一、阴虚阳虚大鼠促肾上腺皮质激素及皮质酮昼夜节律的差异研究（论文文献综述）
任非非[1]（2021）在《基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响》文中研究表明目的:观察AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成对抑郁大鼠海马神经元突触可塑性的影响及醒脾解郁方干预效应。方法:实验研究分为四部分。第一部分:140只雄性SD大鼠随机分为空白组（CON）、模型组（MOD）、醒脾解郁方组（XPJYF）、草酸艾司西酞普兰组（EOT）、醒脾解郁方联合草酸艾司西酞普兰组（XPJYF+EOT）。每组根据应激时间各分为3w、6w组。除CON外,其余各组采用慢性束缚应激（CRS）造模,共21d。各组造模的同时给予相应药物干预。造模前及造模第3 w、6 w时进行行为学观察。造模3 w时评价脾虚程度,结合行为学实验,评价模型成功与否。取材后以HE染色和尼氏染色观察海马CA1区神经元病理变化及XPJYF干预效应。第二部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后观察海马CA1区神经元突触及线粒体超微结构;分析线粒体及神经元突触体视学指标;高尔基染色观察神经元轴树突分支变化;提取海马突触体,免疫荧光染色观察突触重塑蛋白表达;Western blot检测线粒体合成蛋白含量;检测海马线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ及线粒体酶活性。第三部分:制备XPJYF低、中、高剂量组含药血清;体外分离、培养原代海马神经元细胞并鉴定;采用CCK8法进行XPJYF细胞毒性实验;建立皮质酮（CORT）诱导海马神经元损伤模型,分为 CON、CORT、CORT+X（H）、（M）、（L）、CORT+E、CORT+E+X（H）、（M）、（L）共9组。以细胞免疫荧光观察SYN、PSD-95表达及海马神经元线粒体成像;Western blot检测线粒体生物合成及突触重塑蛋白表达;ELISA及RT-PCR检测5-HT、DA及其受体情况。第四部分:大鼠分组及干预同研究一。取材后以免疫荧光三标染色观察海马CA1区NeuN/CD31/GFAP表达;RT-PCR检测海马AMPK/SIRT1/PGC-1α通路基因表达;免疫组化及 Western blot 检测 NeuN、GFAP、VEGF、Collagen Ⅳ蛋白表达。结果:1.第一部分1.1宏观表征:造模前大鼠状态良好,反应灵敏,活动自如。造模3 w后,反应降低,神态倦怠,活动减少,毛发干枯或发黄,粪便逐渐变稀,至6 w时表现更明显,各用药组较模型组有改善。1.2体质量变化:模型各组大鼠体重较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各用药组体重增加（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药3 w、联合各组体重增加（P<0.01,P<0.05）,西药6 w组降低（P<0.05）。联合各组体重较西药组增加（P<0.01,P<0.05）。1.3行为学:模型各组糖水偏好率（SPT）较空白组降低（P<0.01）,强迫游泳不动时间（FST）延长（P<0.01）。与模型组比较,西药、联合各3 w及各用药6w组SPT升高,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。联合各组SPT较中药、西药组升高（P<0.01,P<0.05）,FST缩短（P<0.01,P<0.05）。与同组别基线比较,各组各时间点SPT降低（P<0.01）,模型各组及中药、西药各6 w组FST延长（P<0.01,P<0.05）。1.4血清淀粉酶、尿D-木糖排泄率比较:造模3 w后血清淀粉酶和尿D-木糖排泄率均降低（P<0.01）,至造模6周时更低（P<0.01）。1.5海马CA1区病理改变:HE染色:空白组海马CA1区神经元数量、分布、形态均无异常,圆形胞核清晰居中。模型3w组神经元数量减少,排列及形态不规则,细胞大小不一,部分呈三角形,细胞核深染、固缩,核仁显示不清;至6w时损伤进一步加重。各用药组有不同程度改善,以中药6 w组和联合组较为明显。尼氏染色:空白组海马CA1区神经元正常分布,胞质内可见丰富的尼氏小体,近胞核处呈“虎斑样”,远端呈细颗粒样,核仁清晰。模型3 w组细胞排列散乱,胞质内尼氏小体减少。至6w时,损伤加重,细胞皱缩明显,部分细胞尼氏体减少,并可见中央性染色质溶解现象。各用药组损伤逐渐恢复,以西药3 w组及中药6 w组明显。2.第二部分2.1神经元超微结构:正常组神经元突起较多,线粒体正常,突触结构完整,突触小泡较多。造模3 w后,线粒体肿胀,嵴断裂,突触小泡数量减少。至造模6 w,损伤加重,突触间隙显示不清,突触小泡减少,聚集分布,线粒体膜破坏,嵴断裂,基质空泡样变。各用药组上述损伤减轻。2.2线粒体体视学:模型各组Vvm较空白组升高（P<0.01）,NM、δ、δm降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组Vvm降低（P<0.01,P<0.05）,各6 w组NM升高（P<0.01）,中药、联合各组及西药6 w组δ、δm升高（P<0.01,P<0.05）。较中药组,西药6 w组δ、联合6 w组Vvm降低（P<0.01）,联合各组δm升高（P<0.01,P<0.05）。2.3突触体视学:模型各组数密度（Nv）、面密度（Sv）、突触小泡面数密度（NS）均较空白组降低（P<0.01）。中药、联合各6 w组Nv、Sv、Ns较模型组升高（P<0.01,P<0.05）。2.4高尔基染色:模型各组Sholl交点数及树突棘较空白组减少（P<0.01）。中药、联合各组Sholl交点数较模型组增多（P<0.01,P<0.05）,中药、西药各6 w组及联合各组树突棘密度升高（P<0.01,P<0.05）,且联合6 w组较中药、西药各6w组升高（P<0.05）。2.5突触体突触重塑蛋白:与空白组比较,模型3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01）,6w组降低（P<0.05）,各组SYN、syntaxin 1均降低（P<0.01）。与模型组比较,中药、联合各组及西药3 w组GAP-43、PSD-95增加（P<0.01,P<0.05）,中药、联合各组SYN升高（P<0.01）,中药、西药及联合各6 w组syntaxin 1升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,西药6 w组SYN降低（P<0.05）,联合6 w组GAP-43增加（P<0.01）。2.6线粒体生物合成蛋白:模型各组SIRT1、PGC-1α、AMPK-α1、Tfam、NRF1较空白组均降低（P<0.01）。与模型组比较,西药3 w组SIRT1和AMPK-α1、联合各组SIRT1、PGC-1α、Tfam升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合3 w组AMPK-α1、6w组PGC-1α表达升高（P<0.01）。3.第三部分3.1细胞毒性实验:经免疫荧光鉴定,培养的海马神经元符合神经元细胞特征。经CCK8实验,确定醒脾解郁方含药血清浓度为高剂量组10%、中剂量组10%和低剂量组20%,作用时间确定为24h。3.2线粒体生物合成蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组SIRT1、PGC-1α、NRF1、Tfam 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 组 SIRT1、NRF1、Tfam 升高（P<0.01）,CORT+E 组 SIRT1 降低（P<0.05）,CORT+X（H）组PGC-1α 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+X（H）组 PGC-1α、Tfam 升高（P<0.05）,CORT+E+X（M）组 NRF1、Tfam 升高（P<0.01）。3.3突触重塑蛋白表达:与CON组比较,CORT组、CORT+E组GAP-43、SYN、PSD-95 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X 的 H、M 各组 GAP-43、SYN 升高（P<0.01）,CORT+X（H）组 PSD-95 升高（P<0.01）。与 CORT+E 组比较,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 GAP-43、SYN、PSD-95 升高（P<0.01,P<0.05）。3.4 5-HT、DA及其受体mRNA含量:与CON组比较,CORT组、CORT+E组5-HT、DA、5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 降低（P<0.01）。与 CORT 组比较,CORT+X（H）组 5-HT、DA 升高（P<0.05）,CORT+E 组 5-HT 降低（P<0.05）,CORT+X 的 H、M组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01）。与 CORT1+E 组比较,CORT+E+X（H）组 5-HT 升高（P<0.05）,CORT+E+XPJYF 的 H、M、L 组 5-HT1AR mRNA、DRD1 mRNA 升高（P<0.01,P<0.05）。4.第四部分4.1线粒体合成基因表达:模型各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,各给药组 SIRT1 mRNA、PGC-1αmRNA、AMPK-α1 mRNA 均升高（P<0.01）,中药6w组、西药及联合各组NRF1 mRNA升高（P<0.01）,西药3 w组、中药及联合各组Tfam mRNA表达均升高（P<0.01,P<0.05）。与中药组比较,联合各组SIRT1 mRNA、PGC-1α mRNA、NRF1 mRNA 均升高（P<0.01）,西药 3 w 组 SIRT1 mRNA升高（P<0.01）。4.2突触微环境蛋白表达:模型各组NeuN、GFAP、VEGF较空白组降低（P<0.01）。与模型组比较,中药及联合各组NeuN、GFAP、VEGF均升高（P<0.01,P<0.05）,西药各组GFAP升高（P<0.01）,西药3 w组VEGF升高（P<0.01）。与中药组比较,西药各组GFAP 降低（P<0.05）,联合各组 GFAP 升高（P<0.01）,联合 3 w 组 VEGF 升高（P<0.05）。结论:1.慢性束缚应激3周时,动物模型符合肝郁脾虚型抑郁症标准,脑内海马CA1区神经元损伤,且随应激时间延长,损伤程度加重。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可不同程度减轻神经元损伤,改善抑郁样行为,中药的远期保护优势较西药明显,且以两者联合应用作用更为显着;2.抑郁模型大鼠脑内海马CA1区神经元突触超微结构破坏,线粒体损伤,突触重塑功能降低,与AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路介导的线粒体生物合成减少直接相关。中药醒脾解郁方和西药草酸艾司西酞普兰均可动态调控该信号通路,促进海马神经元突触重塑,但二者作用的优势环节不同,西药在调节神经递质方面更具优势,而中药在改善线粒体功能方面更为明显,且中药的远期作用效果优于西药。3.抑郁症海马神经元突触微环境中星形胶质细胞、微血管内皮细胞及微血管基底膜损伤,与神经元突触重塑相关。中药醒脾解郁方可通过调控AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路增加线粒体生物合成,保护突触微环境,促进抑郁症神经重塑,作用较西药草酸艾司西酞普兰更具优势,且中西药联合应用效果显着。
