一、血管生成机制的研究进展（论文文献综述）
覃小珊[1]（2021）在《苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究》文中指出目的:探讨苦参素对人肝癌Hep G2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成的作用及其相关分子机制。方法:（1）采用Hep G2细胞条件培养基诱导HUVEC具有肿瘤内皮细胞的特性（TECs）。q PCR检测TEM1、TEM8的表达以明确TECs身份,应用倒置显微镜观察HUVEC在诱导前后的细胞形态。（2）采用ELISA法检测不同细胞培养基中VEGF的含量,并采用q PCR及细胞免疫荧光技术检测诱导前后的HUVEC中VEGFR2、Ets-1的表达。探讨肿瘤条件培养基促使正常ECs向TECs转变的分子机制。（3）采用CCK-8法、细胞划痕实验、体外血管形成实验分别检测浓度分别为0.375mg/m L、0.75mg/m L、1.5mg/m L、3mg/m L、6mg/m L苦参素在不同时间点对TECs增殖、迁移及成管能力的影响。（4）采用q PCR及细胞免疫荧光技术检测苦参素干预TECs前后VEGFR2、Ets-1的表达差异,探讨苦参素抑制TECs血管生成作用可能的分子机制。结果:（1）q PCR结果显示,与阴性对照组相比,经Hep G2细胞条件培养基诱导的HUVEC中TEM1、TEM8、Ets-1、VEGFR2的m RNA表达升高（P<0.05）,说明构建TECs成功。（2）ELISA结果显示,与内皮细胞培养基（endothelial cell medium,ECM）相比,Hep G2细胞条件培养基、混合培养基（含50%Hep G2细胞条件培养基的ECM）中VEGF含量均升高（P<0.001）。（3）细胞免疫荧光技术检测结果显示,与HUVEC相比,TECs中Ets-1、VEGFR2的平均荧光强度增大（P<0.05）。（4）CCK-8法结果显示,苦参素对TECs增殖的抑制作用随浓度增加而增大（P<0.001）;0.375mg/m L、0.75mg/m L、1.5mg/m L、3mg/m L苦参素组对TECs增殖的抑制作用随时间延长而减小,其中3mg/m L苦参素组最明显,差异具有统计学意义（P<0.05）,6 mg/m L苦参素组对TECs增殖的抑制作用随时间延长而增大（P<0.05）,选择0.375 mg/m L、0.75 mg/m L、1.5 mg/m L、3 mg/m L苦参素作为后续实验干预条件,其中3mg/m L浓度组作为后续基因水平及蛋白水平研究的时间效应实验组。细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,0.375 mg/m L苦参素组划痕愈合率差异无统计学意义（P>0.05）,其余苦参素组划痕愈合速度随浓度增加而减慢（P<0.05）;苦参素对划痕愈合率的影响随时间延长而越明显（P<0.05）。体外血管形成实验结果显示,细胞在种板3 h后逐渐出现管腔样结构,各组差异无统计学意义（P>0.05）,与对照组相比,0.375 mg/m L苦参素组管形成数量差异无统计学意义（P>0.05）,其余苦参素组管形成数量随浓度增加而减少（P<0.05）;管形成数量随着苦参素干预时间的延长而减少（P<0.05）。（5）q PCR结果显示,与对照组相比,除0.375 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中Ets-1、VEGFR2 m RNA表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,3 mg/m L苦参素组细胞中Ets-1、VEGFR2 m RNA表达随作用时间延长而增加（P<0.05）。（6）细胞免疫荧光检测显示,与对照组相比,除0.375 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中Ets-1蛋白表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,除0.375 mg/m L、0.75 mg/m L苦参素组外,不同浓度苦参素作用的细胞中VEGFR2蛋白表达随苦参素浓度增大而降低（P<0.05）;与对照组相比,3mg/m L苦参素中Ets-1、VEGFR2蛋白表达随时间延长而增加（P<0.05）。结论:（1）Hep G2细胞条件培养基可以模拟肿瘤微环境诱导正常内皮细胞具备肿瘤内皮细胞的特性,为基于肿瘤内皮细胞的抗肝癌血管生成研究提供了一个细胞模型。（2）苦参素能够抑制Hep G2细胞条件培养基诱导的HUVEC血管生成作用,其机制可能是通过抑制Ets-1的表达进而抑制VEGF/VEGFR2信号转导通路。
刘皎皎[2]（2021）在《“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究》文中研究表明目的:采用随机对照临床试验（RCT）方法观察“补肾生髓成肝”法治疗晚期肝癌的临床疗效,并探究其改善肝癌肝再生微环境的疗效机制,为临床推广应用提供较高级别的循证医学证据。方法:1.采用随机分组法将2017年1月至2020年6月就诊于陕西省中医医院肝病科的入选晚期肝癌患者共126例,基于随机数字表法简单随机分成3组,即西医对照组42例（以下简称西医组）,采用西医综合治疗方案;补肾生髓成肝单独治疗组42例（以下简称中医组）,采用地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减治疗方案;补肾生髓成肝综合治疗组42例（以下简称中西医组）,采用西医治疗组方案基础上加上地五养肝方、抗毒软坚方、左归丸合方化裁,辨证加减。入选后有10例患者脱落（中医组6例,3例因失访脱落,3例因不能坚持治疗脱落;西医组4例,2例因异地就医不便退出,2例因不能坚持治疗脱落）,最终纳入统计分析病例资料的共116例,西医对照组（西医组）38例、补肾生髓成肝综合治疗组（中西医组）42组、补肾生髓成肝单独治疗组（中医组）36例。该研究通过湖北省中医院伦理审查,在中国临床试验注册中心（世界卫生组织国际临床试验平台一级注册机构）完成临床试验注册,注册号:Chi CTR-IOR-17011439。参与研究的患者均自愿签署了知情同意书。对比三组治疗3个月及治疗6个月的生存率及生存期,对比治疗前、治疗后3个月血常规、粪常规加潜血、肝功、血糖、血脂、肾功等指标,对比三组治疗前后的中医证候评分、生存质量评分,并对患者生存期的独立影响因素进行分析。2.依据治疗方案治疗3个月后分别收集中医组、西医组、中西组每组20名患者血清,共60份,正常人群血清18份。收集的血清-80℃冻存于陕西省中医医院肝病实验室。通过悬液芯片系统检测患者血清肝再生相关细胞因子粒细胞集落刺激因子（Granulocyte Colony Factor,G-CSF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）、干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-6/8/18（Interleukin-6,IL-6,Interleukin-8,IL-8,Interleukin-18,IL-18）、血小板源性生长因子（Platelet Derived Growth Factor,PDGF-BB）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Nnecrosis Factor-α,TNF-α）的含量,观察体现“补肾生髓成肝”的中药对这些细胞因子的影响。结果:（1）三组患者治疗前后生存率及生存期比较:治疗3个月及6个月后,中西医组、中医组和西医组生存率比较,有统计学差异（88.10%VS72.22%VS52.63%）、（71.43%VS58.33%VS34.21%）（P<0.05）。治疗后中西医组、中西组和西医组患者生存期比较,具有统计学差异（23.86±17.55VS20.08±19.86VS15.95±16.44）（P<0.05）。（2）三组患者治疗前后肿瘤大小比较:中西医组、中医组和西医组组间比较及前后测量时间比较,差异不具有统计学意义（P>0.05）。（3）三组患者治疗前后肝功指标比较:中西医组患者治疗后直接胆红素水平、间接胆红素水平、谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶水平较治疗前显着降低（P<0.05）,组间比较无统计学差异（P>0.05）。中医组治疗后胆碱酯酶水平较治疗前显着升高,组间比较不具有统计学意义（P>0.05）。三组患者治疗前后白蛋白水平比较,具有统计学意义（P<0.05）;两两比较,中西医组及中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（4）三组患者治疗前后其他生化指标比较:三组患者治疗后血常规指标中白细胞水平、中性粒细胞/淋巴细胞比值、血小板水平,中西医组、中医组与西医组比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后肌酐水平比较,中西医组、中医组与西医组比较,具有统计学意义（P<0.05）。（5）三组患者治疗前后中医证候评分比较:三组患者治疗前后中医证候评分以时间因素为源的主体内差异及以组别为源的主体间效应,具有统计学意义（P<0.05）。三组患者治疗后的中医证候评分均显着低于治疗前,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组显着低于西医组的中医证候评分,差异具有统计学意义（P<0.05）。（6）三组患者治疗前后生存量表积分比较:三组患者生理机能积分方面治疗后积分均显着高于治疗前,具有统计学意义（P<0.05）。治疗后中西医组、中医组与西医组的社会功能评分比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。三组患者在生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,有统计学意义（P<0.05）,且两两组间比较后中西医组与中医组、西医组的生理职能、躯体疼痛、一般健康状况三个维度的积分组间比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（7）HGF表达水平比较:西医组明显高于中西医组、中医组及正常人群组,差异具有统计学意（2255.17VS1097.76VS1072.39VS882.67）（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制HGF的过度表达。（8）IL-6表达水平比较:中医组、中西医组及西医组均低于正常人群组,且组间差异具有统计学意义（5638.03VS5166.45VS12842.5VS24559.34）（P<0.05）。中西医组、中医组IL-6表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗可在一定程度上抑制IL-6的过度表达。（9）IL-18表达水平比较:西医组、中西医组及中医组,比较差异不具有统计学意义（120.345VS82.61VS78.58）（P>0.05）,但均较正常人群组升高（75.165）。提示单用“补肾生髓成肝”或配合西医综合治疗同样可以促进IL-18的表达。（10）PDGF-BB表达水平比较:中医组相对中西医组、西医组降低,差异不具有统计学意义（4677.18VS6140.6VS5534.885）（P>0.05）。但中医组低于西医组及中西医组,且更接近正常人群组（4401.67）。提示单用“补肾生髓成肝”可以抑制PDGF-BB的过度表达。（11）TNF-α表达水平比较:西医组、中西医组、中医组及正常人群组比较差异具有统计学意义（735.955VS244.93VS573.46VS1037.25）（P>0.05）。中西医组TNF-α表达水平明显低于正常人群组,差异具有统计学意义（P<0.05）。提示单用“补肾生髓成肝”可以更好的抑制TNF-α的过度表达。结论:“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌能够显着提高晚期肝癌患者3个月及6个月的生存率及生存期,改善晚期肝癌患者临床症状同时,改善患者各种生化指标。明显降低晚期肝癌患者的中医证候评分,提高患者的生存质量,为临床推广应用提供了较高级别的循证医学证据。“补肾生髓成肝”治疗晚期肝癌患者的疗效机制之一可能是通过抑制晚期肝癌患者HGF、PDGF-BB、TNF-α、IL-6的过度表达,同时升高晚期肝癌患者IL-18的表达,改善肝癌的肝再生微环境及其相关的炎症微环境、免疫微环境、血管新生微环境等。
