酸诱导小鼠癫痫模型中的作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 经典MHCⅠ类分子在海人酸诱导小鼠癫痫模型中作用机制的初步探究 |
| 1 材料及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 小结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（6）TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| INTRODUCTION |
| 1.1 Background |
| 1.1.1 Synaptic plasticity |
| 1.1.2 Biochemical Mechanism |
| 1.1.3 Short term plasticity |
| 1.1.4 Long term plasticity |
| 1.2 Long Term Potentiation(LTP) |
| 1.3 Glutamate Receptors |
| 1.3.1 AMPA Receptors(AMPAR) |
| 1.3.2 NMDA Receptors |
| 1.4 Gamma-Aminobutyric acid(GABA)Receptors |
| 1.5 Excitotoxicity |
| 1.6 Notch Signaling in brief |
| 1.6.1 Notch in the Brain |
| 1.6.2 Notch and Plasticity |
| 1.7 Research Questions |
| 1.8 Objectives |
| 1.9 Justification of the study |
| 1.10 Hypothesis |
| MATERIALS AND METHODS |
| 2.1 Materials |
| 2.2 Methods |
| 2.2.1 Experimental animals |
| 2.2.2 Genotyping of TRIM32 mice |
| 2.2.3 LTP |
| 2.2.4 I/O curves |
| 2.2.5 PPF |
| 2.2.6 Nissl staining |
| 2.2.7 Golgi staining and analysis |
| 2.2.8 Primary Neuron Culture and inhibitor treatments |
| 2.2.9 RNA Extraction |
| 2.2.10 Reverse-transcription reaction preparation |
| 2.2.11 q RT-PCR analysis |
| 2.2.12 Protein extraction procedure |
| 2.2.13 Tissue lysates concentration and immunoblotting |
| 2.2.14 Immunofluorescence staining |
| 2.2.15 Surgery and Electrophysiological Neural Data acquisition |
| 2.2.16 Sorting and Analysis of Neural Data |
| 2.2.17 Statistical analysis |
| RESULTS |
| 3.1 LTP decreased in hippocampal slices of TRIM32 KO mice |
| 3.2 Input-Output Curve did not change significantly in TRIM32KO |
| 3.3 Paired Pulse Facilitation(PPF)did not change in TRIMKO in short term |
| 3.4 TRIM32 KO mice showed decreased Dendritic spine density and altered spine characteristics |
| 3.5 Synaptic Proteins are down-regulated in TRIM32 KO mice |
| 3.6 AMPA Receptors decreased in TRIM32 deficiency mice |
| 3.7 TRIM32 deficiency decreases expression levels of GABAA receptors |
| 3.8 TRIM32KO increased expression levels of NMDA receptors |
| 3.9 TRIM32 KO causes an imbalance in excitation and inhibition transporters |
| 3.10 TRIM32 KO increased the frequency of spikes |
| 3.11 Overexcitation is associated with decreased neuronal numbers in TRIM32 KO mice |
| 3.12 Local Field Potentials are reduced in TRIM32 KO |
| 3.13 The network activity at specific oscillatory frequency bands are impaired in TRIM32 KO |
| 3.14 TRIM32 relates with Notch pathway and inhibition with DAPT in-vitro downregulate notch and downstream genes |
| 3.15 Inhibition of notch with DAPT reduces the glutamatergic phenotypes to improve synaptic function |
| DISCUSSION AND CONCLUSION |
| 4.0 Discussion |
| 4.1 LTP decrease in hippocampal slices of TRIM32 KO mice |
| 4.2 TRIM32 deficiency decreases hippocampal dendritic spine density |
| 4.3 TRIM32 deficiency resulted in downregulation of synaptic proteins |
| 4.4 TRIM32 deficiency reduces AMPA receptors in the hippocampus |