王颖[2]（2021）在《2型糖尿病合并骨质疏松证型分析及葛根素对DOP的改善机制》文中指出糖尿病性骨质疏松症是指糖尿病并发骨量减少,骨组织显微结构受损,骨脆性增加,易于骨折的一种全身性代谢性骨病,是糖尿病在骨骼系统引起的严重慢性并发症,其发病率高、致残率高,严重影响患者的生活质量。糖尿病性骨质疏松症发病机制复杂,目前研究表明在慢性炎症状态刺激下,肝脏和脂肪组织等局部靶器官与组织中11 β-羟类固醇脱氢酶1型（11 β-HSD1）活性增加,将无活性的11脱氢皮质酮转化为有活性的皮质酮增多,是糖尿病性骨质疏松症的重要病理生理过程。目前临床尚缺乏作用持久、副作用小、治疗方法简单的针对性药物。中医药在糖尿病性骨质疏松症的防治方面具有独特优势,其作用靶点丰富、不良反应少,且疗效确切,在临床上应用广泛。本文通过临床研究分析2型糖尿病合并骨质疏松症的中医证型及临床特点;通过动物实验研究,探讨葛根素对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用;以抗炎与抑制11 β-HSD1活性为靶点,探讨葛根素干预糖尿病性骨质疏松症的作用机制;为临床上糖尿病性骨质疏松症的防治提供新的思路与方法。一、临床研究目的:通过回顾性收集2型糖尿病住院患者的病例资料,分析2型糖尿病合并骨质疏松症的中医证型及临床特点,为临床防治2型糖尿病合并骨质疏松症提供一定的依据。方法:收集北京中医药大学东方医院内分泌科2018年10月-2020年10月住院的2型糖尿病患者病例资料96例。按照骨密度值,将患者分为骨量正常的T2DM组（45例）及合并骨质疏松组（51例）。探索两组患者中医证型的特点,并分析性别、年龄、糖尿病病程、HbA1C、Ca、P、ALP、25（0H）VD、PTH、骨钙素、T-P1NP、β-CTX、骨密度值等相关指标,为2型糖尿病合并骨质疏松症有效防治提供理论依据。结果:①两组患者主证型比例,T2DM组气阴两虚证>肺胃热盛证>阴虚火旺证,合并骨质疏松组气阴两虚证>阴虚火旺证>肺胃热盛证,两组主证型分布不同,具有显着差异（P<0.05）;两组兼证均是瘀血阻络证>痰湿内蕴证,具有显着差异（P<0.05）;合并骨质疏松组三组主证型的骨密度值无明显差异（P>0.05）。②两组患者男女性别分布不同,T2DM组男性患者多,合并骨质疏松组女性患者多,具有显着差异（P<0.05）。③两组患者年龄分布不同,合并骨质疏松组患者年龄高于T2DM组,具有显着差异（P<0.05）。④两组患者的糖尿病病程不同,合并骨质疏松组病程较T2DM组长,具有显着差异（P<0.05）。⑤两组患者的糖化血红蛋白水平无明显差异（P>0.05）。⑥两组患者血Ca、血P、25（OH）VD、PTH、β-CTX水平无明显差异（P>0.05）;ALP、T-P1NP水平不同,合并骨质疏松组ALP、T-P1NP水平高于T2DM组,具有显着差异（P<0.05）;骨钙素水平不同,合并骨质疏松组骨钙素水平低于T2DM组,具有显着差异（P<0.05）。结论:①2型糖尿病合并骨质疏松症中医主证型最多的是气阴两虚证,兼证最多的是瘀血阻络证;主证阴虚火旺证占比较T2DM组明显升高。为临床中医药防治2型糖尿病合并骨质疏松症提供了一定的思路。②2型糖尿病合并骨质疏松症与性别、年龄、糖尿病病程密切相关。③2型糖尿病合并骨质疏松症患者血ALP、T-P1NP水平较高,骨钙素水平较低。为临床更早发现骨质疏松及针对性有效防治提供了一定的依据。二、动物实验目的:使用葛根素干预2型糖尿病大鼠,以抗炎与抑制11 β-HSD1活性为靶点,探讨葛根素对糖尿病大鼠骨质疏松的改善作用与机制。方法:①建立2型糖尿病大鼠模型,并用不同剂量葛根素进行干预,采用生化法、酶联免疫法（ELISA）及相关仪器检测大鼠血糖、胰岛素,骨代谢相关指标（血钙、25羟维生素D、TRACP5b、CTX-1、ALP-B、OC、骨密度）,探讨葛根素对糖尿病大鼠骨质疏松的防治作用。（2）采用酶联免疫法（ELISA）测定炎性相关细胞因子与皮质酮代谢相关指标:MCP-1、TNF-α、IL-1、IL-6以及与炎性反应密切相关的hs-CRP,血清糖皮质激素活性形式皮质酮;通过RT-PCR、Western blot方法,检测大鼠肝脏、脂肪、骨组织中11 β-HSD1的基因和蛋白表达以及酶活性,阐明葛根素对炎性反应及11 β-HSD1活性的影响,明确葛根素的作用靶点及作用机制。结果:①糖代谢方面,葛根素（低、中、高剂量）三组大鼠血糖与模型组比较明显下降（P<0.05）,其中高剂组血糖水平最低（P<0.05）;葛根素三组大鼠胰岛素与模型组比较明显升高（P<0.05）,其中中剂组胰岛素水平最高（P<0.05）。②骨代谢方面,葛根素三组大鼠血钙、25（OH）VD与模型组比较明显升高（P<0.05）,其中高剂组血钙、25（OH）VD水平最高（P<0.05）;葛根素三组大鼠血清TRACP5b、CTX-1、ALP-B与模型组比较明显降低（P<0.05）,其中中剂组血清TRACP5b、CTX-1、ALP-B水平最低（P<0.05）;葛根素三组大鼠血清0C与模型组比较明显升高（P<0.05）,其中中剂组血清OC水平最高（P<0.05）;葛根素三组大鼠骨密度与模型组比较升高（P<0.05）,三组间比较无统计学差异（P>0.05）。③炎症指标:葛根素三组大鼠MCP-1、TNF-α、IL-1、hs-CRP与模型组比较下降明显（P<0.05）,其中中剂组MCP-1、TNF-α、IL-1、hs-CRP水平最低（P<0.05）。④皮质酮代谢方面,葛根素三组大鼠血清中皮质酮浓度与模型组比较下降明显（P<0.05）,其中中剂组皮质酮浓度最低（P<0.05）;葛根素三组大鼠肝脏、脂肪、骨组织中11 β-HSD1蛋白及mRNA表达与模型组比较有所下降（P<0.05）,其中中剂组11 β-HSD1蛋白及mRNA表达最低（P<0.05）。结论:①在糖代谢、骨代谢方面,葛根素具有降低血糖、提高胰岛素水平的作用;葛根素具有升高血钙、25（OH）VD、OC及骨密度,降低TRACP5b、CTX-1、ALP-B的作用。说明葛根素能够调节血糖、胰岛素、钙、25（OH）VD代谢,抑制骨吸收,促进骨形成,调节骨转化,改善糖尿病大鼠的骨质疏松。②在炎症反应及皮质酮代谢方面,葛根素具有降低MCP-1、TNF-α、IL-1、hs-CRP、皮质酮水平,降低11 β-HSD1在肝脏、脂肪、骨组织中活性的作用;说明葛根素可能通过抗炎与抑制11β-HSD1活性,降低皮质酮活化,达到改善糖尿病大鼠骨质疏松的作用。③不同剂量葛根素比较,中剂量组在提高胰岛素水平、调节骨代谢、抗炎及抑制11 β-HSD1活性方面效果最佳。
赵凡[3]（2020）在《黄芩在治疗抑郁症方剂中的配伍应用及其抗抑郁机制研究》文中提出目的黄芩作为传统的清热药已被证实具有良好的抗抑郁作用,许多含黄芩方剂临床治疗抑郁症疗效显着。目前有关含黄芩治疗抑郁症方剂（以下简称“含黄芩抗抑郁方”）的系统研究尚未见有报道,而明确含黄芩抗抑郁方的临证应用指征和配伍方法对于中医临床运用黄芩及含黄芩方治疗抑郁症具有理论和实际指导意义。本论文以中医药理论为指导,运用数据挖掘方法探讨含黄芩抗抑郁方主治病证特点及主要配伍方法;并运用实验研究观察黄芩及其主要有效成分黄芩苷对皮质酮（CORT）诱导的抑郁模型小鼠的抗抑郁效应,从干预抑郁模型小鼠神经发生这一维度,探讨黄芩及黄芩苷的抗抑郁机制,以冀初步阐明抗抑郁方剂配伍黄芩的科学内涵。方法1.数据挖掘研究 收集整理中文数据库（知网、万方、维普等）1986～2019年公开发表的含黄芩方治疗抑郁症的临床文献,将其分为临床研究（病例数30例以上,有对照组）、病案及临证加用黄芩三类。①采用SPSS Statistics 22.0统计软件对各部分文献的方剂名称与类别、临床有效率、药物不良反应发生率、主治病证的证型及病机（病性和病位证素）、症状和舌脉、配伍药物（单味药和药物类别）、黄芩及核心配伍药物的用量与比例等进行频次统计;②采用SPSS Modeler 14.1软件的Apriori算法对含黄芩抗抑郁方主治病证的高频症状进行两症状和三症状之间的关联规则分析,并对方剂组成中的高频药物进行两药、三药之间的关联规则分析;③采用Gephi 0.9.2软件对证素-症状、药物-症状进行复杂网络分析,以探讨含黄芩抗抑郁方的证治规律。2.实验研究①采用慢性CORT皮下注射6周建立抑郁小鼠模型,造模3周后分为空白、模型、阳性药、黄芩苷低剂量、黄芩苷高剂量、黄芩低剂量和黄芩高剂量7组,分别给药治疗3周后进行糖水偏好、悬尾、强迫游泳、开场、新颖摄食行为学测试,同时取血检测血清皮质酮含量,观察黄芩及黄芩苷对抑郁模型小鼠行为学及血清皮质酮的影响;②采用免疫组化方法检测海马齿状回Ki-67及BrdU 阳性细胞数,免疫荧光方法检测齿状回BrdU/DCX/NeuN叠染细胞数,高尔基染色检测齿状回神经元形态、树突长度、树突棘密度,蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路蛋白表达;给予PI3K及AKT抑制剂LY294002、Perifosine后,采用蛋白免疫印迹法检测黄芩苷对CORT造模后HT-22细胞中上述通路相关蛋白表达的影响,探讨黄芩及黄芩苷基于PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路对神经发生的影响;③采用高效液相测定黄芩水煎剂中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素4种主要成分的含量。结果1.数据挖掘研究 共收集整理含黄芩抗抑郁方临床文献464篇,其中临床研究文献249篇,有明确疗效的病例9702例;病案文献122篇,有明确疗效的病案153例;临证加用黄芩文献93篇。三类文献的研究结果如下:1.1临床研究文献在临床研究文献中,所涉及的含黄芩抗抑郁方共90首,方剂类别9种。使用频率位列前4的方剂类别为和解剂、化痰剂、清热剂、理气剂,其中和解剂（使用频率65.49%）远超过其他类别方剂。和解剂中柴胡类方使用频率最高（56.96%）,柴胡加龙骨牡蛎汤居所有方剂之首（33.10%）。疗效和不良反应发生率统计表明,临床含黄芩抗抑郁方中药治疗组、中西结合治疗组的总有效率明显高于西药对照组（p<0.01）,且不良反应发生率显着低于西药对照组（p＜0.01）。含黄芩抗抑郁方主治病证的证型有21种,实证为主,亦有虚实夹杂。证型出现频率位列前4的为肝郁气滞（18.72%）、肝郁痰热（12.34%）、肝郁痰阻（10.37%）、肝郁化火（热）（9.66%）,累计占51.08%。涉及病性证素1 1种,病性有虚有实,以实为主。主要病性为气滞（85.14%）、火热（46.21%）、痰（30.66%）,此外还有气虚（10.97%）、血瘀（10.95%）等。涉及病位证素9种,病位以肝居首（出现频率96.17%）,其次为脾（16.03%）、心（12.55%）、胆（6.66%）等。在配伍方面,与黄芩配伍的核心单味药为柴胡、半夏,使用频率分别为88.03%、75.21%;主要配伍药物（使用频率在30%-60%之间）为茯苓、牡蛎、龙骨、白芍、大枣、生姜、桂枝、大黄,以上除白芍外,均为柴胡加龙骨牡蛎汤药物组成;次要配伍药物（使用频率在15%-30%之间）有郁金、石菖蒲、酸枣仁、合欢皮、远志、当归、陈皮、人参、党参、栀子、枳壳。常见的两药关联主要有半夏-柴胡、茯苓-柴胡、茯苓-半夏等,常见的三药关联主要有桂枝、半夏-柴胡,大黄、半夏-柴胡,大黄、牡蛎-柴胡,大黄、龙骨-牡蛎,大黄、龙骨-柴胡,桂枝、牡蛎-柴胡,多为上述核心药物与主要配伍药物之间形成的关联。与黄芩配伍的主要药物类别为理气药（使用频率93.38%）、补益药（86.02%）、安神药（83.59%）、化痰药（79.15%）、清热药（57.06%）,次要配伍药物类别为活血化瘀药、开窍药、泻下药。黄芩及其核心配伍药物的用量,黄芩为2-20g,平均10.50±2.26g;柴胡为6-36g,平均13.45±4.87g;半夏为4-20g,平均10.35±2.54g。黄芩与柴胡、黄芩与半夏的用量比例均以1:1为主,三药配比亦以1:1:1居多。1.2病案文献在病案文献中,所涉及的含黄芩抗抑郁方共46首,方剂类别8种。所治证型有19种,出现频率最高的为肝郁气滞证（13.95%）,其次为肝郁化火（8.53%）、肝火扰心（8.53%）、肝郁痰热（8.53%）、肝郁痰阻（7.75%）、肝郁脾虚6.98%,累计占54.27%。各类方剂使用频率、主治病证的证型、病性及病位、配伍药物及核心配伍药物用量的统计结果与临床研究文献结果基本一致。有关含黄芩抗抑郁方主治病证的证候研究显示,此类方剂主治病证的症状计有92种,涉及舌象15种,脉象10种。其中,主要症状（出现频率>30%）在神志方面的表现有忧郁,烦躁,易怒;在躯体方面的表现有寐差,纳差,胸胁不适;舌脉表现为舌红、淡红,苔黄、白、腻、薄,脉弦、细。次要症状（出现频率在8.5%-30%之间）在神志方面的表现有悲伤欲哭,少言寡语,厌世求死,记忆力下降,多思多虑,焦虑,精神紧张,兴趣减退;在躯体方面的表现有乏力,口苦,心悸,大便秘结,口干,头晕,咽部不适,脘痞不适,出汗,腹胀,大便稀溏,头痛,叹息,寒热异常感;舌脉表现为舌暗、胖大有齿痕,苔厚,脉数、滑、沉。常见的两症状关联为忧郁-脉弦、纳差-寐差、纳差-脉弦、烦躁-寐差、苔黄-脉弦、苔腻-寐差、舌红-脉弦,常见的三症状关联为易怒、寐差-烦躁,苔黄、忧郁-脉弦,苔腻、纳差-寐差,易怒、烦躁-寐差,舌红、寐差-脉弦,烦躁、脉弦-寐差,纳差、忧郁-脉弦、乏力、寐差-纳差,多为上述主要症状、舌脉与次要症状之间形成的关联。在证治规律即病机、症状与药物关系的研究方面,利用复杂网络勾勒出3个较为清晰的常见病证与选方用药之间的联系脉络。①肝郁气滞、肝郁脾虚等证:涉及的症状有忧郁,少言寡语,悲伤欲哭,厌世求死,反应迟钝,胸胁不适,寒热异常感,胃脘不适,乏力,纳差,腹胀,叹息,嗳气,消瘦,大便稀溏,苔薄,苔白,脉细;所用代表方剂为柴胡加龙骨牡蛎汤及逍遥散类方。②肝郁痰热、胆热痰扰等证:涉及的症状有精神紧张,幻觉,多思多虑,注意力不集中,记忆力下降,寐差,头重,四肢不温,呃逆,苔腻,脉滑;所用代表方剂为温胆汤类方。③肝郁化火、肝火扰心等证:涉及的症状有烦躁,易怒,恐惧感,心神不宁,口苦,口干,耳鸣,头痛,腹痛,全身疼痛,小便黄,小便短少,大便秘结,舌红,苔黄,脉数,脉弦;所用代表方剂为黄连解毒汤及龙胆泻肝汤。1.3临证加用黄芩文献在临证加用黄芩文献中,所涉及的方剂有60首。研究表明,当临床医家运用不含黄芩的方剂治疗抑郁症时,于原方中加用黄芩的主要依据是:主治病证有热盛、肝郁化火、痰热等病理改变,症状表现为口苦,心烦,大便干结或不畅,急躁易怒,舌苔黄腻,口干等。临床与黄芩同时加入处方的药物主要为栀子、黄连、龙胆,其次为柴胡、瓜蒌、半夏、牡丹皮、胆南星等清热、理气、化痰药。黄芩的常用剂量为6-20g,平均10.35±2.54g。结合上述研究结果及中医传统理论可知,黄芩在抗抑郁方剂中所起的作用主要有:①清热泻火以祛热邪;②清气降火以除痰热;③未雨绸缪以防邪郁化热;④配伍柴胡、半夏以调畅气机;⑤以寒制温,以防温药助火。黄芩在抗抑郁方剂中主要作为臣药、佐药,但其作用与地位不可小觑。2.