宫文静[3]（2021）在《ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究》文中认为研究背景在所有恶性肿瘤中,肺癌的发病率和死亡率均位居首位。非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）是肺癌最主要的类型,占全部肺癌的80-85%。NSCLC起病隐匿,多数患者就诊时已处于疾病中晚期。近年来随着手术、化疗、放疗、靶向治疗及免疫治疗等多种治疗手段的发展,NSCLC的预后有了很大改善,但其整体5年生存率仍仅有20%,而复发和转移是NSCLC治疗失败的最主要因素。众所周知,肿瘤的生长和转移依赖新生血管的形成来提供能量及转移路径,因此抗血管生成治疗成为NSCLC整体治疗重要组成部分。目前临床中抗肿瘤血管生成的治疗策略主要包括:针对VEGF/VEGFR通路的大分子单克隆抗体、多靶点小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）类药物和血管内皮抑制素等。但由于肿瘤微环境中促血管生成旁路信号的激活、抗体结合力降低等原因,导致现有的抗血管生成药物的临床获益普遍较为短暂;此外,多靶点抗血管生成药物因其作用机制复杂,毒性反应较重,也在某种程度上限制了其临床应用。因此,探索NSCLC血管生成的分子机制,寻找新的有效治疗靶点,开发更具特异性的高效低毒的抗血管生成药物,是克服肿瘤血行转移、提高临床获益的重要研究方向,对提高NSCLC的治疗水平、改善患者预后具有重要意义。免疫球蛋白样转录子（immunoglobulin-like transcripts,ILTs）,也被称为白细胞免疫球蛋白样受体（leukocyte immunoglobulin-like receptors,LIR or LILR）,或单核细胞/巨噬细胞免疫球蛋白样受体（monocyte/macrophage immunoglobulin-like receptors,MIR）。根据胞内基序的作用不同分别将ILTs（LILRs）分为激活性受体LILRA（白细胞免疫球蛋白样受体亚型A,leucocyte immunoglobulin-like receptor subfamily A）和抑制性受体 LILRB（白细胞免疫球蛋白样受体亚型 B,leucocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B）。激活性受体LILRA包括LILRA1-LILRA6这6种受体;而抑制性受体LILRB包括LILRB1-5这5种受体。ILT4又被称为LILRB2、LIR2,单核细胞/巨噬细胞免疫球蛋白样受体10（monocyte/macrophage immunoglobulin-like 10,MIR-10）或 CD85d,是经典的免疫抑制性受体。作为I型跨膜蛋白,ILT4与不同的配体结合,通过胞内3个酪氨酸激酶抑制基序（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs,ITIMs）传递抑制信号至胞内。ILT4起初发现主要表达于髓系细胞包括树突状细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和血小板。最近研究显示它也表达于活化的CD4+T细胞中。ILT4通过抑制树突状细胞的成熟和抗原提呈、诱导巨噬细胞和髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSCs）M2 样极化、抑制中性粒细胞的吞噬功能、促进CD4+Th2分化等方式,诱导免疫抑制的微环境。除免疫细胞外,近年来研究发现ILT4在乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、原发性肝癌和非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤细胞也高表达,通过多种机制促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,诱导M2样肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）募集及T细胞老化和免疫浸润。课题组前期通过基因芯片发现ILT4可以上调血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）和基质金属蛋白酶 9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）这两种促血管生成因子的表达。VEGF-A是血管内皮细胞强有力的促细胞分裂剂,是调控血管生成的经典因子;MMP9也被证实能够促进血管基底膜的分解,诱导内皮细胞迁移,促进新生血管形成。因此我们推测ILT4可能与调控肿瘤新生血管密切相关。由于目前国内外针对ILT4在肿瘤新生血管形成方面的研究尚属空白,考虑到目前NSCLC抗血管生成治疗的局限性,以及我们课题组前期基因芯片的发现,本研究拟从组织水平、细胞水平以及大数据分析进行一系列研究检测ILT4对NSCLC血管生成的作用,并通过体外和体内干预性研究对可能的分子机制进行进一步的探索。该研究结果可能会为ILT4在NSCLC抗血管生成方面的研究带来新的突破。研究目的1.通过免疫组化、qPCR和Western blot检测NSCLC组织和细胞株中ILT4的表达,结合生存随访和GEO（Gene Expression Omnibus）数据库的生存信息,明确ILT4在NSCLC中的表达及预后意义;2.通过检测NSCLC组织中微血管密度（microvascular density,MVD）以及体外研究通过上调和沉默ILT4表达检测ILT4对血管内皮细胞迁移和小管生成的影响,结合数据库分析,明确ILT4对血管生成的作用;3.通过转染过表达、敲低ILT4,检测ILT4调控的促血管生成因子的变化、信号通路蛋白的变化及应用相应的促血管生成因子中和抗体、信号通路抑制剂进行干预,探究ILT4调控血管生成的分子机制;4.利用ILT4过表达/敲除肺癌细胞系建立裸鼠体内移植瘤模型,进一步体内验证ILT4对血管生成的影响及可能的分子机制。研究方法1.通过qPCR和Western blot方法检测NSCLC细胞和正常支气管上皮细胞中ILT4表达,明确ILT4在NSCLC细胞和正常支气管上皮细胞表达的差异,并筛选出内源性低表达ILT4的细胞系H1650、A549和内源性高表达ILT4的细胞系H1299、H1975。2.通过免疫组织化学方法检测ILT4在NSCLC组织和癌旁组织表达的差异,分析ILT4的表达与NSCLC临床病理指标的相关性;随访病人的生存状况,应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析ILT4对NSCLC患者总生存的影响;同时结合Kaplan-Meier Plotter在线生存分析系统,分析ILT4表达对肺癌患者预后的影响。3.应用免疫组化的方法检测NSCLC组织中ILT4表达与肿瘤微血管密度相关蛋白的表达情况,同时结合 GEPIA（gene expression profiling interactive analysis）数据库,统计分析ILT4与微血管密度的相关性,ILT4/CD34共表达与临床病理参数的相关性。4.采用转染技术,将携带ILT4过表达载体的慢病毒转染内源性ILT4低表达的H1650、A549细胞株,上调H1650、A549细胞中的ILT4的表达,空载体作为对照;将携带ILT4短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）慢病毒转染内源性ILT4过表达的H1975、H1299细胞株,以下调ILT4的表达,空载体作为对照。收集该细胞培养基作为条件培养基,用于培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelia cells,HUVECs）。应用 qPCR 和 Western blot实验方法验证转染效果。采用Transwell细胞迁移实验和HUVECs小管形成实验检测ILT4过表达及敲除对血管内皮细胞迁移能力和小管形成能力的影响。5.通过基因芯片技术发现ILT4上调后可引起促血管生成因子VEGF-A和MMP9表达的上调。细胞水平上,通过转染技术上调和下调NSCLC细胞ILT4的表达,利用qPCR和Western blot技术验证ILT4对VEGF-A和MMP9表达的调节作用;组织水平上,通过将NSCLC组织连续切片应用免疫组化验证ILT4与VEGF-A、MMP9在组织中表达的相关性。6.采用转染技术,将内源性低表达ILT4的细胞系H1650和A549过表达ILT4,采用VEGF-A中和抗体或MMP9中和抗体进行干预,收集条件培养基,应用Transwell细胞迁移实验和HUVECs小管形成实验观察条件培养基对血管内皮细胞迁移能力和成管能力的影响。7.结合基因微阵列筛选出ILT4调控的信号通路,采用转染技术过表达和沉默NSCLC细胞ILT4的表达,利用Western blot技术检测ILT4对促分裂素原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路中关键蛋白及其磷酸化水平的影响,包括pERK、ERK、pp38、p38、pJNK和JNK。8.将内源性低表达ILT4的细胞系H1650和A549过表达ILT4后,加入ERK抑制剂、p38抑制剂进行干预,分别阻断ERK信号通路,p38信号通路,应用Western blot方法检测通路抑制后VEGF-A和MMP9的表达情况,采用Transwell细胞迁移实验和小管形成实验观察ERK信号通路在ILT4调控血管生成方面的作用。9.通过慢病毒感染建立稳定ILT4过表达的NSCLC细胞株A549 LV-ILT4和对照组细胞株A549 LV-NC;建立稳定干扰ILT4的NSCLC细胞株H1299 LV-shILT4和对照组细胞株H1299 LV-shNC,选择BALB/c Nude裸鼠皮下注射上述细胞,体内实验观察ILT4对NSCLC细胞体内成瘤能力的影响;利用免疫组化的方法检测移植瘤组织中微血管密度,同时检测促血管生成因子VEGF-A、MMP9和信号通路ERK和pERK蛋白表达,进一步验证ILT4对血管生成能力的影响。研究结果1.ILT4在NSCLC细胞系和NSCLC肿瘤组织中高表达qPCR和Western blot检测显示ILT4在NSCLC细胞中的表达高于正常支气管上皮细胞。内源性低表达ILT4的细胞系为H1650和A549,内源性高表达ILT4的细胞系为H1299和H1975。免疫组化显示ILT4在NSCLC肿瘤组织中的表达高于肿瘤周围正常组织,ILT4在肿瘤组织的阳性表达率为:57.7%（52/90）,在周围正常组织中的阳性率为4.4%（4/90）。2.ILT4表达与NSCLC患者临床病理指标及患者预后的相关性ILT4在NSCLC肿瘤组织中的表达与较晚的TNM分期（III期-IV期,p=0.0104）,淋巴结转移（p=0.001）成正相关。随访90例NSCLC患者生存,Kaplan-Meier生存分析显示ILT4高表达患者的OS低于ILT4低表达患者OS（p=0.0419）。利用Kaplan-Meier Plotter在线生存分析系统分析ILT4对肺癌患者预后的影响,采用包含ILT4基因特定序列的探针进行测探,探针207697xat信息显示ILT4高表达组患者总生存OS（p=0.056）及中位至疾病进展时间FP均低于ILT4低表达组（p=0.022）。3.ILT4表达水平与NSCLC瘤内微血管密度的相关性,ILT4/CD34共表达与临床病理指标的相关性目前尚没有ILT4在NSCLC血管生成方面的研究,我们探索性的分析了ILT4表达水平与NSCLC肿瘤组织中的微血管密度的相关性。采用临床常用的CD34阳性的细胞表达情况代表微血管密度。GEPIA数据库分析提示,ILT4与CD34表达呈正相关;组织标本免疫组化结果提示ILT4高表达组的微血管密度显着高于ILT4低表达组的微血管密度（p=0.0058）。同时ILT4+/CD34+共表达患者,较ILT4-/CD34-组患者,有更高的淋巴结转移率（p=0.0466）,共表达组腺癌的患者比例明显增高（p=0.0 12）。4.ILT4促进HUVECs细胞迁移能力和HUVECs小管形成能力Transwell细胞迁移实验证实过表达ILT4的H1650和A549的条件培养基促进HUVECs细胞迁移,并提高其成管能力;ILT4下调的H1975和H1299的条件培养基抑制HUVECs的细胞迁移,减弱其成管能力。5.ILT4可以上调NSCLC中促血管生成因子VEGF-A和MMP9的表达基因芯片检测提示肿瘤细胞ILT4过表达可引起VEGF-A和MMP9基因表达上调。