| 4.5 Deficiency in TRIM32 downregulated the expression of GABAA Receptors |
| 4.6 Deficiency in TRIM32 increased expression levels of NDMA Receptors |
| 4.7 TRIM32 KO causes an excitatory-inhibitory imbalance |
| 4.8 Spike frequency is increased in TRIM32KO mice |
| 4.9 Overexcitation is associated with the decreased neuronal numbers in the absence of TRIM32 |
| 4.10 Local Field Potentials are reduced in TRIM32 KO |
| 4.11 TRIM32 influences EEG wave oscillations |
| 4.12 TRIM32 KO activates Notch signaling and inhibition of notch(with DAPT)influences the mechanisms contributing to impaired synaptic plasticity |
| 4.13 Inhibition of notch with DAPT reduces the glutamatergic phenotypes to improve synaptic function |
| Conclusion |
| REFERENCES |
| LITERATURE REVIEW |
| 5.0 Introduction |
| 5.1 Background |
| 5.1.1 The phenomenon of Neurogenesis |
| 5.1.2 The role of TRIM32 in neurogenesis |
| 5.1.3 The Role of TRIM32 mutation in disease pathologies |
| 5.1.4.Linking Neurogenesis to Synaptic plasticity |
| 5.1.5 The importance of receptors in synaptic plasticity |
| 5.1.5.1 NMDA Receptors |
| 5.1.5.2 NMDARs in learning and memory |
| 5.1.6 AMPA Receptors |
| 5.1.6.1 AMPA Receptors and Synaptic plasticity |
| 5.1.7 Synaptic proteins and their role in synaptic plasticity |
| 5.1.7.1 Synapsin |
| 5.1.7.2 Growth associated protein43 |
| 5.1.7.3 Synaptophysin |
| 5.1.7.4 Post Synaptic Density95 |
| 5.1.8 Neural Function in Learning and Memory |
| 5.1.8.1 Local Field Potentials |
| 5.1.9 Electroencephalogram(EEG)Measurements |
| 5.1.10 Notch in the development of the brain |
| 5.1.10.1 Role of Notch in NSC cell division |
| 5.1.10.2 Notch modulates NSC behavior |
| 5.1.10.3 Role of notch in the adult brain |
| 5.1.10.4 The Role of Notch in Brain disorders |
| REFERENCES |
| APPENDIX |
| ACKNOWLEDGEMENT |
| LIST OF PUBLICATIONS |
（7）阿维菌素和噻虫嗪两种农药对水稻转录组的影响（论文提纲范文）
| Acknowledgement |
| DEDICATED |
| List of Abbreviations |
| Abstract |
| 中文摘要 |
| Chapter 1 General Introduction |
| 1.1 Crop production is at risk |
| 1.2 Next generation techniques and GMOs |
| 1.3 Insect Pest Management |
| 1.4 Chemical control methods of IPs |
| 1.5 Significance of rice |
| 1.6 RNA-seq as a DEGs measuring tool |
| 1.7 Objectives of the study |
| Chapter 2 Literature review |
| 2.1 Importance of rice as a monocot |
| 2.2 Factors affecting rice production |
| 2.3 Effects of crop protection on yield level |
| 2.4 Strategies of IPs control |
| 2.5 Methods of pest control |
| 2.5.1 Biological control |
| 2.5.2 Mechanical control |
| 2.5.3 Cultural methods of IPs control |
| 2.5.4 Microbial control: |
| 2.5.5 Transgenic control method of IPs |
| 2.6 Pests and diseases of Rice |
| 2.7 Insects |
| 2.8 Nematode |
| 2.9 Diseases |
| 2.10 Integrated pest management (IPM)in rice |
| 2.10.1 Plants resistance to IPs |
| 2.11 R-genes |
| 2.12 Pesticides use |
| 2.12.1 Chemical control methods |
| 2.12.2 Thiamethoxam (TXM) (C_8H_(10)CIN_5O_3S) |
| 2.13 Cons and Pros of Chemical control method: |
| 2.14 Auxin |