实验研究2.1黄芩及黄芩苷对CORT抑郁模型小鼠行为学及血清皮质酮含量的影响慢性皮质酮40mg/kg皮下注射6周后模型小鼠糖水偏好率降低,悬尾和强迫游泳实验中不动时间延长,新颖摄食中潜伏期增加、食物消耗减少,与正常组比较具有统计学差异（P<0.01）,表现出明显的快感缺失、行为绝望状态;且造模6周后血清皮质酮含量升高,与正常组比较具有统计学差异（p<0.01）。而黄芩1.5g/kg、黄芩苷60mg/kg可显着改善CORT诱导的上述抑郁样行为、降低血清皮质酮含量,与模型组比较具有统计学差异（p<0.05,p<0.01）。2.2基于PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路的黄芩及黄芩苷对CORT抑郁模型小鼠神经发生的影响免疫组化显示,模型小鼠齿状回中Ki-67及BrdU 阳性细胞数显着降低（p<0.01）,而黄芩苷及黄芩治疗3周可增加阳性细胞数（p<0.01）。免疫荧光显示,模型小鼠齿状回中DCX+/NeuN+/BrdU+标记的未成熟神经元细胞数目显着降低（p<0.01）,DCX-/NeuN+/BrdU+标记的成熟神经元阳性细胞数显着下降（p<0.01）,而黄芩1.5g/kg、黄芩苷60mg/kg可显着增加存活的成熟及未成熟神经元数目（p<0.01）。高尔基染色显示,模型组齿状回神经元树突分支少、形态简单,树突总长度显着减少（p<0.01）,而给予黄芩1.5g/kg、黄芩苷60mg/kg可显着增加神经元树突复杂性,增加树突总长度（p<0.05,p<0.01）;神经元树突棘数目统计显示,CORT造模与黄芩苷、黄芩给药均未对神经元总树突棘密度及蘑菇状树突棘密度产生影响（p>0.05）。蛋白免疫印迹法显示,模型小鼠海马组织中PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路蛋白及突触蛋白PSD95、Synapsin 1表达降低（p<0.01）,给予黄芩1.5g/kg、黄芩苷60mg/kg后上述相关蛋白表达上调（p<0.05,p<0.01）;在CORT诱导的HT-22细胞上,黄芩苷可上调PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路蛋白表达（p<0.05,p<0.01）,而给予PI3K及AKT抑制剂LY294002、Perifosine后可抵消黄芩苷作用（p>0.05）。2.3黄芩水煎剂主要成分含量测定黄芩水煎剂主要含有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素4种物质成分,其中黄芩苷含量最高,为217.77±1.96mg/g。结论1.含黄芩抗抑郁方临床主要用于肝郁气滞、肝郁痰热、肝郁痰阻、肝郁化火（热）、肝火扰心和肝郁脾虚等证型。其主治病证以实为主,亦有虚实夹杂。常见病性证素为气滞、火热、痰,此外还有气虚、血瘀等;病位主要在肝（胆）,其次为心、脾（胃）等。2.含黄芩抗抑郁方主治病证的主要症状,在神志方面表现为忧郁,烦躁,易怒;在躯体方面表现为寐差,纳差,胸胁胀满。次要症状在神志方面表现为悲伤欲哭,少言寡语,厌世求死,记忆力下降等;在躯体方面表现为乏力,口苦,心悸,大便秘结,口干,头晕,咽部不适,脘痞不适等。舌脉主要表现为舌红、淡红,苔薄、苔白、苔腻,脉弦、细。3.含黄芩抗抑郁方中与黄芩配伍的核心药物为柴胡、半夏,三味药物平均用量分别为10g、13g、10g,黄芩与柴胡、黄芩与半夏的两药配比均以1:1为主,三药配比亦以1:1:1居多。4.在含黄芩抗抑郁方中,与黄芩配伍的单味药除柴胡、半夏外,主要有茯苓、牡蛎、龙骨、白芍、大枣、生姜、桂枝和大黄,此外还有郁金、石菖蒲、酸枣仁、合欢皮、远志、当归、陈皮、人参、党参、栀子和枳壳等。与黄芩配伍的主要药物类别为理气药、安神药、补益药、化痰药和清热药,此外还有活血化瘀药、开窍药和泻下药等。5.对常见病证与选方用药关系的研究表明:以肝郁气滞或肝郁脾虚等为主的病证,所用代表方剂为柴胡加龙骨牡蛎汤或逍遥散类方;以肝郁痰热或胆热痰扰等为主的病证,所用代表方剂为温胆汤类方;以肝郁化火或肝火扰心等为主的病证,所用代表方剂为龙胆泻肝汤或黄连解毒汤。6.黄芩和黄芩苷可通过上调PI3K/AKT/GSK3 β/β-catenin信号通路促进CORT抑郁模型小鼠齿状回神经发生发挥抗抑郁作用。
吉琳,申琪,郭向东[4]（2021）在《阳虚动物模型及检测指标的研究进展》文中研究表明阳虚证是中医临床常见证侯之一,涉及许多疾病,阳虚体质者也越来越多,大多疾病的晚期均会不同程度地出现阳虚证。目前关于阳虚动物模型主要从模拟中医病因、西医病理、病证结合三方面建立,集中在脾、肾二脏。关于阳虚的本质及物质基础的研究从生理生化和分子生物学两大方面的指标检测展开研究,主要包括内分泌、免疫、血液流变学、能量代谢、自由基、微量元素和整体水平上的基因、蛋白质、代谢组学。通过对以上研究分析探讨,有助于了解阳虚及其相关疾病的发病机制,完善不同脏腑阳虚证的诊断标准,为临床辨证论治的规范统一奠定基础。
任小娟[5]（2020）在《肾不藏志不寐的理论及实验研究》文中进行了进一步梳理目的:（1）探讨肾不藏志不寐论治的理论依据、因机证治和常用安肾志方药。（2）采用D-半乳糖联合对氯苯丙氨酸（PCPA）建立肾不藏志不寐大鼠模型,观察肾不藏志不寐模型大鼠衰老方面、睡眠方面和海马转录组变化,衰老方面包括记忆能力、氧化应激、凋亡基因,睡眠方面包括睡眠时间、脑电图、炎症因子和神经递质。（3）观察远志对肾不藏志不寐大鼠睡眠、神经递质和炎性因子的影响,以及远志对肾不藏志不寐大鼠海马转录组的影响。方方法:（1）收集、归纳和探讨肾不藏志不寐的理论依据和论治方药。（2）将实验动物随机分为空白对照组、D-半乳糖组、对氯苯丙氨酸组、肾不藏志不寐组,采用D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）通过Morris水迷宫（MWM）观察肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,检测肾不藏志不寐大鼠脑氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的含量,海马超氧化物歧化酶1（SOD1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）、CAT、B淋巴细胞瘤相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶（Caspase-3）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠衰老方面的变化。（4）采用戊巴比妥实验观察肾不藏志不寐大鼠睡眠情况,通过脑电图观察大鼠觉醒（Wake）、慢波睡眠I期（SWS1）、慢波睡眠II期（SWS2）、快速动眼睡眠（REMS）和睡眠总时间（TST）,检测肾不藏志不寐大鼠血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,脑5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量,海马白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）、5羟色胺1A受体(5-HT1AR)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABAARα1)、代谢型谷氨酸受体2（m Glu R2）m RNA的表达,观察肾不藏志不寐大鼠进行睡眠方面的变化。（5）对空白对照组和肾不藏志不寐组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。（6）观察远志对肾不藏志不寐大鼠的影响:将实验动物随机分为空白对照组、肾不藏志不寐组、远志低剂量组（0.0875g/kg）、远志中剂量组（0.175g/kg）、远志高剂量组（0.35g/kg）、地西泮组（0.92mg/kg）,通过MWM观察远志对肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力的影响,检测各组大鼠海马5-HT、Glu、GABA的含量,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）对空白对照组、肾不藏志不寐组、远志中剂量组、地西泮组大鼠海马提取总RNA进行转录组测序和分析。结结果:（1）肾志对寐寤具有调节作用,肾不藏志不寐的主症为夜寐早寤,病位在肾,病因是肾脏虚损,肾志不入于舍是肾不藏志不寐的核心病机。肾不藏志不寐常见临床证型包括肾气不固型、肾精不足型、肾阳虚型、肾阴虚型、肾虚水泛型和肾不纳气型六种证型。远志、刺五加、人参、茯神、五味子、交泰丸、黄连阿胶汤、六味地黄丸、磁朱丸和孔圣枕中丹是治疗肾不藏志不寐常用方药。（2）D-半乳糖120mg/kg/d皮下注射42d联合PCPA 300mg/kg/d腹腔注射3d可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型衰老方面的变化:与空白对照组比较,模型大鼠体重减轻,MWM中逃避潜伏期延长、穿台次数减少,脑SOD、CAT、GSH-px含量减少、MDA含量增加,海马SOD1、SOD2、CAT m RNA表达上调,海马Bax、Caspase-3 m RNA的表达上调、Bcl-2 m RNA表达下调。（4）肾不藏志不寐大鼠模型睡眠方面的变化:戊巴比妥实验发现肾不藏志不寐大鼠睡眠潜伏期延长、睡眠时间缩短,肾不藏志不寐大鼠脑电图WAKE增加、SWS1、SWS2、REMS和TST减少,血浆IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加,脑5-HT、GABA含量减少、Glu含量增加,海马IL-6、TNF-αm RNA表达上调,海马5-HT1AR、GABAARα1m RNA表达下调、m Glu R2 m RNA表达上调。（5）肾不藏志不寐大鼠海马转录组分析结果:与空白对照组相比,肾不藏志不寐组的差异基因共有1628个,其中上调基因上调887个,下调741个;差异基因的功能涉及神经发育、细胞发育、甘油三酯代谢、核糖体、氧化应激、炎性因子;并与帕金森病、阿尔茨海默病、逆行神经的信号通路、慢性进行性舞蹈病有密切联系。通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析、蛋白互作分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组的关键差异基因并进行验证,发现肾不藏志不寐大鼠海马显着差异基因为Gnb3、Faah、Mmp9、Twist1。（6）远志可以提高肾不藏志不寐大鼠学习记忆能力,增加模型大鼠海马5-HT、GABA的含量、降低Glu的含量,降低血浆IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。（7）药物干预肾不藏志不寐大鼠的海马转录组分析结果:（1）与肾不藏志不寐组相比,远志组的差异基因共有663个,其中上调240个,下调423个;差异基因主要涉及神经发育、昼夜节律调控、细胞凋亡与增殖、氧化磷酸化、能量代谢、免疫调节;并与帕金森病、阿尔茨海默病、慢性进行性舞蹈病、非酒精性脂肪肝、I型糖尿病、哮喘的发生有密切联系。（2）与肾不藏志不寐组相比,地西泮组的差异基因共有1660个,其中上调基因732个,下调基因928个;差异基因主要涉及神经系统发育的调控、氧化磷酸化、神经元凋亡、氧化应激、能量代谢;并与帕金森病、慢性进行性舞蹈病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝有密切联系。（3）远志对肾不藏志不寐干预作用的差异基因235个,其中显着治疗作用的基因37个;差异基因的功能涉及神经元发育、γ-氨基丁酸信号通路、细胞生长调控、参与免疫球蛋白介导的免疫应答、能量代谢;并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、I型糖尿病、非酒精性脂肪肝等有关。（4）地西泮对肾不藏志不寐干预作用的差异基因753个,其中显着治疗作用的基因49个;差异基因涉及中枢神经系统发育、老化、突触的调节、凋亡的调控、多巴胺、糖原、脂肪酸、嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸代谢。并与慢性进行性舞蹈病、帕金森病、阿尔茨海默病、非酒精性脂肪肝、心肌收缩、单纯疱疹病毒感染等有关。（5）肾不藏志不寐与远志、地西泮关联的靶标基因及分子通路分析:通过组间差异基因GO分析、KEGG Pathway分析以及肾不藏志不寐内涵,筛选肾不藏志不寐组、远志组和地西泮组的关键差异基因并进行验证,发现远志有效靶基因为Faim、Pcp2、Elovl6;地西泮有效靶基因为Npr3、Trh;两药共同作用的靶点为BDNF、Gabra6。结结论:（1）肾志与不寐有着密切联系,肾不藏志是肾不藏志不寐的核心病机,补益肾脏、安神定志为肾不藏志不寐的治疗原则,远志是归经入肾的的安肾志药物,具有安神、强志、益肾的功效,是治疗志异常的首选药物。（2）D-半乳糖联合PCPA可以建立肾不藏志不寐大鼠模型。（3）肾不藏志不寐大鼠模型与衰老相关的学习记忆能力、氧化应激、凋亡记忆基因的表达发生了改变,与睡眠相关的睡眠时间、脑电图、神经递质和炎性因子的表达发生了改变。（4）肾不藏志不寐大鼠模型海马存在基因转录水平上的变化,显着差异基因功能涉及神经系统、代谢和炎症等。（5）远志可以改善肾不藏志不寐大鼠的睡眠、调节神经递质、降低炎性因子的表达。（6）远志和地西泮对肾不藏志不寐大鼠海马的神经系统和炎症相关基因具有一定的干预效应,远志更侧重对神经功能相关靶基因的调节。