在细胞水平上,通过qPCR和Western blot结果提示过表达ILT4后的NSCLC细胞系VEGF-A和MMP9的RNA水平和蛋白水平均明显升高;下调ILT4表达后的NSCLC细胞系VEGF-A和MMP9的RNA水平和蛋白水平均显着下降;组织水平上,在病理连续切片中通过免疫组化提示ILT4高表达组织中VEGF-A、MMP9的蛋白表达水平偏高。6.ILT4通过调控NSCLC细胞的VEGF-A、MMP9表达参与血管内皮细胞迁移和HUVECs小管形成内源性低表达ILT4的H1650和A549细胞系过表达ILT4后,加入VEGF-A中和抗体或MMP9中和抗体进行干预,收集条件培养基,培养HUVECs,结果示阻断VEGF-A、MMP9表达后,HUVECs细胞迁移能力明显降低;HUVECs的小管形成能力明显下降。7.ILT4可以激活NSCLC细胞ERK、p38信号通路基因微阵列分析提示上调ILT4后可引起MAPK信号通路中多种基因的表达。MAPK信号通路主要包括ERK通路,JNK通路和p38信号通路。Western blot实验提示H1650和A549细胞过表达ILT4后,肿瘤细胞的pERK、pp38水平升高,H1975和H1299细胞下调ILT4表达后,pERK,pp38蛋白表达水平均明显降低。8.ILT4通过激活ERK信号通路促进VEGF-A、MMP9表达将内源性低表达ILT4的H1650、A549细胞过表达ILT4后,加入ERK抑制剂U0126和p38通路抑制剂SB 203580（20μM）进行干预,培养48小时,收集条件培养基,Western blot提示加入ERK抑制剂U0126后ILT4过表达上调的VEGF-A、MMP9表达被显着逆转,加入p38通路抑制剂对VEGF-A、MMP9表达无影响。9.ILT4通过ERK信号通路调控血管内皮迁移和HUVECs的小管形成Transwell迁移实验和HUVECs小管形成实验证实抑制ERK信号通路后,ILT4上调的血管内皮细胞迁移能力和成管能力均显着逆转。结果提示:ILT4通过ERK信号通路诱导VEGF-A、MMP9表达并调控血管内皮细胞迁移和HUVECs的小管形成。10.ILT4促进NSCLC细胞体内成瘤及血管生成通过裸鼠皮下注射稳定过表达ILT4的NSCLC细胞株A549 LV-ILT4,和注射稳定干扰ILT4表达的细胞株H1299 LV-shILT4,建立裸鼠移植瘤模型,结果提示ILT4过表达组,NSCLC肿瘤生长速度显着快于对照组,ILT4过表达组的肿瘤体积和重量明显大于对照组;干扰ILT4表达组,肿瘤生长速度显着慢于对照组,ILT4干扰组的肿瘤体积和重量明显小于对照组。通过建立裸鼠移植瘤模型,造模4周后,分离肿瘤组织行免疫组化,结果提示ILT4过表达组,肿瘤微血管密度显着高于对照组,VEGF-A和MMP9表达高于对照组,pERK明显高于对照组,ERK表达无明显改变;干扰ILT4表达后,肿瘤微血管密度显着低于对照组,VEGF-A和MMP9表达低于对照组,pERK明显低于对照组,ERK表达无明显改变。体内实验进一步支持ILT4具有促进NSCLC血管生成的潜力。结论1.ILT4在NSCLC组织中及多个NSCLC细胞株中高表达,与更晚的病理分期、淋巴结转移及临床不良预后明显相关,可作为预后预测因子。体内体外实验证实ILT4可促进NSCLC血管生成。2.体外实验证实了 ILT4通过激活ERK信号通路上调VEGF-A、MMP9的表达并促进NSCLC血管内皮细胞迁移和小管形成,体内实验进一步验证了 ILT4对NSCLC血管生成的作用及潜在机制。
王一同[4]（2021）在《华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究》文中研究说明研究背景恶性腹水是晚期结肠癌患者的常见并发症,是临床治疗的难点。西医目前主要采用腹腔穿刺置管引流、全身化疗或联合腹腔灌注化疗等方法,但恶性腹水患者多为肿瘤晚期,经过多程放、化疗治疗,体质较差,再次化疗的敏感性及耐受性降低,且恶性腹水多为血性,无法大量置管引流,使腹胀、喘憋等症状持续存在,严重影响生活质量。因此需探索更为温和、有效的治疗方法。中药腹腔灌注,可避免口服汤药引起的胃肠不适,副反应小,近年来广泛应用于恶性腹水的临床治疗。本团队致力于华蟾素注射液腔内灌注治疗研究多年,发现华蟾素注射液对恶性浆膜腔积液有一定的疗效,庄等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注治疗恶性浆膜腔积液,有效率为66.42%;杨等研究发现,华蟾素注射液腔内灌注对于恶性胸水有效率为60.00%;袁等研究发现,华蟾素注射液对于消化系统肿瘤来源恶性腹水有效率为75.4%,疗效更好,但前期研究对于不同癌种患者分层后病例数较少,未进行具体分层讨论。恶性腹水的生成与血管新生密切相关。本团队前期基础研究发现华蟾素注射液能够降低恶性腹水中的红细胞数量,使腹水颜色变浅,推测华蟾素注射液可能通过抑制肿瘤血管新生干预恶性腹水的生成。血管生成拟态（Vasculogenic Mimicry,VM）是近年来提出的全新肿瘤血管新生模式,可能与传统内皮细胞参与的肿瘤血管新生共同促进恶性腹水的生成。既往多数研究关注在华蟾素对内皮细胞参与的肿瘤血管新生的影响,鲜有研究探究华蟾素对VM形成的影响。研究目的临床部分:明确华蟾素注射液腹腔灌注治疗对于结肠癌这一单一病种来源的恶性腹水的疗效及该治疗方法对应的优效人群特征,以期为华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水提供更为个体化的临床指导。实验部分:由临床现象探索内在机制。以VM为新切入点,通过体内、体外实验观察华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞VM形成的影响及作用机制,从而更为全面地从肿瘤血管新生角度阐述华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌恶性腹水的作用机制。研究方法临床部分:采用单臂回顾性研究方法,收集2010年1月1日～2020年12月31日于北京中医药大学东方医院肿瘤科行华蟾素注射液腹腔灌注治疗的结肠癌恶性腹水的患者临床资料,从腹水量控制率、腹水质改善率、KPS评分改善情况及患者生存期方面进行疗效评价,同时评价安全性。进一步对比不同因素（如肿瘤原发病特点、转移情况、整体及局部中医辨证分型、合并全身治疗等）对疗效的影响,从中筛选优效病例,总结优效人群特征。实验部分:（1）采用结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种法建立BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;观察造模前后及华蟾素注射液干预前后裸鼠一般体征、体重、腹围、腹水量、腹水红细胞数量及腹腔转移瘤瘤重等。（2）采用CoCl2化学诱导建立结肠癌HCT116细胞体外缺氧模型;采用CCK-8实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。（3）采用Matrigel基质胶细胞三维培养建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型;通过PAS-CD31组织化学与免疫组化双染法显示结肠癌HCT116细胞体内VM的形成;显微镜下计数VM形成数目,观察缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌HCT116细胞体内、体外VM形成的影响。（4）采用RT-qPCR、Western-blot实验检测缺氧微环境及华蟾素注射液对结肠癌 HCT116 细胞 VM 形成相关靶点 HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白表达的影响。研究结果临床部分:（1）腹水量疗效评价:研究共纳入135例患者。灌注后腹围较灌注前显着减小（P<0.01）;完全缓解2例,部分缓解25例,稳定56例,合计有效83例,无效52例,总有效率61.5%。（2）腹水质疗效评价:灌注后腹水红细胞数、腹水肿瘤标记物、腹水乳酸脱氢酶水平较灌注前显着下降（P<0.01）;腹水红细胞较治疗前下降≥25%者94例,总有效率74.0%;腹水肿瘤标记物较灌注前下降≥25%者70例,总有效率55.1%,其中CEA、CA199、CA724水平下降显着,铁蛋白水平较灌注前差异无统计学意义（P>0.05）;腹水乳酸脱氢酶较治疗前下降≥25%者50例,总有效率39.4%。（3）KPS评分疗效评价:灌注后KPS评分较灌注前显着提高（P<0.01）;较治疗前提高者41例,较治疗前稳定者82例,较治疗前减少者12例。（4）生存情况疗效评价:纳入患者截至末次随访,仍存活者2例,腹水生存期为1～31个月,平均腹水生存期5.66±4.59个月,中位腹水生存期4.00个月;腹水1年生存率为9.6%,2年生存率为3.7%,未见大于3年生存者。（5）安全性评价:出现不良反应者27例,占比20.0%,主要不良反应为腹痛（10例）、发热（11例）、恶心呕吐（3例）、腹泻（3例）,多可耐受或对症治疗后可较快缓解,为1级轻度不良反应。未见由药物引起的骨髓抑制、肝、肾功能异常及心电图改变,未见腹腔感染、肠梗阻、消化道出血等严重并发症,安全性良好。（6）短期疗效优效人群特征分析:对于男性、有饮酒史、左半结肠、灌注前血液NLR≤2.81、初诊即诊断恶性腹水、血性腹水、全身辨证含瘀毒证,全身辨证非肝肾阴虚证、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水量控制方面疗效更好,其中结肠癌位置、腹水性质、合并全身中医治疗是影响腹水量控制率的独立预后因素;对于有饮酒史、无肝转移、有腹腔淋巴结转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗患者的腹水颜色改善方面疗效更好,其中肝转移、胆红素升高、腹水性质、局部辨证为影响腹水颜色改善率的独立预后因素。（7）长期疗效优效人群特征分析:有家族史、左半结肠、无肝转移、无脑转移、转移部位≤2个、灌注前无血中乳酸脱氢酶升高、初诊即诊断恶性腹水、全身辨证非肝肾阴虚证、无不良反应及腹水量得到控制的患者腹水生存期更长,但与外部研究结果对比生存期未见明显延长。实验部分:（1）结肠癌HCT116细胞腹腔+脾脏原位接种可建立较为稳定的BALB/C裸鼠结肠癌血性腹水模型;Matrigel基质胶细胞三维培养可建立结肠癌HCT116细胞体外VM模型。（2）华蟾素注射液腹腔注射可抑制结肠癌血性腹水的生成、降低腹水中红细胞数目,抑制结肠癌腹腔转移瘤的生成。（3）缺氧微环境可促进结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭,增强体外VM的形成能力。（4）华蟾素注射液可逆转缺氧对HCT116细胞造成的不良影响,抑制其增殖、迁移、侵袭及体内、体外VM的形成。（5）缺氧微环境可上调HCT116细胞HIF-1α、VEGF、MMP2、MMP9、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达,华蟾素注射液干预后可抑制HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherinmRNA及蛋白表达,对MMP9 mRNA及蛋白未见显着影响。研究结论临床部分:（1）华蟾素注射液腹腔灌注可有效抑制结肠癌恶性腹水的产生,延缓病情进展,降低腹水中的红细胞数量,提高KPS评分,改善患者生活质量,安全性良好;（2）左半结肠癌、无肝转移、无胆红素升高、血性腹水、局部辨证为湿热毒证及合并全身中医治疗的患者是华蟾素注射液腹腔灌注治疗的优效人群,通过人群特征初步筛选后用药可提高临床疗效。实验研究:华蟾素注射液腹腔灌注抑制结肠癌血性腹水的机制,可能与其逆转肿瘤缺氧微环境,下调HIF-1α、VEGF、MMP2、VE-cadherin mRNA及蛋白的表达从而抑制结肠癌细胞体内、体外VM的形成,同时抑制结肠癌细胞增殖、迁移及腹腔侵袭有关。