| 2.14.1 Regulatory roles of auxin |
| 2.15 Salicylic acid |
| 2.15.1 Regulatory roles of SA in plants |
| 2.16 Regulation of gene expression |
| 2.16.1 Transcriptional regulation |
| 2.16.2 Regulation at post-transcription |
| 2.17 Alternative splicing |
| 2.17.1 Mechanism of splicing and AS regulatory elements |
| 2.17.2 Significance |
| 2.18 Long non-coding RNAs (IncRNAs) |
| 2.18.1 LncRNAS mediated gene expression |
| 2.18.2 Saturation |
| 2.19 Transposable elements |
| 2.19.1 Classification of TEs |
| Chapter 3 Identification of DEGs and DE AS |
| 3.1 Materials and Methods |
| 3.1.1 Plant materials |
| 3.1.2 RNA extraction and Illumina sequencing |
| 3.1.3 Analysis of RNA-seq data |
| 3.1.4 Differential gene expression analysis |
| 3.1.5 AS events and gene detection |
| 3.1.6 Differential AS gene detection and AS function |
| 3.1.7 Synthesis of cDNA and validation of DEGs by RT-qPCR |
| 3.2 Results |
| 3.2.0 Identification of DEGs under ABM treated rice |
| 3.2.1 An overview of ABM-induced DEGs through MapMan analysis |
| 3.2.2 Identification of DEGs under TXM applied rice |
| 3.2.2.1 An overview of TXM-induced DEGs through MapMan analysis |
| 3.2.3 Identification and characterization of the Co-expressed DEGs by two pesticides |
| 3.2.4 Identification of FT genes in RNA-seq data set |
| 3.2.4.1 Expression patterns of FT genes in RNA-seq data |
| 3.2.5 Identification of alternative splicing (AS) events in pesticides applied rice |
| Chapter 4 Characterization of DELs and DE TEs |
| 4.1 Materials and Methods |
| 4.1.1 Plant materials |
| 4.1.2 RNA extraction and Illumina sequencing |
| 4.1.3 LncRNA conservation analysis |
| 4.1.4 Detection of differentially expressed IncRNAs |
| 4.1.5 Prediction of miRNA,IncRNA and coding genes network |
| 4.1.6 Differentially expressed Transposable elements |
| 4.2 Results |
| 4.2.1 Characterization of IncRNAs in rice under pesticides treatments |
| 4.2.2 Transposable elements (TEs) are involved in the alteration of GE in the locale |
| Chapter 5 Discussion |
| 5.1 Alternative splicing as a source of GE in pesticides treated rice |
| 5.2 Differentially expressed IncRNAs (DELs) are the means to regulate gene expression |
| 5.3 Transposons might be involved in gene expression regulation |
| Chapter 6 Conclusion |
| Chapter 7 Future perspectives |
| References |
| Appendix |
| List of publications |
（8）苹果SND1与MYB46转录因子的功能及作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 1 前言 |
| 1.1 植物细胞壁的构成 |
| 1.2 木质素合成代谢途径 |
| 1.2.1 木质素合成相关酶类及作用 |
| 1.2.2 木质素合成代谢与其它代谢间的关系 |
| 1.2.3 木质素合成代谢的进化 |
| 1.3 木质素合成代谢的调控因子 |
| 1.3.1 NAC转录因子 |
| 1.3.2 MYB转录因子 |
| 1.3.3 其它调控因子 |
| 1.4 木质素生物合成途径对胁迫信号的响应 |
| 1.4.1 干旱及盐胁迫 |
| 1.4.2 光胁迫 |
| 1.4.3 低温胁迫 |
| 1.4.4 生物胁迫 |
| 1.5 木质素代谢基因工程的研究 |
| 1.6 本研究目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株 |
| 2.1.3 载体 |
| 2.1.4 各种酶类及试剂盒 |
| 2.1.5 引物 |
| 2.2 亚细胞定位 |
| 2.2.1 载体构建 |
| 2.2.2 烟草注射 |
| 2.2.3 激光共聚焦下观察定位 |
| 2.3 转录因子转录活性分析实验 |
| 2.3.1 载体构建 |
| 2.3.2 Y2H实验 |
| 2.4 苹果转化 |
| 2.4.1 载体构建 |
| 2.4.2 所需农杆菌及培养基配制 |
| 2.4.3 苹果叶片侵染 |