王萌[6]（2020）在《基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制》文中进行了进一步梳理目的:本研究旨在探讨在抑郁症发病过程中,NLRP3炎症小体通路的过度活化是否与其负向调控机制线粒体自噬失活有关;明确小建中汤是否具有抗抑郁作用,能否有效逆转CUMS大鼠抑郁样行为,以及小建中汤治疗抑郁症的药理机制是否与上调抑郁模型大鼠海马线粒体自噬水平,改善线粒体功能,抑制TLR4/NF-κB通路和NLRP3炎症小体活化有关;明确小建中汤对NLRP3炎症小体通路的抑制作用是否依赖于PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬。进一步探讨小建中汤调摄阴阳、温健脾气、生发肝气之功对抑郁症的作用机理。方法:1.实验一:SD大鼠40只,除空白组大鼠（n=8）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=8）、氟西汀组（n=9）和雷帕霉素组（n=9）。分别给予药物治疗3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,取海马组织和血清。RT-PCR检测mt DNA拷贝数,线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;ELISA检测血清IL-1β、IL-18、DA和5-HT变化。2.实验二:SD大鼠60只,除空白组大鼠（n=7）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=7）、氟西汀组（n=7）、小建中低剂量组（n=8）、小建中中剂量组（n=8）和小建中高剂量组（n=8）。分别给予药物干预3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,继而取海马组织和血清。尼氏染色检测海马CA3区锥体细胞形态,透射电镜观察海马CA3区锥体细胞和线粒体超微结构;RT-PCR检测mt DNA拷贝数,线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NF-κB信号通路相关m RNA（TLR4、IκB-α、NF-κB1、RELA和TNFα）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NF-κB信号通路相关蛋白（TLR4、p-IκB-α、p-p50和p-p65）变化;Western-Blot和免疫荧光检测NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;ELISA检测血清IL-1β、IL-18、DA、5-HT、SOD和MDA变化。3.实验三:SD大鼠50只,除空白组大鼠（n=7）外,应用CUMS造模,3周后测试大鼠体重和蔗糖偏好率,判断造模是否成功,造模成功的大鼠随机分为模型组（n=8）、氟西汀组（n=8）、小建中组（n=8）和小建中+抑制剂组（n=8）。分别给予药物治疗3周,同时继续进行CUMS造模。治疗结束后对大鼠实施行为学检测,继而取海马组织。RT-PCR检测线粒体自噬相关m RNA（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关m RNA（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化;Western-Blot检测线粒体自噬相关蛋白（PINK-1、Parkin、Beclin-1、LC3B、P62）变化,NLRP3炎症小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18）变化。结果:1.CUMS模型大鼠行为学、线粒体自噬和NLRP3炎症小体通路变化1.1.行为学:与空白组相比,模型组大鼠体重和蔗糖偏好率明显下降（P<0.01）;从强迫游泳实验（FST）结果来看,模型组大鼠不动时间明显延长（P<0.01）;从旷场实验（OFT）结果来看,模型组大鼠水平得分、垂直得分、运动总距离、运动总时间均下降（P<0.01）。1.2.线粒体自噬:与空白组比较,模型组大鼠海马PINK-1、Parkinh和Beclin-1的m RNA相对表达量明显减少（P<0.01）,P62的m RNA相对表达量增多（P<0.01）;与空白组比较,模型组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,P62蛋白表达明显上升（P<0.01）。CUMS大鼠海马线粒体自噬水平降低。1.3.NLRP3炎症小体通路:与空白组比较,模型组大鼠海马NLRP3（P<0.05）、ASC（P<0.01）、caspase-1（P<0.01）、IL-1β（P<0.05）和IL-18（P<0.01）的m RNA相对表达量明显增多;与空白组比较,模型组大鼠NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。在CUMS大鼠海马出现了NLRP3炎症小体活化和神经炎症反应。2.雷帕霉素对CUMS模型大鼠行为学、线粒体自噬和NLRP3炎症小体通路的作用2.1行为学:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠的蔗糖偏好率显着升高（P<0.01）,FST不动时间显着降低（P<0.01）。雷帕霉素逆转了CUMS大鼠的抑郁样行为。2.2线粒体自噬:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）、Beclin-1（P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62的m RNA相对表达量减少（P<0.01）;与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平升高（P<0.01）,P62蛋白表达下降（P<0.01）。雷帕霉素上调了CUMS大鼠海马线粒体自噬水平。2.3 NLRP3炎症小体通路:与模型组比较,雷帕霉素组大鼠海马NLRP3（P<0.01）、caspase-1（P<0.05）、ASC（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-18（P<0.01）的m RNA相对表达量减少;同时,雷帕霉素组大鼠NLRP3、caspase-1 p20、ASC、IL-1β和IL-18的蛋白表达下降（P<0.01）。雷帕霉素抑制了CUMS大鼠海马NLRP3炎症小体活化。3.小建中汤对CUMS模型大鼠行为学的影响与模型组比较,小建中低、中、高剂量组大鼠体重均显着增加（P<0.01）;与模型组比较,小建中低、中、高剂量组大鼠的FST不动时间明显减少（P<0.01）;与模型组比较,低剂量和中剂量组大鼠OFT水平得分也有所增加（P<0.05）,小建中低、中、高剂量组大鼠的垂直得分、运动总距离和运动总时间明显上升（P<0.01）。小建中汤显着逆转了CUMS大鼠抑郁样行为。4.小建中汤对CUMS模型大鼠线粒体自噬的调控与模型组比较,小建中汤低剂量组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62（P<0.01）的m RNA相对表达量减少;小建中汤中剂量和高剂量组大鼠海马PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）和Beclin-1（P<0.01,P<0.05）的m RNA相对表达量增多,P62的m RNA相对表达量减少（P<0.01）。与模型组比较,小建中汤低剂量组大鼠海马PINK-1、Parkin和Beclin-1的蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,P62的蛋白表达水平下降（P<0.01）;小建中汤中剂量和高剂量组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1（P<0.01）的蛋白表达上调,P62的蛋白表达下降（P<0.01）。小建中汤通过PINK-1/Parkin途径上调了CUMS大鼠海马区线粒体自噬水平。5.小建中汤对CUMS模型大鼠mt DNA拷贝数的影响与空白组比较,模型组大鼠海马mt DNA拷贝数增多（P<0.01）。与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马mt DNA拷贝数明显增多（P<0.01）。小建中汤明显上调了CUMS大鼠海马神经元的线粒体拷贝数,增加了线粒体数量。6.小建中汤对CUMS模型大鼠血清SOD和MDA的影响与空白组比较,模型组大鼠血清SOD（P<0.01）表达量减少,MDA（P<0.01）表达量明显增多;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠血清SOD（P<0.05,P<0.01,P<0.01）表达量明显减增多,MDA（P<0.01,P<0.05,P<0.01）表达量明显减少。小建中汤改善了CUMS大鼠脂质过氧化水平。7.小建中汤对CUMS模型大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响与空白组比较,模型组大鼠海马TLR4、IκB-α、NF-κB1、RELA和TNF-α的m RNA相对表达量增多（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马TLR4（P<0.01）、IκB-α（P<0.01）、NF-κB1（P<0.01）、RELA（P<0.01）和TNF-α（P<0.01,P<0.01,P<0.05）的m RNA相对表达量减少。与空白组比较,模型组大鼠海马p-p50、p-p65、p-IκB-α和TLR4的蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠海马p-p50、p-p65、p-IκB-α和TLR4的蛋白水平降低（P<0.01）。小建中汤抑制了CUMS大鼠海马TLR4/NF-κB信号通路的激活。8.小建中汤对CUMS模型大鼠NLRP3炎症小体通路的作用与模型组比较,小建中汤低、中、高组大鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18的m RNA相对表达量和蛋白表达水平均降低（P<0.01）。小建中汤抑制了CUMS大鼠海马NLRP3炎症小体的活化。9.小建中汤对CUMS模型大鼠血清5-HT和DA的影响与空白组比较,模型组大鼠血清中DA（P<0.01）和5-HT的蛋白水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,小建中汤低、中、高剂量组大鼠血清DA和5-HT的表达上调（P<0.01）。小建中汤增加了CUMS大鼠血清5-HT和DA水平。10.小建中汤+线粒体自噬抑制剂对CUMS模型大鼠线粒体自噬的影响与小建中组相比,小建中+抑制剂组大鼠PINK-1（P<0.01）、Parkin（P<0.05）、Beclin-1（P<0.01）的m RNA相对表达量减少,P62（P<0.01）的m RNA相对表达量增多;与小建中组比较,小建中+抑制剂组大鼠海马PINK-1、Parkin、Beclin-1和LC3B2/1的蛋白表达水平明显下降（P<0.01）,P62蛋白表达明显上升（P<0.01）。线粒体自噬抑制剂减弱了小建中汤对CUMS大鼠线粒体自噬的正向调控作用。11.小建中汤+线粒体自噬抑制剂对CUMS模型大鼠NLRP3炎症小体通路的影响与小建中组相比,小建中+抑制剂组大鼠海马NLRP3（P<0.01）、ASC（P<0.05）、caspase-1（P<0.01）、IL-1β（P<0.01）和IL-18（P<0.01）的m RNA和蛋白表达均上升。线粒体自噬抑制剂减弱了小建中汤对CUMS大鼠NLRP3炎症小体的抑制作用。结论:1.CUMS抑郁模型大鼠海马区同时存在线粒体自噬水平低下和NLRP3炎症小体通路的过度活化,这可能是抑郁症的重要机制之一。2.线粒体自噬激动剂雷帕霉素改善了CUMS大鼠的抑郁样行为,降低了NLRP3炎症小体各组分和下游炎症因子的表达水平。雷帕霉素通过上调线粒体自噬水平抑制了NLRP3炎症小体的过度活化。进一步验证了在抑郁症发病过程中,NLRP3炎症小体的活化可能与其负向调控机制线粒体自噬失活有关。3.小建中汤通过改善CUMS大鼠自主活动,减少CUMS大鼠强迫游泳不动时间,有效逆转了CUMS大鼠抑郁样行为,具有明确的抗抑郁作用。4.小建中汤治疗抑郁症的药理机制可能与上调CUMS大鼠海马区PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬水平,增加mt DNA拷贝数,改善线粒体功能,抑制TLR4/NF-κB通路和NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的释放有关。5.小建中汤对NLRP3炎症小体的抑制作用依赖于其对PINK-1/Parkin途径介导的线粒体自噬的调节。