崔鹤蓉[5]（2021）在《血管生成干预药物筛选及活性检测技术平台的初步建立与应用（一）》文中进行了进一步梳理目的:心血管系统是脊椎动物胚胎发育的第一个功能器官系统。血管生成研究方向迄今获批国家自然基金项目合计800余项,资助金额超过3亿,已建立多种评价方法,但现有依赖于体外筛选的评价模式局限了中医药作为研究对象的结果重现性可靠性,亟需建立高效客观的研究方法。本论文采用鹌鹑胚模型（qCAM）、微血管三维成像分析系统、DESI-MSI质谱成像、经典血管内皮细胞实验、代谢组学等多学科技术方法相互佐证,旨在建立适用于中医药的血管生成药物筛选与活性检测技术平台,为相关研究提供技术支持和方法学参考。方法:一、平台的建立。初步建立本平台,完成方法学考察及研究流程示例。本平台包括三个连续的评价环节:（1）基于qCAM模型的药物初步筛选（qCAM筛选）;（2）基于HUVEC实验的活性验证（HUVEC验证）;（3）基于组学分析的调控机制研究（组学分析）。1.方法学考察。考察qCAM模型的相似性、重复性、可靠性、适用性和可控性、易行性和经济性。qCAM模型的主要评价指标包括qCAM死亡率、血管生成形态学观察、血管病理学及超微结构、qCAMVEGFR2mRNA表达及NO含量等,从整体、组织、细胞、亚细胞、分子五个检测水平综合表征受试对象对血管生成的干预作用。（1）给药载体的优化。比较分子筛、硅胶粒、米粒、大孔树脂、甲基纤维素、明胶海绵对qCAM的影响,筛选模型给药载体。（2）给药时间的选择。开窗操作后,观察qCAM连续7天的发育情况,考察模型给药及取材时间。（3）模型稳定性。比较不同批次（2018年1月、3月、5月、7月、9月、11月）相同实验条件下qCAM微血管（三级+四级）计数结果。（4）模型重复性。验证性地评价课题组前期合成试药DG-15（5、20 μg）给药36 h对qCAM微血管数的影响。2.平台流程示例。以甲苯磺酸索拉非尼为研究对象,从实验设计、选择原则、方法学内涵、数据分析等方面详细阐释本平台的建立及研究流程。（1）qCAM筛选。选择40 μg多韦替尼（Dov）作为阳性对照药物,评价甲苯磺酸索拉非尼（ST,40、80 μg）给药36 h对qCAM微血管数、EN-face面血管分布、血管超微结构、VEGFR2表达及NO含量的影响。（2）HUVEC验证。选择2.5 μM Dov作为阳性对照药物,评价40μM ST处理24 h对HUVEC的细胞活力抑制率及划痕愈合百分比的影响。（3）组学分析。采用UPLC-QTOF-MS非靶向代谢组学分析40 μg ST给药36 h主要调节差异代谢产物及通路。二、应用实例。采用本平台解决代表性研究实例的具体科学问题,阐明本平台的特色和优势。1.平台在中药研究中的应用。基于本平台和qCAM模型开展基于血管生成的寒热药性规律研究,以30味中药及生品莪术（广西莪术、蓬莪术、温郁金）、醋莪术为研究对象,初步揭示基于血管生成的中药寒热药性生物学内涵。（1）文献挖掘。采用CNKI国学宝典数据库进行单库古籍检索,检索公式为“FT=（‘血管’+‘生成’）*‘寒热’”,检索类型为“全文”,检索时间不限;采用CNKI国学宝典数据库进行跨库文献检索,检索公式为“SU=（‘血管’+‘生成’）*‘寒热’”,检索类型为“主题”,检索时间不限。（2）qCAM评价。采用t检验和卡方检验评价中药对qCAM的相对血管面积、微血管数、总血管数指标的影响差异。（3）平台验证。qCAM筛选:检测83.33 mg/mL生品莪术和醋莪术水煎液给药36 h后鹌鹑胚的微血管数、VEGFR2 mRNA、NO含量;HBMEC验证:检测83.33 μg/μL生品莪术和醋莪术水煎液处理24 h后40 μM t-BHP造模4 h损伤HBMEC的细胞活力、ROS水平;组学分析:采用GC-MS非靶向代谢组学分析83.33μg/μL醋莪术水煎液处理24h调节HBMEC的差异代谢产物及通路;采用GC-MS代谢组学指认主要差异成分作为醋莪术促血管生成的质量标志物。2.平台在中药活性成分研究中的应用。采用本平台揭示延胡索乙素（THP）对血管生成的干预作用及机制。（1）qCAM筛选。选择16μg天麻素作为阳性对照药物,评价16、32、64 μg THP 给药 36h 对 qCAM 微血管数、EN-face 面血管分布、VEGFR2mRNA的影响。（2）HUVEC验证。采用五种HUVECs细胞损伤模型,造模条件分别是7.2 μM H2O2 处理 12h、3.6 μM H2O2 处理 12h、11 μM 过氧化叔丁醇（t-BHP）处理 4h,5.5μM过氧化叔丁醇（t-BHP）处理4h、320μM的氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）处理12h,造成不同程度的细胞损伤,80μM选择天麻素作为阳性对照,检测20、40、80 μMTHP处理24 h对损伤HUVEC的细胞活力、划痕愈合百分比的影响。（3）组学分析。采用DESI-MSI/GC-MS非靶向代谢组学分析THP调节的差异代谢产物及通路。3.平台在化学药物研究中的应用。采用本平台揭示课题组前期合成药物BA-12对血管生成的干预作用及机制。（1）qCAM筛选。选择40 μg Dov给药36 h作为阳性对照药物,评价20、40、80 μg BA-12给药36 h对qCAM微血管数、VEGFR2 mRNA的影响。（2）HUVEC验证。选择2.5 μM Dov处理24 h作为阳性对照,评价1.25 μM、2.5 μM、5 μM的BA-12处理24h对HUVEC的细胞活力、划痕愈合百分比以及VEGFR2蛋白表达的影响;采用MTT、划痕实验及流式细胞术,选择2.5μMDov处理24h作为阳性对照,评价2.5、5、10 μM BA-12处理24 h对T24的细胞活力、划痕愈合百分比、细胞周期、凋亡率的影响。（3）组学分析。采用UPLC-QTOF-MS/GC-MS非靶向代谢组学分析BA-12调节的差异代谢产物及通路。结果:一、平台的建立1.方法学考察。（1）给药载体的优化。明胶海绵不影响受试药物,准确定量。（2）给药时间的选择。开窗后36h能降低结果假阳性率。（3）模型稳定性。不同批次qCAM微血管计数组间差异没有统计学意义。（4）模型重复性。与空白组比较,高剂量（20 μg）DG-15给药能显着（P<0.05）增加qCAM微血管数,与前期结果一致。2.平台流程示例。（1）qCAM筛选。与空白组比较,80 μg ST给药能显着（P<0.05）抑制qCAM微血管数、VEGFR2 mRNA表达及NO含量,血管内皮细胞间隙增大、线粒体肿胀。（2）HUVEC验证。与溶剂对照组比较,40 μM ST处理24h能显着（P<0.05）抑制细胞活力及划痕愈合百分比。（3）组学分析。ST通过调节甘油酯代谢（P<0.05）,抑制血管生成。二、应用实例1.平台在中药研究中的应用。（1）文献挖掘。味甘性热药多促进生脉,味苦性寒药多抑制;寒热相关eNOS通路参与血管生成。（2）qCAM评价。寒热中药对血管生成的影响差异显着（P<0.05）。（3）平台验证。与空白组比较,醋莪术（VZT,83.33mg/mL）水煎液能显着（P<0.05）促进qCAM微血管数、VEGFR2 mRNA表达及NO含量;与模型组比较,VZT处理24h能显着（P<0.05）保护损伤细胞活力及ROS过表达;VZT通过调控三羧酸循环等代谢通路（P<0.05）,促进血管生成。2.平台在中药活性成分研究中的应用。（1）qCAM筛选。与空白组比较,64μg THP能显着（P<0.05）增加qCAM微血管数及VEGFR2 mRNA表达水平。（2）HUVEC验证。与模型组比较,80 μM THP处理24 h能显着（P<0.05）保护损伤细胞活力及划痕愈合百分比。（3）组学分析。THP通过调节瓜氨酸向精氨酸的转化、影响精氨酸的生物合成（P<0.05）,促进血管生成。3.平台在化学药物研究中的应用。（1）qCAM筛选。与空白组比较,80 μg的BA-12能显着（P<0.05）抑制qCAM微血管数及VEGFR2 mRNA表达。（2）HUVEC验证。与溶剂对照组比较,5 μM BA-12能显着（P<0.05）抑制细胞活力及划痕愈合比,下调VEGFR2蛋白表达。（3）组学分析。BA-12通过调控GSH及甘油磷脂代谢（P<0.05）,抑制血管生成。结论:本课题采用多学科方法技术相互佐证,初步建立了适用于中医药的血管生成干预药物筛选及活性检测技术平台,基于三个连续的研究环节（qCAM筛选、HUVEC验证、组学分析）,提出本平台的基本原则、操作流程及指导原则。本平台的优势包括:实现对中药等复杂研究对象的定性/定量检测,是一种综合研究方法;通过获得受试对象干预血管生成时产生多维立体、实时快速的生物效应信息,实现活体实时检测;在体内外水平上采用多组学分析更准确地识别受试对象对血管生成促进/抑制作用及分子机理。将为相关新药的研发创制提供技术支持和方法学参考。
辛娟[6]（2021）在《孕三烯酮联合来曲唑对大鼠子宫内膜异位病灶VEGF、MMP-9表达的影响》文中研究指明背景子宫内膜异位症（Endometriosis,EMs）是妇科常见疾病,该病虽为一种良性疾病,但却具有恶性肿瘤的生物学特征。EMs发病机制复杂,无论哪种学说均有其局限性,近些年,人们逐渐认识到细胞凋亡及血管生成在EMs发生中扮演重要作用。在血管生成过程中,血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是一种重要的调节因子;同时基质金属蛋白酶9（Matrix metal proteinase 9,MMP-9）也扮演一定的作用,其对血管内皮细胞的出芽有促进作用,进而诱发新生血管生成,最终导致EMs的发生。孕三烯酮可与内膜上相应受体结合,引发内膜萎缩,甚至蜕膜化,最终导致病灶坏死吸收而达到治疗目的,但不能解决EMs复发率高的问题。EMs是雌激素依赖性疾病,来曲唑通过抑制芳香化酶活性来抑制雌激素合成,进而起到治疗雌激素依赖性肿瘤的作用。故本研究主要探讨孕三烯酮联合来曲唑对大鼠子宫内膜异位病灶VEGF、MMP-9表达的影响。目的探讨孕三烯酮联合来曲唑对EMs模型大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9的影响,并与二者单独治疗进行对比,同时设置对照组,观察孕三烯酮联合来曲唑及二者单独治疗时EMs模型大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9表达变化情况,旨在为临床EMs的治疗提供一种新的思路和方法。方法EMs大鼠模型的建立采用子宫内膜自体移植法,建模成功后的模型大鼠随机分为对照组、孕三烯酮组、来曲唑组和联合组4组,每组15只。依据《药理实验方法学》中大鼠给药剂量转化公式计算每组大鼠的实际给药剂量。将孕三烯酮胶囊和来曲唑片研碎后分别加入花生油中形成1 mg/m L的悬浮液,孕三烯酮组按孕三烯酮0.26mg/（kg·d）进行灌胃,每周第1 d首次灌胃,第4 d给予第2次灌胃,2次/周,每周的第2、3、5、6、7 d给予等量花生油灌胃,连续灌胃4周;来曲唑组按来曲唑0.26 mg/（kg·d）每天灌胃,连续灌胃4周;联合组联合给予孕三烯酮和来曲唑治疗,孕三烯酮和来曲唑用法用量均不变,即按来曲唑0.26 mg/（kg·d）剂量,每天灌胃;同时每周第1 d和第4 d联合孕三烯酮灌胃,2次/周,剂量仍按孕三烯酮0.26 mg/（kg·d）,连续灌胃4周;对照组大鼠给予等量花生油,每天灌胃。连续灌胃4周后全部处死,开腹取异位病变组织。比较4组EMs模型大鼠治疗后异位病灶体积、异位内膜组织中VEGF、MMP-9蛋白表达量及VEGF mRNA、MMP-9 mRNA表达水平。结果1.治疗后孕三烯酮组、来曲唑组、联合组大鼠异位病灶体积均小于对照组,联合组明显小于其他两组（P<0.05）。2.治疗后光学显微镜下可见孕三烯酮组、来曲唑组、联合组细胞阳性表达比例大大降低。3.治疗后孕三烯酮组、来曲唑组、联合组大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9蛋白的平均光密度值（Mean optical density,MOD）均小于对照组,联合组明显小于其他两组（P<0.05）。4.治疗后孕三烯酮组、来曲唑组、联合组大鼠异位内膜组织中VEGF mRNA、MMP-9 mRNA相对β-actin的表达强度均小于对照组,联合组明显小于其他两组（P<0.05）。5.pearson相关性分析结果显示,EMs大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9的表达存在正相关性（P<0.05）。结论1.孕三烯酮、来曲唑均可下调EMs模型大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9蛋白及VEGF mRNA、MMP-9 mRNA的表达,缩小异位病灶体积,然二者联合效果更明显。2.EMs大鼠异位内膜组织中VEGF、MMP-9的表达存在一定的正相关性。