| 2.5 RNA提取 |
| 2.5.1 苹果叶片总RNA提取 |
| 2.5.2 含量与纯度检测 |
| 2.6 荧光定量PCR |
| 2.6.1 反转录 |
| 2.6.2 qRT-PCR检测 |
| 2.7 木质素的测定 |
| 2.8 染色体免疫沉淀实验 |
| 2.8.1 载体构建 |
| 2.8.2 苹果王林愈伤组织的培养 |
| 2.8.3 苹果愈伤组织的转化 |
| 2.8.4 染色体免疫沉淀实验 |
| 2.9 苹果材料胁迫处理 |
| 2.10 启动子绑定位点分析 |
| 2.11 凝胶迁移实验 |
| 2.11.1 载体构建 |
| 2.11.2 蛋白诱导 |
| 2.11.3 蛋白的纯化 |
| 2.11.4 EMSA |
| 2.11.5 DNA探针与蛋白质结合 |
| 2.11.6 制备非变性聚丙烯酰胺凝胶 |
| 2.11.7 电泳和转膜 |
| 2.11.8 洗膜和显影 |
| 2.12 萤火虫荧光报告基因转录活性分析实验 |
| 2.12.1 载体构建 |
| 2.12.2 烟草注射 |
| 2.12.3 荧光素酶活性检测 |
| 2.13 叶片相对含水量检测 |
| 2.14 脯氨酸含量检测 |
| 2.15 H_2O_2 含量检测 |
| 2.16 MDA含量检测 |
| 2.17 NBT/DAB染色 |
| 2.18 拟南芥转化 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 苹果SND1 转录因子在木质素调控中的功能 |
| 3.1.1 MdSND1 基因的克隆与序列分析 |
| 3.1.2 MdSND1 转录因子的亚细胞定位和酵母细胞中转录活性分析 |
| 3.1.3 MdSND1 在木质素合成过程中的作用 |
| 3.2 苹果中MdMYB46 在木质素合成过程中的功能 |
| 3.2.1 苹果MdMYB46 基因的克隆与序列分析 |
| 3.2.2 MdMYB46 的亚细胞定位和酵母细胞中转录活性分析 |
| 3.2.3 MdMYB46 在木质素合成过程中的作用 |
| 3.3 MdSND1和MdMYB46 在木质素合成过程中的调控机制 |
| 3.3.1 MdSND1对MYB46和MYB83 基因的调控作用和分子机制 |
| 3.3.2 MdMYB46 调控苹果植株木质素合成的机制 |
| 3.4 MdSND1和MdMYB46 正调控苹果对盐胁迫与渗透胁迫的耐受性 |
| 3.4.1 MdSND1 正调控苹果植株对盐胁迫与渗透胁迫的耐受性 |
| 3.4.2 MdMYB46 正调控苹果植株对盐胁迫与渗透胁迫的耐受性 |
| 3.5 MdSND1和MdMYB46 直接提高苹果耐盐及耐渗透胁迫能力的机制 |
| 3.5.1 苹果中胁迫应答相关基因在盐胁迫及渗透胁迫下的表达 |
| 3.5.2 MdSND1 对胁迫应答相关基因的转录调控 |
| 3.5.3 MdSND1 调控胁迫应答相关基因表达的分子机制 |
| 3.5.4 MdMYB46 对胁迫应答相关基因的转录调控作用 |
| 3.5.5 MdMYB46 调控胁迫应答相关基因表达的分子机制 |
| 4 讨论 |
| 4.1 苹果中SND1和MYB46 调控木质素的合成 |
| 4.2 MdSND1、MdMYB46 对盐胁迫和渗透胁迫响应 |
| 5 结论与创新点 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（9）七氟醚及右美托咪定对体外培养海马神经元发育的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 原代大鼠海马神经元的培养、形态学观察及纯度鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 七氟醚对发育期海马神经元影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 七氟醚对发育期海马神经元影响的可能机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 右美托咪定对七氟醚引起的发育期原代培养海马神经元毒性的影响及其机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 全身麻醉对婴幼儿的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、Transgenic mice overexpressingγ-aminobutyric acid transporter subtypeⅠ develop obesity（论文参考文献）
- [1]PEDF通过前额叶调节小鼠抑郁抵抗的代谢组学初步研究[D]. 白梦鸽. 重庆医科大学, 2021(01)
- [2]NMDA受体亚基GluN2A/GRIN2A功能丧失型基因突变所致癫痫的发病机制及精准药物干预研究[D]. 赵腾. 吉林大学, 2021(01)
- [3]Sleep disorders in Alzheimer’s disease: the predictive roles and potential mechanisms[J]. Huang Kuang,Yu-Ge Zhu,Zhi-Feng Zhou,Mei-Wen Yang,Fen-Fang Hong,Shu-Long Yang. Neural Regeneration Research, 2021(10)
- [4]Stem cell therapy for Alzheimer’s disease[J]. Xin-Yu Liu,Lin-Po Yang,Lan Zhao. World Journal of Stem Cells, 2020(08)
- [5]经典MHCⅠ类分子在癫痫中的表达及功能的初步研究[D]. 吕君文. 东南大学, 2020(01)
- [6]TRIM32基因敲除对小鼠海马突触可塑性的影响及机制研究[D]. Michael Ntim. 大连医科大学, 2020(02)
- [7]阿维菌素和噻虫嗪两种农药对水稻转录组的影响[D]. Muhammad Sajid. 浙江大学, 2019(01)
- [8]苹果SND1与MYB46转录因子的功能及作用机制[D]. 陈可钦. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [9]七氟醚及右美托咪定对体外培养海马神经元发育的影响及机制研究[D]. 薄立军. 河北医科大学, 2016(08)
- [10]Importance of being Nernst: Synaptic activity and functional relevance in stem cell-derived neurons[J]. Aaron B Bradford,Patrick M McNutt. World Journal of Stem Cells, 2015(06)