曾颂玫[7]（2020）在《待确诊青光眼24h-NCT昼夜变化特征与其中医证型之间的关系研究》文中研究说明目的:通过对待确诊青光眼患者24h-NCT监测,观察其昼夜眼压变化的特征与中医证型之间的关系;并客观评价24h-NCT监测对早期诊断原发性开角型青光眼（POAG）、慢性闭角型青光眼（CPACG）或高眼压症（OHT）的意义,并及时发现其高眼压峰值所在一天中的时间段,以指导治疗。方法:（1）予符合病例选择标准的待确诊青光眼患者记录其一般情况、中医临床症状及舌脉征象,并逐步完成A超测量角膜厚度、视野检查、青光眼OCT检查、UBM检查、24h-NCT监测,连续24h内,每2小时测量眼压1次,每次测量3个值,取平均值记录。（2）分析其24h-NCT昼夜变化特征,对所有入选的患者进行中医辨证分型,分析24h-NCT昼夜变化特征与中医证型的关系。（3）统计并分析入选的所有待确诊青光眼患者非门诊时间（包括夜间）出现眼压峰值的患者比例,以及统计入选患者青光眼或高眼压症的确诊率,并进一步分析该部分患者高眼压峰值出现时间特征。结果:采用前瞻性研究纳入2018年12月1日至2020年1月31日于广东省中医院收治入院符合病例选择标准的待确诊青光眼患者84例（168眼）,经鉴别诊断,其中POAG最多共35例,占41.7%;其次是CPACG患者,共27例,占32.1%;OHT患者共10例,占11.9%;排除青光眼共12例,占14.3%。纳入研究的POAG、CPACG和OHT患者中,门诊时间出现高眼压峰值的占46%,非门诊时间（包括夜间）出现高眼压峰值的占54%。患者在非门诊时间（包括夜间）出现眼压峰值的构成比略高于其在门诊时间出现的构成比。符合病例选择标准的待确诊青光眼中确诊POAG、CPACG和OHT共72例,其中眼压峰值位于日间的共36例,阳虚证最多共14例,占38.9%;肝肾阴虚证共10例,占27.8%;肝郁气滞证共7例占19.4%;痰湿证共5例占13.9%。眼压峰值位于夜间的共36例,其中肝郁气滞证最多共16例,占44.4%;阳虚证共8例,占22.2%;痰湿证共6例,占16.7%;肝肾阴虚证共6例,占16.7%。纳入研究的POAG、CPACG和OHT患者中,痰湿证型连续24h内NCT峰值所在时间段最多位于15:00-17:00;肝郁气滞证型连续24h内NCT峰值所在时间段最多位于17:00-19:00;阳虚证型连续24h内NCT峰值所在时间段最多位于11:00-13:00;肝肾阴虚证型连续24h内NCT峰值所在时间段最多位于17:00-19:00。纳入研究的POAG患者肝郁气滞证最多,共14例,占40.0%;阳虚证其次,共9例,占25.7%;肝肾阴虚证和痰湿证各6例,占17.1%。纳入研究的CPACG患者阳虚证最多,共11例,占40.7%;肝肾阴虚证其次,共9例,占33.3%;痰湿证5例,占18.5%;肝郁气滞证最少,共2例,占7.4%。纳入研究的OHT患者肝郁气滞证最多,共7例,占70.0%;阳虚证其次,共2例,占20.0%;肝肾阴虚证,共1例,占10.0%;没有痰湿证患者。纳入研究的POAG、CPACG和OHT患者年龄分布在60-69岁最多,其次是50-59岁,70-80岁最少。结论:（1）待确诊青光眼经检查发现绝大多数为症状隐匿的POAG、CPACG或OHT患者,故要重视24h-NCT在POAG、CPACG和OHT诊断中的意义。（2）24h-NCT监测可以发现非门诊时间（包括夜间）出现眼压峰值的隐匿型青光眼患者和高眼压症患者,此发现有利于减少漏诊并早期诊断POAG、CPACG和OHT。（3）POAG、CPACG和OHT眼压峰值位于日间的患者多为阳虚证,痰湿证最少。POAG、CPACG和OHT眼压峰值位于夜间的患者中,肝郁气滞证最多,肝肾阴虚证和痰湿证最少。（4）POAG、OHT患者中,均为肝郁气滞证型最多;CPACG患者中,阳虚证型最多。
刘淼[8]（2020）在《“肾应冬”理论与HPA轴生物钟基因和细胞信号转导因子的相关性研究》文中提出1.研究目的本文旨在通过“以时测脏”的研究方法,即在中医“天人相应”观指导下,根据中医五脏与四时变化相通应的特点。通过观察比较四时变化中对照组金黄地鼠和实验组（摘除松果体）金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴（Hypothalamus-Pituitary-Adrenal axis,HPA）各组织中相关生物钟基因和细胞信号转导因子的季节变化特点,进一步揭示“肾应冬”生物学机制,探讨中医肾藏象的本质内涵。2.研究方法2.1动物实验选用8周龄SPF级雄性叙利亚金黄地鼠,体重120g±20g,分别于春分、夏至、秋分、冬至前5周从北京维通利华实验动物技术有限公司购入。随后将金黄地鼠随机分为对照组与实验组,每组8只。实验组进行松果体摘除手术,对照组不做任何处理。在相同饲养条件下饲养至春分、夏至、秋分、冬至当日,于当日20:00移至暗室,21:00开始取材,分别取出各组金黄地鼠下丘脑、垂体、肾上腺组织,用蛋白质免疫印迹（Western Blot）法检测各组织中生物钟基因和细胞信号转导因子的蛋白表达情况。2.2指标检测2.2.1四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴生物钟基因per1、per2的影响2.2.2四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴G蛋白Gi、Gs的影响2.2.3四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴细胞信号转导因子c-fos、c-jun的影响2.3统计分析方法计量结果均以均数±标准差（（?）± s）表示,采用SAS 8.0进行统计分析,组间采用单因素方差分析;两两比较时,用独立样本t检验,或2个独立样本的非参数检验。以P<0.05为差异具有统计学意义。3.研究结果3.1 HPA轴各组织中生物钟基因per1、per2蛋白表达的四季变化3.1.1下丘脑组织中生物钟基因per1、per2蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠下丘脑组织per1蛋白表达四季变化趋势为春>秋>冬>夏,实验组下丘脑组织per1蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏。②对照组金黄地鼠下丘脑组织per2蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏,实验组下丘脑组织per2蛋白表达四季变化趋势为秋>冬>夏>春。3.1.2垂体组织中生物钟基因per 2蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠垂体组织per2蛋白表达四季变化趋势为春>冬>秋>夏,实验组金黄地鼠垂体组织per2蛋白表达四季变化趋势为春>秋>冬>夏。3.1.3肾上腺组织中生物钟基因per1、per2蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠肾上腺组织per1蛋白表达四季变化趋势为夏>冬>春>秋,实验组金黄地鼠肾上腺组织per1蛋白表达四季变化趋势为秋>夏>冬>春。②对照组金黄地鼠肾上腺组织per2蛋白表达四季变化趋势为夏>秋>春>冬,其中春、夏、秋三季与冬季相比有显着差异,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01,P<0.001）;实验组金黄地鼠肾上腺组织per2蛋白表达四季变化趋势为春>夏>秋>冬。3.2 HPA轴各组织中细胞信号转导因子c-fos、c-jun蛋白表达的四季变化3.2.1下丘脑组织中细胞信号转导因子c-fos、c-jun蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠下丘脑组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏,实验组金黄地鼠下丘脑组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏。②对照组金黄地鼠下丘脑组织c-jun蛋白表达四季变化趋势为春>秋>冬>夏,其中夏、冬季两季与春季相比有显着差异,差异有统计学意义（P<0.05）;实验组金黄地鼠下丘脑组织c-j un蛋白表达四季变化趋势为秋>春>冬>夏,其中实验组春与对照组春相比存在明显差异,差异有统计学意义（P<0.05）。3.2.2垂体组织中细胞信号转导因子.c-fos、c-j un蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠垂体组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏,其中春夏、秋三季与冬季相比有显着差异,且有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;实验组金黄地鼠垂体组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为夏>春>秋>冬,其中实验组冬季与对照组冬季相比差异显着,且有统计学意义（P<0.01）。②对照组金黄地鼠垂体组织c-jun蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏,其中春、夏两季与冬季相比差异显着,且有统计学意义（P<0.05）;实验组金黄地鼠垂体组织c-jun蛋白表达四季变化趋势为秋>冬>春>夏。3.2.3肾上腺组织中细胞信号转导因子c-fos、c-j un蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠肾上腺组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏,实验组金黄地鼠肾上腺组织c-fos蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏。②对照组金黄地鼠肾上腺组织c-jun蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏,其中夏季与冬季相比有显着差异,差异有统计学意义（P<0.05）;实验组金黄地鼠肾上腺组织c-jun蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏。3.3 HPA轴各组织中细胞信号转导因子Gi、Gs蛋白表达的四季变化3.3.1下丘脑组织中细胞信号转导因子Gi、Gs蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠下丘脑组织Gi蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏,实验组金黄地鼠下丘脑组织Gi蛋白表达四季变化趋势为春>夏>冬>秋。②对照组金黄地鼠下丘脑组织Gs蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏,其中春、夏两季与冬季相比差异显着,且有统计学意义（P<0.05）;实验组金黄地鼠下丘脑组织Gs蛋白表达四季变化趋势为夏>春>秋>冬,其中实验组夏与对照组夏相比差异显着,有统计学意义（P<0.05）。3.3.2肾上腺组织中细胞信号转导因子Gi、Gs蛋白表达的四季变化①对照组金黄地鼠肾上腺组织Gi蛋白表达四季变化趋势为冬>秋>春>夏,实验组金黄地鼠肾上腺组织Gi蛋白表达四季变化趋势为冬>春>秋>夏。②对照组金黄地鼠肾上腺组织Gs蛋白表达四季变化趋势为夏>秋>春>冬,其中夏季与冬季相比差异显着,且有统计学意义（P<0.05）;实验组金黄地鼠肾上腺组织Gs蛋白表达四季变化趋势为春>夏>秋>冬,其中实验组春与对照组春相比有显着差异,且差异有统计学意义（P<0.05）。4.结论（1）本研究首次证实了下丘脑、垂体、肾上腺组织的生物钟基因per1、per2具有一定的季节节律性,并且生物钟基因per1、per2参与了下丘脑-垂体-肾上腺轴对机体的调控过程。“肾应冬”的规律与下丘脑-垂体-肾上腺轴生物钟基因的季节性节律变化密切相关。（2）中医“肾应冬”生理机制与下丘脑-垂体-肾上腺轴褪黑素的变化,G蛋白介导和第三信使c-fos、c-jun参与的细胞信号转导系统密切相关。