倪璐[7]（2020）在《基于斑马鱼模型的重楼抗血管生成活性研究》文中进行了进一步梳理近些年来,肿瘤发病率和死亡率居高不下,已成为医学领域研究的重点问题之一。研究表明血管生成是肿瘤生长所必须的过程,抑制血管生成是癌症治疗的一个很好的靶点。目前临床常使用的抗血管生成制剂价格昂贵,靶点单一,易产生耐药性,这严重影响了它们在临床上的应用。故寻找新的抗血管生成药物,已成为当前肿瘤治疗领域亟待解决的问题。中药历经上千年的临床循证,具有价格便宜,毒副作用小,作用靶点多等特点。中医传统理论认为癌症的发生与热毒内积有很大的关系,清热解毒药作为中医治疗癌症患者常用的一类中草药,故本研究采用转基因斑马鱼模型,以斑马鱼体节间血管生成为指标,研究31味清热解毒中药在同一浓度区间对斑马鱼胚胎血管生成的作用的影响。选择具有抗斑马鱼体内血管生成活性的中药重楼作为研究对象。以转基因斑马鱼异种移植的肿瘤IOD值和肠下血管（SIV）为指标,评价重楼提取物是否具有抗肿瘤血管生成活性;进一步探讨重楼皂苷类成分对斑马鱼血管生成的抑制作用,为抗肿瘤新药的研发提供参考。本论文的主要研究内容如下:第一章:选择转基因斑马鱼Tg（flk1:mCherry）为模型,以100ng/mL PTK787作为阳性对照药,考察31味中药分别在同一浓度区间（50μg/mL、100μg/mL、200 μg/mL）对6 hpf～72 hpf的斑马鱼体节间血管生成的影响。结果显示,白蔹和委陵菜在各自特定的浓度条件下可以促进斑马鱼体节间血管的生成。重楼在50μμg/mL、100μg/mL时可以减少斑马鱼体节间血管生成,山豆根在50μg/mL可以抑制斑马鱼体节间血管生成,紫花地丁在100 μg/mL时可以造成斑马鱼体节间血管的缺失,山慈菇在100 μg/mL、200 μg/mL时可以抑制斑马鱼体节间血管生成,穿心莲、大青叶在200μg/mL时可以抑制斑马鱼体节间血管生成。除对血管生成有作用外,穿心莲、大青叶、紫花地丁、山慈菇、山豆根都会对抑制斑马鱼幼鱼的生长发育,甚至造成斑马鱼幼鱼卵黄吸收延迟;重楼不会影响影响斑马鱼的生长发育,故选择重楼作为本课题的研究对象。第二章:以转基因斑马鱼为模型,研究重楼的不同提取物对斑马鱼血管生成活性的影响,结果表明:重楼水提物与重楼醇提物均具有抗斑马鱼血管生成的活性,且重楼醇提物的抑制作用更强。更进一步,以肿瘤的IOD值和肠下血管的面积为指标,考察不同浓度的重楼醇提物对斑马鱼体内抗病理性血管生成活性的影响,发现重楼醇提物在100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL的浓度下,可以同时抑制转基因斑马鱼肠下血管和异种移植的人源肝癌肿瘤细胞的生成,且其抑制效果呈浓度依赖性。第三章:采用转基因斑马鱼模型,比较重楼中的主要活性成分重楼皂苷Ⅰ,重楼皂苷Ⅱ,重楼皂苷Ⅵ,重楼皂苷Ⅶ,重楼皂苷H这5种重楼皂苷对斑马鱼体内血管生成作用的影响。研究结果表明重楼皂苷H仅在100 ng/mL的浓度下对斑马鱼体节间血管生成有促进作用。重楼皂苷Ⅵ在50 ng/mL、100 ng/mL的浓度下对斑马鱼体节间血管有抑制作用;重楼皂苷Ⅶ仅在200ng/mL的条件下对斑马鱼体节间血管有抑制作用。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ在100ng/mL、200ng/mL、400 ng/mL的浓度下,均能抑制斑马鱼体节间血管生成,也可以抑制肿瘤的生长及斑马鱼肠下血管的发育。因此重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ有继续研究开发的价值。本研究表明部分清热解毒药中对体内血管生成具有一定的作用。通过转基因斑马鱼模型与异种肿瘤移植模型的结合可以同时观察到中药对斑马鱼体内的血管变化和肿瘤血管的变化。本课题为重楼在临床中治疗肿瘤提供了体内的依据,为其活性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ在以后的开发应用奠定了基础。
陈水龄[8]（2020）在《姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究》文中进行了进一步梳理第一章目的采用 532nm倍频激光建立实验性脉络膜新生血管（Choroidal Neovascularization,CNV）动物模型,为CNV的相关基础研究提供模型参考。方法1.应用532nm倍频激光光凝棕色挪威（Brown Norway,BN）大鼠建立实验性CNV模型,分别在光凝后1d、3d、5d、7d、14d、21d采用眼底照、眼底荧光血管造影（Fundus Fluorescein Angiograph,FFA）和吲哚菁绿血管造影（Indocyanine green Angiography,ICGA）观察光凝后不同时间点 CNV 的变化情况。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察光凝后不同时间点CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学染色法观察光凝后不同时间点CNV眼组织中CD105因子表达的情况。结果1.光凝后1d光斑处无荧光素渗漏;光凝后3d、5d仅有少量光斑处有荧光素渗漏。光凝后7d CNV生成率为70.18%,荧光素渗漏平均光密度值为128.30±11.21。光凝后14d CNV生成率为78.18%,平均光密度值为182.12±6.59,与光凝后7d组比较差异有统计学意义（P<0.05）。光凝后21d,CNV生成率和荧光素渗漏平均光密度值与光凝后14d组比较差异无统计学意义。2.HE染色结果显示:随着光凝后时间的增加,CNV中央厚度逐渐增加,光凝后7d CNV厚度为48.92±2.81μm,较光凝后1d显着增加（P<0.05）;光凝后14d CNV厚度为61.98±5.06μm,较光凝后7d显着增加（P<0.05）;光凝后21d CNV厚度为61.78±4.03μm,与14d组比较差异无统计学意义。3.CD105免疫组化结果显示:正常组视网膜组织CD105表达呈阴性,光凝后1d、3d、5d组光斑处可见少量棕黄色反应物表达,光凝后7d组光斑处棕黄色反应物逐渐增多（P<0.05）,光凝后14d组较光凝后7d组比较显着增加（P<0.05）,光凝后21d组与光凝后14d组比较差异无统计学意义。结论1.应用532nm激光光凝可以成功建立BN大鼠实验性CNV动物模型。2.CNV在光凝后7d至14d生长迅速,至21d逐渐稳定,此模型具有成模速度快,成模率高、重复性好、成本低的优点,可作为CNV基础研究的动物模型。3.眼底照、FFA、ICGA、HE染色和免疫组化检查可以动态观察CNV的变化。第二章目的观察中药单体姜黄素对BN大鼠实验性CNV的抑制作用,以及对AKT/p-AKT/HIF-1 α/VEGF信号通路活性的影响,为姜黄素治疗CNV提供实验依据。方法1.应用532nm倍频激光光凝诱导BN大鼠建立CNV模型,造模后的大鼠被随机分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组,在光凝后14d进行眼底照、FFA与ICGA检查。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。4.采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。5.采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。结果1.正常组未打激光,模型组,雷珠单抗组,姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%,组间比较差异无统计学意义;荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显着升高（P<0.05）,其中姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。2.HE染色结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d,雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显着减少（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着减少（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。3.免疫组化结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性,未见棕黄色反应物。光凝后14d,模型组光斑处AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）;姜黄素低剂量组、中剂量组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组的表达较模型组显着降低（P<0.05）;较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。4.mRNA结果显示:光凝后14d,模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。5.Westernblot结果显示:光凝后14d,AKT蛋白各组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。HIF-1α蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低、中剂量与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低剂量组与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。结论1.高剂量姜黄素（400mg/Kg/d）对激光诱导的BN大鼠实验性CNV的形成具有抑制作用。2.姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与抑制AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的激活,降低相关因子的表达有关。第三章目的观察姜黄素对氯化钴（CoCl2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株-19（adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19）细胞缺氧模型中 AKT、HIF-1 α 和VEGF因子mRNA及蛋白表达的影响。方法1.采用CoCl2诱导ARPE-19细胞建立化学性缺氧模型,应用CCK-8法筛选造模试剂CoCl2、实验药物姜黄素和阳性对照药雷珠单抗的浓度,同时检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞活性的影响。2.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用RT-qPCR法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、HIF-1α和VEGF mRNA表达量的影响。3.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用Westernblot法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达量的影响。结果1.CCK-8细胞活性检测:随着CoCl2浓度的增加,ARPE-19细胞活性呈现先增长后抑制,当CoCl2终浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。姜黄素终浓度在0-100μM时,ARPE-19细胞活性未见异常;当浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。雷珠单抗在终浓度为20μg/mL时,细胞活性较CoCl2组显着降低（P<0.05）,与正常组比较差异无统计学意义;当浓度为40μg/mL、80μg/mL时,细胞活性较CoCl2组和正常组均显着降低（P<0.05）。因此,我们选择终浓度100μM的CoCl2作为造模浓度;终浓度6.25μM、25μM、100μM的姜黄素作为低、中、高剂量组浓度;终浓度为20μg/mL的雷珠单抗作为阳性对照药物的浓度。2.RT-qPCR结果显示:模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）;与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.Westernblot结果显示:AKT蛋白相对表达量各组间比较差异无统计学意义。p-AKT和HIF-1α蛋白相对表达量模型组均高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）,姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。VEGF蛋白相对表达量模型组高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）,姜黄素低剂量与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.应用CoCl2可成功建立APRE-19细胞化学缺氧模型。