张涛[9]（2019）在《针刺对肾阳虚近视视功能和屈光的影响及其机制研究》文中认为目的:本研究旨在发挥中医药的优势,研究高度近视发展与中医体质的相关性,揭示中医体质对高度近视发展的影响,探索体质偏颇近视治疗的方法和机制,为高度近视治疗提供新的方法和理论基础。研究设计:本研究包括三个部分,第一部分:通过中医体质类型调查问卷和眼科检查开展高度近视发展与阳虚质、阴虚质、气虚质、痰湿质和湿热质等9种中医体质相关性的临床研究,揭示高度近视发展与中医体质的相关性。第二部分:在临床研究的基础上,选取阳虚质为研究对象,通过动物实验研究评估电针肾俞穴对肾阳虚体质的治疗效果,为量化中医单穴治疗肾阳虚以及肾阳虚近视等疾病提供实验基础。第三部分:通过动物实验研究评估电针肾俞穴改善肾阳虚体质治疗肾阳虚近视的效果并探索其分子机制,探索中医治疗高度近视的新方法。方法:第一部分:对来我院就诊的高度近视患者进行屈光度、眼轴长度和眼内压检测以及中医体质问卷调查,将高度近视患者的屈光度、眼轴长度和眼内压与患者中医体质进行相关性分析,揭示高度近视发展与中医体质的相关性。第二部分:腹腔注射氢化可的松构建肾阳虚豚鼠动物模型,针刺肾俞穴治疗肾阳虚豚鼠,评估对肾阳虚豚鼠的治疗效果。针刺方法:选穴为豚鼠双侧肾俞穴,针刺时间为14:00～16:00,每次针刺30min,连续6周。评估指标:动物形态行为变化,动物体重,游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine,FT3）,游离甲状腺素（free thyroxine,FT4）,睾酮（testosterone,T）和雌二醇（estradiol,E2）。第三部分:通过氢化可的松腹腔注射结合右眼佩戴负透镜建立肾阳虚近视模型,检测针刺肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠视力、屈光度、眼轴长度和视网膜电图的影响,高效液相色谱法检测视网膜谷氨酸和γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）含量,实时荧光定量PCR和Western blot检测视网膜GABA受体、多巴胺受体和双调蛋白（amphiregulin,AREG）含量变化。结果:1.高度近视和中医体质密切相关,患者体质类型主要为阳虚质、气虚质和阴虚质。等效球镜度与阳虚质（P<0.001）、气虚质（P=0.009）和阴虚质（P<0.001）呈显着负相关,眼轴长度与阳虚质（P<0.001）、气虚质（P=0.002）和阴虚质（P<0.001）呈显着正相关,眼内压与中医体质无相关性。高度近视患者的平均等效球镜度为-9.36±3.31D,其中阳虚质、气虚质和阴虚质显着低于平均值,分别为-11.38±4.14D、-11.60±3.80和-10.28±4.12D;所有高度近视患者的平均眼轴长度为27.22±1.48mm,其中阳虚质、气虚质和阴虚质分别为28.51±1.45mm、27.73±1.40mm和28.41±1.69mm;阳虚质、阴虚质和气虚质患者的近视程度更深。2.肾阳虚造模2周后,与CONTROL组豚鼠相比,KD+EA组和KD+SHAM组豚鼠出现消瘦,毛发枯槁,畏寒怕冷,腹部潮湿、褪毛,萎靡、蜷缩懒动等肾阳虚症状,体重显着降低,血清激素FT3、FT4和T水平显着降低,E2水平显着升高。针刺肾俞穴4周开始,与KD+SHAM组豚鼠相比,KD+EA组豚鼠精神转好,体态均匀,毛发有光泽,肾阳虚症状消失,体重显着升高,血清激素FT3、FT4和T水平显着升高,E2水平显着降低,豚鼠肾阳虚体质得到明显改善。3.肾阳虚造模和负透镜诱导2周后,MYOPIA组豚鼠负透镜诱导眼眼轴增长,屈光度呈负值;KDM+SHAM组和KDM+EA组豚鼠出现肾阳虚症状,体重显着降低,血清激素紊乱,负透镜诱导眼眼球屈光度和眼轴长度过度增长。针刺肾俞穴治疗后,KDM+EA组豚鼠体重显着增加,肾阳虚症状消失,血清激素水平恢复,负透镜诱导眼屈光度和眼轴长度过度增长受到明显抑制。肾阳虚近视豚鼠负透镜诱导眼震荡电位总振幅、暗适应最大混合反应（Max-ERG）和明适应视锥细胞反应（Cone-ERG）的b波振幅均显着下降;针刺肾俞穴4周后,肾阳虚豚鼠负透镜诱导眼震荡电位总振幅、Max-ERG波b波和Cone-ERG波b波振幅恢复正常。与CONTROL组相比,MYOPIA组豚鼠右眼视物时,头部跟随转动条栅摆动次数明显降低,右眼视力明显降低;针刺肾俞穴治疗后,与KDM+SHAM组相比,KDM+EA组豚鼠右眼视物时头部跟随转动条栅摆动次数明显升高,肾阳虚近视豚鼠右眼视力明显提高。各组豚鼠右眼视网膜近视相关分子表达变化如下:与CONTROL组相比,MYOPIA组和KDM+SHAM豚鼠右眼GABA和谷氨酸含量升高,视网膜GABA受体GABAA和受体GABAC、AREG、多巴胺受体D2mRNA和蛋白水平均表达升高,多巴胺受体D1 mRNA和蛋白水平均表达降低;针刺肾俞穴4周后,与KDM+SHAM组相比,KDM+EA组豚鼠负透镜诱导眼视网膜GABA和谷氨酸含量降低,视网膜GABA受体GABAA和受体GABAc、AREG、多巴胺受体D2表达降低,多巴胺受体D1表达升高。结论:1.高度近视发展与中医体质密切相关,近视患者的中医体质主要为阳虚质、气虚质和阴虚质。2.针刺肾俞穴能有效改善豚鼠肾阳虚体质。3.针刺肾俞穴能提高肾阳虚近视豚鼠视力,抑制肾阳虚近视屈光度和眼轴长度的过度增长,显着提高震荡电位总振幅、Max-ERG波b波和Cone-ERG波b波振幅。针刺肾俞穴后,肾阳虚近视豚鼠视网膜谷氨酸和GABA分泌降低,GABA受体、AREG和多巴胺受体D1受体表达降低,多巴胺受体D2表达升高。针刺肾俞穴可以通过改善肾阳虚体质延缓近视发展,为未来中西医结合治疗偏颇体质近视提供了理论基础和实验基础。
周璇[10]（2019）在《艾条悬灸调控MR和GR对皮质酮肾阳虚大鼠影响的机制研究》文中认为目的:探讨艾条悬灸对皮质酮肾阳虚大鼠海马及杏仁核中盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptor,MR）和糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor,GR）基因及蛋白表达的影响,揭示艾条悬灸改善肾阳虚证的可能分子机制。方法:将70只Sprague-Dawley雄性大鼠,体重200±25g,由江西中医药大学动物实验中心提供,借助随机数字表分为空白对照组（n=20）和造模组（n=50）。造模组大鼠依据每克体重给予0.03mg剂量的氢化可的松注射液于双后肢肌注（左右后肢交替注射）每日1次,连续14天建立肾阳虚大鼠模型。造模完成后,剔除不符合要求及死亡的大鼠,剩下造模成功的40只大鼠同样按随机数字表分成2组,分别是模型对照组（20只）,艾条悬灸组（20只）。艾条悬灸组从实验第15天起开始介入艾条悬灸,悬灸前预先剪去穴位处的毛发,用江西中医药大学附属医院特制的艾条（直径8mm,长12mm）悬于关元穴、肾俞穴（双）上,先回旋灸2min预热局部皮肤,再固定于上述穴位施行温和灸,实施者将食指放于穴位四周,以有温热感为宜。艾条悬灸20min,每日一次,7次为一疗程,疗程间隔休息2日,再进行第二疗程,共治疗14次。其他两组大鼠进行与艾条悬灸组大鼠同样的捆绑固定及备皮操作。两个疗程结束后,取材。采用ELISA法检测大鼠血清中ACTH、CRH、CORT指标含量,采用RT-PCR技术,Western blot技术检测观察各组大鼠海马和杏仁核中MR和GR mRNA及蛋白的表达。结果:1.体重比较:（1）造模前各组大鼠体重相比较,差异均无统计学意义（P>0.05）具有可比性;（2）造模14天,与模型对照组比较,空白对照组大鼠增长明显,有显着性差异（P<0.01）。2.血清指标检测:（1）与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清ACTH、CRH、CORT表达均下降,均有显着性差异（P<0.01）;（2）与模型对照组比较,艾条悬灸组大鼠血清CRH、CORT表达均有不同程度的上升,有显着性差异（P<0.01）,血清ACTH的表达也具有显着性差异（P<0.05）;（3）艾条悬灸组与空白对照组比较,上述各指标均无显着性差异（P>0.05）。3.基因（mRNA）表达:（1）海马:（1）与空白对照组比较,模型对照组海马MR mRNA表达虽有下降但差异无统计学意义（P>0.05）,而GR mRNA表达下降,差异有显着性意义（P<0.05）;（2）与模型对照组相比较,艾条悬灸组海马MR、GRmRNA表达虽有不同程度的上升,但是差异未达至统计学意义（P>0.05）;（2）杏仁核:（1）与空白对照组比较,模型对照组杏仁核MR、GR mRNA表达下降,极具显着性差异（P<0.01）;（2）与模型对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR mRNA表达上升,差异有统计学意义（P<0.01）,GR mRNA表达升高,具有显着性差异（P<0.05）;（3）与空白对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR、GR mRNA表达无显着性差异（P>0.05）。4.蛋白表达:（1）海马:（1）与空白对照组比较,各组大鼠海马MR蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）,但模型对照组大鼠海马GR蛋白表达明显下调,差异有统计学意义（P<0.05）,艾条悬灸组大鼠海马GR蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）;（2）与模型对照组比较,艾条悬灸组大鼠海马GR蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）杏仁核:（1）与空白对照组相比,模型对照组大鼠杏仁核MR、GR的蛋白表达明显下降,均有显着性差异（P<0.05）,艾条悬灸组大鼠杏仁核MR、GR蛋白表达基本达至正常水平并无显着性差异（P>0.05）;（2）与模型对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR、GR蛋白表达上升,有显着性差异（P<0.05）。结论:1.本实验在查阅各类肾阳虚大鼠造模方法文献后,选用肌注氢化可的松注射液方法成功建立皮质酮肾阳虚大鼠模型,为本实验的展开奠定良好基础。2.艾条悬灸肾俞穴（双）、关元穴能有效改善肾阳虚大鼠的阳虚症状,在艾灸的温热刺激和特定穴位效应干预下HPA轴上ACTH、CRH、CORT的激素水平升高,HPA轴相关调节功能渐趋正常。3.艾条悬灸使海马、杏仁核GR mRNA及蛋白表达上调,同样帮助杏仁核的MR mRNA及蛋白表达水平上调,从而参与到HPA轴的负反馈调控中,这可能是艾灸改善肾阳虚证的分子机制之一。
二、阴虚阳虚大鼠促肾上腺皮质激素及皮质酮昼夜节律的差异研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、阴虚阳虚大鼠促肾上腺皮质激素及皮质酮昼夜节律的差异研究（论文提纲范文）
（1）基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 抑郁症现代医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 抑郁症中医药研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1. 抑郁症病理机制中的线粒体损伤 |
| 2. 线粒体能量代谢障碍与突触可塑性损伤 |
| 3. 线粒体生物合成异常与抑郁症神经元突触重塑 |
| 4. 从“脾”论治抑郁症或成为中医治疗的新途径 |
| 参考文献 |
| 实验一 醒脾解郁方对肝郁脾虚抑郁大鼠行为学及海马神经元损伤的保护作用研究 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α介导的线粒体生物合成研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨醒脾解郁方含药血清对皮质酮诱导海马神经元损伤突触重塑的影响 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 基于AMPK/SIRT1/PGC-1α信号通路探讨突触微环境对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响及醒脾解郁方干预效应 |
| 概述 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、初步结论 |
| 三、存在不足 |
| 四、创新点 |
| 五、展望 |
| 第四部分 附录 |
| 附录1: 致谢 |
| 附录2 攻读学位期间发表的学术论文及参与课题情况 |
| 附录3 个人简历 |
（2）2型糖尿病合并骨质疏松证型分析及葛根素对DOP的改善机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 糖尿病性骨质疏松症的现代研究进展 |
| 1. 糖尿病性骨质疏松症发病机制研究进展 |
| 2. 糖尿病性骨质疏松症的治疗进展 |
| 3. 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 糖尿病性骨质疏松症的中医研究进展 |
| 1. 病因病机 |
| 2. 辨证分型 |
| 3. 中药治疗 |
| 4. 展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 临床研究 2型糖尿病合并骨质疏松症中医证型及相关因素分析 |
| 1. 研究资料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 病例选择标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 病例资料收集 |
| 2.2 一般情况收集 |
| 2.3 调查内容 |
| 3. 统计方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 一般情况 |
| 4.2 实验室指标比较 |
| 4.3 骨密度值比较 |
| 4.4 中医证型比较 |
| 4.5 合并骨质疏松组主证型间骨密度值比较 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 临床特征 |
| 5.2 中医证型特点 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 基于炎性反应及皮质酮代谢探讨葛根素对糖尿病大鼠骨质疏松的改善机制 |
| 1. 实验资料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 造模 |