2.CoCl2在终浓度为100μM时可增加细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达量。3.高剂量姜黄素（100μM）可降低CoCl2诱导的ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和 VEGF mRNA 及 p-AKT、HIF-1α 和 VEGF 蛋白的表达。4.姜黄素（100μM）对CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧具有保护作用。第四章目的观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。方法1.将ARPE-19细胞条件培养液分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,分别作用于HUVEC细胞;采用CCK-8法观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响。2.采用细胞划痕实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的水平迁移的影响。3.采用Transwell小室迁移实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的垂直迁移的影响。4.采用Transwell小室侵袭实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的侵袭的影响。5.采用Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响。结果1.ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响,组间差异无统计学意义。2.HUVEC细胞水平迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞水平迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组水平迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）、高（100μM）剂量组水平迁移较模型组显着减少（P<0.05）,其中,高剂量组与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.HUVEC细胞垂直迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞垂直迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组垂直迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组垂直迁移与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组垂直迁移较模型组显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。4.HUVEC细胞侵袭实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞侵袭显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组细胞侵袭显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组细胞侵袭与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组较模型组细胞侵袭显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。5.HUVEC细胞管腔形成实验结果显示:模型组管腔形成较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组管腔形成较模型组显着较少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）剂量组管腔形成与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中（25μM）、高（100μM）剂量组管腔形成与模型组比较显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.ARPE-19细胞姜黄素低（6.25μM）、中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可显着抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显着抑制HUVEC细胞垂直迁移。2.ARPE-19细胞姜黄素高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞侵袭。3.ARPE-19细胞姜黄素中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。4.姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。
潘雅婧[9]（2020）在《肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究》文中指出目的:以VEGF为切入点,在动物和细胞实验探讨肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和HUVEC血管生成的调控作用及作用机制。方法:1.动物实验:将雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham）、单侧输尿管梗阻组（UUO）、氯沙坦钾组（ARB）及高、中、低剂量肾康组（SKI-H、SKI-M、SKI-L）。除sham组外的各组行UUO手术;次日ARB组予氯沙坦钾（13 mg/kg·d）灌胃;SK]-H、SKI-M、SKI-L 组分别予 7.8 g/kg·d、3.9 g/kg·d、1.95 g/kg·d SKI 尾静脉注射。观察小鼠一般状态、记录体重变化。给药14天后检测血Scr、BUN、CysC水平;micro-CT检测肾脏血管分布;HE染色观察肾组织形态改变;天狼星红染色观察胶原沉积;IHC染色观察VEGF、VEGFR-2表达。2.细胞实验:将HUVEC分为空白组（CON）、SKI高剂量组（SKI-11）、SKI-低剂量组（SKI-L）、VE GF 沉默组（Si）、VEGF 沉默-SKI 高剂量组（Si-SKI-H）、VEGF 沉默-SKI 低剂量组（Si-SKI-L）。SKI-H、SKI-L 组分别予 8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预 24 h;Si组通过RNAi转染沉默VEGF基因;Si-SKI-H、Si-SKI-L组在转染同时分别予8 mg/ml、2 mg/ml SKI干预24 h。观察血管生成情况,计算血管生成参数;real-time PCR和western blot法分别检测VEGF通路重要靶点基因和蛋白表达。结果:1.动物实验:给药14天后UUO组体重较sham组减轻（P<0.01）;ARB、SKI-H、SKI-M组体重较UUO组增高（P<0.05）。UUO组Scr、BUN、CysC水平较sham组升高（P<0.05,P<0.01）;ARB、SKI-H 组 Scr、BUN、CysC 水平较 UUO 组降低（P<0.05,P<0.01）。肉眼观察sham组双肾无明显异常改变;UUO组患侧肾脏表面粗糙、膨大、积水,肾盂肾盏扩张,实质变薄;SKI组患肾结构破坏较UUO组减轻。micro-CT见sham组肾血管密集,走向清晰;UUO组患肾血管疏松,分支减少、曲度下降;SKI组患肾血管损伤较UUO组减轻。HE染色见sham组肾脏结构完整,无明显病理损害;UUO组肾小管扩张,上皮细胞肿胀坏死,间质增宽伴炎性浸润;SKI组肾脏损伤较UUO组减轻。天狼星红染色（光镜）见sham组肾脏几乎无红染胶原;UUO组肾间质大量红色胶原聚集;SKI组红染程度较UUO组减轻。偏振光镜荧光信号变化与普通光镜所见大体一致。IHC示UUO组患肾VEGF、VEGFR-2表达较sham组降低（P<0.01）;SKI 组 VEGF、VEGFR-2 表达较 UUO 组降低（P<0.01）。剂量方面,SKI 减轻肾脏纤维化损伤和促进血管生成,以中、高剂量效果更优。2.细胞实验:沉默VEGF 24 h后Si组VEGF基因表达较CON组显着降低（P<0.01）,阴性对照组与CON组VEGF无显着差异（P>0.05）,验证转染稳定可行。血管生成方面,SKI组血管连接较CON组增多、血管网密度增大,血管生成参数提高,SKI促进HUVEC血管生成（P<0.01,P<0.05）。基因表达方面,与CON组相比,SKI-H 组 VEGF、VEGFR-2、eNOS 水平升高（P<0.05,P<0.01）;与 Si 组相比,Si-SKI-H 和 Si-SKI-L 组 VEGF、eNOS 水平升高（P<0.05,P<O.01）,SKI 上调 VEGF 通路靶点基因,且该效应在VEGF沉默时更突出。蛋白表达方面,在正常培养及VEGF沉默状态,SKI 均提高 VEGFR-2、p-VEGFR-2、eNOS、p-eNOS 表达水平（P<0.05,P<0.01）。结论:1.肾康注射液可改善UUO小鼠肾功能,缓解肾纤维化病理改变,减轻纤维化损伤;可缓解肾脏微血管网损伤,上调VEGF、VEGFR-2表达,促进患侧肾脏血管生成。2.肾康注射液可促进HUVEC血管生成;可上调HUVEC的VEGF、VEGFR-2基因表达;可提高VEGFR-2、eNOS总蛋白水平及磷酸化蛋白水平。3.肾康注射液可能通过调节VEGF/VEGFR-2及下游eNOS来改善肾纤维化损伤和促进血管生成。
王子卿[10]（2020）在《益气养阴、化痰祛瘀方通过调节IL-17抑制肺癌血管生成及部分机制研究》文中进行了进一步梳理[研究目的]明确益气养阴、化痰祛瘀方是否能够通过IL-17调控VEGFR-2表达,并进一步阐明其作用是否是通过STAT3信号传导通路进行,深化对益气养阴、化痰祛瘀方分子机制方面的研究,以期为在临床中合理有效应用益气养阴、化痰祛瘀方提供新的依据。[研究方法]本研究建立了 Lewis肺癌小鼠模型,将31只荷瘤小鼠随机分为模型组、中药组、中药联合顺铂组、顺铂组,共4组,模型组7只,其余三组各8只。模型组予0.4ml/20g生理盐水灌胃,中药组予0.4ml/20g益气养阴、化痰祛瘀方汤液灌胃,中药联合顺铂组予0.3mg/ml浓度顺铂溶液200ul/20g进行腹腔内注射,第1、4、7天给药,同时予0.4ml/20g中药汤液灌胃,顺铂组予0.3mg/ml浓度顺铂溶液200ul/20g进行腹腔内注射,第1、4、7天给药,同时予0.4ml/20g生理盐水灌胃,每日1次,连续15天。期间观察Lewis小鼠生存状态;灌胃结束,处死小鼠后,称定小鼠体质量、瘤重及脾脏重,计算抑瘤率和脾指数;HE染色法观察各组瘤组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组Lewis肺癌小鼠血清IL-17表达的变化;免疫组织化学法（IHC）检测各组瘤组织VEGFR-2及STAT3表达的变化。[研究结果]1.接种第5 日,在小鼠右腋窝皮下触及黄豆大小肿块,第7日瘤体生长明显加快。随瘤体的生长,各组均逐渐出现不同程度的毛发脱落、缺少光泽、反应迟缓、聚集和进食量减少等现象。与模型组、顺铂组及联合组比较,中药组的小鼠活动度更大,更具活力,一般状态相比其余三组较好,生存质量相对较优。2.中药组、联合组及顺铂组抑瘤率分别为28.99%、56.34%、57.99%。与模型组相比,中药组、联合组及顺铂组Lewis小鼠瘤重均显着降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与顺铂组相比,中药组瘤重明显较高,差异具有统计学意义（P<0.05）,联合组瘤重差异无统计学差异（P>0.05）。3.与模型组相比,联合组及顺铂组脾指数显着下降,差异有统计学意义（P<0.01）,中药组脾指数升高,但差异无统计学意义（P>0.05）;,与顺铂组相比,模型组及中药组脾指数升高,差异有统计学意义（P<0.01）,联合组脾指数升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。4.模型组肿瘤细胞生长密集程度较高,细胞核大且核染色深,细胞质分布不均匀,细胞核固缩较少,未见明显细胞坏死及凋亡现象;中药组,与模型组相比,肿瘤细胞密集度降低,细胞排列欠规则;顺铂组及联合组可见肿瘤细胞结构不完整,体积缩小,排列不规则,可见片状细胞坏死。5.与模型组相比,中药组、联合组及顺铂组Lewis小鼠血清IL-17含量均显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）,与顺铂组相比,中药组及联合组小鼠IL-17含量无统计学差异（P>0.05）。6.与模型组相比,中药组、联合组、顺铂组STAT3蛋白水平有所下降,但组间差异无统计学意义（P>0.05）,但三组VEGFR-2蛋白表达明显降低,且具有统计学差异（P<0.05）;与顺铂组相比,联合组及顺铂组STAT3、VEGFR-2表达所示差异无统计学意义（P>0.05）。[研究结论]益气养阴、化痰祛瘀方能提高小鼠一般生存状态,更注重机体整体的生存质量,有一定抑瘤作用,对脾脏生长影响较小,且其对顺铂造成的脾脏损害有一定的逆转作用。顺铂抑瘤作用明显,但对机体有一定的副作用,对脾脏生长具有抑制作用,对免疫功能的损伤较明显。益气养阴、化痰祛瘀方与顺铂合用,对Lewis小鼠的免疫功能有改善的趋势,但在抑制肿瘤生长方面并未体现出明显的联合作用。益气养阴、化痰祛瘀方及顺铂都可以降低Lewis肺癌小鼠血清IL-17含量及VEGFR-2蛋白表达,且有下调STAT3的趋势,由此推论,益气养阴、化痰祛瘀方可能可以通过下调IL-17含量抑制VEGFR-2表达,对肺癌肿瘤血管生成产生抑制作用。但益气养阴、化痰祛瘀方联合顺铂组较顺铂组在降低肺癌小鼠血清IL-17含量、降低VEGFR-2表达方面并未显示出更好的效果。
二、血管生成机制的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管生成机制的研究进展（论文提纲范文）
（1）苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 人肝癌Hep G2 细胞条件培养基诱导正常内皮细胞具有肿瘤内皮细胞的特性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 苦参素对Hep G2 细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 不足与展望 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述1 ETS 转录因子家族在消化道肿瘤中的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2 肿瘤微环境对肝细胞癌血管生成的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（2）“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文名称缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察 |
| 1 一般资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 纳入标准 |
| 2.2 排除标准 |
| 2.3 剔除标准 |
| 2.4 退出标准 |
| 2.5 中止标准 |
| 2.6 观察指标:包括安全性观察指标和疗效性观察指标 |
| 2.7 疗效判断 |
| 3 治疗方法 |
| 4 统计学分析 |
| 5 结果 |
| 5.1 三组患者基线资料比较 |
| 5.2 三组患者治疗前后生存率及生存期比较 |
| 5.3 三组患者治疗前后肿瘤大小比较 |
| 5.4 三组患者治疗前后生化指标水平比较 |
| 5.5 三组患者中医证候评分比较 |
| 5.6 三组患者生存质量评分比较 |
| 5.7 观察指标对患者疗效及预后的影响 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”对晚期肝癌患者生存率及生存期的影响 |
| 2 肝癌肝再生微环境及“补肾生髓成肝”的改善作用 |
| 3 “补肾生髓成肝”对患者中医证候评分及生存质量的影响 |
| 4 “补肾生髓成肝”对患者并发症及预后的影响 |
| 参考文献 |
| 第二部分 “补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的疗效机制研究 |
| 1 研究样本及方法 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 实验操作流程 |
| 2 统计学处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 肝再生相关细胞因子正态性检验结果 |
| 3.2 肝再生相关细胞因子在各组人群中表达的差异性 |
| 3.3 肝再生相关细胞因子表达水平之间的相关性分析 |
| 讨论 |
| 1 “补肾生髓成肝”疗法相关研究进展 |
| 2 “补肾生髓成肝”改善肝再生微环境防治肝癌的疗效机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述一 肝癌微环境的研究现状 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 中医药影响肝癌微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中医证候评分量表 |
| SF-36 |
| 在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（3）ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 ILT4对非小细胞肺癌血管生成的作用和预后分析 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 ILT4调控非小细胞肺癌血管内皮细胞迁移和血管生成的机制研究 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第三部分体内验证ILT4通过诱导血管生成促进肿瘤进展 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述:ILT4和VEGF-A的研究现状与进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文Ⅰ |
| 外文论文Ⅱ |
（4）华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 恶性腹水的中西医研究进展 |
| 1. 恶性腹水的西医研究进展 |
| 1.1 恶性腹水的形成机制 |
| 1.2 恶性腹水的西医诊断 |
| 1.3 恶性腹水的西医治疗 |
| 2. 恶性腹水的中医研究进展 |
| 2.1 恶性腹水的中医病因病机 |
| 2.2 恶性腹水的中医辨证 |
| 2.3 恶性腹水的中医治疗 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 血管生成拟态(VM)在结肠癌中的研究进展 |
| 1. 结肠癌VM的发现及生物学特性 |
| 2. VM的形成机制 |
| 2.1 肿瘤缺氧微环境与VM |
| 2.2 肿瘤干细胞与VM |
| 2.3 上皮间质转化与VM |
| 2.4 促血管生成相关因子与VM |
| 2.5 VM形成相关信号通路 |
| 3. VM与结肠癌不良预后的相关性 |
| 4. VM与结肠癌的治疗 |
| 5. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成作用的研究进展 |
| 1. 肿瘤血管生成的病理机制 |
| 2. 华蟾素注射液的主要化学成分及其抗肿瘤作用 |
| 3. 华蟾素注射液干预肿瘤血管生成的机制 |
| 3.1 VEGF/VEGFR通路抑制作用 |
| 3.2 MMPs/TIMPs通路抑制作用 |
| 3.3 肿瘤血管内皮细胞诱导凋亡作用 |
| 3.4 其他潜在靶点 |
| 4. 结语 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 临床研究 华蟾素注射液腹腔灌注治疗结肠癌恶性腹水的疗效评价及优效人群分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 研究方法 |
| 1.2 研究对象 |
| 1.3 病例筛选方法 |
| 1.4 治疗方法 |
| 1.5 提取指标 |
| 1.6 疗效评价 |
| 1.7 安全性评价 |
| 1.8 统计方法 |
| 1.9 技术路线图 |
| 2. 研究结果 |
| 2.1 总体资料分析 |
| 2.2 疗效评价 |
| 2.3 安全性评价 |
| 2.4 优效人群特征筛选 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 结肠癌恶性腹水的治疗现状 |
| 3.2 优效人群研究的必要性 |
| 3.3 华蟾素注射液治疗结肠癌恶性腹水的潜在机制 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 基于血管生成拟态(VM)研究华蟾素注射液抑制结肠癌血性腹水的机制 |
| 实验一: 华蟾素注射液抑制裸鼠结肠癌血性腹水生成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二: 华蟾素注射液体外抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三: 华蟾素注射液体内、体外抑制结肠癌细胞VM形成的研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验四: 华蟾素注射液抑制结肠癌VM形成的机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1. 研究结论 |
| 2. 研究创新性 |
| 3. 不足与展望 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）血管生成干预药物筛选及活性检测技术平台的初步建立与应用（一）（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 血管生成相关领域研究热点及评价方法概况 |
| 第二节 基于络脉络病理论的血管生成相关病证中医药论治概况 |
| 第二章 平台的建立及方法学考察 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 研究结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 第三章 平台在中药研究中的应用 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 研究结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 第四章 平台在中药活性成分研究中的应用 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 研究结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 第五章 平台在化学药物研究中的应用 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 研究结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）孕三烯酮联合来曲唑对大鼠子宫内膜异位病灶VEGF、MMP-9表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 血管生成与子宫内膜异位症发病机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词对照 |
| 攻读硕士学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）基于斑马鱼模型的重楼抗血管生成活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 文献综述 |
| 一、斑马鱼抗肿瘤血管生成的研究进展 |
| 二、重楼的化学成分及药理活性研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于斑马鱼模型的清热解毒类中药抗血管生成活性筛选 |
| 第一节 阳性药的剂量确定 |