| 2.2 分组处理 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3. 技术路线 |
| 4. 结果 |
| 4.1 一般情况 |
| 4.2 不同剂量葛根素对糖代谢指标的影响 |
| 4.3 不同剂量葛根素对骨代谢指标的影响 |
| 4.4 不同剂量葛根素对炎症指标的影响 |
| 4.5 不同剂量葛根素对皮质酮代谢的影响 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 2型糖尿病性骨质疏松动物模型的建立 |
| 5.2 血糖、胰岛素与糖尿病性骨质疏松 |
| 5.3 骨代谢标记物与糖尿病性骨质疏松 |
| 5.4 炎症指标与糖尿病性骨质疏松 |
| 5.5 皮质酮代谢与糖尿病性骨质疏松 |
| 5.6 葛根素与糖尿病性骨质疏松 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）黄芩在治疗抑郁症方剂中的配伍应用及其抗抑郁机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、古代中医对抑郁症相关疾病的论述 |
| 二、现代中医对抑郁症的认识 |
| 1 病因病机 |
| 2 辨证与治疗 |
| 三、清热药及含清热药方的抗抑郁研究 |
| 1 清热药 |
| 2 含清热药方 |
| 四、黄芩及含黄芩方的抗抑郁研究 |
| 1 黄芩及其活性成分 |
| 2 临床常用的含黄芩方 |
| 第二部分 数据挖掘 含黄芩抗抑郁方的主治病证与配伍方法研究 |
| 一、资料的收集与整理 |
| 1 方剂来源 |
| 2 文献筛选标准 |
| 3 资料规范 |
| 二、数据挖掘方法 |
| 1 频数统计 |
| 2 关联规则分析 |
| 3 复杂网络分析 |
| 三、研究结果 |
| (一) 含黄芩抗抑郁方临床研究文献 |
| 1 常用方剂及类别 |
| 2 总有效率 |
| 3 不良反应发生率 |
| 4 主治病证 |
| 5 配伍方法 |
| 6 黄芩与核心配伍药物的用量及比例 |
| 7 小结 |
| (二) 含黄芩抗抑郁方病案文献 |
| 1 常用方剂及类别 |
| 2 主治病证 |
| 3 配伍方法 |
| 4 黄芩与核心配伍药物的用量及比例 |
| 5 证治规律 |
| 6 小结 |
| (三) 临证加用黄芩文献 |
| 1 原方及主治证型 |
| 2 加用黄芩所对应的病机与症状 |
| 3 与黄芩同时加入处方的药物 |
| 4 黄芩用量 |
| 5 小结 |
| 四、讨论 |
| 1 含黄芩抗抑郁方所治病证的主要病机 |
| 2 含黄芩抗抑郁方所治病证的证候特点 |
| 3 含黄芩抗抑郁方的常用配伍方法 |
| 4 含黄芩抗抑郁方的类别及功效 |
| 5 黄芩在抗抑郁方中的作用与地位 |
| 第三部分 实验研究 |
| 一、研究背景 |
| 1 抑郁症神经发生假说 |
| 2 抗抑郁药对神经发生的作用 |
| 二、黄芩及黄芩苷对CORT抑郁模型小鼠行为学及血清皮质酮含量的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 三、基于PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin通路的黄芩及黄芩苷对CORT抑郁模型小鼠神经发生的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 四、黄芩水煎剂主要成分含量测定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略语中英文对照 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）阳虚动物模型及检测指标的研究进展（论文提纲范文）
| 1 阳虚动物模型的建立 |
| 1.1 模拟中医病因 |
| 1.2 模拟西医病理 |
| 1.3 病证结合 |
| 2 生理生化指标检测 |
| 2.1 阳虚与内分泌 |
| 2.2 阳虚与免疫系统 |
| 2.3 阳虚与血液流变学 |
| 2.4 阳虚与能量代谢 |
| 2.5 阳虚与自由基 |
| 2.6 阳虚与微量元素 |
| 3 分子生物学指标 |
| 4 问题与展望 |
（5）肾不藏志不寐的理论及实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肾不藏志不寐理论研究 |
| 1 肾、志的含义及两者之间的关系 |
| 2 肾藏志对寐寤的调节作用 |
| 3 肾不藏志不寐的因机证治 |
| 4 常用安肾志的方药 |
| 5 小结 |
| 第二部分 肾不藏志不寐大鼠模型研究 |
| 研究一 肾不藏志不寐大鼠氧化应激、凋亡基因、炎性因子和神经递质的实验研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 肾不藏志不寐大鼠海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 安肾志药物远志对肾不藏志不寐大鼠镇静促眠作用的实验研究 |
| 研究一 远志对肾不藏志不寐大鼠神经递质和炎性因子的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 研究二 远志对肾不藏志不寐大鼠作用的海马转录组学研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 失眠大鼠模型的建立及中药治疗对氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（6）基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究思路 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.中医郁病理论的源流与发展 |
| 1.1 秦汉时期 |
| 1.1.1 《黄帝内经》 |
| 1.1.2 《伤寒杂病论》 |
| 1.2 魏晋南北朝隋唐时期 |
| 1.3 宋金元时期 |
| 1.4 明清时期 |
| 1.5 近现代 |
| 2.抑郁症的病因病机 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.1.1 五脏精气虚弱 |
| 2.1.2 体质偏颇 |
| 2.1.3 情志刺激 |
| 2.1.4 劳神过度 |
| 2.2 各家论点 |
| 2.2.1 肝气郁结 |
| 2.2.2 肺气郁结 |
| 2.2.3 脾虚 |
| 2.2.4 肝郁脾虚 |
| 2.2.5 胆失决断 |
| 2.2.6 肾阳虚 |
| 2.2.7 肝阳气虚 |
| 2.2.8 肾精不足 |
| 2.2.9 肝肾不足 |
| 2.2.10 “脑神”不用 |
| 3.抑郁症的发病机制 |
| 3.1 单胺类神经递质 |
| 3.2 下丘脑-垂体-肾上腺轴 |
| 3.3 神经可塑性 |
| 3.4 谷氨酸能失衡 |
| 3.5 线粒体假说 |
| 3.6 神经炎症反应 |
| 3.7 Micro RNA |
| 3.8 肠道微生态 |
| 4.本研究立题依据 |
| 4.1 抑郁症与神经炎症反应密切相关 |
| 4.2 NLRP3炎症小体活化是抑郁症的重要机制之一 |
| 4.3 线粒体自噬是调控NLRP3炎症小体的关键 |
| 4.4 抑郁症发病机制的线粒体自噬假说 |
| 4.5 抑郁症与脾虚密切相关 |
| 4.5.1 脾之生理为神志活动提供基础 |
| 4.5.2 抑郁症与脾虚 |
| 4.5.3 线粒体自噬水平低下可能为脾虚气化不足的生物学基础 |
| 4.6 肝脾不和是抑郁症的重要病机 |
| 4.6.1 脾虚肝郁 |
| 4.6.2 脾虚肝虚 |
| 4.7 小建中汤的选方依据 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 线粒体自噬对抑郁模型大鼠海马NLRP3炎症小体的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 ELISA检测 |
| 2.5.3 RT-PCR检测 |
| 2.5.4 Western-blot检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 SPT变化 |
| 3.1.3 FST不动时间变化 |
| 3.2 MtDNA拷贝数变化 |
| 3.3 线粒体自噬相关指标含量的变化 |
| 3.3.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.3.2 线粒体自噬相关蛋白变化 |
| 3.4 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.4.1 NLRP3 炎症小体m RNA表达变化 |
| 3.4.2 炎症因子mRNA表达变化 |
| 3.4.3 NLRP3炎症小体以及下游炎症因子蛋白水平变化 |
| 3.5 血清炎症因子变化 |
| 3.6 血清DA和5-HT水平变化 |
| 实验二 小建中汤抗抑郁研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 ELISA检测 |
| 2.5.3 SOD和 MDA检测 |
| 2.5.4 尼氏染色 |
| 2.5.5 透射电镜观察海马CA3区细胞超微结构 |
| 2.5.6 RT-PCR检测 |
| 2.5.7 Western-blot检测 |
| 2.5.8 免疫荧光 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 SPT基线 |
| 3.1.3 OFT变化 |
| 3.1.4 FST变化 |
| 3.2 MtDNA拷贝数变化 |
| 3.3 海马区神经元形态学变化(附图1.1) |
| 3.4 海马区神经元超微结构变化(附图1.2) |
| 3.5 血清SOD和 MDA变化 |
| 3.6 线粒体自噬相关指标变化 |
| 3.6.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.6.2 线粒体自噬相关蛋白表达变化 |
| 3.7 NF-κB信号通路相关指标变化 |
| 3.7.1 NF-κB信号通路相关m RNA表达变化 |
| 3.7.2 NF-κB信号通路相关蛋白表达变化 |
| 3.8 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.8.1 NLRP3 炎症小体相关m RNA表达变化 |
| 3.8.2 NLRP3炎症小体相关蛋白表达变化 |
| 3.9 血清炎症因子变化 |
| 3.10 血清DA、5-HT变化 |
| 实验三 小建中汤介导线粒体自噬抑制NLRP3炎症小体活化研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要药品及试剂 |
| 1.2.1 药品 |
| 1.2.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 糖水训练和蔗糖偏好率测试 |
| 2.2 CUMS大鼠抑郁模型制备 |
| 2.3 实验分组及给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 指标检测方法 |
| 2.5.1 行为学检测 |
| 2.5.2 RT-PCR检测 |
| 2.5.3 Western-blot检测 |
| 2.6 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 行为学变化 |
| 3.1.1 体重变化 |
| 3.1.2 FST变化 |
| 3.2 线粒体自噬相关指标变化 |
| 3.2.1 线粒体自噬相关mRNA表达变化 |
| 3.2.2 线粒体自噬相关蛋白表达变化 |
| 3.3 NLRP3炎症小体相关指标变化 |
| 3.3.1 NLRP3 炎症小体相关m RNA表达变化 |
| 3.3.2 NLRP3炎症小体相关蛋白表达变化 |
| 讨论 |
| 1.CUMS模型的选择 |
| 2.对照药氟西汀和激动剂雷帕霉素的选择 |
| 3.上调线粒体自噬对CUMS大鼠的作用 |
| 3.1 RAPA上调了CUMS大鼠线粒体自噬水平 |
| 3.2 上调线粒体自噬对CUMS大鼠行为学影响 |
| 3.3 上调线粒体自噬对CUMS大鼠线粒体DNA拷贝数的影响 |
| 3.4 上调线粒体自噬对CUMS大鼠NLRP3 炎症小体及炎症因子的影响. |
| 3.5 上调线粒体自噬对CUMS大鼠5-HT和 DA的影响 |
| 4.小建中汤治疗抑郁症的机制探讨 |
| 4.1 小建中汤对CUMS大鼠行为学影响 |
| 4.2 小建中汤对CUMS大鼠海马神经元形态的影响 |
| 4.2.1 尼氏染色 |
| 4.2.2 超微结构 |
| 4.3 小建中汤对CUMS大鼠线粒体自噬的影响 |
| 4.3.1 小建中汤对CUMS大鼠海马mt DNA拷贝数影响 |
| 4.3.2 小建中汤对CUMS大鼠血清SOD和 MDA的影响 |
| 4.3.3 小建中汤上调CUMS大鼠海马线粒体自噬水平 |
| 4.4 小建中汤对CUMS大鼠海马炎症的影响 |
| 4.4.1 小建中汤抑制CUMS大鼠TLR4/NF-κB信号通路活化 |
| 4.4.2 小建中汤抑制CUMS大鼠NLRP3 炎症小体通路活化 |
| 4.5 小建中汤对CUMS大鼠5-HT和 DA的影响 |
| 4.6 小建中汤通过介导线粒体自噬抑制NLRP3炎症小体活化 |
| 5.小建中汤健脾调肝治疗抑郁症作用探讨 |
| 5.1 小建中汤温健脾气、调摄阴阳 |
| 5.2 小建中汤生发肝气 |
| 5.3 小建中汤健脾调肝的生物学基础 |
| 结论 |
| 特色与创新性 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1 附图 |
| 1.1 实验二海马尼氏染色(200×) |
| 1.2 实验二海马超微结构 |
| 1.3 实验二NLRP3炎症小体通路蛋白表达(免疫荧光) |
| 2 动物实验伦理审查意见表 |
| 3 综述 NF-κB/NLRP3 信号通路在抑郁症及中药作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（7）待确诊青光眼24h-NCT昼夜变化特征与其中医证型之间的关系研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 现代医学研究概况 |
| 1.2 中医研究概况 |
| 第二章 方法与内容 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 研究内容与方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 POAG、CPACG和OHT连续24h-NCT峰值所在时间段 |
| 3.2 POAG、CPACG和OHT眼压峰值位于日间、夜间的中医证型分布 |
| 3.3 不同中医证型的POAG、CPACG和OHT眼压峰值所在时间段 |
| 3.4 POAG、CPACG和OHT患者中医证型构成比 |
| 3.5 待确诊青光眼中POAG、CPACG、OHT、排除青光眼人群构成比 |
| 3.6 POAG、CPACG和OHT患者年龄分层统计 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 待确诊青光眼行24小时眼压监测的意义 |
| 4.2 POAG、CPACG和OHT患者24h-NCT昼夜变化与中医证型之间的关系 |
| 4.3 初步探讨POAG、CPACG和OHT患者眼压24h内波动特征与十二时辰的关系 |
| 4.4 POAG、CPACG、OHT中医证型构成比分析 |
| 4.5 待确诊青光眼患者中POAG、CPACG、OHT、排除青光眼人群构成比分析 |
| 4.6 POAG、CPACG和OHT患者年龄分析 |
| 4.7 不足与展望 |
| 第五章 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1: 诊断标准(参考《我国原发性青光眼诊断和治疗专家共识(2014)》) |
| 附录2: 英文缩略语 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（8）“肾应冬”理论与HPA轴生物钟基因和细胞信号转导因子的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一: 生物钟基因Per1、Per2及其相关的信号转导通路的研究进展 |
| 1. 生物钟基因Per1、Per2的研究 |
| 1.1 生物昼夜节律与生物钟基因 |
| 1.2 生物钟基因Per1、Per2 |
| 2. 与生物钟基因Per1、Per2相关的信号转导通路的研究 |
| 2.1 Ras/Raf/MAPK蛋白信号转导通路 |
| 2.2 Ras转导的信号通路 |
| 综述二: 与生物钟节律相关的G蛋白及其信号转导通路的研究进展 |
| 1. G蛋白 |
| 1.1 G蛋白的种类 |
| 1.2 G蛋白的功能 |
| 2. 与G蛋白相关的信号转导通路 |
| 2.1 G蛋白偶联受体(GPCRs) |
| 2.2 在生物钟节律系统中对G蛋白起主要激活作用的褪黑素受体 |
| 2.3 受体激活后的信号转导 |
| 2.4 以cAMP为第二信使的信号通路 |
| 2.5 即刻早期基因(IEG) |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 理论探讨 |
| 1. 中医的“肾”与下丘脑-垂体-肾上腺轴相关性研究 |
| 1.1 “肾”的古今研究 |
| 1.2 “肾”与下丘脑-垂体-肾上腺轴的关系 |
| 2. “肾应冬”理论与生物钟基因调控的相关性研究 |
| 2.1 “肾应冬”理论的研究 |
| 2.2 时间季节节律性变化与生物钟基因调控的相关性 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴生物钟基因per 1、per 2的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 实验二 四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴细胞信号转导因子c-fos、c-jun的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 实验三 四季变化对金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴G蛋白Gi、Gs的影响 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）针刺对肾阳虚近视视功能和屈光的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 高度近视与中医体质的相关性研究 |
| 材料和方法 |
| 1 主要仪器和试剂 |
| 2 研究对象 |
| 3 调查内容 |
| 3.1 知情同意 |
| 3.2 检查内容和流程 |
| 4 问卷调查 |
| 4.1 中医体质问卷设计 |
| 4.2 中医体质类型判定 |
| 5 检查方法 |
| 5.1 视力检测 |
| 5.2 屈光度检测 |
| 5.3 眼压检测 |
| 6 诊断、纳入和排除标准 |
| 6.1 诊断标准 |
| 6.2 纳入标准 |
| 6.3 排除标准 |
| 7 统计分析 |
| 结果 |
| 1 样本一般情况 |
| 2 高度近视患者中医体质构成 |
| 3 高度近视与中医体质相关性分析 |
| 4 不同中医体质类型患者近视参数分析 |
| 讨论 |
| 1 中医体质学说 |
| 2 中医对近视的认识 |
| 3 近视与中医体质 |
| 4 研究结果分析 |
| 小结与展望 |
| 第二部分 电针对肾阳虚豚鼠体质的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 实验仪器和试剂 |
| 2.1 主要实验仪器和设备 |
| 2.2 主要实验试剂 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 动物分组及造模 |
| 3.2 电针豚鼠肾俞穴 |
| 3.3 血清激素水平检测 |
| 3.4 检影验光 |
| 3.5 A超测眼轴 |
| 3.6 豚鼠眼压检测 |
| 4 统计分析 |
| 结果 |
| 1 肾阳虚模型豚鼠形态行为学的变化 |
| 2 肾阳虚模型动物体重的变化 |
| 3 肾阳虚模型豚鼠血清激素水平的变化 |
| 4 肾阳虚模型豚鼠眼轴长度和屈光度检测 |
| 讨论 |
| 1 中医对肾阳虚的发展认识 |
| 2 肾阳虚动物模型建立方法 |
| 3 肾阳虚模型动物指标变化 |
| 4 肾俞穴与肾阳虚 |
| 5 研究结果分析 |
| 小结与展望 |
| 第三部分 电针豚鼠肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠视功能的影响 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 实验仪器和试剂 |
| 2.1 主要实验仪器和设备 |
| 2.2 主要实验试剂 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 动物分组及造模 |
| 3.2 电针豚鼠肾俞穴 |
| 3.3 血清激素水平的检测 |
| 3.4 检影验光 |
| 3.5 A超测眼轴 |
| 3.6 针刺对肾阳虚近视视网膜电图的影响 |
| 3.7 电针肾俞穴对肾阳虚近视豚鼠视力的影响 |
| 3.8 视网膜神经递质和受体mRNA和蛋白表达水平变化 |
| 3.9 高效液相色谱法检测视网膜GABA和谷氨酸含量 |
| 4 统计分析 |
| 结果 |
| 1 肾阳虚近视模型豚鼠形态行为、体重和血清激素FT3、FT4、T和E2变化 |
| 2 肾阳虚近视模型豚鼠行为视力、屈光度、眼轴长度和视网膜电图变化 |
| 2.1 肾阳虚近视模型豚鼠行为视力的变化 |
| 2.2 肾阳虚近视模型豚鼠眼球屈光度的变化 |
| 2.3 肾阳虚近视模型豚鼠眼轴长度的变化 |
| 2.4 肾阳虚近视模型豚鼠眼球视网膜电图 |
| 3 肾阳虚近视豚鼠视网膜神经递质谷氨酸、γ-氨基丁酸及其受体、多巴胺受体和双调蛋白含量的变化 |
| 3.1 肾阳虚近视模型豚鼠视网膜谷氨酸含量变化 |
| 3.2 肾阳虚近视模型豚鼠视网膜γ-氨基丁酸及其受体含量变化 |
| 3.3 肾阳虚近视模型豚鼠视网膜多巴胺受体mRNA'表达和蛋白含量变化 |
| 3.4 肾阳虚近视模型豚鼠视网膜双调蛋白含量变化 |
| 讨论 |
| 1 阳虚体质与近视发展 |
| 2 针灸通过改善肾阳虚体质治疗疾病的研究 |
| 3 动物行为视力的检测方法 |
| 4 视网膜电图和近视 |
| 5 神经递质及其受体与近视发展 |
| 6 生长因子及其受体与近视发展 |
| 7 神经递质和中医体质 |
| 8 研究结果分析 |
| 小结与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 近视的针灸和中药治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 发表论文 |
（10）艾条悬灸调控MR和GR对皮质酮肾阳虚大鼠影响的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 历史回顾 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 实验器械 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物的分组 |
| 2.2 动物模型制备 |
| 2.3 动物模型成功的判断 |
| 2.4 穴位定位 |
| 2.5 治疗方法 |
| 3 指标检测及方法 |
| 3.1 标本取材 |
| 3.2 检测方法 |
| 3.3 ELISA法操作步骤 |
| 3.4 Real-TimePCR技术方法 |
| 3.5 Western blot检测方法 |
| 3.6 统计分析 |
| 4 实验结果与分析 |
| 4.1 大鼠的一般情况观察 |
| 4.2 各组大鼠造模前后体重变化 |
| 4.3 各组大鼠血清ACTH、CRH、CORT含量表达变化 |
| 4.4 Real-Time PCR mRNA表达结果 |
| 4.5 Western blot蛋白表达结果 |
| 5 讨论 |
| 5.1 肾阳虚证动物模型的制备与评价 |
| 5.2 中医对肾阳虚证的认识 |
| 5.3 现代医学对肾阳虚证的研究进展 |
| 5.4 艾灸疗法的研究概况 |
| 5.5 艾灸治疗肾阳虚证的选穴依据 |
| 5.6 各项观察指标的选择依据及艾条悬灸对其调控机制探讨 |
| 6 本研究存在的不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 答辩委员会名单 |
| 个人简介 |
四、阴虚阳虚大鼠促肾上腺皮质激素及皮质酮昼夜节律的差异研究（论文参考文献）
- [1]基于AMPK/SIRT1/PGC-1α通路研究醒脾解郁方对抑郁大鼠海马神经元突触重塑的影响[D]. 任非非. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]2型糖尿病合并骨质疏松证型分析及葛根素对DOP的改善机制[D]. 王颖. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]黄芩在治疗抑郁症方剂中的配伍应用及其抗抑郁机制研究[D]. 赵凡. 南京中医药大学, 2020
- [4]阳虚动物模型及检测指标的研究进展[J]. 吉琳,申琪,郭向东. 中国比较医学杂志, 2021(01)
- [5]肾不藏志不寐的理论及实验研究[D]. 任小娟. 新疆医科大学, 2020(02)
- [6]基于线粒体自噬研究小建中汤抑制NLRP3炎症小体活化治疗抑郁症的机制[D]. 王萌. 成都中医药大学, 2020(02)
- [7]待确诊青光眼24h-NCT昼夜变化特征与其中医证型之间的关系研究[D]. 曾颂玫. 广州中医药大学, 2020(06)
- [8]“肾应冬”理论与HPA轴生物钟基因和细胞信号转导因子的相关性研究[D]. 刘淼. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]针刺对肾阳虚近视视功能和屈光的影响及其机制研究[D]. 张涛. 山东中医药大学, 2019(01)
- [10]艾条悬灸调控MR和GR对皮质酮肾阳虚大鼠影响的机制研究[D]. 周璇. 江西中医药大学, 2019(02)