| 第二节 基于斑马鱼模型31种清热解毒药的抗血管生成活性测定 |
| 第二章 重楼提取物的抗血管生成活性研究 |
| 第一节 重楼提取物的抗血管生成活性的比较 |
| 第二节 重楼醇提物抗斑马鱼病理性血管生成作用的研究 |
| 第三章 重楼皂苷的抗血管生成活性考察 |
| 第一节 重楼5种皂苷抗生理性血管新生的考察 |
| 第二节 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ抗病理性血管生成实验 |
| 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 532nm倍频激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型的建立 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 532nm倍频激光建立CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 制备病理学标本 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA及ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 CD105免疫组化结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 CNV模型建立的方法 |
| 5.2 532nm倍频激光诱导BN大鼠建立实验性CNV模型的机制 |
| 5.3 532nm倍频激光诱导BN大鼠CNV模型的评价 |
| 6. 结论 |
| 第二章 姜黄素通过AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路抑制BN大鼠CNV的实验研究 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.0 实验药物配制 |
| 2.1 实验分组及给药 |
| 2.2 532nm倍频激光建立实验性CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 病理学标本制备 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 2.7 RT-qPCR检测mRNA表达 |
| 2.8 Westernblot检测蛋白表达 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA与ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 RT-qPCR结果分析 |
| 3.5 Westernblot结果分析 |
| 3.6 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 免疫组化结果 |
| 4.4 RT-qPCR结果 |
| 4.5 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 新生血管与中药单体 |
| 5.2 姜黄与姜黄素 |
| 5.3 姜黄素与眼部新生血管 |
| 5.4 CNV的中医认识 |
| 5.5 姜黄素抑制CNV的机制 |
| 6. 结论 |
| 第三章 姜黄素对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型中AKT、HIF-1α和VEGF因子的影响 |
| 1. 实验细胞、试剂、药物及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验药物及溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 ARPE-19细胞复苏、传代与冻存 |
| 2.2 造模试剂CoCl_2、实验药物姜黄素及阳性对照药雷珠单抗浓度的筛选 |
| 2.3 实验分组与干预 |
| 2.4 CCK-8法检测实验各组ARPE-19细胞的活性 |
| 2.5 RT-qPCR检测 |
| 2.6 Westernblot检测 |
| 3. 结果分析与统计学方法 |
| 3.1 CCK-8检测细胞活性结果分析 |
| 3.2 RT-qPCR结果分析 |
| 3.3 Westernblot结果分析 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常ARPE-19细胞形态 |
| 4.2 CoCl_2对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.3 姜黄素对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.4 雷珠单抗对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.5 RT-qPCR结果 |
| 4.6 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞缺氧模型的建立 |
| 5.2 CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧模型的机制 |
| 5.3 姜黄素对CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧的保护作用 |
| 6. 结论 |
| 第四章 非接触共培养体系观察ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对HUVEC细胞形态学的影响 |
| 1. 实验细胞、药物、试剂及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验试剂的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 HUVEC细胞株复苏培养、传代与冻存 |
| 2.2 CCK-8检测 |
| 2.3 划痕实验检测细胞水平迁移 |
| 2.4 Transwell小室法检测细胞垂直迁移 |
| 2.5 Transwell小室法检测细胞侵袭 |
| 2.6 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常HUVEC细胞形态 |
| 4.2 CCK-8结果 |
| 4.3 划痕实验细胞水平迁移结果 |
| 4.4 Transwell小室实验细胞垂直迁移结果 |
| 4.5 Transwell小室实验细胞侵袭结果 |
| 4.6 Matrigel基质胶实验细胞管腔形成结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞迁移 |
| 5.2 细胞侵袭 |
| 5.3 细胞管腔形成 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 创新性 |
| 不足与展望 |
| 综述一 脉络膜新生血管的发病机制及中西医治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 姜黄素在眼科疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间学术表现 |
| 致谢 |
| 附: 查新报告 |
（9）肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治慢性肾脏病肾纤维化研究进展 |
| 1. 病名 |
| 2. 病因病机 |
| 3. 临床治疗 |
| 4. 实验研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 肾康注射液治疗肾脏疾病研究概述 |
| 1. 药物基本情况 |
| 2. 临床疗效研究 |
| 3. 基础药理机制研究 |
| 4.发展前景 |
| 参考文献 |
| 综述三 血管生成在肾纤维化发生发展中作用的研究进展 |
| 1. 血管生成发生发展 |
| 2. 肾纤维化发生发展 |
| 3. 血管生成障碍与肾纤维化密切相关 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 肾康注射液对UUO小鼠肾纤维化和血管生成的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对HUVEC血管生成和VEGF/VEGFR-2/eNOS的影响 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（10）益气养阴、化痰祛瘀方通过调节IL-17抑制肺癌血管生成及部分机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 肺癌抗肿瘤血管生成及其与IL-17、STAT通路的相关性研究 |
| 1 肿瘤血管生成及VEGF |
| 2 IL-17 |
| 3 STAT3通路 |
| 4 肺癌抗血管生成药物在临床中的应用 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医干预肿瘤血管生成研究进展 |
| 1 中医对肿瘤病因病机的认识 |
| 2 现代中医对肿瘤血管生成机制的认识 |
| 3 中药复方在抗肿瘤血管生成中的应用 |
| 4 中药复方与抗血管生成作用西药联合应用治疗肺癌的临床研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 前言 |
| Lewis肺癌荷瘤小鼠模型的建立及中药制备 |
| 1 实验材料 |
| 2 细胞培养与造模 |
| 3 实验分组 |
| 4 给药方法 |
| 5 小鼠处死及标本留存 |
| 实验一: Lewis肺癌小鼠生存状态观察及益气养阴、化痰祛瘀方对Lewis小鼠抑瘤率和脾指数的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 实验二: Lewis小鼠瘤组织病理形态学观察 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验三: ELISA法检测各组Lewis小鼠血清中IL-17的含量 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 实验四: 免疫组化法检测各组Lewis小鼠瘤组织中STAT3、VEGFR-2的含量 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 讨论 |
| 1 现代中医对肺癌病因病机的认识 |
| 2 肺癌常见中医证型 |
| 3 益气养阴、化痰祛瘀方组方依据 |
| 4 研究结果分析 |
| 第三章 结语 |
| 1 结论 |
| 2 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、血管生成机制的研究进展（论文参考文献）
- [1]苦参素对HepG2细胞条件培养基诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成作用的研究[D]. 覃小珊. 右江民族医学院, 2021(01)
- [2]“补肾生髓成肝”改善肝癌肝再生微环境治疗晚期肝癌的临床疗效观察及机制研究[D]. 刘皎皎. 湖北中医药大学, 2021
- [3]ILT4调控非小细胞肺癌血管生成的作用和机制研究[D]. 宫文静. 山东大学, 2021(11)
- [4]华蟾素注射液治疗结肠癌腹水的优效人群分析及对VM的作用机制研究[D]. 王一同. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]血管生成干预药物筛选及活性检测技术平台的初步建立与应用（一）[D]. 崔鹤蓉. 北京中医药大学, 2021(02)
- [6]孕三烯酮联合来曲唑对大鼠子宫内膜异位病灶VEGF、MMP-9表达的影响[D]. 辛娟. 新乡医学院, 2021(01)
- [7]基于斑马鱼模型的重楼抗血管生成活性研究[D]. 倪璐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究[D]. 陈水龄. 中国中医科学院, 2020(01)
- [9]肾康注射液调节UUO小鼠肾纤维化及HUVEC血管生成的机制研究[D]. 潘雅婧. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]益气养阴、化痰祛瘀方通过调节IL-17抑制肺癌血管生成及部分机制研究[D]. 王子卿. 北京中医药大学, 2020(04)